UNIVERSIDAD PRIVADA DE HUANCAYOFACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICACURSO: BIOQUIMICA II

PRCTICA N 9EXTRACCIN DEL ADNObjetivos: Extraer el ADN de un tejido animal, confirmar su estructura fibrilar. Determinar la longitud de la estructura fibrilar. Confirmar o rechazar que el ncleo del ADN se encuentra replegado a la estructura fibrilar.Muestra biolgica Hgado de pollo 100gMateriales Varilla de vidrio Mortero y piln Vasos de precipitado x 250ml Pipeta de 10ml Probeta de 50ml Tela o gasa para filtrarReactivos Alcohol 96 Agua destilada LUSA Cloruro de sodio al 9% Detergente 2mg

Otros Arena 05g

Procedimiento:1) Triturar los 100g de hgado de pollo, aadir arena 05g para que al triturar se puedan romper las membranas y queden los ncleos sueltos.2) Aadir al triturado 50ml de agua destilada, homogenizar hasta hacer una masa.3) Filtrar 3 4 veces sobre la tela o gasa para separar los restos de tejidos que hayan quedado sin romper.4) Medir el volumen del filtrado con la probeta.5) Aadir al volumen del filtrado una cantidad igual de cloruro de sodio al 9%. Con esto pretendemos producir un estallido de los ncleos de manera que queden libres las fibras de cromatina.6) Posteriormente agregar 1mg de detergente. La intencin es formar un complejo con las protenas y separarlas del ADN, de esta manera quedar el ADN libre de las protenas que tiene asociadas.7) Con el uso de la pipeta aadir 50ml de alcohol al 96. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interface se precipita el ADN.8) Introducir la varilla de vidrio e ir removiendo de manera lenta y homognea. En la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas que son el resultado de la agrupacin de fibras de ADN.

CUESTIONARIO1.- Mediante un esquema indique la composicin nutricional del hgado de pollo.2.- Grafique una estructura fibrilar.3.- Qu forma tiene el ADN de un tejido animal. Grafique.4.- En qu casos de utiliza el cloruro de sodio al 9%.5.- De qu manera puedes desnaturalizar los cidos nucleicos. 6.- Proponga un mecanismo de accin entre el contenido del hgado de pollo + arena + cloruro de sodio al 9% + detergente + alcohol.