INSTRUCTIVOPgina: 7 de 7

DEMOSTRACION DE LA ESPECIFICIDAD ENZIMTICA

1. OBJETIVOS1.1 Demostrar la especificidad enzimtica de la enzima de glucosa oxidasa sobre la glucosa.

2. INTRODUCCION La glucosa oxidasa es producida por Penicillium notatum. Esta enzima tiene una afinidad extremadamente marcada por la glucosa. En la presente prctica vamos a demostrar la especificidad de la enzima sobre un sustrato. Para ello, emplearemos glucosa y fructosa; dos ismeros que tiene la formula general C6H12O6.La Glucosa oxidasa (GOD) cataliza la reaccin siguiente:Glucosa + O2 + H2O2 -----GOD----- cido Glucnico + H2O2.El H2O2 uno de los productos de la reaccin pude ser determinado utilizando la enzima Peroxidasa, la misma que al actuar sobre el H2O2 libera Oxigeno, el cual reacciona con la 4-aminofenazona (4-AF) y el fenol, en forma proporcional a la concentracin de H2O2.La reaccin es la siguiente:2 H2O2 + 4 AF + fenol -----POD---- Quinona coloreada + 4 H2O.

3. MATERIAL METODOS

3.1 Materiales:PipetasTubos de ensayosBao maraCocina elctrica

3.2. Reactivos.Solucin fructosa.Solucin glucosa.Solucin GOD/POD.

4. PROCEDIMIENTO:4.1. PREPARACION DE 3 SISTEMAS. Utilizando la tabla a continuacin se debe prepara 3 sistemas. Favor utilizar pipetas individuales por reactivo utilizado (no contaminar pipetas).

Tabla 01: Sistema Experimentales:

COMPONENTES Y PROCESOSISTEMA (Tubos)

123

Solucin de Glucosa 1 g/L (mL)-0.1-

Solucin de Fructosa 1 g/L (mL)--0.1

Solucin GOD/POD (mL)2.02.02.0

Incubar a 37 C por 10 minutos.

Agua destilada (mL)3.13.03.0

Mezclar por inversin

Posteriormente leer mediante el colormetro a 505 nm la absorbancia.

5. ESQUEMA.

leer mediante el colormetro a 520 nm la absorbancia. COMPONENTESRESULTADOS

GLUCOSA(2)-0.254

FRUCTOSA(3)-0.248

GOD (1)-0.256

leer mediante el colormetro a 420 nm la absorbancia. COMPONENTESRESULTADOS

GLUCOSA (2)0.002

FRUCTOSA (3)0.006

GOD (1)0.011

6. RESULTADO (MESA 3)

Una vez que hemos ledo la muestra en el calormetro calcularemos el factor y la glucosa: FACTOR:

COMPONENTESRESULTADOS

GLUCOSA (2)

FRUCTOSA (3)

GOD (1)

GLUCOSA:PROBLEMARESULTDO

Glucosa (2)

Fructuosa (3)

RESULTADO EN OTRAS MESASG/LM1M2M3(MI MESA)

T1T2T3T1T2T3T1T2T3

LECTURA EN 420 Abs1g/mm0.99g/mm1g/mm1g/mm0.99g/mm0.99g/mm

7. DISCUSION.Ya con los resultados obtenidos por la experimentacin que se realiz, se tom en cuenta que el procedimiento para encontrar el factor de la glucosa y fructosa se tom como catalizador al GOD. En mi mesa (3) los resultados no fueron los correctos, pero en la mesa (1) si se dio los resultados positivos. Se pudo notar que solo se afect la glucosa porque la Glucosa Oxidasa es un catalizador especfico, es decir, aceleran slo una reaccin concreta y no el resto. A diferencia de la fructuosa el cual no fue catalizado totalmente.

Cabe mencionar que la Fructuosa y la Glucosa son azcares simples y son monosacridos. Las azcares simples contienen un slo tipo de carbohidrato en lugar de dos como la sacarosa disacrida. La frmula qumica de la glucosa y fructosa, tambin es las misma: C6(H2O)6.Pero tienen una gran diferencia que radica en la ubicacin del grupo funcional de los carbohidratos (=O) dentro de la molcula. Siendo la glucosa una aldohexosa, el cual el carbono se adjunta a un tomo de hidrgeno por un enlace simple y un tomo de oxgeno por un doble enlace. Mientras que la fructuosa es una cetohexosa, el cual el carbono se adjunta a un tomo de oxgeno por un enlace sencillo.

