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“HERIDAS”
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE
MEXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES
CUAUTITLAN CAMPO-1
LA PIEL
La piel es el mayor órgano del cuerpo, tiene la
característica de ser elástica, áspera, impermeable y
regenerativa. Proporciona una barrera mecánica muy eficaz
frente a una invasión parasitaria
FUNCIONES DE LA PIEL
Regula la temperatura corporal
Previene la deshidratación
Proporciona una barrera mecánica, frente a los agentes
externos
Produce Vit. D
Participa en la respuesta inmunitaria
Proporciona contacto sensorial con el entorno
BARRERAS DE LA PIEL
Pocos microorganismos tienen la capacidad innata de penetrar la piel
La continua descamación de las células epiteliales escamosas externas elimina los microorganismos que consiguen adherirse
Una cierta sequedad de la piel permite un crecimiento microbiano lento
Una acidez moderada inhibe el crecimiento de muchos microorganismos
La microbiota normal de la piel actúa antagónicamente frente a muchos patógenos
El cebo liberado por las glándulas sebáceas forma una película protectora sobre la superficie de la piel.
CAPAS DE LA PIEL
La piel presenta tres capas que son:
EPIDERMIS. Es la capa más superficial de la piel.
DERMIS Está por debajo de la anterior; en ella se encuentran las glándulas sudoríparas y sebáceas, así como la raíz del pelo.
HIPODERMIS Es la capa más profunda de la piel y en ella se encuentran los vasos sanguíneos que nutren a toda la piel.
LA PIEL
LA EPIDERMIS
La epidermis es un epitelio escamoso, estratificado
y queratinizado que presenta las siguientes
subcapas:
Estrato corneo
Estrato lucido
Estrato granuloso
Estrato espinoso
Estrato germinativo
LA DERMIS
La dermis es una capa de tejido conectivo denso
subyacente vascular que contiene estructuras
especializadas como las glándulas cebàceas y
sudoriparas, folículos pilosos derivados del
epitelio y los receptores sensoriales del Sistema
Nervioso
HIPODERMIS O TEJIDO
SUBCUTANEO
Esta conformado por tejido conectivo
laxo y cantidades variables de grasa,
une la dermis con la estructura
subyacente
Lesiones en la piel y en el
Sistema Muscular
La piel puede resultar lesionada por múltiples causas dando lugar a varios tipos de lesión en función de la fuerza agresora y la profundidad de la lesión:
Heridas.
Contusiones.
Traumatismos.
Quemaduras y causticaciones.
HERIDAS
La herida es una ruptura de la
superficie externa o interna del
cuerpo que produce separación
de tejidos y está causada por una
fuerza o agente lesionante
externo
Herida
Es toda pérdida de continuidad en la piel,
secundaria a un traumatismo.
Como consecuencia de la agresión de este
tejido existe riesgo de infección y
posibilidad de lesiones en órganos o tejidos
adyacentes: músculos, nervios, vasos
sanguíneos, etc.
Las heridas pueden ser graves
en función de una o varias de
estas características:
Las heridas pueden ser graves en función de
una o varias de estas características:
Profundidad.
Extensión.
Localización.
Suciedad evidente, cuerpos extraños o
signos de infección.
Toda herida es un foco de infecciónen potencia, aún aquellas queparecen limpias tienen en su interiorgérmenes de contaminación que hanllegado ahí desde la piel, la ropa opor el agente traumatizante. Antegrandes superficies traumatizadas,la infección está presente enaccidentes de toda índole, enespecial los producidos en la víapública.
INFECCION
Es un estado de enfermedadprovocado por agentes patógenos y/otoxinas. Los signos más usuales de lainfección :
Suelen ser la inflamación y el estadofebril general que evidencia elenfermo.
Toda infección requiere inmediatotratamiento médico.
CLINICA DE LAS HERIDAS
Determinar la localización, la extensiónde la herida, la presencia de edemas, eldaño de los tejidos subyacentes.Las heridas que se han infectadopresentan secreción purulenta, a vecescon repercusión general (fiebre,
linfangitis, etc.).
CLASIFICACION DE LAS HERIDAS
ABIERTA: Es aquella cuyo labios se hallan separados
ARTICULAR: Es aquella herida que abre una articulación
ASEPTICA: Es una herida que no está infectada con
microorganismos patógenos
ENSEDAL: Es una herida penetrante con abertura de
entrada y salida en un mismo lado
ENVENENADA: Herida complicada con la introducción
de un veneno mineral, orgánico o ponzoñoso
LACERADA: Herida con desgarro de los tejidos
CLASIFICACION DE LAS HERIDAS
INCISA: Herida producida por un instrumento cortante
LACERADA: Herida con desgarro de los tejidos
PENETRANTE: Herida producida por un instrumento punzante, que deja abierta una cavidad del cuerpo o que atraviesa de parte a parte.
Por arma de fuego: Herida por contusión producida por un proyectil
POR ARRANCAMIENTO: Herida en la cual es separado por tracciòn violenta un miembro o segmento del miembro
SEPTICA: Herida infectada con gérmenes patógenos
SUBCUTANEA: Herida de una parte u órgano subcutáneo en la que solo existe una pequeñísima abertura en la piel por la que se ha producido
TRAUMATICA: Herida penetrante del tórax, por la que entra y sale el aire
CLASIFICACION DE LAS HERIDAS
Las heridas pueden ser clasificadas en tres
tipos fundamentales :
HERIDAS QUIRURGICAS
HERIDAS NO QUIRURGICAS
POR QUEMADURAS
HERIDAS QUIRURGICAS
Estas heridas son infectadas pormicroorganismos introducidos al tejido durantelos procesos operatorios y cuyos orígenes sonla flora cutánea residente del paciente y losmicroorganismos externos.
Algunos factores predisponentes de heridasinfectadas como la edad avanzada, los estadosde mala nutrición, focos de infección cercanos,enfermedades del paciente como la diabetesmellitus, deficiencia renal, etc.
Heridas Quirúrgicas
Muchas heridas infectadas aparecen de 3 a 7 días
post-cirugía; algunos en forma temprana (24-48
horas) son comúnmente causados por
Streptococcus del grupo A o especie de
Clostridium.
La infección causada por Staphylococcus aureus
generalmente de 4-6 días y de una semana o màs
para los gérmenes Gram negativos.
HERIDAS NO QUIRURGICAS
Son comunes en infecciones nosocomiales
e incluyen: sitios de inyección, ulceras
cutáneas, úlceras de decúbito, resultado de
enfermedades oclusivas venosas o
arteriales.
En general los patógenos son similares a
las infecciones de heridas quirúrgicas.
HERIDAS POR QUEMADURAS
El paciente quemado se encuentra dentro de los sujetos
comprometidos, que por su situación son fácilmente
colonizados por organismos oportunistas, propios de su flora
o provenientes de otras fuentes.
Las bacterias de mayor incidencia en pacientes quemados
son:
Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Staphylococcus
epidermidis y Enterobacterias como E.coli, Enterobacter
agglomerans, Serratia liquefaciens, Proteus mirabilis, etc.
NATURALEZA DE LAS HERIDAS
Las heridas producidas por objetos contundentes se
caracterizan por presentar tejidos desvitalizados, edemas y
bordes irregulares
Las heridas producidas por objetos cortantes pueden ser
más profundas y sangrar más que la anterior, se caracteriza
por tener bordes rectos; puede llegar a vasos sanguíneos,
tendones y nervios
Las heridas por abrasión son generalmente superficiales, se
caracterizan por internar la epidermis y a veces la dermis,
pueden contener cuerpos extraños que probablemente estén
contaminados
• Las heridas por mordedura de animal o de
humano son de alto riesgo para contraer una
infección.
En toda herida relacionada con la mordedura reciente de un animal,
con mayor frecuencia perro, gato y en ocasiones roedores.
El riesgo de infecciones de piel y partes blandas está relacionado con la flora bacteriana que coloniza la mucosa oral del animal.
Es importante averiguar datos tales como la pertenencia y el tipo de animal, así como las circunstancias en que se produjo la mordedura.
Es un accidente relativamente frecuente en pediatría
LOS PROCEDIMIENTOS QUIRÚRGICOS SON
CLASIFICADOS EN CUATRO CATEGORÍAS:
INCISION LIMPIA – incisión notraumática carente de infección que no esllevada a cabo en los sistemas respiratorio,digestivo, génito-urinario o faríngeo.
Dichas incisiones son electivas, suturadasy sin drenaje.
De ocurrir infección, ella se debeprincipalmente como resultado decontaminación en el aire o irregularidadesen la asepsia.
Su incidencia es menor del 5% y losagentes patógenos son usualmente gram-positivo (ej. Estafilococos).
INCISIONES LIMPIAS CONTAMINADAS –
Procedimientos quirúrgicos llevados a cabo en los sistemas respiratorio, digestivo, o génito-urinario sin contaminación aparente; o incisiones que requieren drenaje. Esta incisión limpia tiene un índice de infección anticipada de 8%-15%. El origen principal de esta infección se encuentra en el mismo paciente. Infección activa no se encuentra presente previo a la operación, pero la misma implica una penetración a través de áreas del cuerpo normalmente colonizadas. Los agentes patógenos son usualmente gram-positivo (ej. poli-microbianas).
