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Shigella spp. : diagnóstico y caracterización
María Rosa Viñas
Servicio EnterobacteriasINEI-ANLIS “C.G.Malbrán”
Especialización en Bacteriología Clínica – UNNE12-13 de junio 2015
Familia Enterobacteriaceae. Género: Escherichia
Escherichia coli
Escherichia fergusonii
Escherichia hermannii
Escherichia vulneris
Escherichia blattaeEscherichia blattae
Género: Shigella
Shigella dysenteriae
Shigella flexneri
Shigella boydii
Shigella sonnei
GÉNERO SHIGELLA* Gram negativos, anaerobios facultativos, no esporulados, no móviles de la
familia ENTEROBACTERIACEAE, no produce gas a partir de carbohidratos .
El género se diferencia en cuatro especies y esta separación se basa en caracteres bioquímicos y antigénicos.
Shigella dysenteriae, serogrupo A: 13 serotipos.(*)
Shigella flexneri, serogrupo B: 8 serotipos. (*)Shigella flexneri, serogrupo B: 8 serotipos. (*)
Shigella boydii, serogrupo C: 20 serotipos. (*)
Shigella sonnei, serogrupo D: 1 serotipo.
(*) La cantidad de serotipos por grupo cambia cuando se definen nuevos serotipos.
(*) En el marco de un grupo de trabajo a nivel internacional se estáconsensuado la nomenclatura de la nueva variante emergente de S. flexneri
Infección por Shigella spp.
� La shigellosis está distribuída en todo el mundo, endémica en países tropicales y de clima templado incidencia en verano.
� Riesgo para viajeros que se trasladan hacia áreas endémicas .
� Brotes en condiciones de hacinamiento y falta de saneamiento en cárceles, hospitales psiquiátricos, geriátricos, campamentos y a bordo de embarcaciones.
� Shigella: único huésped el ser humano y a los primates.
� Se transmite de persona a persona por la vía fecal-oral o por alimentos contaminados, el vector de transmisión son las moscas y/ o aguas estancadas.
� Altamente infecciosa por la ruta oral, la ingestión de 10 a 100 organismos.
� Shigella no es de notificación obligatoria pero a través del SNVS de Argentina, módulo laboratorio SIVILA, permite una vigilancia del mo.
La mayor parte de los casos positivos para diarreas bacterianas se debieron a Shigella
(4116) con predominio de S. flexneri , seguido por Salmonella , Escherichia coli . SIVILA
2014
SHIGELLOSIS – PRESENTACION CLINICA
� Diarrea acuosa asociada con vómitos y deshidratación leve a moderada.
� Disentería caracterizada por pequeños volúmenes de materia fecal con sangre, mucus y dolor abdominal.
Disentería: consecuencia de la invasión de la mucosa colónica, multiplicación y muerte celular, inflamación y ulceración de la mucosa con la consiguiente y muerte celular, inflamación y ulceración de la mucosa con la consiguiente aparición de sangre en materia fecal.
� Complicaciones posteriores a una Shigellosis : bacteriemia, convulsiones y problemas neurológicos, artritis reactiva
( pacientes inmunocomprometidos, niños y ancianos) .
� Infección por Sh. dysenteriae serotipo 1: tasa de letalidad del 20% causando las más severas disenterías debido a su potente toxina Shiga , exotoxina termolábil que afecta el intestino y el SNC, y contribuir a la gravedad extrema de la infección.
INVASION POR SHIGELLA
GENE GLOBE PATHWAYS
U1
Diapositiva 7
U1 Usuario, 28/08/2014
FLUJOGRAMA PARA EL AISLAMIENTO DE Shigella (Muestra clínica)
MUESTRA (Hisopo enCary Blair)
Suspensión salina
Coloración de Gram
Observación en fresco
MacConkey, EMB, SS, Hektoen, XLDMacConkey, EMB, SS, Hektoen, XLD
Colonias típicas
TSA TSI LIA
P. Bioquímicas Serotipificación
• El género Shigella es un género bioquimicamente poco reactivo; presenta las propiedades indicadas en
TABLA IV. Las placas de medio selectivos y diferenciales : agar McConkey y agar EMB a 37ºC, 18 a 24 horas.
