PROTEÍNASDRA. BIÓRICA E. LAMAS

PROTEÍNAS• proteis “primero en importancia”.

• Macromoléculas compuestas de polímeros de aminoácidos unidos por enlaces covalentes, las cuales están involucradas en múltiples procesos celulares.

PROTEÍNAS

PROTEÍNASCaracterísticas Generales

• Constituyen 50-70% del peso seco de la célula.

• Se encuentran todas las células, fluidos secreciones y excreciones.

PROTEÍNASMetabolismo

• 20 aminoácidos.• 9 aminoácidos esenciales.• Degradación (pepsina y tripsina) → aminoácidos.• Absorción → sistema porta• Funciones y reserva• Síntesis de proteínas y de productos nitrogenados

no proteicos.

Estructura

UNIÓN PEPTÍDICA

La condensación de dos o mas aminoácidos por medio de sus grupos

–COO- y –NH3+ con pérdida de una

molécula de agua.

ESTRUCTURA PRIMARIA

Es el orden de los aminoácidos unidos entre sí por uniones peptídicas.

α HELICE

Estable

Estructura helicoidal

Varias vueltas semejan un cilíndro

ESTRUCTURA SECUNDARIA

ESTRUCTURA βESTRUCTURA SECUNDARIA

Formada por dos o más cadena polipeptídicas paralelas o antiparalelas.Formada por dos o más cadena polipeptídicas paralelas o antiparalelas.

Adosadas estrechamente por puentes de hidrógeno.Adosadas estrechamente por puentes de hidrógeno.

Estructura laminar plegada.Estructura laminar plegada.

ESTRUCTURA TERCIARIA

Arreglo tridimensional de las proteínas.

-Uniones de atracción electrostática.

-Puentes de hidrógeno.

-Interacción de cadenas no polares.

-Fuerzas de Van der Waals.

-Puentes disulfuro

Mioglobina.

ESTRUCTURA CUATERNARIA

Agrupación de varias cadenas polipeptídicas iguales o diferentes para formar estructuras más complejas.

ESTRUCTURA QUINARIA

Estructuras supramolecularesEstructuras supramoleculares

Asociación de las proteínas a otras moléculasAsociación de las proteínas a otras moléculas

PROTEÍNAS Función Ejemplo• Transporte de moléculas pequeñas Transcortina (cortisol), tiroxina

(GFT)• Receptores Receptores de estriol

(citoplasmático),• receptor de insulina (superficie)• Catalíticas Todas las enzimas• Estructurales Colágeno• Nutricionales (fuente de calorías Albúmina• y aminoácidos)• Presión oncótica Albúmina• Defensa del huésped frente a Anticuerpos (todas las clases)• antígenos externos• Hormonas Hormona estimulante de tiroides

(TSH)• Coagulación Fibrinógeno

DETECCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES

MÉTODO PRINCIPIO COMENTARIO

Kjeldahl Digestión de proteínas; medición del contenido de nitrógenoMétodo de referencia; asumir el contenido

medio de nitrógeno de 16 %.

RefractometríaMedición del índice de refracción debido a los solutos en el

suero.

Rápido y sencillo; el índice refractivo es definido como la relación de la

velocidad de la luz en el aire con la velocidad de la luz en el medio

medido.

BiuretFormación de color violeta a la quelación entre iones de

cobre y porción peptídica

Método de rutina, requiere al menos 2 uniones peptídicas y un medio

alcalino, 540-560 nm.

Colorante unido a proteína

Proteínas unidas a colorantes provocando cambio espectral de la absorbancia máxima de 465nm a 595nm la

absorbancia se incrementa a 595nm.  

TurbidimetríaPrecipitación de proteínas y medición de turbidéz por el

incremento de la densidad óptica.Comparación con patrones tratado de

manera similar.

Lowey Método de Biuret modificado Reactivo de fenol que mejora el color

TÉCNICAS DE SEPARACIÓN• Electroforesis

Aplicación de muestra en gel de agarosa

Electroforesis en solución amortiguadora

Proteínas separadas en bandas después Proteínas separadas en bandas después de tinciónde tinción

PATRÓN NORMAL

PATRÓN NORMAL

Albumin 1 2

+ -

PATRONES DE ANORMALIDADES

Patrón normal Patrón nefrótico

PATRONES DE ANORMALIDADES

Patrón normal Patrón cirrótico

PATRONES DE ANORMALIDADES

Patrón normal Gamapatía Monoclonal

• Precipitación

Separan la albúmina y las globulinas.

Sulfato sódico.

Sulfito sódico.

Sulfato amoniaco.

Metanol.

Valorar PT y obtenemos la proporción albúmina/globulina.

• Separación en columna

Según la matriz escogida, las proteínas se pueden separar de acuerdo a su carga, su hidrofobicidad, su tamañó o su capacidad de unirse a grupos químicos particulares.

Diferentes tipos de cromatografía en columna

CASO CLÍNICO• Paciente masculino de 45 años esta siendo

sometido a evaluación por una posible recurrencia de plasmocitoma, que originalmente se presentó como una fractura en la columna vertebral, manifestada por compresión. Ha sido tratado con radiación y quimioterapia. La electroforesis de proteínas muestra a la albúmina, α1, α2 y β en proprociones normales . La fracción γ demuestra una ligera banda monoclonal en la primera porción (cerca de la región β). La electroforesis de orina concentrada muestra un sola banda monoclonal que migra un poco menos que la banda observada en el suero.

1. La presencia de la banda monoclonal en el suero indica recurrencia del tumor?

2. Qué dato adicional le interesa conocer acerca de la determinación en orina?

3. Qué otras pruebas se necesitan para confirmar el tipo de proteínas urinarias?

BIBLIOGRAFÍA• Henry, el Laboratorio en el diagnóstico clínico, 20ª

edición., editorial Saunders, U.S.A. 2005.• Bishop M, Clinical Chemistry, 4ª edición, editorial

Lippincott Williams Wilkins, U.S.A. 2000.• Kaplan, química clínica, 3ª edición, Editorial Mosby,

New York 1996.• Wallach J, Interpretación clínica de las pruebas de

laboratorio, 4ª edición, editorial Masson, España 2002.