UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE QUÍMICA

LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA GENERAL

Técnicas de Inmunoprecipitación

Gpo: 4 Equipo: Conejo D

Casas María FernandaFonte López Dulce Ameyalli

Moreno Escobar JavierNicolás Solís Anahi

12-mar-2015

Práctica 4. Cuantificación de la concentración de albúmina sérica humana en dos muestras problema por el método de Inmunodifusión radial simple (RID)

OBJETIVOS:

Obtener la concentración de albúmina de las muestras problema. Comparar las cantidades obtenidos con los valores de referencia para albúmina en

suero y determinar si se encuentran alterados.

PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN: ¿Cuál es la concentración de ASH de las muestras problema?

DESCRIPCIÓN DE RESULTADOS:

MuestraConcentración en mg/mL

Estándar 1 8Estándar 2 4Estándar 3 2

Tabla II: Datos de la concentración de cada muestra estándar.

MuestraDiámetro

del halo en centímetros

Problema 1 derecho 1.3Problema 1 izquierdo 1.4Problema 2 derecho 1.0

Problema 2 izquierdo 1.0Estándar 1 derecho 1.3

Estándar 1 izquierdo 1.5Estándar 2 derecho 1.3

Estándar 2 izquierdo 1.2Estándar 3 derecho 1.0

Estándar 3 izquierdo 1.0

FALTA ANEXAR GRÁFICAS

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

Práctica 4. Mezcla de antígeno y anticuerpo. Prueba de identidad a sueros de uso terapéutico y

Determinación del origen de manchas de sangre.

OBJETIVOS:

Tabla I: Diámetro del halo medido en la placa de para la técnica de RID.

P1 P1

P2 P2

St1St1

St3 St3

St2St2

Identificar de qué especie proviene un suero anti-alacrán por medio de la técnica de inmunoprecipitación en capilar.

PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN (1): ¿Cuál es el origen de la muestra con suero anti-alacrán?

DESCRIPCIÓN DE RESULTADOS:

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

Primeramente, las muestras control salieron correctamente por lo que no hubo una contaminación de las pruebas con la plastilina, ya que si las muestras hubiesen estado en contacto con la plastilina generaría un precipitado y por tanto obtendríamos falsos positivos.

En el caso de -alacrán hubo una formación de precipitado en el caso del suero -equino, lo cual nos dice que el suero extraído contra el veneno de alacrán provenía del suero de caballo; es decir, una parte de los anticuerpos de suero equino reconoció a una porción Fc del suero -alacrán.

PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN (2): ¿De qué origen es la mancha de sangre encontrada en la bata de un compañero de la Facultad de Química?

DESCRIPCIÓN DE RESULTADOS:

-alacrán + BS

(control negativo)

-SH + SH

control positivo

-alacrán + - equino

Positivo: hay

presencia de un pp.

-alacrán + -rata

Negativo: no hay

formación de pp.

-suero ratón +

SRcontrol positivo

PBS + mancha

de sangrecontrol

negativo

-SH + mancha de

sangre muestra 1

-SR + mancha de

sangremuestra 2

La muestra de la mancha de sangre fue proporcionada por los profesores, para tenerla en solución le agregamos solución salina y posteriormente la pusimos en la centrifuga para que los eritrocitos quedaran en el fondo (pellet) y tuviéramos únicamente en suspensión el suero de dicha mancha problema.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

Como en el caso anterior, se observó que las muestras control, salieron correctamente, en caso de nuestros control positivo y negativo, lo cual nos garantiza que las muestras no se contaminaron, ya que no estuvieron en contacto directo con la plastilina, ya que si hubiese ocurrido esto tendríamos falsos positivos (formación de precipitado en diferentes muestras, así como en la control negativo).

La precipitación se observaba en forma de bandas en el capilar de suero -humano con suero humano, y el de suero anti-rata con suero de rata, se utilizaron como control positivo. El control positivo garantiza o no, la efectividad reactiva de las muestras y reactivos que se usarán en la práctica. Por otro lado también se tiene el control negativo, el cual también indica que nuestros reactivos sean los adecuados para realizar el experimento de inmunoprecipitación.

En el caso de la muestra 1 se observa que se formó el precipitado, ya que el suero -humano interactúa con los componentes presentes en la mancha de sangre, por lo cual podemos decir que la mancha de sangre provenía de un humano, en este caso si hubo interacción de antígeno-anticuerpo, por lo que de esta manera se logró identificar la procedencia de la mancha. Mientras que en el caso de suero -ratón no hubo formación de un precipitado, por lo que al no haber dicha interacción antígeno-anticuerpo no hubo formación de dichas redes.

CONCLUSIONES:

El suero anti-alacrán proviene del suero del caballo, ya que hay formación de un precipitado.La mancha de sangre que se encontró en la bata de un alumno de la Facultad de Química corresponde a la de un humano, ya que formó un precipitado al interaccionar con el suero -humano.

En ambos casos, hubo una interacción antígeno-anticuerpo, de esta manera podemos conocer de donde provenían los diferentes sueros problema.

Bibliografía: Abbas, A.; et. al. “Inmunología celular y molecular”, sexta edición. Barcelona, España. Ed. El Sevier, 2008, p.47-64.