HERIDAS CONTAMINADAS – Heridastraumáticas abiertas, a las que se efectúan operacionesdonde no es posible observar estrictas normas deesterilidad, e incisiones frente a zonas donde estápresente inflamación aguda (sin pus) en la que sepresenta un derramamiento del contenido de algunavíscera. El índice de infección fluctúa entre 15% y 30%
HERIDAS SUCIAS E INFECTADAS – Incluyen
aquellas donde se encuentra pus o alguna vísceraperforada, así como las heridas traumáticas de largade larga evolución. La definición de esta clasificaciónsugiere que los organismos que provocaron la infecciónpost-operativa estaban presentes en el campoquirúrgico antes del procedimiento. Las posibilidadesde adquirirlas son mayores del 30% y pueden provocaruna bacteremia.
FORMAS Y PRESENTACION DE
HERIDAS
Infecciones de Heridas Exógenas : Son aquellas que
están asociadas con traumatismos o ulceras por decúbito,
mordeduras de animales o de humanos,, quemaduras o
cuerpos extraños en la piel o en las membranas de las
mucosas
Infecciones de Heridas Endógenas ò abscesos : Se
asocian con apendicitis, colecistitis, infecciones dentales,
osteomielitis, artritis sépticas, sinusitis y muchas otras
infecciones internas. Muchas de estas infecciones son
hospitalarias, secundarias de procedimientos invasivos,
manipulaciones quirúrgicas o colocación de prótesis.
LAS QUEMADURAS
Son lesiones de los tejidos orgánicos producidos por
agentes calientes ya sean sólidos, líquidos o gaseosos.
También pueden ser producidos por hielo, agentes
químicos cáusticos (ácidos y bases fuertes), el paso de
una corriente eléctrica o la exposición a ciertas
radiaciones.
CLASIFICACION DE LAS
QUEMADURAS
Esta basada en principio en la profundidad de las mismas
y en la superficie afectada por lo que las quemaduras se
clasifican en:
Quemaduras de primer grado: Afectan sólo de forma
leve y superficial a la capa más externa de la piel (la
epidermis)
Quemaduras de segundo grado: Se afecta a la
epidermis en todo su grosor
Quemaduras de tercer grado: Se alcanza ya a la
dermis produciendo costras oscuras a consecuencia de la
necrosis del tejido
. Quemaduras de cuarto grado: Se altera el tejido
situado inmediatamente por debajo del tegumento
. Quemaduras de quinto grado: Se afecta también al
músculo
. Quemaduras de sexto grado: Este tipo de
quemadura es la más grave y peligrosa ya que se
afecta el tejido óseo
COLONIZACION
En ocasiones la flora normal puede
provocar alguna infección cuando las
defensas normales sufren un desequilibrio
inmunomoduladora, antimicrobiana, un
dispositivo invasivo, es así como algunos
pacientes adquieren infecciones
intrahospitalarias o nosocomiales.
Primeros Auxilios
En rasgos generales podemos hacer lo siguiente:1. Lavar la zona lesionada2. Secar y colocar un antiséptico (a base de iodopovidona)3. Cubrir con un apósito4. Vendar5. Controlar el sangrado.6. De ser necesario concurrir al médico
TOMA DE MUESTRA
- Recolectar muestras cutáneas o vesiculares
- Aspirar el líquido o pus de la profundidad de la herida con
una aguja y jeringa estériles
- Descontaminar el sitio con jabón quirúrgico y un antiséptico
suave
- Sí se prevé una demora en el procesamiento de más de 30
minutos, la muestra debe transferirse a un envase anaerobio
- Sí es difícil de obtener material con aguja y jeringa, debe
usarse un hisopo y en ocasiones es necesario separar las
márgenes cutáneas adyacentes. El hisopo debe colocarse de
inmediato en un envase para transporte adecuado
(anaerobio) o inocularse directamente en medios de cultivo
para anaerobios según las circunstancias
El material de un absceso no drenado
anteriormente debe de contener el o los
agentes etiológicos de la enfermedad en
la mayor parte de los casos.
En cambio una herida abierta, ulcera o
fístula se contamina a menudo con
microorganismos cutáneos de la mucosa
o del medio ambiente.
DIAGRAMA DE TRABAJO
HERIDAS
DIAGNOSTICO DE LAS INFECCONES
BACTERIANAS EN HERIDAS
FLORA COMENSAL Y BACTERIAS
PATOGENAS EN MUESTRAS DE HERIDAS
FLORA BACTERIANA NORMAL DE
PIEL Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus aures
Especies de micrococcus
Especies no patógenas de Neisseria
Estreptococos -hemolíticos y no hemolíticos
Difteroides
Especies de Propionibacterium
Especies de Peptoestreptococcus
Pequeñas cantidades de otros m.o. (Especies de Candida, Especies de Acinetobacter, etc.)
BACILOS GRAM(+) FORMADORES
DE ESPORAS
GENERO Bacillus
- Bacilos aerobios G (+), grandes (1x3 a 4 µm)
- Forman cadenas largas
- Esporas centrales, subterminales o terminales
(según la especie)
- m.o. saprofitos, la mayoría no patógenos,
- Viven es suelo agua, aire y vegetación
- Presentan hemolisis
GENERO clostridium
- Bacilos anaerobios obligados, gram (+) ,grandes.
- Motilidad (+), flagelo perítrico
-Espora más ancha qué el género Bacillus
- Crecimiento en medio anaerobio, algunas especies
toleran el aire.
- Incapacidad de utilizar O2 como aceptor final de e-
- Carecen de citrocromo y cotocromooxidasa
- No pueden desdoblar el H2O2 debido a la ausencia
de catalaza y peroxidasa
Clostridium
PRICIPALES PATÓGENOS DE BACILOS
GRAM (+) FORMADORES DE ESPORAS
GENERO Bacillus
Bacillus cereus
- Se desarrollan en alimentos
- Produce una toxina o toxina emetica causando
envenenamiento alimentario.
- Causa importante de infecciones oculares ,
queratitis grave y endoftalmitis
- Se introducen al ojo por cuerpos extraños
relacionados con traumatismos
Bacillus anthracis
- Principal patógeno de este genero
- Causante del ántrax (principalmente en hervivoros, en
humanos se da en forma accidental).
- En humanos la infección generalmente se adquiere
por entrada de esporas a través de piel lesionada
(ántrax cutáneo) o inhalación de esporas que
finalmente llegan a pulmón (ántrax respiratorio)
- Las esporas germinan en tejidos del sitio de entrada
- Se propagan vía linfática a la sangre y se multiplican
libremente en sangre y tejidos
MECANISMO DE PATOGENICIDAD
Bacillus anthracis
- La proteína del ántrax se constituye de 3 proteínas:
- Ag protector (AP) - Factor letal (FL)
- Factor edema (FE)
- AP se fija a receptores celulares del huesped
- Despues de la activación proteolítica forma un canal de
membrana que media la entrada de FE y FL a la célula.
- FE es una adenilato ciclasa y junto con AP forma la
tóxina edema. FL + AP forman la tóxina letal(este es el
fáctor mayor de virulencia.)
- Las toxinas están codificadas en un plasmido
Bacillus
ANAEROBIOS
Bacterias que requieren tensiones bajas de O2 para crecer
La suceptibilidad a este gas varía según la especie
– a) Anaerobios estrictos: Mueren al poco tiempo de entrar en
contacto con el O2
– b) Aerotolerantes: Viven hasta por días sin multiplicarse (la
mayoría de las bacterias con significancia clínica pertenecen a
este grupo)
Anaerobios con significancia clínica se dividen en 5 grupos
– Cocos G+ - Baclios G+ esporulados - Bacilos G -
– Cocos G- - Baclios G+ no esporulados
Su presencia en áreas muy aireadas se debe a la presencia de
micronichos protegidos del medio ambiente y por consumo de O2
que hacen las bacterias aerobias coexistentes
ANAEROBIOS En piel se encuentran en el interior de folículos pilosos y de las
glándulas sebaceas (principalmente Propionibacterium acnes)
En vagina el principal m.o. Es Lactobacillusspp. Otros son:cocos
anaerobios, Bacteroides, Prevotella y Clostridium.
En tracto G.I., se encuentran fundamentalmente en I.G. (alcanzan
las 1011UFC/mL.) y constituyen 9899% del total de m.o. en este
tracto.
Principales m.o. Anaerobios presenten en tracto G.I.: Bacteroides,
Peptoestreptococos y Clostridium
En intestino, el papel fisiológico que cumplen es:
– Proteger de la colonización e infección por patógenos
– Intervienen en la síntesis de vitamina K
– Desconjugación de ácidos biliares
– Producción de compuestos nitrogenados
– Alteración de fármacos
ANAEROBIOS
PATOGENIA
En el desarrollo de infeciones por anaerobios intervienen factoresbacterianos y propios del huesped.
a) FACTORES BACTERIANOS
- Componenetes del m.o. Que condicionan la virulencia, talescomo cápsula fimbrias, proteínas de pared, LPS, enzimas ytóxinas
- Las toxinas determinan los cuadros clínicos específicosproducidos por clostridium (C. botulinum, C. perfringens, C.tetani, C.difficile)
- Ejercen efecto sinérgico con agentes aerobios
- la flora asociada consume O2 y produce gas (lo cuál reduce elpotencial redox y facilita el creciemiento de anaerobios)
ANAEROBIOS
PATOGENIA
b) FACTORES DEL HUESPED
- Lesiones en las mucosas
- Alteración de los sistemas defensivos
- Modificación del equilibrio bacteriano aerobios
anaerobios, con prevalencia de estos últimos
ANAEROBIOS
SITIOS DE INFECCION
SNC:
- Produce diversas lesiones(meningitis abscesos tromboflebitis de
venas cerebrales)
- Desarrollo por contigüidad a partir de infecciones de senos
paranasales, oído medio y mastoides
- Por inoculación directa en acto quirúrgico
- Traumatismo abierto
- Diseminación hematogena desde focos a distancia
ORODENTALES
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
PLEUROPULMONARES
ANAEROBIOS
SITIOS DE INFECCION INTRAABDOMINALES
- Por perdida de la integridad del tracto G.I. (Carcinoma de colón,apendicitis, obstrucción cirugía previa, etc.)
