Juan Carlos Rodrguez Daz
S. Microbiologa
Hospital General Universitario de Alicante
[email protected]
PRUEBAS PARA EL DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS EMPLEADAS
EN LA PRACTICA CLINICA II
Mtodos diagnsticos
SerologaSe basa en al deteccin de anticuerpos del paciente mediante ensayos in vitro
Mtodos:Aglutinacin
IFI: Inmunofluorescencia indirecta
EIA: Enzimoinmunoensayo
Western Blot
Tipos de inmunoglobulinasIg G: Se mantiene positiva toda la vida del paciente (puede cuantificarse)
IgM. Slo se mantiene positiva en la fase aguda de la enfermedad (semanas o meses)
Mtodos diagnsticos
Aglutinacin
ELISA
En el fondo de pocillo se adhieren los antgenos del patgeno
Se aade el suero del paciente y se lava para eliminar los anticuerpos que no se hayan unido
Se aade el conjugado: anticuerpos frente a anticuerpos humanos unidos a un enzima
Se lava para eliminar los conjugados no unidos
Se aade el cromgeno (sustancia que por accin del enzima cambia de color)
Si el paciente tiene anticuerpos, el pocicllocambia de color
Mtodos diagnsticos: ELISA
Mtodos diagnsticos: IFI
Mtodos diagnsticos: Western Blot
Mtodos diagnsticos
Cultivos celularesClulas animales mantenidas indefinidamente in vitro
Hay muchas lneas, especficas de cada virus: Fibroblastos
HELA
Vero
Hep-2
Slo crecen algunos virus
Mtodo complejo
Permite estudiar la sensibilidad a frmacos antivricos
En desuso
Mtodos diagnsticos
Mtodos diagnsticos
Deteccin por reaccin en cadena de la polimerasaSirve para detectar la presencia de los virus
1.- Separacin de las cadenas
2.- Unin de los cebadores y la diana
3.- La Taq polimerasagenera de una nueva cadena
Mtodos diagnsticos
Hibridacin con sondas especficasPermite estudiar los genotipos virales
Mtodos diagnsticos
SecuenciacinPermite estudiar la sensibilidad a diferentes antivricos
Mtodos diagnsticos
Microscopia electrnicaPermite la identificacin morfolgica de algunos virus
Completo y requiere tecnologa costosa y personal muy experto
En desuso
Herpesvirus
Virus herpes 1 y 2El tipo 1 se asocia generalmente a infecciones orofaringeasy el tipo 2 se asocia a lesiones genitales (son muy frecuentes las recidivas)
Lesiones del sistema nervioso central (encefalitis): Habitualmente asociados al tipo 1
Transmisin vertical: Abortos o lesiones en el neonato
Caractersticas clnicasLatencia
Diagnstico:Deteccin de los virus en las lesiones por PCR
IgM (slo til en primoinfeccin)
Herpes 1 y 2
Herpesvirus
Varicela zoster
Varicela:Asociada a la primoinfeccin
Lesiones cutneas benignas
Neumona
Encefalitis
Herpes zoster: Asociada a reactivaciones de los virus latentes en los ganglios dorsales
Diagnstico: Varicela: Ig M o PCR de la lesin
Herpes zoster: PCR de la lesin
Varicella/Herpes zoster
Herpesvirus
CitomegalovirusInfeccin muy frecuente en personas sanas, habitualmente asintomtica o sndrome mononucleosido
Transmisin por va respiratoria y sexual
Latencia
Causa ms frecuente de infeccin congnita
Causa muy importante de infeccin oportunista en inmunodeprimidos (HIV, trasplantados)Diseminada
Neumona: Trasplantados de mdula osea
Esofagitis: HIV
Retinitis: HIV
Herpesvirus
CitomegalovirusDiagnstico de
a.- Infeccin en inmunodeprimidos: Cuantificacin del los virus en sangre
b.- Enfermedad en inmunodeprimidos: PCR en biopsias: esofagitis, neumonas. etc.
c.- Mononucleosis infecciosa en inmunocompetentes: Ig M (slo en primoinfeccin)
Deteccin de antgenos en leucocitos del paciente: Tcnica en sesuso; sustituida por PCR en sangre
Citomegalovirus
Herpesvirus
Virus de Epstein BarrGran capacidad oncognica
Mononucleosis infecciosa (enfermedad del beso)Fiebre
Faringitis
Adenopatas
Habitualmente autolimitada en algunas semanas
Tumores Carcinoma nasofaringeo
Linfoma de Burkitt
Enfermedad de Hodgkin: Nios y HIV
Enfermedad linfoproliferativa en pacientes inmunodeprimidos
Herpesvirus
Virus de Epstein Barr
Diagnstico de la mononucleosisMtodos serolgicos
Paul Bunnell: Antgenos no especficos (hematies de diferentes animales)
Deteccin de IgM frente al VCA (Virus capside antigen)
Diagnstico de la linfoproliferacin en pacientes inmunodeprimidos y tumoresPCR
Mononucleosis infecciosa
Herpesvirus
Virus herpes tipo 6, 7 y 8
Muy frecuentes en la poblacin
Generalmente no producen sntomas
Reactivaciones en inmunodeprimidos con afectacin en SNC
Sarcoma de kaposi
Diagnstico:PCR
Adenovirus
ClnicaInfectan muy frecuentemente pero generalmente de forma leve o asintomtica
Procesos respiratorios
Conjuntivitis epidmicas
Infecciones de orina
Gastroenteritis
TransmisinVa respiratoria
Contacto con la conjuntiva de manos sucias
Fecal oral
DiagnsticoPruebas serolgicas: IgM y PCR
Adenovirus
Papilomavirus
GenotiposHay ms de 100 diferentes
Infeccin muy prevalente
Bajo riesgo: Se asocian a patologas benignas: verrugas genitales o no genitales
Alto riestgo: Son factores que contribuyen a la generacin de procesos cancergenos: cuello de tero, faringe, etc.