Las colonias características, se siembran en estría de TSA , TSI y LIA, a 37ºC , 18 a 24 hs. •TSI: -K/A, LIA: -K/A pruebas mínimas
Prueba Bioquimica Shigella spp.
SH2 -
Glucosa (gas) -
Glucosa (ácido) +
Movilidad -
Citrato Simmons -
Adonita (fermentación) -
Malonato (utilización) -
Voges-Proskauer -Voges-Proskauer -
Arginina dehidrolasa -
Lisina decarboxilasa -
Ornitina decarboxilasa - ó + (S. sonnei)
Salicina (fermentación) -
Lactosa (fermentación) -
Urea (hidrólisis) -
Sacarosa (fermentación) -
Xilosa (fermentación) -
Fenilalanina deaminasa -
Inosita (fermentación) -
Rojo de metilo +
+ 90% o más en 1-2 días; - + 90% o más en 1-2 días
� TSI alcalino/ácido sin gas, LIA alcalino/ácido, SIM (- v -), acetato negativo, urea negativa.
Serología para Shigella: pobre o negativa; estos cultivos se deben calentar a 100º C.
� TSI alcalino/ácido con gas, LIA alcalino/ácido,
ATIPIAS
� TSI alcalino/ácido con gas, LIA alcalino/ácido, SIM (- - -), acetato negativo, urea negativa.
Se debe realizar serología para Shigella, porque hay ciertos serotipos de Sh. dysenteriae,
Sh flexneri y Sh. boydii que pueden producir gas a partir de glucosa.
� Shigella sonnei ONPG negativas, lactosa -
Especie D-Manitol ONPGOrnitina
decarboxilasa
*Sh. dysenteriae - - -
TABLA . Caracteres Bioquímicos Diferenciales entre especies de Shigella
**Sh. flexneri + - -
***Sh. sonnei + + +
Sh. boydii + - -
Utilización de Azúcares, pruebas orientativas para la diferenciación a nivel de especie de Shigella :
Dulcita, Xilosa, Ramnosa, Rafinosa y Glicerol (Tabla con % ) Ej. S. boydii utiliza xilosa ó ducitol, glicerol ,
S sonnei utiliza rafinosa , rhamnosa, permite diferenciar de otros subgrupos ó especies
• S. dysenteriae 1 son ONPG +, ** S. flexneri fermenta manitol, excepciones:• S. flexneri 4 y 6 variedades S. flexneri manitol-negativo , *** S. sonnei ONPG –
Prueba Bioquímica Shigella Escherichia
coli
Indol - o + +
Lisina decarboxilasa - +, (+), -
Ornitina decarboxilasa - o + +, (+), -
Arginina dehidrolasa - , +, (+) (+), +, -
Mucato (utilización) - +
Acetato (utilización) - + , (+)
Citrato Christensen - +, (+), -
TABLA . Caracteres Bioquímicos Diferenciales entre Shigella y E. coli.