GINECOLOGICAS
endometritis posparto, sepsis posaborto infección ginecológicaposoperatoria
BACTERIEMIA
Producto de la ruptura de barreras cutáneo-mucosas
PIEL Y TEJIDOS BLANDOS
Agentes causales más frecuentes: Bacteroides, Prevotella,porphyromonas, Fusobacterium, cocos G+ y clostridios
OSTEOMIELITIS
- Frecuentemente producida por Actinomyces israelii
- Localización: huesos de cara y columna dorsolumbar en un altoporcentaje de los casos
CLOSTRIDIOS
Bacilos G+
Anaerobios estrictos
esporulados
Muy resistentes al medio ambiente
forman parte de la flora intestinal del
humano y animales
Cuadro clínico mediado por exotoxinas
(neurotoxinas, histotoxinas, enterotoxinas)
GENERO ClostridiumMETABOLISMO Y CLASIFICACION
REACCIONES BIOQUIMICAS
Las reacciones B.Q. y sus productos establecen la
base para la identificación de las especies
La capacidad para fermentar ciertos azucares es útil
para diferenciar a las especies
Muchos clostridios atacan al los CHO’S, proteínas o
ácidos nucleicos
La mayoría de los clostridios producen grandes
cantidades de gas por fermentación butírica
Fermentación butírica (principalmente CO2 y H2)
Otras Pruebas B.Q. de diferenciación son:
- reacciones en leche
- licuefacción de gelatina
- Producción de indol.
La característica de fermentación tumultuosa de laleche por especies tales como C. perfringens sedebe a la formación de un coágulo que se rasga porel gas acumulado
Ciertos Clostridios son predominantementeproteolíticos y otros son sacarolíticos
GENERO ClostridiumMETABOLISMO Y CLASIFICACION
Los Ag’s somáticos y flagelares no han proporcionan un
sistema práctico de identificación de especies o para su
división en serotipos (Bergey´s Manual of determinative
Bactereology, 8th edition) agrupa a los clostridius de la
siguiente manera:
I) Esporas subterminales.
a) No hidrolizan gelatina – Grupo 1 C. colinum
b) Hidrolizan gelatina – Grupo 2
- C. sordellii - C. botullinum - C. novyi
- C. perfringens - C. haemolyticcum - C. chauvoei
- C. septicum - C. difficile
II) Esporas terminales
a) No hidrolizan gelatina – Grupo 3 (No esta relacionado
a enfermedades)
b) Hidrolizan gelatina – Grupo 4 C. tetani
III) Especies con requerimientos especiales para crecer –
Grupo 5
( ninguno asociado a enfermendades)
GENERO Clostridium
Por su patogenicidad se dividen en dos grupos:
1) Incluye a C. botulinum y C. tetani
Son no invasivos y colonizan a individuosafectados en sitios muy especificos produciendoenfermedades iguales en animales y humanos
2) Grupo Gas gangrena.
Se diseminan via portal produciendo infeccioneslocales y manifestaciones sistémicas como laenterotoxemias.
GENERO ClostridiumPATOGENICIDAD
La potencia de las tóxinas producidas y la habilidad
invasiva permite una división de los clostridiums
patógenos en los siguientes grupos:
Clostridios neurotrópicos (C. tetani, C. botulinum)
Clostridios histotóxicos (C. chauvoei, C. septicum, C
novyi, C. haemoliticum, C. sordellii, C. perfringens tipo
A y C) incluye clostridios productores de gangrena
gaseosa.
Clostridios que producen enterotoxemias (C.perfringes tipo A – E)
Clostidios que producen enfermedadesentéricas que pueden ser inducidas porantibióticos (C. difficile y C spiroforme)
GENERO Clostridium
DIAGNOSTICO GENERAL
Muestras
- Heridas tejidos o cadáveres de humanos y
animales de muerte reciente ( C. perfringens, C.
septicum invaden rápidamente el animal post-
mortem)
- Para aislamientos cortes de tejido afectado o
líquidos en contenedores libres de aire, sistemas
comerciales, medios de transporte de Cary-Blair
Microscopia Directa
Tinción de Gram
Técnica de anticuerpos Flourecentes
Se usa antisuero marcado comercialmente en partícular C. chauvoei, C septicum, C. novyi y C. sordellii
GENERO ClostridiumProcedimiento General de aislamiento
Se recomienda AS fresco o prereducido para
aislamiento de clostridius debido a que una vez
almacenado absorbe gradualmente O2.
Una placa de AS y otra de AMC deben inocularse
aeróbicamente ya que estas pueden detectar
patógenos aeróbicos presentes e indicar el grado
de contaminación por anaerobios facultativos.
• Medios líquidos y semisólidos con bajopotencial redox, como el Caldo cooked meat y eltioglicolato se usan para mantener puros loscultivos clostridios (su uso es limitado en cultivosprimarios).
• Estos medios deben calentarse a ebullición paraexpeler el O2 absorbido y enfriarse rápidamente a37° C.
GENERO ClostridiumREACCIONES BIOQUIMICAS
En AYH los clostidios con actividad lecitinasa
producen opalescencia alrededor de las colonias
por su acción enzimática sobre la lecitina
Los que producen lipasas generan una capa
perlada que puede cubrir la colonia y algunas
veces todo el medio
Cl. perfringes- Nagler test positivo en agar yema de huevo
perdida de la actividad de la Lecitinasa en el lado derecho, con
antitoxina, comparado con el agar limpio en el lado izquierdo, sin
antitoxina
Una emulsión de lípidos y un indicador
llamado Spirit Blue se incorporan en un
medio sólido complejo.
• C. perfringens inoculado en medio de leche
tornasol produce la reacción “stormy clot” (reacción
tormentosa).
La lactosa del medio es fermentada por C.
perfringens produciendo ácido que coágula la
caseína e inducen un cambio de color de azul a rosa
El coágulo ácido es roto por la formación de gas
• Sistemas comerciales miniaturizados como API
20A, ATB 32aA (Biomeriux) se han desarrollado
para identificar a los clostridios
GENERO ClostridiumCLOSTRIDIOS NEUROTOXICOS
Clostridium tetani
Agente causal del tetanos
libera tetanospasmina (neurotoxina) en la misma heridageneralmente sucia
En la herida el bacilo germina y se multiplica
Posteriormente la toxina se disemina vía intraaxonalretrógrada hasta llegar a SNC, donde bloquea neuronasinhibidoras, provocando el cuadro clínico típico
Tétanos neonatal se debe a la contaminación del cordónumbilical
Periodo de incubación aproximado de 2 semanas
GENERO ClostridiumCLOSTRIDIOS NEUROTOXICOS
Clostridium tetani
CARACTERISTICAS GENERALES
- Su endospora es circular y terminal (aspecto de palillode tambor), resistentes a temperatura.
PATOGENIA
Produce las siguientes exotóxinas:
- Tetanolisina: no parece tener significado patogénico
- Tetanopasmina (neurotóxina codificada por plasmidos)responsable de los cuadros clínicos del tétanos
- La tetanospasmina una vez unida a gangliosidos nopuede ser neutralizada por la antitóxina.
Clostridium tetani
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
- Se basa en signos clínicos característicos, no se necesitan pruebas de laboratorio
- La demostración e identificación de la tóxina esimportante para el Dx.
MICROSCOPIA DIRECTA
- Frotis de material presentes de heridas (Tinción deGram)
- Se observan esporas características de palillos detambor de C. tetani, C. tetanomaspitum y C.tetanoides tienen morfología similar
AISLAMIENTO
- Exudado o téjido necrótico de heridas se calienta a
80°C/20min
- Se inocula en placas de AS y AS duro (3% Agar)
- Un caldo de cooked meat o tioglicolato pueden
inocularse e incubar 2-3 dias
Subcultivo de AS e incubar a 37°C/3-4 días en
atmósfera de CO2 y H2
IDENTIFICACION MORFOLOGICA COLONIAL
- C. tetani en AS es hemolítico y crece como enjambre
de abejas
REACCIONES BIOQUIMICAS
Gelatina (+)
No fermenta CHO´S comunes
IDENTIFICACION DE LA TOXINA
- Demostración de la tóxina presente en suero o en
filtrados de cooked meat o medio de tioglicolato.
Debe mostrarse en animales de laboratorio e
identificado por pruebas de neutralización y de
protección utilizando la antitoxinaespecifica.
- En la prueba de protección a animales se les aplica
la antitóxina 2 hrs antes de inocular la tóxina
- Ratones control presentan sígnos típicos de
espasmos tetánicos en el sitio de inoculación.
