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UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO VALDIZAN DE HUANUCOE.A.P.DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
MANUAL DE PRACTICAS: MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
PRACTICA N°
ATLAS DE PARASITOS PARA INVESTIGACIÓN DE HUEVOS DE HELMINTOS Y PROTOZOARIOS
I. INTRODUCCION
II. FUNDAMENTO TEORICO
III. MATERIALES Y METODOS
a. Materiales
b. Métodos
Procedimientos de toma de muestra
- Se eligió en forma aleatoria el campo de cultivo, se anotó el tipo y número de verduras
de la muestra
- Se eligieron las muestras teniendo en cuenta la procedencia o adquisición.
- Cada producto, fue colocado en una bolsa de polietileno, siempre con los datos y así
llevado al laboratorio.
Obtención del agua del lavado
El agua del lavado de las verduras se obtuvo de la siguiente manera:
- Se pesan 100 gr de verdura. Cada unidad es remojada en 500 ml de agua destilada.
- Se procedió a separar en dos trozando la parte comestible entre tallos, hojas,
tubérculos
- Se procede a lavar las verduras con ayuda de una escobilla.
- Se separa el agua del lavado en dos partes de 250 ml cada una, para ser utilizada en
los métodos de concentración por sedimentación en tubo y concentración por
flotación membrana filtrante respectivamente.
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- Se deja en reposo el agua de lavado por 30 minutos, con el fin de permitir que los
quistes adheridos a la tierra se aflojen y queden separados.
Figura 1. Muestras de Rabanito y Culantro.
Figura 02. Muestra de Cebolla china Figura 09.Muestra de Apio
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Método de sedimentación
Después de los 30 minutos de reposo, se elimina las ¾ partes del agua del lavado,
teniendo cuidado de no perder el sedimento, debido a que los quistes, huevos y larvas se
depositan en el sedimento, por ser más pesados que el agua.
- El sedimento se coloca en tubos de centrifuga de 115 x 30 mm luego se realiza una
suspensión con agua destilada y se centrifuga a 2000 rpm x 2 minutos, con el fin de
lavar el sedimentación.
- Se descarta el sobrenadante y se realiza el lavado del sedimento las veces que sean
necesarias, hasta obtener un sobrenadante claro.
- Se descarta el ultimo sobrenadante y se adiciona NaoH al 2%, solución salina, y agua
destilada.
- Se agita el sedimento en el tubo y centrifuga a 2000 rpm x 2 minutos.
- Se deja en reposo y con la ayuda de una pipeta se extrae el sedimento para la
observación microscópica con objetivos de 10X y de 40X
- Añadimos una dos gotas de muestra a agregamos una gota de solución de lugol se
coloca en 10 laminas portaobjeto colocando una laminilla cubre objeto y observamos
en el microscopio.
- Se aplicó la fórmula del contaje de huevos por campo y por gramo de la muestra (INS
2008).
Criterios de muestreo de agua
Se eligieron las zonas o puntos de muestreo manual de acuerdo a las recomendaciones
de la APHA, EPA para aguas residuales, se realizo un reconocimiento previo de la
zona, vías de acceso para la toma de muestra y las estaciones de muestreo teniendo
en cuenta el caudal del vertimiento y el volumen del cuerpo para componer la muestra
final. El procedimiento consistió en tomar por un periodo de seis meses porciones de
muestras seleccionadas del lugar de extracción que puntualmente fue la
desembocadura de la matriz de principal de riego de los campos de cultivos del Fundo-
Bocanegra,y se obtuvieron 4 muestras de agua vertimientos domésticosque son
usados para el riego de sus cultivos. Se emplearon los hisopos de gasa, (los cuales no
afectan la composición del agua extraída, es fácil de limpiar, fácil de transferir el
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contenido del muestreado al envase) que son colectados, transcurridos las 24 hs de
colocado el hisopo. En cada punto o zona de muestreo se midió la temperatura y el pH.
Procedimiento de Análisis cualitativo
Después de las 24 horas de reposo, se colecta los hisopos de gasa con las partes del
agua contenidas en ella, teniendo cuidados de no perder parte de agua, debido a que por
el caudal del agua los quistes, huevos y larvas se han adherido a los tejidos de la gasa.
- La gasa se coloca en bickers de 1 lt, luego se realiza cortes al hisopo de gasa.
- Se agita cada corte con solución salina con el fin de lavar los tejidos y obtener un
sobrenadante.
- Distribuir el volumen total de la muestra en tubos de centrifuga. Los tubos deben ser,
preferentemente de polietileno y con 250 ml de capacidad.
- Centrifugar a 2400 rpm durante 5 minutos
- Decantar el sobrenadante, teniendo cuidado de no desprender el sedimento.
- Lavar el sedimento, adicionarle 3 a 4 ml de agua a cada tubo y luego homogenizar,
completar el volumen del tubo con agua destilada y centrifugar. Repetir este pasó para
obtener un sobrenadante claro.
- Se deja en reposo y con la ayuda de una pipeta se extrae el sedimento y la película
superficial colocar enlaminas para la observación microscópica con objetivos de 10X
y de 40X en 10 laminas portaobjetos.
- Añadimos una dos gotas de muestra a agregamos una gota de solución de lugol y
otra sin colorear lo cual facilita la diferenciación entre enteroparásitos y otros
microorganismos entre diversos estadios evolutivos de nematodes de vida libre y
algas microscópicas con morfología semejante y que igualmente se tiñen con lugol.
se coloca en lamina portaobjeto colocando una laminilla cubreobjeto y observamos en
el microscopio el grupo de laminas
IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES
V. CONCLUSIONES
VI. RECOMENDACIONES
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VII. REVISION BIBLIOGRAFICA
El análisis parasitológico se realizará por la técnica de Groenen WHO 1969 (33), modificado 1972 y el método de Cadwell y Cadwell modificado.
Detección de parásitos en muestras de agua.
AGUA
PARASITOS OBSERVACION MICROSCOPICA
SEDIMENTACION
HELMINTOS
A.lumbric.
H.nana
H.diminuta
T.trich. 1
Strongyloidessp. 1
toxoascaris
PROTOZOARIOS:
G.lamblia 1
B.hominis 1
E.nana 2
Entamoebasp. 1
TOTAL 7
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Es necesario destacar que los mecanismos de transmisión más frecuente con los parásitos
intestinales es por la contaminación fecal y el agua como vehículo de transporte.
Entre otros helmintos que requieren de hospedador intermediario; y el ganado son hospedador
definitivo se encontró ( 2 )en muestras de tierra, y Toxocarasp el hombre es el hospedador
intermediario, se encontró en muestras de vegetales.
Es importante conocer la distribución de A.lumbricoides porque la hembra adulta, puede vivir
en su huésped hasta 2 años, el rango de fecundidad es de 134,000 a 360,000 huevos por día
por un período de 300 días (36)
Entamoeba sp. Entamoeba sp.
Entamoeba sp Ascaris sp,
Toxocara sp,
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Estrongyloides sp.
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Dermatofito y E.nana. Huevo de Ascaris
Dermatofito Huevo E. nana
Huevo paramecium Dermatofito
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Artropodo
Dermatofito Toxocara
Larva Oruga
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Boca de Strongyloides Huevo Toxocara
Artropodo Huevo Helminto
Huevo Helminto Strongyloides sp
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Strongyloides sp. Entamoeba sp..
Huevo Helminto. AVL.
Huevo Ascaris sp. Flagelado
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Huevos de áscaris y fasciola Quiste de Paragonimus
Quiste de Giardia sp Pulmon Necrosado por paragonimus