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Actividad antagónica de bacterias
biocontroladoras y filtrados de
Trichoderma spp. contra Ralstonia
solanacearum en plátano
Germán Ceballos I.A. CIAT
Elizabeth Álvarez, Ph.D CIAT
Germán Llano, M.Sc. CIAT
XXIX Congreso ASCOLFI
Medellín, junio 2009
INTRODUCCIÓN
El Moko, enfermedad vascular causada por Ralstonia solanacearum,
afecta seriamente la producción de plátano en Colombia, generando
pérdidas del 100% en áreas afectadas.
Shen et al. (2004) demostraron que una cepa de Trichoderma koningii
tuvo actividad antagónica contra R. solanacearum debido a sus
metabolitos termostáticos de efecto antibiótico.
Asmaja (2005) reportó actividad antibacterial de filtrados libres de células
de Trichoderma viride contra R. solanacearum in vitro, encontrando
diferencias entre cepas.
Bacterias antagonistas colonizan el suelo, producen sustancias
metabólicas que tienen efecto sobre patógenos y estimulan desarrollo
radical.
OBJETIVO
Seleccionar una cepa de Trichoderma spp. con
efecto antagónico a Ralstonia solanacearum in vitro e
invernadero.
FNFH
Mejoramiento de la sanidad y
competitividad del cultivo de plátano,
mediante el desarrollo de nuevas
estrategias de manejo del suelo y la
nutrición.
Materiales y métodos Localización
Laboratorio e invernadero
Patología de yuca
Centro Internacional de Agricultura Tropical CIAT
Diseño experimental
Bloques completos al azar (BCA)
Análisis estadístico
Statistix 8.0
In vitro
Cepas de Trichoderma spp. cultivadas en medio PD durante 18 días
• 41-TSM-1, 19-TSM-3A, 47-PDA-3A y CIAT-14PDA-4 (T. viride)
• Agroguard® (cepa comercial de T. harzianum), LST.
• Trichoplant® (mezcla de cepas de T. harzianum, T. viride, T. koningii
y T. lignorum), Sanoplant.
Ralstonia solanacearum (Rs cepas 7 y 78, aisladas de raquis de
plátano).
Se empleó el filtrado (al 40%) libre de estructuras por cada cepa de
Trichoderma spp. mezclado con PDA estéril.
Siembra de dilución de Rs (1x10-4, partiendo de suspensión de 0,2 de
absorbancia).
Invernadero
Plantas de Dominico Hartón de 2 meses de edad:
Inoculación de antagonistas:
Con 50 mL de suspensiones 1,0x106 conidias/mL
de Trichoderma harzianum (Agroguard®) y T. viride
Ecoterra® (Azotobacter chroococcum, Pseudomonas
aeureofaciens, Bacillus licheniformis, B. megaterium y B. subtilis)
(2,0x108 UFC/g) LST.
Inoculación de Rs al suelo:
Mediante herida radical y con 30 mL/planta de
una suspensión bacteriana de 0,1 de absorbancia
(600nm), equivalente a 1x105 UFC/mL
Variables analizadas
In vitro
• Conteo diario del numero de UFC de Rs
En plantas
• Severidad por Rs (mediante
escala 0 a 6)
• Contenido foliar de nutrientes
• Materia seca (en proceso)
Grados de severidad de Ralstonia solanacearum
en plantas de plátano (Mesa y Triviño, 2007)
Resultados y discusión
Día 5 a 8 (p< 0,0001)
Cepas 41-TSM-1, T. viride y Trichoplant® inhibieron completamente el crecimiento
de la bacteria, comparados con el testigo que presentó 6.820 UFC/mL
In vitro
Tratamientos efectivos
41-TSM-1
T. viride
Trichoplant ®
Esterilizados por
filtración o autoclavado
En las mismas
concentraciones 0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
1 2 3 4 5 6 7 8
UF
C R
s 7
/m
L
Días de evaluación
Testigo aboluto
19 TSM 3A
47 PDA 3A
41 TSM 1
Agroguard®
T. viride
Trichoplant®
Agroguard® autoclavado
41 TSM 1 autoclavado
Trichoplant® autoclavado
Testigo R. solanacearum 41-TSM-1 T. viride Trichoplant ®
Cepas 47-PDA-3A y 19-TSM-3A
no presentan ningún efecto de
inhibición de R. solanacearum,
ya que igualaron y superaron al
testigo (2.920 UFC/mL).