Clostridium botulinum
Produce 7 neurotoxinas
Inhiben la liberación de acetilcolina (Ach)
en la unión neuromuscular
Germina, se multiplica y libera sus toxinas
en alimentos mal conservados
Puede contaminar heridas, libera la toxina y
esta se disemina.
Clostridium butilinum
CARACTERISTICAS GENERALES
- Bacilo recto en pH a la neutralidad produce esporas ovales y subterminales
- Esporas resistentes, pero se destruyen a 121°C/15min
- Tóxinas se destruyen a 100°C/20min
- Produce 8 diferentes tipos de neurotóxinas A, B, C, C, D, E, F, G.
- Los tipos A y B, ocasionalmente E son responsables de los casos
- Se forma en pescados
- Las tóxinas son identicas en acción, pero diferentes en potencia, distribución y antígenicidad
PATOGENISIDAD
* BOTULISMO
- Intoxicación causada por ingestión de la tóxina
preformada en alimentos
Toxina que se absorbe
en tracto G.I.
Trasportado vía
sanguínea a nervios
periféricos
Unión a células susceptibles
suprimiendo la conexión de Ach a las funciones
mioneurales
Resultado:
Parálisis flácida y respiratoria. Muerte causada por falta
circulatoria
* BOTULISMO INFANTIL (tóxico infecciónintroinstestinal) es rara
- Ocurre en lactantes de 3-20 semanas
- Se presenta cuando las esporas de clostridiosgerminan en I.D., colonizan, producen la tóxina(la flora no ha sido bien establecida)
* BOTULISMO EN HERIDAS
- Forma rara de la enfermedad
- Las esporas entran por heridas, germinan y seforma la tóxina en este mismo sitio.
- Se disemina en el cuerpo causando severaenfermadad neurológico similar al botulismo.
TOXINA BOTULINICA
- Uno de los venenos más potentes conocidos
- Proteína de 150 Daltones (puede cristalizarse o
polvo blanco)
- Un microorganismo puede contener hasta 1.2 x
106 de DL para el ratón
- 0.25 Kg pueden matar a toda la población del
planeta.
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
Se basa en la historia, signos clínicos, demostración
e identificación de la tóxina en suero de animales
moribundos o recientemente muertos.
Detección y/o C. botulinum en alimentos
sospechosos.
DEMOSTRACION DE LA TOXINA
Suero o exudado seroso de
humano inoculado vía IV (0.3mL) o IP (0.5mL) a
ratones
Toxina presente
El animal adquiere apariencia
característica de cintura de
abeja (en pocas horas)
Por parálisis de músculos
respiratorios Provocando respiración
abdominal
EXTRACCION DE LA TOXINA
Macerado del producto en
SSF toda la noche
Centrifugado de la suspensión
Filtrado del sobrenadante con
filtro 0.45 mm
Como la toxina puede estar
como protóxina
Mezclar que partes del filtrado con J de solución de
tripsina al 9% Incubar a 37° C / 45 min
Inocular ratones IP
IDENTIFICACIÓN DE LA TOXINA
Para pruebas de
neutralización con
ratones
Utilizar inicialmente
antitoxinas polivalente
Seguido de antitoxinas
monovalente
Identificación de la toxina y tipo de clostridium
AISLAMIENTO DE C. batilum DE ALIMENTOS
Maceración de alimentos en
pequeña cantidad de SSF
Calentar la suspensión 65-80°C / 20 min para destruir m.o´s contaminantes e
inducir la germinación de esporas
Inocular la suspensión en AS e incubar anaerobiosis a 35°C / 5 días ( esporas
tipo E requieren Tx con lisozima para
provocar germinación)
Colonias de AS generalmente son hemolíticos su apariencia va de
abombados con bordes rasgados, hasta planas y rugosas
Inocular en caldo Coged meta para
determinar si fue producida la tóxina
Incubar 30 °C / 5-10 días
Los filtrados se preparan y los
animales de laboratorio se utilizan
para demostración e identificación
de la tóxina
GENERO ClostridiumCLOSTRIDIOS NEUROTOXICOS
Clostridios que producen gangrena gaseosa
- Sus tóxina no son tan potentes como las de C. tetani y C. botulinum
- Son invasivos
- Su síndrome puede ir desde una infección en heridas hasta severa y fatal gangrena gaseosa
- Las infecciones pueden ser de origen exógeno y endógeno
Infeccciones endógenas se presentan por C. chauvoei
Infecciones endógenas se presentan por C. chauvoei
Infecciones exógenas
Las esporas se introducen
por heridas
Germinan en este sitio por el
material necrótico
Producción de tóxinas por las formas
vegetativas
DIAGNOSTICO DE
LABORATORIOA) Técnica de anticuerpos flourescentes
- Se adquieren comercialmente antisuerosmarcados con fluoresceína específicos para C.chauvoei, C. perfirngens, C. septicum. C. novyi yC. sordellii
- Método rápido para la identificación deClostridios
- Se aplica a frotis de tejidos afectados o médulaósea fijados en acetona
b) Tinción de Gram de téjidos afectados
c) Apariencia y aislamiento de colonias
- Para aislamiento de m.o. exigentes como C.chauvoei; utilizar AS de ovino con extracto dehígado
- Para aislamiento de C. septicum, C. sordellii, C.perfringes y C. novyi tipo A utilizar AS duro (3%de agar)
- Inocular medios e incubar bajo condicionesanaerobias estrictas (10% de CO2) a 37° C/2 – 4días
D) Reacción de Nagler de C. perfringes
- La antotóxina A (α) se disemina en una placa deAYH y se deja secar
- Cepa sospechosa de C. perfringes se estrían enforma cruzada en ambos lados de la placa
- Todos los tipos de C. perfirnges producen una (α)tóxina (lecitinasa)
- En la mitad de la placa que no tiene antitóxina esatacada produciendo opalescencia alrededor de laestría
- La reacción lecitinasa es neutrlizada en la otramitad de la placa por la antitóxina, pero elcrecimiento de Clostridium no se ve afectado
e) Reacción de CAMP de C. perfringes
- Streptococcus agalacteae produce un factor
difundible, mejora la hemólisis parcial de la tóxina
α
- La zona completa de hemólisis se observa
inmediatamente alrededor de la colonia y es causada
por la tóxina θ
Clostridium difficile
- Tiene requerimientos exigentes para su crecimento
- Se reconoce como cuasa de enfremedad diarreica severa ulcerosa de I. G. (colitis pseudomembranosa) (C. S. M)
- Asociado a tranbtornos intestinales vinculados a Txcon antibióticos
- Los transtornos va desde estado de protadorasíntomatica diarrea moderada a leve hasta C.S.Mfulminante y potencialmente letal
Principal causa de diarrea intrahospitalariaactualmente
C. difficile se encuentra en la biota normal o esadquirido del medio ambiente intrahospitalariodurante el Tx con antibióticos (estos son ambientehostil para el m.o y lo forza a estar en estado deespora)
Los antibióticos tienen capacidad de suprimir laflora normal
En algun momento la espora germina y la formavegetativa de C. difficile crecen en gran cantidad,coloniza y produce toxinas
Cuando el nivel de toxina llega a un estado críticoen IG comienza la diarrea
Clostridium perfringes
Se relaciona con la gangrena gaseosa (80%
de los casos) y cuadros enterotóxicos
(toxiinfección alimentaria, enteritis
necrosante, colitis pseudomembranosa
posantibióticos)
la gangrena gaseosa se caracteriza por gran
destrucción muscular con dolor, edema,
crepitación, necrosis y toxicidad sistémica
Clostridium perfringes
DIAGNOSTICO
a) Toma de muestra
- Debido a que la mezcla de anaerobios y flora saprofita lleva a
confusión en el Dx microbiológico, se consideran muestras
inapropiadas las siguientes
Las procedentes de superficies mucosas, habitualmente
habitadas por este tipo de m.o. (frotis nasofaríngeo, vaginal,
uretraly cervical; esputo, heces y orina)
- Es conveniente tomar el exudado de ulceras con una aguja y
jeringa del fondo de las mismas.
- La punción-aspiración es buena técnica para obtener materail
pulmonar, pleural, peritoneal, osteoarticular y de abscesos
- Punción suprapúbica esta indicada en infecciones urinarias
- Punción trastraqueal es infecciones del tracto respiratorio inferior
DIAGNOSTICO
b) Identificación
- Tinciones de gram, naranja de acridina, fluorescencia
- Detección de Ag’s bacterianos
- Sondas de ADN
c) Aislamiento
- Incubación de muestras en sistemas de anaerobiosis
d) Cultivo
- Medios selectivo y no selectivos
TIOGLICOLATO
Cl. perfringes- Nagler test positivo en agar yema de huevo
perdida de la actividad de la Lecitinasa en el lado derecho, con
antitoxina, comparado con el agar limpio en el lado izquierdo, sin
antitoxina
Una emulsión de lípidos y un indicador
llamado Spirit Blue se incorporan en un
medio sólido complejo.
LECITINASA
Prueba de gelatinasa
GENERO
Pseudomonas
Pseudomonas
QUIÉN ES
PSEUDOMONAS?