Citrato Christensen - +, (+), -
Glucosa (gas) - +
Lactosa (fermentación) - , (+) +
Sacarosa
(fermentación)
- , (+) +, (+), -
Salicina (fermentación) - +, (+), -
Movilidad - + ó -
+ 90% o más en 1-2 días; (+) luego de 3 o más días; - 90% o más, + o – mayoría de cepas positiva, - o + mayoría de cepas
negativa
Edwards and Ewing´s Identification of Enterobacteriaceae”, 4th. Edition
* Las pruebas del acetato y mucato tienen considerable valor para
diferenciar ambos géneros:
Prueba Bioquímica *Shigella Escherichia
coli
**Escherichia
coli inmóvil
Acetato (utilización) - + + ó -
Mucato (utilización) - + + ó -
Glucosa c/gas - + -
SIM -, -, - -,+, + - ,+, - ó -, -, -
Citrato Christensen - - ó + + ó -
*S. flexneri 4: suele utilizar acetato como fuente de carbono positivo 2-7 días reacción
débil (confirmar por PCR)
** biotipos E.coli no móviles anaerógenos, lactosa - en TSI : K/A similar a Shigella
+ : 90% o más en 1-2 días; - : 90% o más, + o – mayoría de cepas
positiva, - o + mayoría de cepas negativa
FIGURA Flujograma de Serotipificación para Shigella spp.
Cepa con características bioquímicas de Shigella
Estria en TSA
Aglutinación con solución fisiológica
Negativa Positiva
Aglutinación con OShB Cepa rugosa
Negativa Positiva Sh. flexneri(se prueban serotipos 1 a 6)
PCR Múltiple para S. flexneri
Aglutinación con OShD
Negativa Positiva Sh. sonnei
Aglutinación con OShC
Negativa Positiva Sh. boydii(se prueban serotipos indol + y --
Aglutinación con OShA
Negativa Positiva Sh. dysenteriae(se prueban serotipos indol + y -Calentar (ver pág.13)
� Shigella spp.: primer agente de origen bacteriano por SIVILA y asociado a brotes comunitarios.
� Mejorar la detección de fuente de infección con técnicas sensibles y/ó medidas oportunas .
�En el marco de la RND* Uso del antisuero AA479 como screening de este nuevo subserotipo de S. flexneri cuya sero -prevalencia aumentó en el país en los últimos años.
200
300
400
Distribución de serotipos de S. flexneri LNR, Enero 2007 a Diciembre 2010
S. flexneri atípicas
S. flexneri 2
S. flexneri 3
N Aislamientos de Shigella flexneri Serotipos de S. flexneri
Vigilancia desde el LRN: S. flexneri atípicas (no tipables): 1,7% en 2008 y 16% en 2009, reconocidos por 1ra vez en tres provincias (N, RN y La Pampa) y luego en el resto del país alcanzando un 30,4% en 2010.
� Caracterizar feno-genotípicamente una selección de aislamientos de S.flexneri atípicos emergentes en Argentina y estudiar el comportamiento epidemiológico de esta variante desde su reconocimiento en el país.
0
100 S. flexneri 1
S. flexneri 6
S. flexneri 4, 5, X e Y2007 2008 2009 2010
S. flexneri atípicas – análisis PFGE
PFGE- NotI: relación genética de aislamientos de S. flexneri atípicos y cepas de
serotipos variantes X, Y and tipo 4.
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-NotI
100
90
80
70
PFGE-NotI
SF461/10
SF478/09
SF564/09
SF66/10
SF1241/10
SF412/09
SF1460/10
SF612/10
Jujuy
Neuquén
Neuquén
Jujuy
Salta
Neuquén
Río Negro
Río Negro
2010-01-04
2009-07-01
2009
2009-11-20
2010
2009
2010-04-10
2010-02-09
ARJZXN11.0019
ARJZXN11.0019
ARJZXN11.0019
ARJZXN11.0019
ARJZXN11.0022
ARJZXN11.0012
ARJZXN11.0028
ARJZXN11.0028
Atypical
Atypical
Atypical
Atypical
Atypical
Atypical
Atypical
Atypical
Isolate State Isolate Date NotI-PFGE pattern S. flexneri
serotype
SF617/10
SF493/09
SF479/09
SF571/09
SF2080/09
SF730/09
SFB67X-1
SF1004/09
SF465/10
SF294/09
SF743/09
SFB4a-1
SF472/09
SFB69Y-1
SF2029/09
SFB4a-6
SF1944/06 .
