Práctica No. 4 Micología

8/12/2019 Práctica No. 4 Micología

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Práctica No. 4

reparación de medios de cultivo

Objetivo:

El alumno aprenderá a realizar la preparación de medios de cultivopara así, posteriormente hacer la correspondiente siembra demuestras fúngicas.

Fundamento

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimientoy otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollode hongos.La diversidad metabólica de estos es variada. Por ello, la diversidad de

medios de cultivo es también amplia, y no existe un medio de cultivouniversal adecuado para todos ellos (hongos).

Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado(es decir, se le añaden organismos) y a continuación incubado en condicionesque favorezcan el crecimiento microbiano. El crecimiento de los hongos es elcultivo.

Un cultivo axénico o puro contiene un único tipo de hongo.Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores decrecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier microorganismo

contaminante.

Los medios de cultivo contienen como mínimo: carbono, nitrógeno, azufre,fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertasvitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.

Generalidades

Los medios de cultivo se preparan fácilmente; los ingredientes se disuelvenpor separado en agua y se mezclan en un matraz erlenmeyer, se calientan

15 minutos a baño María y 5 a 6 minutos en el mechero, la solución se colocaen tubos y se procesa en autoclave a 110°C durante 15 a 20 minutos alsacarlos se colocan en posición inclinada para aumentar la superficie decultivo. Pueden utilizarse cajas Petri, que deben llenarse después deesterilizar el medio.

Si se usa tapón de rosca no debe tapar herméticamente para facilitar lallegada de oxígeno o se pueden utilizar los tapones de algodón.

Todas las manipulaciones han de realizarse en el área esterilizada de la

llama de un mechero Bunsen o en una campana de flujo laminar.



María Leticia Cruz Blas 2 Laboratorio de

USO MEDIOS DE CULTIVO

Identificación de C. neoformans. Medio de alpiste negro agar.Medio de agar dextrosa urea.

Medio de Staib.

Esporulación de dermatofitos. Arroz agar.

Producción de ascosporas (génerosaccharomices).

Agar para producción de ascosporas.

Transporte y revitalización. Sabouraud caldo.

Medio selectivo deprimoaislamiento para diversas

levaduras

Biggy agar.Medio de coco.Medio V8 agar.

Primoaislamiento, conservación yproducción de pigmentos de

dermatofitos. Para esporulación dehongos dermatiáceos.

Medio Borelli.DTM agar.

PZ + dextrosa al 1%.

Investigación de hidrólisis de

caseína en actinomicetos.

Medio de caseína (actinomicetes).Medio para hidrólisis de caseína

(Nocardia).

Investigación de carbohidratos.Medio para investigación decarbohidratos (zimogramas)

Primoaislamiento y conservaciónde diversos hongos.

Sabouraud caldo.Sabouraud dextrosa agar.

Papa peptona agar.Infusión de cerebro corazón agar. (M.

mycetomatis y A. madurae)Harina de maíz agar.

Extracto de levadura agar.Papa dextrosa agar.

Medio de conservación.Para estimulación de pigmento de

A. pelletieri y T. violaceum.Medio de coco.

Investigación de licuefacción degelatina.

Gelatina.

Esporulación de diversos hongos.

Harina de maíz agar.Papa dextrosa agar.

Papa zanahoria agar.Papa peptona agar.

Formación de pseudomiceliso yclamidospora en el género

Candida.

Harina de maíz + Tween 80.Papa zanahoria + Bilis de buey.

Medio de cereal.Agar para clamidosporas.

Medio selectivo para hongospatógenos.

Micosel o micobiotic agar.Medio kurung (en su forma

parasitaria)

Medio de producción de pigmentode T. Rubrum .

PZ + dextroza al 1%.

Primoaislamiento deactinomycetos anaeróbicos y

microaerófilos. Tioglicolato caldo.

Pruebas fisiológicas de

actinomycetos.

Medio para la investigación de xantina, hipoxantina y tirosina.

Medio Bennett.




Rehidratar cultivos desecados. Sabouraud caldo.

Identificación de Aspergillus yPenicillium.

Medio Czapek.

Para cultivar Pytirosporum.

Medio de Sabouraud con aceite deoliva.

Medio para Pytirosporum con bilis debuey.Medio con ácido oleico y vitamina A.

Estimula la fructificación. Extracto de malta o cerveza.

Para observar órganos perforadorespresentes en T. Mentagrophytes.

Medio para penetración de pelos invitro.

Medio de agar dextrosa urea.

Observar producción de ureasa. Medio de agar dextrosa urea.

Para el transporte de hongos. Medio de Stuarts.

Identificación de micobacterias yactinomadura.

Medio de Lowestein-Jensen

Para la obtención de antígenos. Medio de Smith.

Medios de cultivo: fórmula cantidad y uso

Agar para Clamidosporas

Fórmula.

Sulfato de amonio 1 g

Fosfato monopotásico 1 g

Azul de trípano 0 1 g

Polisacárido purificado 1 g

Agar 1 g

Biotina 1 g

Agua destilada 1000 ml

Se suspenden 37 g del polvo deshidratado de la fórmula en el agua destilada

y se deja remojar durante 15 minutos, se hierve durante 1 minuto agitandofrecuentemente; se distribuye en los tubos y se esteriliza a 121°C durante 20min.

Uso: estimula clamidosporas en C. albicans.