GENERO Pseudomonas
Patógenos oportunistas
La mayoría de las infecciones las produce
Pseudomonas Aeruginosa (Principal patógeno
humano del grupo)
Afecta especialmente a pacientes
inmunodeprimidos y hospitalizados
El genero Pseudomonas se distribuye ampliamente
en el suelo, agua plantas y animales
Es invasora y toxigénica
GENERO Pseudomonas
TAXONOMIA
Hasta 1993 el género Pseudomonas se dividía en 5grupos
Actualmente algunas especies que se incluían en estegenero se clasifican como géneros diferentes. Entreellos:
- Xanthomonas - P. cepacia
- P. mallei - P. pseudomallei
Ahora agrupados en el género Burkholderia
La clasificación de Pseudomonas se basa en lahomología del RNAr/DNA y en característicascomunes de cultivo
GENERO Pseudomonas
TAXONOMIA
GENERO Pseudomonas
CARACTERISTICAS GENERALES
Bacilos G- , arobios obligados, no fementadores, catalasa +,oxidasa + (excepto B. mallei). Motilidad +, no producen esporas
Se encuentra como bacteria única, en pares, ocasionalmente encadenas cortas
Casi todas las especies degradan glucosa por vía oxidativa
Reducen NO3 a NO2, incluso a N2
Común en ambientes húmedos de hospitales (se favorece sucrecimiento)
Pueden servir como reservorios:
- Nebulizadores - Soluciones de lavados
- Equipos de terapia respiratoria - Sistemas de hemodialisis
CARACTERISTICAS GENERALES Bacilos G (-).
Se encuentra como bacteriaúnica, en pares,ocasionalmente en cadenascortas.
Aerobios obligados
No fermentadores.
Catalasa (+).
Oxidasa (+).
Motilidad (+).
No producen esporas.
Casi todas las especiesdegradan glucosa por víaoxidativa.
Reducen NO3 a NO2.
Cápsula mucoide de exopolisacáridos…
GENERO Pseudomonas
CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS
Pseudomonas aeruginosa
Tinción de gram
MEDIOS PARA PSEUDOMONAS
Medio Microorganismos
King A El color verde indica presencia de piocianina. La adición de gotas de cloroformo cambia la coloración a azul (típico de
Pseudomona aureginosa).
King B El color verde fluorescente indica presencia de pioverdina. (diferencia Pseudomona flourences de Pseudomona
auroginosa)
Tubo de Agar Flo Observado bajo luz visible la producción de pioverdina o fluoresceína se observan pigmentos amarillos y con luz UV fluorescencia
Tubo de Agar Tech
Producción de piocianina, con observación de pigmentación
azul turquesa No fluorece con luz UV
GENERO Pseudomonas
CULTIVO
Crecen fácilmente sobre muchos medios de cultivo
Son nutricionalmente muy versátiles (capaces de
utilizar numerosos compuestos como fuente de
carbono)
Produce olor dulce, semejante a jugo de uva
Algunas cepas son hemolíticas
Forma colonias redondas, lisas, color verde
fluorescente, aunque puede producir múltiples tipos
de colonia y da la impresión de un cultivo de
especies bacterianas mixtas
GENERO Pseudomonas
CULTIVO
Produce diversos pigmentos
- Piocianina (azul-verdoso, no fluorescente), difunde en agar.
Solo P. aeruginosa la produce.
- Pioverdina (fluorescente), confiere color verdoso al agar
- Piorrubina (rojo - oscuro)
- Piomelanina (negro) Temperatura optima de crecimiento 30 -
37°C, incluso hasta 42 °C
Algunas especies pueden crecer a 4°
El crecimiento a 42 °C lo diferencia de otras especies de
Pseudomonas en el grupo fluorescente
Pseudomonas aeruginosa…
Pigmento fluorescencia
Oxidación de carbohidratos Oxidasa
GENERO Pseudomonas
CARACTERISTICAS DE
CULTIVOCULTIVO
Pseudomonas aeruginosa
GENERO Pseudomonas
FACTORES DE VIRULENCIA Pilis (fimbrias)
- Se Extienden desde la superficie de la célula
- Promueve la adhesión sobre las células epiteliales del huésped
Capsulas de polisacaridos (glucocalix o exopolisacarido
mucoide)
- Fija a las bacterias entre sí y al medio ambiente
(protegiéndolas de los mecanismos defensivos del huésped,
estimulando la formación de complejos inmunes que dañan el
pulmón)
- Son responsables de las colonias mucoides presentes en
cultivos de pacientes con fibrosis quistica.
LPS: Participan en la génesis de la fiebre, es responsable del
shock séptico, coagulación intravascular diseminada y síndrome
de insuficiencia respiratoria
GENERO Pseudomonas
FACTORES DE VIRULENCIA
Enzimas o toxinas extracelulares producidas por P.aeruginosa
- Elastasas, proteasa y colagenasa.- Favorece la destrucción
tisular y la invasión bacteriana
- Dos hemolisinas: Una fosfolipasa C termolabil y un
glucolípido termoestable
Exotoxina A y S
- Produce necrosis tisular, Participa en la diseminación de la
infección
- Impide la síntesis de proteínas por un mecanismo de acción
similar al de la toxina difterica, aunque la estructura de estas
dos toxinas es diferente
Fibrinolisina
Superproducción del alginato
Alginato (exopolisacarido):
Variación de fase.
Conversión de Alg + a Alg -
La mayoría de los aislamientos de pacientes con CF son Alg +.
Los aislamientos ambientales son Alg - .
Regulación.
Dos-componentes de genes reguladores.
Factor antisigma.
•Neutraliza radicales del oxígeno.
•La alta viscosidad contribuye a la obstrucción de vías aéreas.
•Correlacionado con exoproductos reducidos.
•Mecanismo de adherencia - formación de micro colonias.
•El crecimiento del Biofilm - reduce susceptibilidad a
mecanismos bactericidas dependientes de anticuerpos.
Papel del alginato
en la patogenia de P. aeruginosa .
Formación de Biofilm
Fenotipo Mucoide
No mucoide Mucoide
Patógenos Multirresistentes (PMR)
Multirresistencia….Resistencia a multiples antibióticos
Cuántos?, cuáles?, en qué microorganismo?
• S. aureus resistente a la meticilina
• Enterococo resistente a glucopéptidos
• P. aeruginosa multirresistente Productora de carbapenemasa
• Enterobacterias productoras de BLEE
• A.baumannii resistente a carbapenemas
FACTORES DE VIRULENCIA
GENERO Pseudomonas
PATOGENIA P. aeruginosa es un patógeno oportunista
Solo es patógena cuando se introduce en regiones desprovistas
de defensas normales (alteración en las defensas locales o
sistémicas del huésped)
Mucosas y piel lesionada lesionadas por daño tisular directo,
empleo de catéteres IV o urinarios, neutropenia como
consecuencia de quimioterapia contra el cáncer, etc.
La infección se lleva a cabo en 3 fases:
- Coloniación:Las bacterias se unen a mucosas o piel y las
colonizan (invasión local)
- Destrucción tisular
- Diseminación: Provocan enfermedad sistémica
GENERO Pseudomonas
PATOGENIA
Estos procesos se favorecen por pilis,
enzimas y toxinas
P. Aeruginosa y otras Pseudomonas son
resistentes a muchos antimicrobianos
GENERO Pseudomonas
MECANISMOS DE RESISTENCIA
1. Inhibición de antibióticos -lactamicos por -
lactamasas cromosomicas o plasmidicas
2. Mutación del gen gyr A que altera la DNA-
girasa, produce resistencia a quinolonas
3. Disminución de la permeabilidad de la
membrana externa
}4. Enzimas modificadoras de aminoglucósidos
como las AAC (G’)II que confiere resistencia
conjunta a gentamicinas, tobramicina y
netilmicina
GENERO Pseudomonas
DIAGNOSTICO
La identificación casi siempre se basa en la morfología colonial,
positividad a oxidasa, presencia de pigmantosolor carácterístico
y crecimiento a 42 °C (Esto diferencia a P. Aeruginosa de P.
Fluorescens y P.putida quienes también producen pioverdina)
Muestras:Lesiones cutáneas, pus, orina, sangre, LCR, esputo
Las muestras se siembran en AS y medios diferenciales
comunmente empleados para el crecimiento de bacilos entericos
G-
P. Aeruginosa crece fácilmente en la mayor parte4 de estos
medios, pero a veces más lentamente que los entéricos
No fermenta lactosa
IMPORTANCIA DE Pseudomonas aeruginosa
EN AMBIENTE HOSPITALARIO
Es importante por la alta frecuencia de aislamientoy múltiples factores de patogenicidad ymultiresistencia a antimicrobianos comúnmenteutilizados en clínicas.
Constituyen riesgo elevado para casi todo tipo depacientes, en partícular para aquellos que por suedad, estados patológicos tienen disminuidos susmecanismos de defensa
La frecuencia de infecciones nosocomiales varíade un hospital a otro, oscila entre 3 y 4 por cada100 pacientes
Frecuencias mas elevadas se ven en hospitales o
salas para niños.