8. CONCLUSION.Se pudo demostrar la especificidad enzimtica de la enzima de glucosa oxidasa sobre la glucosa gracias a la experimentacin que se realiz en laboratorio. 9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. Catlisis [En lnea] Recuperado el 02 de octubre del 2014, de http://www.100ciaquimica.net/temas/tema6/punto6.htm La Diferencia Entre La Glucosa Y La Fructosa[En lnea] Recuperado el 02 de octubre del 2014, de http://www.diferenciaentre.net/la-diferencia-entre-la-glucosa-y-la-fructosa/

Hernndez R. (2007). Enzimas. [En lnea]. Recuperado el 02 de octubre del 2014, de http://www.forest.ula.ve/~rubenhg/enzimas/

Especificidad enzimtica.[En lnea].Recuperado el 02 de octubre del 2014 de http://temasdebioquimica.wordpress.com/2008/07/12/especificidad-enzimatica/

Tubo blanco, control, estndar[En lnea].Recuperado el 02 de octubre de 2014 de http://www.todoexpertos.com/categorias/ciencias-e-ingenieria/quimica/respuestas/1363718/tubo-blanco-control-estandar

Las enzimas [En lnea].Recuperado el 02 de octubre de 2014 de http://www.monografias.com/trabajos82/las-enzimas/las-enzimas2.shtml

10. CUESTIONARIO.1. Explicar el diseo experimental: Cul es el propsito de cada tubo. Cul es el tubo control? Es necesario ms de un tubo control? Explicar2. Observar los tubo y anotar sus observaciones en la seccin resultados. Explicar la discusin y conclusiones.3. Disear una tabla con resultados.4. Explique usted los tipos de especificidad enzimtica.5. Qu tipo de especificidad enzimtica representa glucosa oxidasa.6. Citar ejemplos de enzima que catalizan reacciones especficas.

Desarrollo1. Su propsito de cada tubo es demostrar especificidad enzimtica de la enzima de glucosa oxidasa sobre la glucosa por medio de la experimentacin que se dio gracias al colormetro.

El tubo control es el que tiene es una solucin que contiene una cantidad conocida de sustancia que se va a cuantificar y sirve para tomarla de referencia en el momento en que se mida la muestra real en este caso es la Glucosa Oxidasa y Peroxidasa. No es necesario otro tubo de control, con uno solo es posible realizarse la experimentacin

2. DISCUSION.Ya con los resultados obtenidos por la experimentacin que se realiz, se tom en cuenta que el procedimiento para encontrar el factor de la glucosa y fructosa se tom como catalizador al GOD. En mi mesa (3) los resultados no fueron los correctos, pero en la mesa (1) si se dio los resultados positivos. Se pudo notar que solo se afect la glucosa porque la Glucosa Oxidasa es un catalizador especfico, es decir, aceleran slo una reaccin concreta y no el resto. A diferencia de la fructuosa el cual no fue catalizado totalmente.

Cabe mencionar que la Fructuosa y la Glucosa son azcares simples y son monosacridos. Las azcares simples contienen un slo tipo de carbohidrato en lugar de dos como la sacarosa disacrida. La frmula qumica de la glucosa y fructosa, tambin es las misma: C6(H2O)6.Pero tienen una gran diferencia que radica en la ubicacin del grupo funcional de los carbohidratos (=O) dentro de la molcula. Siendo la glucosa una aldohexosa, el cual el carbono se adjunta a un tomo de hidrgeno por un enlace simple y un tomo de oxgeno por un doble enlace. Mientras que la fructuosa es una cetohexosa, el cual el carbono se adjunta a un tomo de oxgeno por un enlace sencillo.CONCLUSION.Se pudo demostrar la especificidad enzimtica de la enzima de glucosa oxidasa sobre la glucosa gracias a la experimentacin que se realiz en laboratorio.

3. Tabla con resultados con los dems grupos G/LM1M2M3(MI MESA)

T1T2T3T1T2T3T1T2T3

LECTURA EN 420 Abs1g/mm0.99g/mm1g/mm1g/mm0.99g/mm0.99g/mm

4. Existen dos tipos de especificidad enzimtica que son: Especificidad de accin:es decir una enzima solo puede realizar un determinado tipo de reaccin: Hidrlisis, Oxido Reduccin

Especificidad de sustrato: Esto significa que cada enzima solo puede actuar sobre un sustrato o sobre un reducido de sustratos.

Puede ser tambin: Absoluta: La enzima acta sobre un nico sustrato De grupo: La enzima acta sobre un grupo de sustratos

5. La glucosa oxidasa representa un tipo de especificidad de accin absoluta, ya que realiza un determinado tipo de reaccin en solo sustrato.

6. Existen varios ejemplos entre ellas tenemos: Oxido reductasa: Estas enzimas que catalizan las reacciones de oxidacin- reduccin, incluyen oxidasas, peroxidasas Transferasa: Enzima que catalizan la transferencia de un grupo qumico de una molcula a otra ejemplo: transaminasas Hidrolasas: Este es un gran grupo de enzimas que catalizan la Hidrlisis de diversos sustratos : peptidazas Liasas: En este grupo se incluyen las enzimas que catalizan la eliminacin de grupos sustratos Isomerazas: Enzimas que catalizan diferentes tipos de reacciones de isomerazion Ligazas:La funcin de esta enzimas es la de unir dos molculas mediante enlaces

AUTOR:Jos Ignacio Camacho Tvara