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CD24 promotes tumor cell invasion by suppressing tissue factor
pathway inhibitor-2 (TFPI-2) in a c-Src-dependent fashion.
Niko Bretz , Aurelia Noske, Sascha Keller , Natalie Erbe-Hofmann, Thomas Schlange , Alexei V. Salnikov ,Gerd Moldenhauer ,
Glen Kristiansen , Peter Altevogt.
Laura María Másmela Gil.Sebastián Gómez Restrepo.School of Medicine.3th Semester.
Introduction.
CD24.
Is a glycoprotein expressed on the cell surface of most B lymphocytes and mature granulocytes; Is a cell adhesion molecule.
Importantly, CD24 is often highly
expressed in human solid tumors (lung,
brain,stomach, colorectal,
prostate, breast and ovary) and isassociated with a poor prognosis.
Introduction
Introduction
TFPI-2
Human TFPI is a physiological inhibitor of the extrinsic pathway of
coagulation and functions in anticoagulation and anti-
inflammation. It is a secreted protein with three
Kunitz (K) domains.
The first K domain inhibits coagulation factor VIIa complexed to tissue factor (TF).
The second K domain inhibits factor Xa.
The third K domain binds to heparin.
Introduction
Tissue factor (TF) is a transmembrane glycoprotein that initiates the extrinsic pathway of
coagulation cascade and acts as a receptor and enzyme cofactor factor VII. Also is
directly related to the aggressive cancer.
Introduction
C Src.
Is an endogenous protein from the family of tyrosine kinases, which is present in the cytosol of the cell.c-Src is the gene product of the same proto-oncogene c-Src, that is a precursor of a potentially cancer causing.
Relación
Cancer.
Inhibitor of the extrinsic pathway of coagulation.C Src.
Is a potential precursor of cancer.
TUMOR.Excessive cell division, can be
cancerous (malignant) or noncancerous (benign).
CD24.Is a cell adhesion molecule
expressed in human solid tumors.
TFPI-2
General Objective.
FPI-2• Study the mechanism of cell
invasion with CD24-dependent CD24 knock-down or transient over expression in human cancer cell lines.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizaron 3 tipos de líneas celulares tumorales
HS683 SNB19
células
Carcinoma de ovario glioblastomaAdenocarcinoma pulmonar
A549 SKOV3ip
materiales y métodos
Materiales y métodos
Expresión
pcDNA3-ctrl
JetPEITM
transfección
pcDNA3-TFPI-2
Como control negativo
Materiales y métodos
Mediante el “Ambion siRNA target finder”
siRNA“marca, señala”
TFPI-2Src oligofectamina
Materiales y métodos
Micro arreglos.
Fueron analizadas dos replicas biológicas independientes: genes.
Materiales y métodos PCR en tiempo real.
Amplificación y cuantificación absoluta, del producto de la amplificación del ADN
(ADNc), de hebra simple, obtenido por retro transcripción de (ARN)
Estudio de la expresión génica.
Materiales y métodos
Citometría de
flujo
Es una técnica que permite
medir simultáneamente múltiples
marcadores de una sola
célula.
Utlización de FACS
Canto II FlowJo
software.
Materiales y métodosWestern blot
Detección de proteínas
Lisis celular
Mediante una electroforesis en gel: separación de proteínas
transferencia a membrana absorbente
Detección: anticuerpo primario-anticuerpo secundario
pesadas
Materiales y métodos
Análisis de TFPI-2
Sembrado celular
Separación de Muestra de la
matriz extracelular y de
células
paradetección de la
proteína TFPI-2 se utilizo un
anticuerpo.
Materiales y métodos
Inmunohistoquímica.
Procedimiento histopatológico de cánceres de mama primarios,lesiones in situ de carcinoma, metástasis recurrentes locales y distales.
Uso de anticuerpo especifico, marcado con una enzima que puede transformar CD24 en visible.
Muestra fijada en parafina.
Localización del complejo antígeno-anticuerpo.
Resultados
La caída de CD24 afecta la invasión de líneas celulares cancerosas.• Se demuestra el rol de CD24 en la regulación
de la invasión de células tumorales.• La ausencia de CD24 reduce la
invasión de células tumorales humanas.
Resultados
Resultados
En células de carcinoma colorrectal y de páncreas CD24 fue expresadopara controlar la expresión génica por un mecanismo desconocido hasta ahora.
El agotamiento trasitorio de TFPI-2 modula
la invasión de célulascancerígenas en el
pulmón
Disminución de la expresión del CD24.
Aumenta el TPFI-2
En todas las líneas celulares estudiadas.
Resultados
Resultados
• Expresión del TFPI-2 inhibe la invasión celular.
TFPI-2 juega un papel importante en la regulación de la invasión de células tumorales.
Resultados
• Sobre- expresión de CD24, suprime el TFPI-2; aumentando la invasión célular.
Isoformas.
CD24-Ala CD24-Val
La expresión de ambas formas
reduce la cantidad del TFPI-2.
Resultados
Agotamiento de CD24 afecta la actividad de C Src.
CD24 se localiza en las balsas de membrana junto con el C Src.
El eje CD24-Src juega un papel importante en la regulación y expresión del TFPI 2.
Resultados
Discusión
AUTHOR WHAT HE/SHE SAID AGREE DESAGREE
konduri SD and others
“Importantly, the up-regulation of TFPI-2 mRNA was not only detected in SKOV3ip but also in HS683 and A549 cells. Concomitantly, in all three cell lines we noticed a significantly reduced cell invasion that was not seen inSNB19 cells having no detectable levels of TFPI-2.”
X
Sierko E, Wojtukiewicz MZ, Kisiel W
“Our findings establish a link between CD24 and TFPI-2, a proteinase inhibitor known for its important role in the inhibition of tumor cell invasiveness, neoplastic growth, and metastases formation”
X
DISCUSIÓN
AUTHOR WHAT HE/SHE SAID AGREE DESAGREE
Taniuchi K, Nishimori I, Hollingsworth MA
“In the presence of CD24 the cleavage of BARTmRNA by G3BP was blocked whereas both BART orCD24 siRNA depletion resulted in enhanced cell motilityand invasion”
x
Sierko E, Wojtukiewicz MZ, Kisiel W
“The TFPI-2 gene is considered a tumor suppressorgene as its down-regulation or loss is associated withincreasing malignancy”
x
DISCUSIÓN
DISCUSIÓN
conclusiones
• 1. In summary the results demonstrate for the first time that CD24 can regulate the expression of TFPI-2.
• 2. it was showed that cellular invasion was significantly reduced after CD24 knock down or after TRPI-2 overexpression
conclusiones
• 3. these findings suggest that the depletion of CD24 in malignant tumors might offer a new possibility to interfere with tumor progression.
• 4. in clinical practice is important to know about the expression of CD24 and TFPI-2 in tumor invasion or no invasion of many body cells for potential cancer treatments.
Mapa conceptual- Laura
Mapa conceptual-Sebastián
Thanks!