Pseudomonas aeruginosa provoca el 10% de estas
infecciones
Septicémias producidas por este m.o. se observan
con mayor frecuencia en individuos quemados
70% de estos pacientes si no se tratan con
medicamentos locales se colonizan con
Pseudomonas aeruginosa u otras especies en no
mas de 3 semanas después de la quemadura
INFECCION INTRAHOSPITALARIA
Procesos infecciosos adquiridos o desarrollados en
pacientes hospitalizados como consecuencia de
infecciones adquiridas en estas instituciones o
debido a procesos patalógicos o maniobras
terapéuticas que favorecen la diseminación del m.o.
previamente establecidos en el sujeto enfermo que
frecuentemente corresponden a la flora normal u
oportunista
Infecciones de P. aeruginosa. Patógeno oportunista humano
Pacientes con fibrosis quistica
Pacientes Immunocomprometidos
( Cáncer, trasplante de órganos, SIDA)
Pacientes quemados
Heridas severas
UTI
Dermatitis
Infecciones de tejido blando
Bacteriemia
Pulmonía
Infecciones intrahospitalarias.
Implantes de catéter (biofilm)
P.Aeruginosa Infecciones
Keratitis Fibrosis quística
Superproducción del alginato
Alginato (exopolisacarido):
Variación de fase.
Conversión de Alg + a Alg -
La mayoría de los aislamientos de pacientes con CF son Alg +.
Los aislamientos ambientales son Alg - .
Regulación.
Dos-componentes de genes reguladores.
Factor antisigma.
•Neutraliza radicales del oxígeno.
•La alta viscosidad contribuye a la obstrucción de vías aéreas.
•Correlacionado con exoproductos reducidos.
•Mecanismo de adherencia - formación de micro colonias.
•El crecimiento del Biofilm - reduce susceptibilidad a
mecanismos bactericidas dependientes de anticuerpos.
Papel del alginato
en la patogenia de P. aeruginosa .
Formación de Biofilm
Fenotipo Mucoide
No mucoide Mucoide
P.Aeruginosa Infecciones
Quemaduras Hemodiálisis
P.Aeruginosa Infecciones
Área de terapia intensiva
P. Aeruginosa infecciones
Quirófanocuneros
Salas de terapia intensiva
¿Por qué causa diversas
infecciones?
Flexibilidad alimenticia
Utilizado a menudo en estudios de bioremediación.
Resistencia a los antibióticos
Impermeable (porina).
Resistencia adquirida (mutación o transferencia).
Factores virulencia
Exotoxina S y A, proteasas, hemolisinas, pigmentos y
alginato.
Estudios de bioremediación
Pseudomonas putida es un microorganismo de la putrefacción y que puede resistir los efectos nocivos de solventes orgánicos.
P. putida mt-2 (pWWO) es capaz de descontaminar de sustancias orgánicas como el tolueno, uno de los componentes de la gasolina.
Se puede utilizar para realizar bioremediación, en la purificación del suelo y del agua subterránea transformando muchas sustancias orgánicas tóxicas a inofensivas.
AISLAMIENTO E IDENTIFICCIÓN
a) Medios y condiciones de crecimiento
- Es nutricionalmente poco exigente.
- Crece en medio basal inorgánico, suplementadocon un solo compuesto orgánico como acetato oglucosa
- No es fermentativa
- Otros aceptores de electrones además de O2,como el NO3 permiten el crecimiento anaerobio
- Crecen facilmente de 20 - 42 °C
Caracteristicas que permiten identificar a
Pseudomonas aeruginosas:
- Crecimiento en Agar citrato dexosicolato
Colonias grisaseas, lactosa (-), pigmento verde que difunde en
el medio indicando producción de piocianinas
- Crecimiento en AMC
Colonias grisaseas, lactosa (-)
- Agar pseudosel
Recupera fácilmente al m.o., se recomienda como medio
selectivo, contien cetrimida (detergente) que inhibe bacterias
Gram (-), favorece producción de piocianinas (color azul
verdoso)
- Medio NFL (Prueba de fluorescencia - desnitrificación)
Determina la reducción de NO3 a N2, Producción de
fluorescencia.
- Agar Tech
Promueve la aparición de color verde debido a las piocianinas
- Medio de D4 de Kado y Heskett
El dodecil sulfato de Sodio elimina contaminantes que alteran
componentes de la superficie celular sus desventajas son que
crecen otras bacterias G(-), no se observa flourecencia
PELIGRO DEL USO INDISCRIMINADO DE
ANTIMICROBIANOS
1) Sensibilización diseminada de la población, con aparición dehipersensibilidad, anafilaxia, erupciones, fiebre, trastornossanguíneos, hepatitis colestática.
2) Cambios en la flora normal del cuerpo con enfermedad resultantepor súper infección de heridas al crecimiento excesivo deorganismo resistentes al medicamento
3) Enmascaramiento de infecciones graves sin erradicarlas
4) Toxicidad directa del medicamento particularmente con el usoprolongado de ciertos antibióticos
5) Desarrollo de resistencia medicamentosa en poblacionesmicrobianas por eliminación de m.o. sensibles a medicamentos ysustitución por m.o. resistentes a los mismos
MEDIO Mc CONKEY
TINCION ZIEL NEELSEN
BAAR (BACILOS ACIDO ALCOHOL RESISTENTES)
POSITIVA NEGATIVA
TINCIONES
Streptococcus spp
Streptococcus pneumonie
ESTREPTOCOCOS
Son cocos Gram (+) de 1 - 1.5
micrómetros de diámetro, anaerobios
facultativos que se disponen en pares
y en cadenas. Son catalasa y oxidasa
negativas y fermentan glucosa con la
producción consiguiente de ácidos.
Muchas especies de este género son
saprófitos para el hombre, otros son
oportunistas y algunos son patógenos
CLASIFICACION
Los estreptococos se pueden diferenciar según:
El tipo de hemólisis
Las características antigénicas
La determinación del grupo antigénico al que pertenecen a través de reacciones serológicas específicas (aglutinación pasiva, precipitación, inmunofluorescencia)
TIPOS DE HEMOLISIS
GAMMA HEMOLITICOS.- Son los
estreptococos no hemolíticos
ALFA HEMOLITICOS.- Son los estreptococos
tipo viridans que producen hemólisis parcial en
torno a la colonia (decoloración parda verdosa)
BETA HEMOLISIS.- Son llamados estreptococos
hemolíticos que destruyen totalemnte los
eritrocitos produciendo halos de transparencia
HEMOLISIS
ALFA
GAMMA
BETTA
FACTORES DE VIRULENCIA Antigeno de pared Celular del grupo A.- Es un
polisacárido (L- ramnosa y N-acetil-D-glucosamina) unido al péptidoglican. Induce la fiebre, provoca necrosis dérmica y cardiaca, lisis y resistencia a mecanismos inespecíficos
Acido hialurónico.- Forma la cápsula
Hialuronidasa.- Es una enzima responsable de hidrolizar el ácido hialurónico del tejido conjuntivo
Proteina M.- Es una poteína que está conectada a la membrana de la bacteria. Es sensible a los ácidos, al calor y a la tripsina. Provee a la bacteria resistencia a la fogocitosis. Se conocen 80 serotipos y su tipificación se realiza con la técnica de Lancefield
Estreptolisisna O.- Es una proteína lábil al oxígeno, es antigénica, se inhibe frente al colesterol y es tóxica para los leucocitos y monocitos. Responsable de la beta-hemólisis. Es útil para el Dx de infecciones faringeas y poco útil para infecciones cútaneas.
Exotoxina Estreptocócica Pirógena.- Es laresponsable de la escarlatina. Se conocen los tiposA, B y C.
La A y C provienen de bacteriófagos
El tipo B es de origen cromosómico.
Desoxirribonucleasas.- Es una enzima quedespolimeriza al ADN, son antigénicas y seconocen los tipos A, B, C y D.
Estreptoquinasas.- Su mecanismo de acción esactivar el plasminógeno a plasmina (rotura decoágulos). Presenta propiedades antigénicas. Aligual que la estreptolisina S se utiliza en hospitalesen procesos trombo génicos.
Estreptococos del Grupo A
Debido a la gran cantidad de factores de virulencia que presentan,
producen procesos infecciosos en el hombre que pueden ser o no de
carácter supurativo.
Producen infecciones en piel y en mucosas (faringoamigdalitis,
sinusitis), infecciones en vísceras o infecciones generalizadas.
Con frecuencia hay complicaciones no supuradas, como fiebre
reumática o glomérulo nefritis.
La fiebre reumática aparece de forma tardía pueden generar
mecanismos inmunológicos (SLO), donde se originan daños
progresivos en tejido conectivo de articulaciones y corazón
Estreptococos del Grupo B
Es saprofito para el hombre, se localiza en rinofaringe,
aparato urogenital e intestinal. Se asocia a las infecciones
oportunistas.
Su hemólisis es variable aunque en su mayoría son Beta
hemolíticos.
La prueba de hipurato de sodio diferencia del resto.
Presenta en superficie un carbohidrato C. Originan
meningitis e infecciones pulmonares en neonatos así, como
infecciones en el tracto respiratorio, mucosas y piel
Estreptococos del Grupo C
Por las propiedades que presentan es la más próxima
al grupo A y corresponden a S. Beta-hemolíticos.
Es muy sensible a gentes externos.
Aparece como saprofito de la rinofaringe y en
ocasiones puede actuar como patógeno.
Estreptococos del Grupo D
Son estreptococos alfa y gamma hemolíticos, que
resisten muy bien a los agentes externos e incluso a los
antibióticos.
Se dividen en entero cocos (S. faecalis y S. faecium
entre otros, son saprofitos del intestino del hombre.
