PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA.

Es usada para detectar la sensibilización in vivo de los glóbulos rojos. Es de gran valor en el diagnóstico de la:

Enfermedad hemolítica del recién nacido.

Anemia hemolítica autoinmune.

Anemia hemolítica y sensibilización inducida por drogas.

Investigación de reacciones transnfuncionales.

Procedimiento.

1. En un tubo de ensayo de 10 o 12x75mm, colocar una gota de células rojas al 5% suspendidas en solución salina fisiológica (SSF).

2. Agregar suficiente SSF al tubo, tratando de obtener una suspensión uniforme de las células.

3. Centrifugar durante 2min a 3000 rpm para empaquetar los glóbulos rojos en el fondo del tubo. Decantar completamente la salina.

4. Agregar unas gotas de salina fresca al tubo, resuspender las células y luego agregar más salina para realizar el segundo lavado.

5. Centrifugar nuevamente y repetir el mismo procedimiento hasta completar 4 lavados.

6. Inmediatamente después del cuarto lavado, agregar 2 gotas de reactiva de antiglobulina humana y mezclar.

7. Centrifugar a: 3400rpm x 15segundos, o 1000rpm x 1 minuto.

8. Examinar el tubo para observar si hay aglutinación, graduarla en cruces y anotar los resultados tubo en mano. Para facilitar la lectura es recomendable la ayuda visual.

9. Las pruebas negativas deben confirmarse con las células de Coombs. Al tubo de la prueba negativa se agregan unas gotas de células control de Coombs, mezclar, recentrifugar, leer y anotar los resultados, tubo en mano.

Interpretación.

Si la prueba de antiglobulina muestra aglutinación, se interpreta positiva, significa que hubo sensibilización in vivo de los eritrocitos y se informa: prueba de antiglobulina o de Coombs directo positiva, señalando en cruces la intensidad de la reacción, por ejemplo, 4+.

Si no hubo aglutinación, la prueba es negativa y significa que no existe autosensibiilización eritrocitaria.

La prueba de antiglobulina negativa será válida, solamente, si la prueba control de Coombs es positiva. En este caso, prueba de antiglobulina o de Coombs directo negativa.

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA.

La detección de anticuerpos presentes en el suero se puede efectuar con:

1. Células rojas especialmente seleccionadas (células detectoras), en las cuales se encuentras presentes los antígenos de grupos sanguíneos correspondientes a los anticuerpos de mayor frecuencia e importancia clínica.

2. Con células de genética conocida (panel) que permiten hacer la identificación del anticuerpo presente. El panel se emplea una vez que se ha comprobado que en el suero existe un anticuerpo irregular, demostrado mediante las células detectoras.

3. Con las células desconocidas, como en las pruebas de compatibilidad.

La prueba de antiglobulina indirecta se usa en:

Detección e identificación de anticuerpos irregulares.

En la parte final de la prueba de compatibilidad.

Detección de antígenos no demostrables por otras técnicas: Du, Kell, Duffy, Kidd, etc.

Identificación de anticuerpos presentes en eluatos.

Pruebas especiales como: consumo de antiglobulina, estudio de anticuerpos antileucocitarios, antiplaquetarios, etc.

Procedimiento.

En un tubo de ensayo de 10 o 12x75mm colocar 2 gotas de suero fresco en estudio.

Agregar 1 gota de una suspensión de células lavadas una vez y preparadas al 5% en SSF.

Agregar 2 gotas de albumina bovina polimerizada o albumina al 22% o al 30%. Mezclar, centrifugar, leer y anotar los resultados, tubo en mano.

Incubar a 37ºC por 15 a 30 minutos. Centrifugar, leer y anotar los resultados, tubo en mano.

Lavar 4 veces con suficiente SSF como en la prueba directa, decantando cada vez toda la salina.

Agregar 2 gotas del reactivo antiglobulina humana poliespecifico y mezclar.

Centrifugar, leer y anotar los resultados, tubo en mano.

Comprobar las pruebas negativas con las células control de Coombs.

Interpretación.

Prueba de antiglobulina negativa + prueba de control de Coombs positiva. Interpretación: prueba de albumina negativa.

Prueba de albumina negativa + prueba de control de Coombs negativa. Interpretación: Prueba no valida.

Repetir todo el procedimiento. Averiguar la causa del error.