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Methods to isolate a novel family of proteins from Trypanosoma cruzi with great potential as vaccine and diagnostics elements
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Trypanosoma cruzi:– Enfermedad de Chagas– En el mundo hay entre 7 y 8
millones de personas infectadas por Trypanosoma cruzi (OMS, 2014)
Tx:– Benznidazol y Nifurtimox– Fase crónica– Efectos secundarios graves (Berna,
2011).
INTRODUCCIÓN
NO EXISTE VACUNA PARA TRATAMIENTO Y/O PREVENCIÓN
ANTECEDENTESGarcía, et al., (2010) TcTASV: A Novel Protein Family in Trypanosoma cruzi Identified from a Subtractive Trypomastigote cDNA Library.
Enriquecidas por Ala, Ser y Val.
TcTASV
Tres subfamilias (A, B y C)
18 kDa, 27 kDa y 36 kDa.
Péptido señal de 57 al 72 aminoácidos
Genes ortólogos
ANTECEDENTES
Bernabó G, et al. (2013) TcTASV-C, a Protein Family in Trypanosoma cruzi that Is Predominantly Trypomastigote-Stage Specific and Secreted to the Medium.
~ 60 kDa en tripomastigotes.
Potencial de anclaje por glicosilfosfatidilinositol (Ser y Trh).
TcTASV-C sobrenadante en medio de cultivo
• La enfermedad de Chagas es curable cuando es detectada dentro de los
primeros meses de infección.
• TcTASV es una familia de proteínas recientemente descritas en cepas de
tripomastigotos que puede estar implicada en las estrategias de
supervivencia y/o la evasión del sistema inmune.
JUSTIFICACIÓN
Las proteínas TcTASV pueden ser un blanco específico para el desarrollo
de nuevas técnicas de diagnóstico en los primeros meses de infección del
parásito o de posibles vacunas de DNA que induzcan la síntesis de
anticuerpos específicos de tripomastigotos.
JUSTIFICACIÓN
• GENERAL
Aislar las proteínas TcTASV en tripomastigotos de Trypanosoma cruzi
• ESPECÍFICO
Aislar la subfamilia TcTASV-A
Aislar la subfamilia TcTASV-B
Aislar la subfamilia TcTASV-C
OBJETIVOS
ESTRATEGIA EXPERIMENTAL
Detergente no iónico (Tritón x-100)
Antiproteasas citosólicasTripomastigotos
Sonicación
1. Proteína quinasa A (PKA)2. Anticuerpo monoclonales:
Anti-fosfoserina [7F12, 1C8(IgM)]. Anti-fosfotreonina (1E11).
Alexis Biochemicals (San Diego, CA)
Inmunoprecipitación Cromatografía por Inmunoafinidad
Subfamilia A—18 kDa Subfamilia B—27 kDa Subfamilia C—36 kDa
Lavar con tampón de lisis frío. Eluir por ebullición 6-8 min en tampón de
muestra (Mads G. et al.,2002)