PROTOCOLO ORAC-FL

MIEL

1. Preparación de extractos de miel:

- Pesar 1g de muestra de miel y agregar 3g de agua destilada.

- Poner en el ultra sonido el tiempo que sea necesario para homogeneizar la mezcla.

- Preparar una colección de 5 eppendorf, para cada extracto, agregando los siguientes

volúmenes de miel y de buffer.

V miel [uL] V buffer [uL]

Eppendorf 0 0 1000

Eppendorf 1 40 960

Eppendorf 2 80 920

Eppendorf 3 120 880

Eppendorf 4 160 840

Eppendorf 5 200 800

2. Preparación de Fluoresceína:

- tomar una masa de Fluoresceína entre 1 mg y 5 mg, agregar 1mL de buffer, homogeneizar en

“vortex”.

- de la solución preparada en el paso anterior tomar 2[uL] y poner en un segundo eppendorf,

agregar 998 [uL] de buffer y homogeneizar en “vortex”

-Finalmente agregar un volumen de solución de Fluoresceína del segundo eppendorf a un

matraz aforado de 10 [mL].

masa [mg] C1 [M] C2 [M] V. Alícuota [uL]

3. Preparación de AAPH (3mL):

- tomar aproximadamente 117.06 mg del compuesto.

- agregar un volumen de buffer determinado por la siguiente ecuación:

𝑉𝑏𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 = 𝑋[𝑚𝑔] × 0,02563[𝑚𝐿

𝑚𝑔]

4. Preparar la celda:

- Agregar 200 [uL] de agua a las celdas de las orillas.

- Agregar los 150 [uL] de solución de Fluoresceína.

- Agregar los 25 [uL] de extracto de miel.

- Calentar en BioTek durante 7 minutos hasta 40°C.

- Agregar 25 uL de solución de AAPH recién preparada a cada una de las celdas.

5. Registro de celdas:

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua

B Agua Agua

C Agua Agua

D Agua Agua

E Agua Agua

F Agua Agua

G Agua Agua

H Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua

6. Observaciones: .............................................................................................................................

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Fecha:

Horas de Trabajo:

Camilo Maliqueo Gabriela Maturana

masa [mg] V. Buffer [mL]