PROPAGACION CLONAL DE CARICA PAPAYA L. MARADOL.
MATERIALES Y METODOS.TABLA DE TRATAMIENTOS
La presente investigacin se realizara con la variedad de papaya
Maradol Roja. Como material vegetal se emplearon semillas para la
germinacin.
El experimento se desarrollara en dos fases: a) Germinacin in
vitro; b). Propagacin clonal mediante Meristemos
En la primera fase se utilizara semillas de papaya cv. Maradol,
con 60 das de poscosecha, esterilizadas con hipoclorito de sodio al
4 %; adems del medio MS, 3 % de sacarosa, 0.6 % de agar, pH 5.8
0.01, fotoperodo de 16 horas luz y 28C. La segunda fase consistir
en la induccin de brotes mltiples procedentes de plntulas
germinadas in vitro.
Establecimiento de material vegetal in vitro
Desinfeccin de las semillas.Para la desinfeccin se empleara el
procedimiento reportado por Vegas et al. (2003), lavando primero
los frutos con jabn lquido. En la cmara de flujo laminar horizontal
se realiz la desinfeccin superficial de los frutos mediante la
aspersin de alcohol isoproplico 70%. Sobre papel aluminio estril se
hizo un corte longitudinal a cada fruto, eliminando previamente los
extremos con un cuchillo para extraer las semillas con ayuda de
pinzas. Luego de colocar estas semillas en cpsulas de Petri
estriles se les retirara la sarcotesta usando pinzas, para lograr
la escarificacin. Las semillas fueron desinfectadas sumergindolas
en hipoclorito de sodio 2% durante 20min y luego en alcohol
isoproplico 70% (5min). A las semillas desinfectadas se le
realizaran tres lavados de 5min con agua destilada estril y se
colocaran sobre servilletas estriles para su secado con el aire de
la cmara de flujo laminar.
Siembra de semillas en medio de cultivo semislido.Para el
establecimiento de las semillas in vitro se realizara un corte en
cada extremo y otro longitudinal a cada semilla, con la finalidad
de exponer el embrin al medio de cultivo (Vegas et al., 2003), y se
sembrara en tubos de ensayo, con 20ml de medio MS semislido,
esterilizado a 121C y 15 lbs de presin por 20min. Los tubos fueron
tapados con tapas plsticas, y se colocaron en oscuridad a 25 2C.
Despus de 15 das se descartaran las plntulas contaminadas con
bacterias u hongos. Se realizara una siembra, de 100 semillas.
Anlisis estadsticoSe registraran los porcentajes de semillas
germinadas in vitro.
Una vez obtenida las plntulas con un tamao adecuado se proceder
a las fases:Fase de establecimiento de meristemos.- Luego de
desinfectar las yemas apicales, con la ayuda de un microscopio
estereoscopio se realizara la diseccin de meristemos. Los explantes
vegetales se colocaran sobre una placa Petri (148 x 120 mm.), se
sujetaran con pinzas y con ayuda del bistur se eliminaran los
primordios foliares hasta dejar el meristemo descubierto. Despus se
realizara un corte en la base del meristemo y se introducir al tubo
de ensayo que contenga el medio de cultivo. Con la finalidad de
obtener el medio de cultivo adecuado que nos permita la
diferenciacin de los meristemos se formularon diversos tratamientos
considerando los resultados obtenidos por Alvarado (1992) y Baca
(2002), empleando el medio de cultivo basal Murashige y Skoog
(MS-1962) con diferentes concentraciones de BAP, ANA, AIA, AG3 y
adenina (Tabla 1).El pH del medio de cultivo fue ajustado a 5,6. Se
realizarn evaluaciones cada 7 das y la evaluacin final se realizara
49 das despus de la siembra.
Fase de multiplicacin.- Para determinar el medio de cultivo ms
adecuado para la multiplicacin de las plntulas, los tratamientos
planteados consistieron en medio de cultivo base MS con diferentes
concentraciones de BAP, KIN, ANA, AIA,AG3 y adenina (Tabla 2). Se
realizaran evaluaciones cada 7 das y la evaluacin final se
realizara 35 das despus de la siembra.
Fase de enraizamiento.- Para determinar el medio de cultivo
adecuado para el enraizamiento de las plntulas se formularon
diversos tratamientos empleando el medio base MS con diferentes
concentraciones de IBA, BAP, ANA y adenina (Tabla 3). La evaluacin
se realizara 21 das despus de la siembra.
TABLA DE TRATAMIENTOSTabla 1. Medios de cultivo para la fase de
establecimiento de meristemos.Tratamiento Medio + HormonasTR0 MSTR1
MS + BAP 0,5 mg.L-1 + ANA 0,3 mg.L-1TR2 MS + BAP 0,5 mg.L-1 + ANA
0,3 mg.L-1 + AG3 0,3 mg.L-1TR3 MS + BAP 0,5 mg.L-1 + ANA 0,3 mg.L-1
+ Adenina 10 mg.L-1TR4 MS + BAP 0,5 mg.L-1 + AIA 0,5 mg.L-1TR5 MS +
BAP 0,5 mg.L-1 + AIA 0,5 mg.L-1 + AG3 0,3 mg.L-1TR6 MS + BAP 0,5
mg.L-1 + AIA 0,5 mg.L-1 + Adenina 10 mg.L-1
Tabla 2. Medios de cultivo para la fase de
multiplicacin.Tratamiento Medio + HormonasTA 0 MSTA 1 MS + BAP 0,5
mg.L-1 + AIA 0,3 mg.L-1 + AG3 0,3 mg.L-1 + Aden. 5 mg.L-1TA 2 MS +
BAP 0,5 mg.L-1 + AIA 0,5 mg.L-1 + AG3 0,3 mg.L-1TA 3 MS + BAP 0,5
mg.L-1 + ANA 0,3 mg.L-1 + AG3 0,3 mg.L-1+ Aden. 5 mg.L-1TA 4 MS +
BAP 0,5 mg.L-1 + ANA 0,5 mg.L-1 + AG3 0,3 mg.L-1TA 5 MS + KIN 1
mg.L-1 + AIA 0,3 mg.L-1 + AG3 0,3 mg.L-1 + Adenina 5 mg.L-1TA 6 MS
+ KIN 1 mg.L-1 + AIA 0,5 mg.L-1 + AG3 0,3 mg.L-1TA 7 MS + KIN 1
mg.L-1 + ANA 0,3 mg.L-1 + AG3 0,3 mg.L-1 + Adenina 5 mg.L-1TA 8 MS
+ KIN 1 mg.L-1 + ANA 0,5 mg.L-1 + AG3 0,3 mg.L-1
Tabla 3. Medios de cultivo para la fase de
enraizamiento.Tratamiento Medio + HormonasTM0 MSTM1 MS + IBA 3
mg.L-1 + ANA 0,5 mg.L-1TM2 MS + ANA 1 mg.L-1TM3 MS + IBA 3
mg.L-1TM4 MS + IBA 3 mg.L-1 + Adenina 5 mg.L-1TM5 MS + IBA 2 mg.L-1
+ BAP 0,5 mg.L-1 + AIA 0,5 mg.L-1TM6 MS + IBA 2 mg.L-1 + BAP 0,5
mg.L-1 + ANA 0,5 mg.L-1
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CIGTICOS DE LA PAPAYA (Carica papaya L.) var. 'MARADOL ROJA'; Vctor
R. Medero Vega*, Yanelis Bravo Corrales, Milagros Basail Prez
