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Tesistas:
ANLLY MARIELENA CONDEÑA RIOS
SONIA NELIDA LUDEÑA CONTRERAS
Asesores:
Artemio Chang C. Silvia Klinar B.
PRODUCCIÓN DE MOLECULAS DE OXIGENO REACTIVO
H2O2 H2O
HClO 1O2 + Cl –
Acido Singulete Hipocloroso de oxigeno
Mie
lope
roxi
dasa
Cl-
e - O2+ O2 Fe2+ Fe+ H+
O2 O2 .- H2O2 O H. H2O
Superóxido dismutasa Peróxido Radical Hidrogeno hidróxilo NO2+ H+
Radical dióxido NO OONO-- H OONO nitrógeno Oxido Anión Nítrico Peroxinitrito
HClO 1O2
O2 .- H2O2 O H.
NO2+
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTEActividad antioxidante natural
Antioxidantes exógenos
Antioxidantes Primarios♦ SOD♦ Glutation peroxidasa♦ Catalasas♦ Ferritina y cerulóplasmina, entre otros.
Antioxidantes Secundarios♦ Acido ascórbico♦ Vitamina E♦ β - caroteno
DESCRIPCION DE LAS ESPECIES VEGETALES-Bidens pilosa (amor seco)-Cymbopogon fluoxuosus (hierba luisa)-Flaveria bidentis (matagusano)-Hydrocotyle umbellata (hierba de abad)-Ricinus communis (higuerilla)-Solanum peruvianum (hierba mora)-Spilanthes beccabunga (deflemadera)-Taraxacum officinalis (diente de león) -Waltheria ovata (lucraco)
Resultado positivo a la actividad antioxidante:-Hydrocotyle umbellata (hierba de abad)-Ricinus communis (higuerilla)-Spilanthes beccabunga (deflemadera)
Hydrocotyle umbellataAPIACEAE
Hierba de Abad
Usos tradicional
En paperas (cataplasma)
Diurético
Como colirio
Ricinus communisEUPHORBIACEAE
Higuerilla
Usos tradicionales
En estreñimiento
En indigestión
Spilanthes beccabungaASTERACEAEDeflemadera
Usos tradicionales
Anestésico en odontalgias
Afecciones bucofaríngeas
Afecciones hepáticas
Diabetes
MATERIALES
♦ Material Vegetal:
Recolección y preparación del material vegetal
♦ Reactivos
♦ Equipos
METODOS
Extracción:Por gradiente, con:
- Diclorometano- Etanol- Agua
Maceración
Reflujo
Evaluación de la Actividad Antioxidante
Evaluación de la Actividad Antioxidante
Preparación de reactivos:
• Preparación de muestra
• Preparación de amortiguador
• Preparación de la enzima (PPO)
• Preparación del Sustrato
• Preparación del estándar (Vit. C)
Evaluación de la Actividad Antioxidante
Procedimiento:Amortiguador Catecol Muestra
Blanco: 1.7 ml 0.3 ml -
Muestra: 1.4 ml 0.3 ml 0.3 ml *
Estándar: 1.4 ml 0.3 ml 0.3 ml **
Agregar 1 ml de solución de PPO y leer a 420 nm.