Río Negro
Neuquén
Neuquén
Neuquén
Neuquén
Río Negro
ND
Tucumán
Jujuy
Buenos Aires
La Pampa
ND
La Pampa
ND
Río Negro
ND
CABA
2010-02-13
2009-07-01
2009
2009
2009
2009-07-01
ND
2009-07-01
2010-05-05
2009
2009-07-01
ND
ND
ND
2006
ARJZXN11.0028
ARJZXN11.0010
ARJZXN11.0006
ARJZXN11.0007
ARJZXN11.0033
ARJZXN11.0026
ARJZXN11.0084
ARJZXN11.0045
ARJZXN11.0024
ARJZXN11.0080
ARJZXN11.0039
ARJZXN11.0054
ARJZXN11.0046
ARJZXN11.0072
ARJZXN11.0133
ARJZXN11.0044
ARJZXN11.0136
Atypical
Atypical
Atypical
Atypical
Atypical
X variant
X variant
Atypical
Atypical
Atypical
Atypical
4a
Y variant
Y variant
Y variant
4a
4a
* Shigella flexneri nomenclature updated.August, 2014
Caracterización feno-genotípica de una selección de S. flexneri atípicas?
Study of agglutination assay with:
Biochemical assays:
Acetate / mannitol / Indol
Resistant to:
AMP-SXT
Results of PCR a ssays
S.
flexneri Serotype
Typing S.
flexneri IV sera (INPB)
Typing S.
flexneri IV sera
(DS)
Grouping
3,4 sera
(INPB &
DS)
Grouping 6 sera
(INPB & DS)
Grouping 7,8 sera (INPB &
DS)
AA479 antisera
MASF IV-1
antisera
gtrIV gtrX set1-B sen
4a + + + - - - - - / + / - S / S + - - -
4a + + + - - - - - / + / - S / S + - - +
4a + + + - - - - + / - / + R / R + - - +
Y - - + - - - - - / + / - S / S - - + +
Y - - + - - - NR - / + / - S / R - - + +
Y - - + - - - - - / + / - S / S - + - -
X - - - - + - - - / + / - R / R - + - +
X - - - - + - - - / + / - R / R - + - +
Caracterización fenotípica Car. genotípica PCR
X - - - - + - - - / + / - R / R - + - +
“atypical” - + - - + + NR - / + / - R / R - + - -
“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +
“atypical” - + - - + + NR - / + / + R / R - + - +
“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +
“atypical” - + - - + + + - / + / + R / R - + - +
“atypical” - + - - + + + - / + / + R / R - + - -
“atypical” - + - - + + NR - / + / - S / S - + - +
“atypical” - + - - + + NR - / + / - R / R - + - +
“atypical” - + - - + + NR - / + / - R / R - + - +
“atypical” - + - - + + NR - / + / - R / R - + - +
“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +
“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +
“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +
“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +
“atypical” - + - - + + NR - / + / - R / R - + - +
“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +
“atypical” - + - - + + NR - / + / - R / R - + - +
NR: no determinado Mab MASF IV-1, Dr Kaisar Talukder, icddr,Bangladesh
m5m6
Diapositiva 18
m5 mpichel, 03/06/2013
m6 mpichel, 03/06/2013
� La adición de residuos
glucosil, acetil o fosfoetanolamina a
los ázúcares del antígeno-O resulta
en determinantes antigénicos:
� de “tipo” (I, II, III, IV, V,VI) específicos de un serotipo
Bases de la seroconversión en S. flexneripara diseño de PCR
específicos de un serotipo
� de “grupo” (3,4; 6; 7,8; E1037) pueden estar presentes en mas
de un serotipo.
* En su conjunto definen un serotipo y subserotipo
Gwen E. Allison and Naresh K. Verma, 2000, Trends in Microbiology
Serotipificación molecular:*Validación PCR Múltiple, con grupo colaborativo de trabajo compuesto por
5 laboratorios de referencia (USA, Inglaterra, Bangladesh, China, Hong Kong y
Argentina). Set de muestras ensayadas incluyó aislamientos de distintas regiones y
autóctonos de cada país.