Tratamientos efectivos
T. viride
41-TSM-1
Agroguard ®
Trichoplant ®
Testigo R. solanacearum 47-PDA-3A
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
1 2 3 4 5 6 7 8
UF
C R
s 7
8 /m
L
Días de evaluación
Testigo
19 TSM 3A
47 PDA 3A
41 TSM 1
Agroguard®
T. viride
Trichoplant®
Agroguard® autoclavado
41 TSM 1 autoclavado
Trichoplant® autoclavado
Día 5 a 8 (p< 0,0001)
La actividad antagónica de T. viride y Ecoterra® se corroboró al encontrar
menores niveles de severidad por Rs en plantas (0,6 y 1,9, respectivamente),
comparados con los testigos de Rs (2,1 y 2,9).
Invernadero
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
4,0
13 16 19 22 25 28 31 34 37 40 43
Se
ve
rid
ad
R.
so
lan
ac
ea
rum
(e
sc
ala
o-6
)
Días después de inoculación
Agro® +Rs7
Agro® +Rs78
Ecot® +Rs7
Ecot® +Rs78
T.viride +Rs7
T.viride +Rs78
Rs 7
Rs 78
Testigo
LSD 5% día 43: 2,09
Haz vascular necrosado
0
10
20
30
40
50
60
70
Agrog® Rs7 Agrog® Rs78 Ecot® Rs7 Ecot® Rs78 T. viride Rs7 T. viride Rs 78 Testigo
ab
c
ab
bc
a
abc abc
a
bcd abc
bcd
ab abc
cd
abc bc
a
abc abc abc
c Co
nte
nid
o f
oli
ar
(g / k
g)
Tratamientos
P K Ca
Contenido foliar de nutrientes
Agroguard® : K
T. viride: K, P
Ecoterra® : Ca
Patogenicidad de cepa Rs 78,
se nota en la nutrición
bc c
a
abc abc
bc
ab
abc
ab
bc
a
bc
abc abc
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
4000
Agrog®Rs7
Agrog®Rs78
Ecot®Rs7
Ecot®Rs78
T. virideRs7
T. virideRs 78
Testigo
Co
nte
nid
o f
oli
ar
(mg
/ K
g)
Tratamientos
Fe Mn
Ecoterra® no se presentaron diferencias para P
Mostró mayores contenidos de Mn y estimuló el
desarrollo radical.
Conclusiones Se comprobó la efectividad y termoestabilidad de los filtrados de las cepas 41-
TSM-1, T. virirde, y el producto Trichoplant®, ya que inhibieron completamente
las dos cepas de R. solanacearum, conservando dichas propiedades, aún
después de ser sometidos a esterilización por autoclavado.
En plantas se encontró efectividad de T. viride y Ecoterra® para reducir el
desarrollo de la enfermedad ocasionada por R. solanacearum.
La cepa que demostró actividad antagónica a R. solanacearum tanto in vitro
como en invernadero, fue Trichoderma viride
T. harzianum (Agroguard®) y T. viride mostraron altos contenidos foliares de K
Ecoterra® favoreció la absorción de Ca y Mn. También incentivó desarrollo
radical.
Hace falta continuar investigando sobre los posibles antibióticos producidos
por Trichoderma spp.
Agradecimientos
Live Systems Technology LST
Sanoplant
¡¡¡ GRACIAS !!!