Los no entero cocos (S. bovis y S. equinus), afectan a
vacas y caballos
Streptococcus pneumoniae
(neumococo)
Este tipo de estreptococo constituye un grupo aparte.
Aunque también son Gram (+) se distribuyen como
diplococos.
Son muy sensibles a los agentes externos , necesitan medios
muy específicos para su cultivo.
Se encuentra como saprofito en la flora normal del aparto
respiratorio, aunque se relacionan con neumonías, afecciones
inflamatorias y meningitis.
Su acción patógena está relacionada con un polisacárido
capsular específico que facilita la invasión. Contiene proteína
M y sustancia C
Streptococcus spp
FUENTES DE INFECCION
ESTREPTOCOCICA
La fuente de infección causada por esta bacteria suele
ser endógena (vías respiratorias, fisuras y otras
heridas infectadas).
También pueden proceder de instrumentos o paños
contaminados.
Hay portadores de estreptococos en heces, faringe y
lesiones cutáneas.
FUENTES DE INFECCION
ESTREPTOCOCICA
Los estreptococos del grupo A son causantes de
infecciones en tejidos blandos, se propagan por
tracto directo de una zona lesionada.
El hinchamiento y la higiene deficiente facilitan su
diseminación. Causan piodermia e impétigo.
En la práctica quirúrgica se encuentra casi siempre
en infecciones mixtas de heridas o septicemias
intraperitoneales.
Las infecciones por estreptococos del grupo A siguen unaevolución muy rápida en la que se produce celulitisdifusa, linfangitis y linfadenitis.
No suelen formar abscesos, pero pueden producir necrosis,gangrena o esfacelación local.
En ocasiones aparecen con cúmulos de pus o materialnecrótico sí los límites de la herida se gangrenan,resultando imprescindible su apertura y desbridamiento.
Las infecciones producidas por enterococos son menosinvasivas que las producidas por Streptococcus del grupoA, las cuales se asocian con bacterias Gram (-)intestinales.
HIDRÓLISIS DE ESCULINA
POSITIVA NEGATIVA
HIDRÓLISIS DE HIPURATO
NEGATIVA POSITIVA
PRUEBA DE OPTOQUINAStreptococcus Grupo D
INFECCIONES MIXTAS O SINERGICAS
Hay infecciones que complican las intervencionesquirúrgicas y los traumatismos que son producidospor una flora bacteriana mixta demicroorganismos aerobios, anaerobios que amenudo aparecen como consecuencia de algunalesión o perforación de los aparatosgastrointestinal, respiratorio o genitourinario.
Estos agentes pueden actuar sinergicamentemanifestándose en celulitis, abscesos, trombosis,necrosis, gangrenas y crepitaciones.
BACILOS GRAM (-)
Muchos microorganismos como Klebsiella
pneumoniae y E. Coli presentan una cápsula de
polisacárido (Ag K).
A través de la cápsula externa penetra una estructura
llamada flagelo portadora del Ag H. Estructuras
superficiales llamadas fimbrias que sobresalen de la
cápsula o de la pared celular externa facilitan la
adherencia a mucosas.
Los antígenos de la pared celular
denominados antígenos somáticos o
antígenos O, además de los
polisacáridos y las endotóxinas, son
importantes en la Patagonia de estos
géneros.
La frecuencia de infecciones Gram (-) está
relacionada con el aumento de las
intervenciones quirúrgicas en pacientes
debilitados con enfermedades crónicas. En
las infecciones post-quirúrgicas producidas
por E. coli, Enterobacter, spp, Klebsiella
spp, Proteus o Pseudomonas suelen
encontrarse también Estreptococos
anaerobios facultativos y Bacteroides
fragilis , dichas infecciones son producidas
por el contenido intestinal. Su periodo de
incubación va de 7 a 14 días siendo el
dolor y los edemas menos evidentes en las
infecciones causadas por Staphylococcus.
ENTEROBACTERIAS
Son bacterias que se encuentran en el tracto
digestivo, sus características principales
son:
Bacilos o cobacilos Gram (-)
Son aerobios y anaerobios facultativos
Miden de 1 a 4 micrómetros de longitud
Son de motilidad variable
Son oxidasas negativas
Fermentan glucosa
Producen gran cantidad de fermentos
como, gelatinasas, descarboxilasas,
ureasas,galactocidasas, desaminasas, etc.
ANTIGENOS ASOCIADOS
Antígeno somático.- Es una endotóxina,
formada por una parte proteíca que es la
responsable del poder antigénico y una
parte lípidica inactiva bioquimicamente.
Antígeno capsular K.- Presentan
propiedades antifagocitarias.
Antígeno flagelar H.- Característico de
las cepas móviles. Es de origen proteico y
es el responsable de la acción patógena de
la bacteria.
CRECIMIENTOS
Cuando se cultivan en medios selectivos estas
bacterias presenta un crecimiento similar en
agar sangre y suelen manifestándose en forma
de colonias grises relucientes y grandes que
pueden ser o no hemolíticas. Llegan a ser de
color blanco grisáceo, translúcidas y levemente
convexas, algunas grandes y mucoides.
MEDIOS DE CULTIVO
Los medios básicos de cultivo básicos
para su identificación son Agar Sangre,
Agar Mc Conkey y XLD.
La fermentación de la lactosa es de gran
importancia en la identificación bacteriológica
de los Gram (-), de esta manera las bacterias
lactosa positivas son más suceptibles a los
agentes antimicrobianos, mientras los que no
fermentan la lactosa o lo hacen lentamente en
ocasiones presentan mayor resistencia a
terapia antimicrobiana.
INFECCIONES POR ENTEROBACTERIASEscherichia coli
Es un bacilo aerobio facultativo más abundante en
tracto gastrointestinal, puede ser responsable de
procesos diárreicos, y puede causar a partir de un
foco de infección primaria que pudiera prolongarse
hasta causar una bacteremia
Escherichia coli
Escherichia coli
Klebsiella
Dentro de este género se reconocen tres especies: K.
Pneumonie, K. Ozaenae, K. Rhinoscleromatis y K.
Oxytoca. Este género produce con frecuencia
colonias mucoides grandes.
K. Pneumoniae es la cuasa de hasta el 10% de las
infecciones adquiridas en el hospital (vías urinarias,
respiratorias y heridas).
ENTEROBACTER
El género Enterobacter comprende varias especies.
E. aerogenes, E. cloacae y E. agglomerans. Por sí
solas no ocasionan infección primaria en ningún
caso, pero se aislan en combinación con E. coli y
Klebsiella de infecciones como drenaje de heridas
en pacientes hospitalizados
E. aerogenes
EMB Mc Conkey
Proteus
Se le asiganan dos especies: P. mirabilis, no
fermentadora de indol. Su principal característica es el
fenómeno de Swarm (crecimiento confluente) de
color gris azulado, que complica el aislamiento de
otros microorganismos presentes en cultivos. Se le ha
considerado responsable de infecciones en heridas y
de pulmón.
La presencia de numerosos flagelos les confiere una
movilidad importante en la infecciones ascendentes
Providencia
Este género consta de tres especies: P.
alcalifaciens, P. rettgeri y P. stuertii, se identifican
con relativa facilidad. P. stuartii es considerada
causante de infecciones hospitalarias complicadas
del aparato urinario y en unidades de quemados.
INFECCIONES DE TEJIDO SUBCUTÁNEO
CON O SIN AFECCIÓN EN LA PIEL
• Absceso cutáneo y subcutáneo
• Pie fétido y diabético
• Heridas por mordeduras
• Celulitis anaerobias, absceso gaseosa y
celulitis clostridiana
• Infección de heridas por quemaduras
MEDIOS DIFERENCIALES PARA
ENTEROBACTERIAS
Medio Microorganismos
Mc Conkey - Lac (+), colonias rojas
E. coli, Klebsiella y Enterobacter
- Lac (+), fermentadoras lentas colonias rojas
Citrobacter, Providencia, Serratia y Hafnia
- Lac (-), colonias transparentes
Proteus, Salmonella, Shigella, Edwadsiella
EMB - Fermentan Lactosa, colonias negras verdosas con brillo metálico
E. coli
- Producen colonias púrpuras entre 24-48 hrs.