ClasificacinAlto riesgo: 16, 18, 31, etc
Bajo riesgo: 6, 8, etc
VacunasProtege de los tipos 16, 18, 6 y 8
Recomendada en mujeres jvenes (14 aos)
Papilomavirus
Formas de transmisinVa sexual
Contacto con verrugas: directamente o a travs de toalla, etc.
Transmisin vertical: Prenatal: placenta
Perinatal: Canal del parto
Postnatal: leche materna
DiagnsticoDeteccin de virus y genotipificacin de muestras
Genitales: Endocervix, ano
Tumores de cabeza y cuello
Genotipificacin:Divide en alto y bajo riesgo
Establece el genotipo especfico
Papilomavirus
Asociacin con el cncer de crvixLa mayor parte de las mujeres sexualmente activas se infectan al comienzo de sus relaciones
El sistema inmune elimina el virus en la mayora y no tiene repercusin clnica, incluso aunque se infecte por genotipos de alto riesgo
Si es sistema inmune no es capaz de eliminar el virus y es de alto riesgo (16), ste se integra en el genoma celular y altera los mecanismos celulares
La clula va evolucionando:ASCUS
CIN 1, 2 y 3
Carcinoma invasivo
Este proceso puede durar hasta 30 aos y puede revertir
Papilomavirus
Papilomavirus
Papilomavirus
Poliomavirus
Virus que infectan al hombreJC
BK
SntomasGeneralmente asintomticas
Leucoencefalopata multifocal progresiva: Criterio de SIDA (JC)
Nefropata en trasplantados renales (BK)
DiagnsticoPCR de LCR o biopsia cerebral
PCR de biopsia renal
Parvovirus B19
Manifestaciones clnicasGeneralmente asintomtica
Eritema infeccioso
Artropatas
Lesiones hematolgicas
Puede producir lesiones congnitas
Diagnstico:Serologa: IgM
PCR
HepatitisCaractersticas generales
Es un proceso asociado a muchas causas, tanto infecciosas como no infecciosas
Hepatitis infecciosas:
Virus de las hepatitis: A, B, C, D, E
Otros virus: Citomegalovirus, Epstein Barr(EBV)
Parsitos: Toxoplasma gondii
Bacterias: Coxiella burnetti
Hepatitis A. Caractersticas generales
Provoca enfermedad aguda en mayor frecuencia al aumentar la edad: en nios es frecuente la infeccin y generalmente es asintomtica
No cronifica nunca
En el 1% de los casos se produce hepatitis fulminante
Transmisin fecal-oral
Existe vacuna eficaz
Hepatitis A
Hepatitis A
Hepatitis A
Hepatitis A
Hepatitis B. Caractersticas generales
En la mayora de los casos provoca una infeccin asintomtica, pero en otros se presenta como una enfermedad aguda
En algunos casos puede cronificar (5-10%) y llegar a cirrosis y a carcinoma heptico. Si hay transmisin materno-fetal, el porcentaje de persistencia es del 80%.
Transmisin a travs de sangre, fluidos biolgicos, va sexual y materno-fetal
Existe vacuna eficaz
Hepatitis B
Hepatitis B
Hepatitis B
Hepatitis B
Hepatitis D. Caractersticas generales
Es un virus defectuoso
Necesita la presencia de HBsAg en el suero para poder replicarse
Puede provocar coinfeccin (se asocia a un elevado porcentaje de hepatitis fulminante) o sobreinfeccin (suele cronificarse y evolucionar a formas graves)
Se transmite igual que la hepatitis B, pero en nuestro medio se da casi exclusivamente en ADVP
No hay vacuna
Hepatitis D
Hepatitis D
Hepatitis C. Caractersticas generales
Infeccin aguda, generalmente asintomtica.
Cronifica el 85% de los casos, con evolucin a cirrosis y a carcinoma
Se transmite igual que la hepatitis B, pero la transmisin sexual es poco eficiente (< 5% de los casos)
Afecta al 2-4% de la poblacin adulta
No hay vacuna
Principal causa del transplante heptico
Hepatitis C