PCR múltiple para la identificación de todos los serotipos descriptos al 2014, incluyendo la variante de S. flexneri X (AA479)
Ye et al, JCM, 2012
Target gene Amplicon size (bp)
Contentración
en la Mix de primers
Concentración en la
reacción Serotype specificity
wzx1-5 782 2 µM 0.2 µM Todos excepto 6
gtrI 1122 2 µM 0.2 µM 1a, 1b, 1c
gtrII 1272 2 µM 0.2 µM 2a, 2b
oac 604 2 µM 0.2 µM 1b, 3a, 3b, 4b
gtrIV 378 2 µM 0.2 µM 4a, 4av, 4b
Desde el LRN: Flujograma de PCR múltiple para serotipos de Sh. flexneri( en desarrollo y validación )PCR 1: a) Primer MIX 1:
Target gene Amplicon
size (bp)
Contentración
en la Mix de primers
Concentración en la
reacción Serotype specificity
gtrX 425 2 µM 0.2 µM 2b, 3a, 5b, X, Xv
gtrIC 518 2 µM 0.2 µM 1C (propuesto como serotipo
7)
lpt-O 1098 4 µM 0.4 µM Xv,Yv,4av
PCR 2: b) Primer MIX 2:
gtrIV 378 2 µM 0.2 µM 4a, 4av, 4b
gtrV 905 2 µM 0.2 µM 5a, 5b
� PCR como técnica alternativa al flujograma
diagnóstico de Shigella flexneri
Validación intralaboratorio con cepas controles y autóctonas recibidas en el LRN
PCR 1Wzx 1-5 782 pb
oac 604 pb
gtrII 1272 pb gtrI 1122 pb
gtrIV 378 pb
gtrV 905 pb
Implementación de PCR Múltiple para Shigellaflexneri
PCR 2lpt-O 1098 pb
gtrX 425 pbgtrIC 518 pb
M marcador de peso molecular 100 pb
Cepas control para PCR Múltiple para S. flexneri (validación interlaboratorio)
PCR 1 (arriba) y PCR 2 (abajo)
Calle Strain Controles Genes
Amplicons sizes
(bp)
2 S. flexneri 1b CDC_China 45 gtrI, wzx1-5, oac 1222, 782, 604
3 S. flexneri 2b CDC_China 46 gtrII, wzx1-5, gtrX 1272, 782, 425
4 S. flexneri 4b CDC_China 47 wzx1-5, gtrIV, oac 782, 604, 378 4 S. flexneri 4b CDC_China 47 wzx1-5, gtrIV, oac 782, 604, 378
5 S. flexneri 5a CDC_China 48 gtrV, wzx1-5, oac 905, 782, 604
7 S. flexneri
Xv CDC_China 49 lpt-O, wzx1-5, gtrX, 1098, 782, 425
8 S. flexneri Ic HPA, UK_1C gtrI, wzx1-5, gtrIC 1122, 782, 518
9 S. flexneri 6 CDC_China 50 wzx6 739
� Estudios epidemiológicos señalan al agua como fuente de infección, vegetales crudos, frutas, mariscos , manipulador de alimentos, etc.
Sobrevida en el agua es limitada (horas a días) , depende de la cantidad de contaminación, temperatura del agua (susceptible a clorinación, luz UV )
Requerimiento de Técnicas sensibles para la
detección en muestras de agua
Métodos rápidos: Ensayos de PCR estandarizados para Shigella spp. para muestras
Nombre de la
TécnicaBlanco Método Tipo de muestra Requerimientos.
Tiempo de
procesamiento
Especificidad /
Sensibilidad
ipaH ( Antígeno
PCR simple
Prueba de tamizaje
Muestras de agua y
cepa aislada
Detección en
muestras de agua a
partir de caldo de
enriquecimiento GN,
E: Shigella spp.