Klebsiella, Enterobacter, Serratia y Hafnia
- No fermentan Lactosa, colonias transparentes
Proteus, Salmonella y Shigella
- Fermentan sacarosa, colonias transparentes
Yersinia enterocolitica
MEDIOS ALTAMENTE SELECTIVOS
Medio Microorganismos
SS
- Fermentadores de Lactosa, colonias rojas Salmonella arizonae
- No fermentadores de Lactosa, colonias incoloras con centro negro Salmonella - Colonias no fermentadoras de Lactosa sin centro negros
Shigella
Agar Hektoen Enterico
- Fermentadores de Lactosa, colonias naranjas brillantes a rosado salmón E. coli
- Colonias azul verdosas con centros negros Salmonella
- Colonia verdosas y palidez hacia la periferia Shigella - Colonias pequeñas, transparentes y brillantes (acuosas)
Proteus
XLD (Agar Xilosa
Lisina Desoxicolato)
- Colonias amarillas brillantes, Xilosa (+) E. coli y Klepsiella
- Colonias rojas con centros negros, Lisina (+) Salmonella y Citrobacter - No utiliza ninguno de estos CHO´S son colonias transparentes
Shigella, Providencia y Proteus
GENERO Staphylococcus
CARACTERISTICAS GENERALES
Algunos son miembros de la flora normal de la piel y mucosas de loshumanos
Otros causan supuración, formación de abscesos, varías infecciones ysepticemia mortal
Los estafilococos patógenos casi siempre causan hemolisis,coagulación de plasma y varias enzimas y toxinas extracelularescausan
Los tres generos de imporancia clínica son:
- Staphylococcus aureus (coagulasa +)
- Staphylococcus epidermidis
- Staphylococcus saprophyticus
Los estafilococos coagulasa negativos son normales en la flora humanaa veces causan infección, casi siempre asociada con dispositivos yaparatos implantados
75% de las infecciones causadas por
staphylococcus coagulasa (-) se deben a S.
epidermidis
Son menos comunes las infecciones causadas por
S. logdunensis, S. hominis y otras especies
S. saprophyticus es causa comun de infecciones de
aparato urinario en mujeres jovenes
Bacteremia causada por Staphyloccoccus aureus
Staphylococcus
epidermidis
Staphylococcus
epidermidis
Staphylococcus epidermidis
MORFOLOGIA E IDENTIFICACIÓN
Células esféricas G(+) dispuestas en racimos de uvas irregulares
En líquidos de cultivo se observan cocos únicos, en parejas tetradas y cadenas.
Los cocos jóvenes son fuertemente G(+), después de envejecer muchas células se hacen G(-)
Motilidad (-)
No forman esporas
Producen pigmento que varian desde el color blanco hasta el amarillo intenso
Staphylococcus
Prueba S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus
Gram y Morfología Coco G(+) Agrupados en racimos
Catalasa + + +
OF F F F
Coagulasa + - -
Sensibilidad a
novobiocina
NA S R
Ureasa NA + -
Nitratos NA - +
Manitol + - -
Hemólisis β α α
Staphylococcus aureusTinción
Staphylococcus aureus
CULTIVO
Crecen fácilmente en casi todos los medios bacteriológicosen condiciones aerobias o microaerofílicas
Crecen con mayor rápidez a 37 °C
Sobre medios sólidos las colonias son redondas, lisasprominentes y brillantes
S. aureus puede producir hemólisis de grado variableforma colonias grises o amarillo dorado intenso
S. epidermidis en aislamiento primario, las colonias soncolor gris o blanco, muchas colonias desarrollan pigmentodespués de incubación prolongada
Peptoestreptococcus son anaerobios y morfologícamentemuy parecidos al Staphylococcus
Hemólisis Staphylococcus aureus
HEMOLIS
Staphylococcus aureus
COAGULASA
NEGATIVA POSITIVA
CARACTERISTICAS DE CRECIMIENTO
Producen catalasa (esto los diferencia de losStreptococcus)
Fermentan lentamente muchos CHO´S
Producen ácido láctico pero no gas
Actividad proteolítica varía de una cepa a otra
Son resistentes a la desecación al calor (resisten50°C durante 30 min) y al NaCl 9%
Pueden inhibirse con hexaclorofeno al 3%muestran susceptibilidad variable a muchosantibióticos
ESTRUCTURA ANTIGENICA
Contienen polisacáridos y proteínas antigénicas
El PG suministra el hexoesqueleto rígido de lapared celular. Induce la producción de IL-I(pirogeno endógeno) y de Ac opsonicos enmonocitos
Puede atraer químicamente a Leucocitos PMN
Posee actividad parecida a endotóxina y activa alcomplemento
Proteína G. Componente de la pared celular demuchas cepas de S. aureus, se une a la porción Fcde las Ig G excepto Ig G3
Algunas cepas de S. aureus poseen cápsulas que
inhiben fagocitocis por los leucocitos PMN
S. aureus posee coagulasa en la superficie de la
pared celular .
La coagulasa se une de manera no enzimática al
fibrinógeno y produce la agregación bacteriana
TOXINAS Y ENZIMAS
A) Catalasa: convierte el H2O2 en H2O y O2
diferencia Staphylococcus de Streptococcus
B) Coagulasa: proteína similar a la enzima que
coagula el plasma
C) Otras enzimas: hialuronidasa staphylocinasa.
D) Exotóxinas: causan lisis en eritrocitos y dañan
plaquetas
E) Leucocidina: mata leucocitos
D) Tóxina exfoliativa: tóxina de S. aureus, producedescamación generalizada en el Sindrome depiel escaldada.
E) Tóxina del Sindrome del choque tóxico: seasocia con fiebre, choque y afeccion demultiples sistemas, incluyendo errupcióndescamativa de la piel
F) Enterotóxinas: 50% de las cepas de S. aureusproducen seis tóxinas solubles A-F. Sonsuperantigenos que se unen al MHCIIestimulando las células T
La resistencia puede clasificarse en los siguientestipos:
1) Producción de lactamasa (bajo control de unplásmido)
2) Resistencia a nafcilina (independiente de laprodución de lactamasa)
3) Fracaso del tratamiento con vancomicina (porun incremento de la síntesis de la parede celular yalteraciones de ésta)
4) Plamidos
5)Tolerancia (el farmaco inhibe losStaphylococcus pero no los mata)
PATOGENIA
Estafilococos en partícular es epidermidis sonparte de la flora normal de la piel humana y deaparatos respiratorios y G.I
La capacidad patógena de S. aureus es un efectocombinado de factores extracelulares y tóxinasaunado a las propiedades invasoras de las cepas
S. aureus produce coagulación y tiende a causarhemólisis
S. epidermidis (no patógeno y no invasor) soncoagulasa negativos y tienden a ser no hemolíticos
Pocas veces producen supuración pero puedeninfectar protesis ortopédicas o cardiovasculares
DIAGNOSTICO
a) Muestras: pues, sangre, aspirado tráqueal, L.C.R
b) Frotis: observación de estrcuturas típicas, no es posible distinguir m.o saprofitos de patógenos
c) Cultivo: muestras sembradas a 37° C
- De AS producen colonias típicas en 18 hrs.
- No puede presentar hemólisis y producción de pigmento hasta días después
- S.aureus es Mol (+) en ASM
- Muestras contaminadas con flora mixta se cultivan en medios con 7.5% de NaCl
D) Prueba de catalasa:
E) Prueba de la coagulasa
F) Pbas. De suscepitibildad
G) Pbas serológicas
GRACIAS ….
ESTRUCTURA DE UNA ESPORA
Bacillus anthracis
Bacillus antrhacis
La gangrena de Fournier es un proceso infeccioso agudo y
necrotizante que afecta a la piel de los genitales. Produce una
necrosis de la piel y del tejido celular subcutáneo fácilmente
reconocible a la inspección externa y obliga a un desbridamiento
quirúrgico amplio de la zona afecta para poder limitar la
progresión del proceso.
Tétanos
Tétanos
Tétanos
Tétanos
Tétanos en animales
Botulismo
Botulismo
Botulismo
El consumo de alimentos procesados y envasados sin las
normas mínimas de higiene, propicia la reproducción
bacteriana y toxina botulínica.
COLITIS PSEUDOMEMBRANOSA: Mucosa cubierta por
numerosas placas blanco amarillentas que miden algunos
milímetros de diámetro.
COLITIS PSEUDOMEMBRANOSA: Corte a muy bajo aumento
de intestino grueso. A la derecha se observa una placa solevantada,
con dilatación de las criptas, necrosis y pseudomembrana en el
tercio superior de la mucosa. Edema inflamatorio de la submucosa
subyacente.
Quemaduras
Quemadura grave
Quemaduras
¿De qué viven los quemados?
En un estudio de 1995 sobre tibias fracturadas, el tiempo promedio que
los fumadores tardaron en recuperarse alcanzó nada menos que 276
días, casi el doble de los 146 días que requirieron personas de igual
edad pero que no fumaban. Otro estudio se concentró en tobillos
quebrados y encontró que los fumadores tenían cuatro veces más
posibilidades que quienes no fumaban de que sus huesos no sanaran
adecuadamente. El mensaje es claro: quiebre con el vicio, antes de que
éste lo quiebre a usted.
Cirugía estética
Clostridium
anaerobic Gram positive rods,
spore formers
•most strict anaerobes, some
aerotolerant
•some appear Gram negative
•spores do not appear in all species
•130 species identified
•organisms in soil, sewage, GI tract
•disease production usually
associated with:
•spore production
•rapid growth in absence of oxygen
•numerous toxins
Clostridia
•C. perfringens: tissue infections,
enteritis
•C. tetani: tetanus
•C. botulinum: botulism
•C. difficile: antibiotic-associated
pseudomembranous colitis
•some other Clostridia: deep
tissue infections
Clostridium perfringens: •most
commonly found Clostridium in
clinical specimens
•large rectangular morphology of
organism, spore production rarely
seen (in vivo and in vitro)
•nonmotile, but spreading colony
on agar, hemolytic
•production of one or more lethal
toxins (α, β, ε, ι) divides organisms
into 5 groups (A-E), type A is most
common in US
•other enzymes and virulence
factors (table 37-3)
Clostridium perfringens:
•α toxin: most important, produced
by all C. perfringens, lecithinase
that lyses most types of cells
•β toxin: causes intestinal necrosis
(enteritis necroticans or pigbel)
•ε toxin: protoxin that must be
cleaved by trypsin to be active,
increases permeability of the
gastrointestinal wall
•ι toxin: necrotic activity and
increases vascular permeability
