Fecha de Entrega: 22 de Septiembre del 2014

Nombres del Equipo:

Hernández Alcaraz AngélicaLópez Rodríguez IsaacOlvera Plata Alfredo

Equipo: 02

Practica: Ejercicio Experimental Numero 4. Doble Difusión en Placa “Ouchterlony”

Introducción:

La multivalencia de anticuerpos ha permitido el desarrollo de técnicas en las cuales, moléculas unidas a anticuerpos pueden ser precipitadas desde solución. Los precipitados inmunes pueden formarse no solo en solución sino también en una matriz de agar. Cuando el antígeno y el anticuerpo se difunden uno hacia el otro en una matriz de gel, se formará una línea de precipitación visible, al igual que una reacción de precipitación en solución, ocurre precipitación visible cuando las concentraciones de los anticuerpos y antígenos son equivalentes una a otra. La inmunodifusión en gel es rápida, fácil de realizar y sorprendentemente exacta. En el método de Ouchterlony, la variación de inmunoprecipitación en gel es la más utilizada, tanto el antígeno como el anticuerpo se difunden en dirección radial desde pozos de una hacia otro, lo que establece un gradiente de concentración. A las concentraciones de antígeno-anticuerpo relativas a las cuales se maximiza la formación de enrejado, llamadas “equivalencias”, se forma en el gel una línea de precipitación visible o “línea de precipitina”. Los análisis más sofisticados de geles de Ouchterlony pueden ofrecer información con respecto a la magnitud de la reactividad cruzada de preparaciones de anticuerpos con antígenos relacionados. Cabe señalar que este tipo de inmunoprecipitación tiene una sensibilidad de 20 a 200μg de anticuerpos por mililitros, superior que las reacciones de precipitación en líquidos.

Objetivo.

Conocer la identidad antigénica de un suero problema.

Procedimiento.

Se colocó una placa de agar sobre un portaobjetos al que se le colocaron las muestras según la siguiente numeración:

1. Anti-suero humano.2. Suero de conejo.3. Suero humano.

4. Suero de ratón.5. Albúmina Sérica Humana (ASH).6. Pozo central, muestra problema.

Se dejó incubar por 48 horas.

Resultados.

Los resultados obtenidos son de la placa del Equipo 1.

Foto Número 1.

Pozo Central: Con Antisuero.

Pozo 1: Se observaron 3 Líneas de precipitación únicas sin entrecruzamientos; la primera línea de precipitación que es la más grande y está del lado más próximo al antisuero, después hay otra línea de precipitación (la mas pequeña), entre las líneas de precipitación más grande y la mediana, y por ultimo hay una línea de precipitación de tamaño mediano y más curveada, próxima al pozo numero 1.

Pozo 2: No cuenta con líneas de precipitado.

Pozo 3: No cuenta con líneas de precipitado.

Pozo 4: Se observaron dos líneas de precipitado, la de mediano tamaño es poco curveada y más próxima al pozo del antisuero, mientras la de mayor tamaño es más gruesa y más curveada, y está más próxima al pozo numero 4. Probablemente la banda de mayor grosor es el resultado de la unión de dos bandas que quedaron próximas entre sí.

Pozo 5: No cuenta con líneas de precipitado.

Análisis de Resultados.

Se colocó el antígeno (antisuero) en el pozo central y se introdujeron muestras de suero en cada uno de los pozos circundantes, en las cuales se notaron que las muestras de los pozos número 1 y 3 son positivas para los antígenos, observando que estas reacciones fueron de identidad total al percibir que se unen en una única banda de precipitación, ya que en una reacción de identidad total ambos antígenos son idénticos y ocurre la fusión de líneas de precipitina, mientras que para las demás muestras de suero son negativas al no contar con una línea de precipitado entre la muestra de suero sobre el exterior y la muestra antigénica del centro.

Cabe señalar que en el pozo número 3 se ven 2 bandas de precipitación; una muy delgada y una muy gruesa, esta última es debido a que se unieron dos bandas de precipitación, esto es debido a que hay un exceso de antígeno que por tanto las bandas de precipitina están más próximas a la cavidad del anticuerpo; mientras en el pozo número 1 se observan las tres bandas de precipitación que se esperaban. Este número de bandas indica que existe polivalencia, es decir, que el antígeno puede inducir en los linfocitos B la producción de tantos anticuerpos distintos como epítopes posea el antígeno.

Se observan tres líneas de precipitación debido a que ocurren fenómenos de zona, siendo la banda intermedia en donde se encuentran el antígeno y anticuerpo en concentraciones equivalentes (punto de equivalencia).

Conclusiones.

Con base en los resultados obtenidos se puede concluir que el antisuero problema presenta reacciones antígeno-anticuerpo en a cual ocurre precipitación (2do paso) para anti-suero humano y para la albúmina sérica humana.

Bibliografía.

Kindt, Goldsby y Osborne. (2014). “Inmunología de Kuby”. Séptima Edición. Edit. Mc Graw Hill Interamericana, México. Páginas: 656-657Bennington, N.C. (2000). “Diccionario Enciclopédico del Laboratorio Clínico”. Primera Edición. Edit. Médica Panamericana, España. Páginas: 754-757