* extractos que se evalúan
** vitamina C
Screening Fitoquímico
Se realiza la detección de los siguientes metabolitos secundarios:
. Taninos . Triterpenoides y/o Esteroides
. Antraquinonas . Alcaloides
. Leucoantocianinas . Catequinas
. Flavonoides . Saponinas
ESPECTROFOTOMETRO
ULTRAVIOLETA VISIBLE
Nº MUESTRA NOMBRE BOTANICO EXTRACTO RESULTADO1 Amor Seco Bidens pilosa Diclorometano -2 Amor Seco Bidens pilosa Etanólico -3 Amor Seco Bidens pilosa Acuoso -4 Deflemadera Spilanthes beccabunga Diclorometano -5 Deflemadera Spilanthes beccabunga Etanólico Positivo 6 Deflemadera Spilanthes beccabunga Acuoso -7 Diente de León Taraxacum officinalis Diclorometano - 8 Diente de León Taraxacum officinalis Etanólico -9 Diente de León Taraxacum officinalis Acuoso -10 Hierba de Abad Hidrocotyle umbellata Diclorometano Positivo 11 Hierba de Abad Hidrocotyle umbellata Etanólico Positivo 12 Hierba de Abad Hidrocotyle umbellata Acuoso -13 Hierba Luisa Cymbopogon fluoxuosus Diclorometano -14 Hierba Luisa Cymbopogon fluoxuosus Etanólico -15 Hierba Luisa Cymbopogon fluoxuosus Acuoso -16 Hierba Mora Solanum peruvianum Diclorometano -17 Hierba Mora Solanum peruvianum Etanólico -18 Hierba Mora Solanum peruvianum Acuoso -19 Higuerilla Ricinus communis Diclorometano -20 Higuerilla Ricinus communis Etanólico Positivo21 Higuerilla Ricinus communis Acuoso -22 Lucraco Waltheria ovata Diclorometano -23 Lucraco Waltheria ovata Etanólico -24 Lucraco Waltheria ovata Acuoso -25 Matagusano Flaveria bidentis Diclorometano -26 Matagusano Flaveria bidentis Etanólico -27 Matagusano Flaveria bidentis Acuoso -
EVALUACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE LOS EXTRACTOS DE LAS HOJAS
EXTRACTO ETANOLICO DE Spilanthes beccabunga D.C. : INHIBICION DE LA PRODUCCION DE QUINONAS
64
79848692
y = -0,2726x + 95,718R2 = 0,8822
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
CONCENTRACION EN ug/ml
ABSO
RB
ANC
IA X
100
0
EXTRACTO ETANOLICO DE Spilanthes beccabunga: INHIBICION DE LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS PPO
13,33
18,73
26,83
32,23
7,93
0
5
10
15
20
25
30
35
10 ug/ml 30 ug/ml 50 ug/ml 80 ug/ml 100 ug/ml
% D
E IN
HIBI
CIO
N
EXTRACTO DICLOROMETANO DE Hydrocotyle umbellata : INHIBICION DE LA PRODUCCION DE QUINONA
7972
68 65 64
y = -0,1583x + 78,147R2 = 0,8932
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
CONCENTRACION EN ug/ml
ABSO
RB
ANC
IA X
100
0
EXTRACTO DICLOROMETANICO DE Hydrocotyle umbellata: INHIBICION DE LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS PPO
7,79
11,36
14,94
20,31
23,89
0
5
10
15
20
25
30
10 ug/ml 30 ug/ml 50 ug/ml 80 ug/ml 100 ug/ml
%DE
INHI
BIC
ION
EXTRACTO ETANOLICO DE Hydrocotyle umbellata: INHIBICION DE LA PRODUCCION DE QUINONAS
123120 113 106 99
y = -0,2695x + 126,76R2 = 0,9891
0102030405060708090
100110120130140
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
CONCENTRACION EN ug/ml
ABSO
RB
ANC
IA X
100
0
EXTRACTO ETANOLICO DE Hydrocotyle umbellata: INHIBICION DE LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS PPO
5,29
9,41
13,52
19,7
23,81
0
5
10
15
20
25
30
10 ug/ml 30 ug/ml 50 ug/ml 80 ug/ml 100 ug/ml
% D
E IN
HIBI
CIO
N