Agar Sabouraud cicloheximida

Fórmula

Sabouraud glucosado 1000 cm3

Cloranfenicol 500 mg

Cicloheximida 500 mg

Disolver la cicloheximida o actidiona en 10 cm3 de acetona, elcloranfenicol en 10 cm3 de alcohol. Agregar el medio ya fundido y esterilizara ¾ de atm durante 20 minutos.

Uso: primoaislamiento y conservación de diversos hongos.

Biggy agar

Fórmula.

Citrato de bismuto 5 g

Amoniaco sulfito de sodio 3 g

Dextrosa 10 g

Extracto de levadura 1 g

Glicina 10 g

Cloranfenicol 0 5 g

Agar 10 g


Hervir el medio 5 min y repartir en cajas Petri o tubos. No se debeesterilizar en autoclave.

Uso: medio selectivoo de primoaislamiento para diversas levaduras.



María Leticia Cruz Blas 5 Laboratorio de Micología

Medio de Czapek

Fórmula.

Nitrato de sodio 3 g

Sacarosa 30 g

Fosfato dipotásico 1 g

Cloruro de potasio 0 5 g

Sulfato de magnesio 0 5 g

Sulfato de hierro 0 01 g

Agar 15 g


Uso: sirve para estudiar Aspergillus y Penicillium .

Sabouraud caldo

Fórmula.

Dextrosa 20 g

Peptona 10 g


PH 6 5

Se esterilizan en autoclave a 121°C durante 15 min.

Uso: primoaislamiento, transporte y revitalización de diversas cepas.




Constituyentes habituales de los medio s de cultivo

1. Fuentes carbono y sales: En muchos casos, la glucosa, la lactosa u otrasdextrosas se emplean como fuente de carbono. Algunos medios de cultivo

se complementan con sales como NaCl o diversos fosfatos y/o sulfatos depotasio, magnesio, amonio, etc.

2. Agar: el agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a losmedios de cultivo. El componente dominante en el agar es unpolisacárido, al que acompañan algunas impurezas, que se absorben dealgas marinas (rodofitas).

3. Extractos: Para su preparación, ciertos órganos o tejidos animales ovegetales (p. ej., carne, hígado, cerebro, semillas) son extraídos con agua

y calor, posteriormente concentrados hasta la forma de pasta o polvo.

Tipos de medios de cultivo

1. Medios generales Permiten el desarrollo de una gran variedad dehongos.

2. Medios de enrequecimiento Favorecen el crecimiento de un determinadotipo de hongos, sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto.

3.

Medios selectivos Permiten el crecimiento de un tipo de hongosdeterminado, inhibiendo el desarrollo de los demás.

4. Medios diferenciales Son aquellos en los que se ponen de relievepropiedades que posee un determinado tipo de hongos.




Preparación de medios de cultivo




Material y equipo

Cajas Petri.

Matraces Erlenmeyer de 500 ml. Asa bacteriológica Probeta de 250 ml. Mechero Bunsen. Tubos de ensayo de 13x100 mm. Gradilla. Algodón. Parrilla. Autoclave. Cinta masking. Agar Dextrosa Sabouraud.

Agar Biggy. Agar para clamidiosporas. Agar Czapek. Gasa.

Técnica

Cada mesa de trabajo se encargará de la preparación de una cantidadsuficiente de un determinado medio de cultivo, para ser utilizado, en su

momento, por todos los alumnos del grupo de prácticas. Las instrucciones aseguir dependerán del número de mesa y el medio de cultivo asignado, pero entodos los casos, los pasos son los siguientes:

1. Disolver los componentes del medio en agua destilada. En muchos casos separte de un preparado comercial con todos los componentes deshidratados.Siguiendo las instrucciones del fabricante o del profesor, añadir la cantidad deagua adecuada para conseguir la concentración deseada de los mismos. Si elmedio contiene un agente solidificante (agar-agar) hay que calentar elpreparado hasta la ebullición del mismo agitando de vez en cuando, paraasegurar una completa disolución del agar (medios sólidos y semisólidos); paramedios líquidos no es necesario calentar, únicamente se agita la mezcla hastala completa disolución de la misma.

2. Esterilizar la disolución. Una vez disuelto el medio se debe esterilizar paraevitar el crecimiento de contaminantes. Dependiendo de la forma en que vaya autilizarse el medio, el procedimiento será diferente:




a) Medios sólidos en placa Tapar el matraz con tapón de algodón y cubrircon papel de aluminio. Llevar a esterilizar a la autoclave (1210C)durante 15-20 minutos. Una vez estéril repartir en placas de Petri

estériles y dejar en reposo para que solidifique.

b) Medios líquidos Una vez disueltos los componentes repartir en tubos arazón de unos 2-4 ml por tubo, tapar con tapón de aluminio y llevar aesterilizar en autoclave.

Observaciones y resultados

Se observan los medios preparados por un equipo. 70 tubos de agar

sabouroad. También se prepararon 42 cajas Petricon agar Biggy 1.030 L y250 mL de agar Czapek.

https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/esterilizacion-desinfeccion-y-antisepsis/autocave











Conclusiones

Con esta práctica aprendimos a preparar los medios de cultivo paradespués sembrar cepas de hongos y así poder observar la morfología

colonial de cada una de ellas. Es importante conocer los componentes de cada medio dde cultivo, ya qye

cada uno de ellos es específico para cierto tipo de hongos.

Bibliografía

Arenas Guzmán Roberto. Micología médica ilustrada . México (2008)3a. Edición. Editorial McGraw-Hill.

Gamazo, Carlos; López Coñi, Ignacio y Díaz Ramón. Manual práctico de Microbiología . España (2005) 3ª. Edición. EditorialElsevier Masson.

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