Fecha de Entrega: 22 de Septiembre del 2014

Nombres del Equipo:

Hernández Alcaraz AngélicaLópez Rodríguez IsaacOlvera Plata Alfredo

Equipo: 02

Práctica: Ejercicio experimental 5. Determinar la cantidad de C4 en el plasma humano.

Introducción:

La inmunodifusión radial (IDR) es una técnica que puede determinar cuantitativamente la concentración de un antígeno. Es una técnica sensible que es usada clínicamente para detectar niveles de proteínas plasmáticas.

Principio: Un anticuerpo es incorporado en agarosa fundida, la cual es vertida dentro de una caja de Petri la cual se deja solidificar. Se cortan pequeños pozos dentro de la agarosa y estos son llenados con concentraciones conocidas de antígeno correspondientes al anticuerpo, con el objeto de construir una curva de calibración. Las muestras desconocidas se colocan dentro de los pozos.

Los antígenos en solución difundirán hacia fuera del pozo en un patrón circular rodeando al pozo. El anticuerpo está presente en exceso y la difusión del antígeno continuará hasta que se forme un precipitado antígeno-anticuerpo en forma de anillo estable. Habrá complejo Ag-Ac en toda la zona circundante al pozo dentro de la línea de precipitina. En esta línea es donde está presente el mayor número de complejos, ya que en ese punto el antígeno y el anticuerpo están en proporciones iguales. Esta es conocida como la zona de equivalencia. Generalmente toma de 24 a 48 horas para que ocurra la difusión óptima y la precipitación se haga evidente. Para cada antígeno, se formará una precipitación final en anillo de cierto diámetro. De las concentraciones conocidas estándar, se traza una curva de calibración, colocando en los ejes: concentración de antígeno vrs mediciones de diámetro cuadrado de los anillos. A partir de esta curva de calibración lineal, la presencia y cantidad de antígeno en las muestras desconocidas pueden ser determinadas.

Esta prueba se puede utilizar para aquellas sustancias que se encuentren en orden de mg/mL, el anticuerpo incorporado determina la sensibilidad de la técnica.Este método se aplica en inmunología clínica para la cuantificación de antígenos, fundamentalmente de las fracciones plasmáticas humanas, como son la albúmina sérica humana, las inmunoglobulinas G, A y M, los componentes C3 y C4 del complemento, factores de coagulación, etc.

Objetivo.

Cuantificar la proteína C4 del complemento en una muestra de suero problema.

Resultados.

Tabla 1. Concentraciones utilizadas de los estándares y halos de precipitación obtenidos en el ensayo.

Muestra Concentración (mg/dL)

Diámetro del halo de precipitación (cm)

1 100 22 200 2.13 400 2.4

Problema 3 - 1.8

50 100 150 200 250 300 350 400 4501

1.2

1.4

1.6

1.8

2

2.2

2.4

2.6

f(x) = 0.00135714285714286 x + 1.85

Curva Patrón

Concentración (mg/dL)

Diám

etro

del

hal

o (c

m)

Gráfico 1. Curva patrón en base a la concentración de los estándares.

Se tiene que:

Concentración=Diámetro−1.850.0014

=1.8−1.850.0014

=−35mg /dL

Análisis de Resultados.

Se obtiene un valor negativo en la concentración. Esto puede indicar varias cosas; la primera, que la muestra no contenía suficiente concentración para ser cuantificada, también está el hecho de

que la curva patrón no abarca el diámetro que se obtuvo para la muestra y por último, pudo haber sido un error de apreciación a la hora de medir el halo. Otro factor a considerar es a la hora de llenar los pozos, si éstos no se rellenaban de forma correcta, entonces la muestra no difundiría de manera adecuada.

Conclusiones.

Con base en los resultados obtenidos se puede concluir que no se pudo determinar la concentración de la proteína C4 del complemento por el método de RID, se atribuye principalmente a un error durante la experimentación.

Bibliografía.

Kindt, Goldsby y Osborne. (2014). “Inmunología de Kuby”. Séptima Edición. Edit. Mc Graw Hill Interamericana, México. Páginas: 656-657Bennington, N.C. (2000). “Diccionario Enciclopédico del Laboratorio Clínico”. Primera Edición. Edit. Médica Panamericana, España. Páginas: 754-757