EXTRACTO ETANOLICO DE Ricinus communis : INHIBICION DE LA PRODUCCION DE QUINONAS
121
99
107112
113
y = -0,2158x + 122,05R2 = 0,9412
2030405060708090
100110120130
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
CONCENTRACION EN ug/ml
ABSO
RB
ANC
IA X
100
0
EXTRACTO ETANOLICO DE Ricinus communis: INHIBICION DE LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS PPO
0,96
4,48
8,04
13,39
16,96
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
10 ug/ml 30 ug/ml 50 ug/ml 80 ug/ml 100 ug/ml
% D
E IN
HIBI
CIO
N
VITAMINA C : INHIBICION DE LA PRODUCCION DE QUINONAS
139 136131 129 126 121
113
y = -0,4036x + 144R2 = 0,9644
0102030405060708090
100110120130140150
0 10 20 30 40 50 60 70 80
CONCENTRACION EN ug/ml
ABSO
RB
ANC
IA X
100
0
VITAMINA C : INHIBICION DE LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS PPO
0,74
3,6
6,46
9,32
12,18
15,04
17,9
024
68
101214
161820
10 ug/ml 20 ug/ml 30 ug/ml 40 ug/ml 50 ug/ml 60 ug/ml 70 ug/ml
% D
E IN
HIBI
CIO
N
CAPACIDAD DE INHIBICION A 50 ug/ml
12,18
18,73
14,9413,52
8,04
0
5
10
15
20
Vitamina C Spilanthesetanólico
Hydrocotyledicloro
Hydrocotyleetanólico
Ricinusetanólico
% D
E IN
HIB
ICIO
N
POTENCIA DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LOS EXTRACTOS FRENTE A LA VITAMINA C
1
1,221,11
0,66
1,53
0
0,5
1
1,5
2
Vitamina C Spilanthesetanólico
Hydrocotyledicloro
Hydrocotyleetanólico
Ricinusetanólico
A B C D E F A B C D E F A B C D E F A B C D E FTANINOS
Sol. Gelatina + - -GRUPOS FENOLICOS LIBRES
Sol. Cloruro férrico + - -TRITERPENOIDES – ESTEROIDES
Lieberman – Bourchard + - - + - - + - - + - -ANTRAQUINONAS
Borntrager - - - -ALCALOIDES
Mayer - - - - - - - -Hager - - - - - - - -
Dragendorf - - - - - - - -Wagner - - - - - - - -
LEUCOANTOCIANINAS-CATEQUINASRosenheim - - - - - - - -
FLAVONOIDESShinoda - + - - - - - -
SAPONINASPrueba de la espuma - - - -
HIERBA DE ABADETANOLICO
HIGUERILLAETANOLICOMETABOLITOS
DEFLEMADERA ETANOLICO
HIERBA DE ABAD DICLOROMETANO
SCREENING FITOQUIMICO DE LOS EXTRACTOS CON ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Se han evaluado 27 extractos de 9 plantas medicinales de Ica, tienen actividad antioxidante:
* Spilanthes beccabunga:extracto etanólico
* Hydrocotyle umbellata:extracto diclorometánicoextracto etanólico
* Ricinus communis:extracto etanólico
El extracto etanólico de Spilanthes beccabunga mostróuna actividad antioxidante 0.53 veces (53%) más potente que la
vitamina C. En este extracto se detectó la
presencia de taninos, triterpenoides y/o esteroides y
flavonoides.
El extracto diclorometánico de Hydrocotyle umbellata mostró
ser 0.22 veces (22%) más potente que la vitamina C.
En este extracto se detectó la presencia de triterpenos y/o
esteroides.
El extracto etanólico de Hydrocotyle umbellata resultó
ser 0.11 veces (11%) más potente que la vitamina C.
Se detectó la presencia de triterpenos y/o esteroides.
El extracto etanólico de Ricinuscommunis mostró ser 0.34
veces (34%) menos potente que la vitamina C.
Se detectó la presencia de triterpenos y/o esteroides.
En los 4 extractos con actividad antioxidante, se detectó la
presencia de triterpenos y/o esteroides.
El extracto etanólico de Spilanthes beccabunga presenta,
además, taninos y flavonoides