/EIEC
PCR Shigella spp. /
EIEC
(E. coli
enteroinvasivo)
ipaH ( Antígeno
plasmídico de
invasión)
(Hartman et al,1990)
enriquecimiento GN,
luego de 18 h de
incubación a 37°C
Detección preliminar
del aislamiento a
partir de TSA, luego
de 24 h de incubación
a 37°C
� PCR a partir de caldo GN el gen ipaH
* codifica una proteína involucrada en el proceso de invasión de las células epiteliales y está presente en varias copias en el plásmido de 140 MDa de Shigella spp. y a nivel cromosomal, presente en aislamientos de E. coli enteroinvasivo (EIEC)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 M
ipaH 619 pb
Fig 1. Gel de electroforesis de PCR ipaH a partir de caldo de enriquecimiento de muestras de agua inoculadas experimentalmente.Calle 1: agua sin inocular, Calle 2: 1- 10UFC (fallo amplificación, pero en este punto tuvimos problemas con el filtro
y perdimos muestra), Calle 3: 10-100 UFC, Calle 4: 100-1000 UFC, Calle 5: Shigella flexneri 4a (1944/06), cepa
Control positivo , Calle 6: agua sin inocular , Calle 7: 1- 10UFC con tritón (fallo amplificación), Calle 8: 10-100
UFC con tritón, Calle 9: 100-1000 UFC con tritón, Calle 10: Shigella flexneri 4a (1944/06), cepa Control positivo.,
Calle 11: Shigella flexneri, cepa control positivo, Calle12: Shigella flexneri, cepa Control positivo, Calle13: Shigella
flexneri, cepa control positivo, Calle 14: Control de reactivos
ipaH 619 pb
* Se notificaron al LRN 2009 al 2014:
• Brotes: 17 de Shigella sonnei y
14 de Shigella flexneri
• De los brotes estudiados se recuperó de:• De los brotes estudiados se recuperó de:
crema de almendras y se sospechó de agua dered, verdura entre otros.
• 2009 Se implementó un estudio prospectivo para
detección temprana de brotes en colaboración con la
Univ de Harvard, USA (Proyecto MIDAS) en seis
provincias de la región centro-sur.
* En Desarrollo y proyectos futuros
� La transferencia en el marco de la RND de una PCR validada para serotipificación molecular de Shigella flexneri
( 2, 1, 3, 4, 5 y 6 ,variante X e Y ;inclusive plásmido gen lpt-O;
S. flexneri AA479).
� Incorporación de S. flexneri atípica en la taxonomía con una nueva nomenclatura según consenso a nivel internacional:nueva nomenclatura según consenso a nivel internacional:Shigella flexneri nomenclature updated. Scheme for serotypes
designation based on the use of monoclonal and polyclonal antisera and PCR.
Proposals of Dr. Kaisar, Dr. Xu and Dr. Sun to be discussed by the working group
Aug, 2014
Shigella flexneri Xb?
� Secuenciación de nuevas variantes emergentes
PFGE-XbaI
100
90
PFGE-XbaI
SS418/13
SS419/13
SS200/13
SS202/13
SS206/13
SS207/13
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Human
Human
Human
Human
Human
Human
2 013-03- 03
2 013-03- 04
2 013-03- 16
2 013-02- 13
2 013-02- 17
2 013-02- 19
MAL E
MAL E
FEMALE
MAL E
MAL E
MAL E
3
2
2
2
4
7
ARJ16 X01.0078
ARJ16 X01.0078
ARJ16 X01.0047
ARJ16 X01.0047
ARJ16 X01.0047
ARJ16 X01.0047
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
Nº aislamiento Origen Fecha aislamiento Sexo Nº patrón Tipificación
Shigella sonnei, recuperados de Febrero y Marzo del 2013 en la ciudad de Trelew, provincia de Chubut.
� Los aislamientos presentaron un perfil fenotípico atípico para S. sonnei,negativos para la prueba de ONPG (o-nitrofenil-β-D-galactopiranósido)
SS207/13
SS413/13
SS414/13
SS415/13
SS416/13
SS417/13
SS424/13
SS425/13
SS426/13
SS420/13
SS204/13
SS423/13
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Stool
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
2 013-02- 19
2 013-02- 25
2 013-02- 27
2 013-02- 28
2 013-02- 28
2 013-03- 01
2 013-03- 12
2 013-03- 13
2 013-03- 16
2 013-03- 04
2 013-02- 15
2 013-03- 09
MAL E
MAL E
MAL E
MAL E
MAL E
MAL E
FEMALE
MAL E
FEMALE
FEMALE
FEMALE
MAL E
7
4
8
5
7
8
8
6
12
5
4
11
ARJ16 X01.0047
ARJ16 X01.0047
ARJ16 X01.0047
ARJ16 X01.0047
ARJ16 X01.0047
ARJ16 X01.0047
ARJ16 X01.0047
ARJ16 X01.0047
ARJ16 X01.0047
ARJ16 X01.0406
ARJ16 X01.0408
ARJ16 X01.0407
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
B gal (-)
Figura 1. Dendograma de relación genética de aislamientos de S. sonnei ONPG (neg) deorigen humano recuperados en Trelew en febrero y marzo de 2013. Se recuadran los
aislamientos con el mismo patrón de PFGE. PFGE con XbaI.
� El patrón ARJ16XO1.0047, 14% de frecuencia en la BDN, subtipo genético que incluyó aisl. de distintas
provincias del país y de distintos años, entre ellas Catamarca 2012; Buenos Aires 2008,2011 y 2012; Córdoba 2010 y
2012; La Pampa 2009; Neuquén 2009; Salta 2005; Jujuy 2011 y Río Negro 2009.
PFGE-B lnIPFG E-Xba I
SS1392 /12
SS1393 /12
SS1394 /12
Lu jan
Lu jan
Lu jan
Human
Human
Human
2012-07-09
2012-07-09
2012-07-12
ARJ16X 01.0370
ARJ16X 01.0370
ARJ16X 01.0370
Nº aislamiento Ciudad Origen F. aislamiento Patrón XbaI
� S. sonnei asociados a un brote familiar:� PFGE demostró la relación genética entre los aislamientos, confirmó el
estudio epidemiológico que evidenció la exposición de los pacientes a una
misma fuente de infección:
� Aislamiento de la cubierta de crema de almendras(una rosca vienesa de elaboración artesanal)
SS1395 /12
SS1396 /12
SS1397 /12
Lu jan
Lu jan
Lu jan
Human
Human
Food
2012-07-12
2012-07-12
2012-07-08
ARJ16X 01.0370
ARJ16X 01.0370
ARJ16X 01.0370
Figura 1. Dendograma de relación genética de aislamientos de S. sonnei recuperados en Luján en juliode 2012 con XbaI. Todos los aislamientos mostraron 100% de similitud.
Esto fue posible por la oportunidad en la investigación del brote y en la toma de muestras
Figure . Dendrogram showing the genetic relatedness of S. sonnei SXT resistant isolates included in the Event 7.
Figure 3. Dendrogram showing the genetic relatedness of S. sonnei SXT resistant isolates included in the Event 7.Isolates recovered in Santa Rosa, La Pampa in January – February 2010. The rectangle highlights the 7 S. sonnei isolates with an indistinguishable PFGE pattern which had not previously been recorded in the National Data Base (NDB). The remaining 7 isolates identified statistically and epidemiologically as part of Event 7, exhibited high genetic relatedness (from 91.4 to 97.4% similarity, 1 to 3 bands of difference) to the most frequent pattern within the event, confirming the relation of the cases.http://www.plosntd.org/article/info:doi/10.1371/journal.pntd.0002521
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