Sindrome de Proteus

5/17/2018 Sindrome de Proteus - slidepdf.com

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SINDROME DE

PROTEUS

Una mutación activadora del mosaico enAKT1 asociados con el síndrome de Proteus

GALLARDO MARTINEZ BRYAN RAULURIAS REYES IVAN EDUARDO



PROTEUS SYNDROME

• El síndrome de Proteus se caracterizapor el crecimiento excesivo de la piel,tejido conjuntivo, órganos, cerebro yotros tejidos.

• Junto con la susceptibilidad aldesarrollo de tumores

I N T R O D U C T I O N



PROTEUS SYNDROME • Descrito en 1979 por Cohen y Hayden.

El síndrome no es frecuente. Incidencia menos de 1caso por 1 millón de habitantes.

En la actualidad, no existe ningún informe queclasifica la enfermedad se hereda.




PROTEUS SYNDROME

• El sindrome de Proteus se hadescrito hipotéticamente comoresultado de trastornossomáticos o mosaico

(UN TRASTORNO ES UN MOSAICO en que las

células en la misma persona, tienen una

composición genética diferente el uno del otro)




PROTEUS SYNDROME



AKT 1

• AKT (proteína quinasa B, PKB) es una serina / treoninaquinasa que desempeña un papel fundamental en laregulación de la supervivencia celular, la señalización deinsulina, la angiogénesis y la formación de tumores.

Hay tres isoformas

de Akt: Akt 1, 2 y 3(también conocidocomo PKBα, β y γ).



RELACIÓN CON ELSÍNDROME DE AKT-1

• Los signos clínicos del síndrome, como elcrecimiento excesivo de los tejidos y órganos, se da porla activación de AKT1 ser fosforilados como resultadode una mutación

Síndrome de Proteus

Mutación AKT 1

Fosforilación del AKT 1

Favorece crecimientoexcesivo de tejidos u órganos



OBJETIVO PRINCIPAL

• Identificar la influencia de lasmutaciones somáticas en lafosforilación de AKT-1 en el

síndrome de Proteus.



MATERIALES Y MÉTODOS

1. MUESTRA

29 Pacientes 158 muestras concriterio clínico positivo de

Síndrome de Proteus.




BIOPSIA PACIENTES ENFERMOS Secuencia exones ADNy comparación con tejidos afectados

• EXONES: son las porciones que codifican las proteínas.(Selección de regiones que codifican en un genoma humana para identificar

genes asociados con desordenes poco frecuentes)



MATERIALES Y MÉTODOS CONFIRMACIÓN Y AMPLIACIÓN Medida de restricción

para analizar 158 muestras de ADN.

Las endonucleasas o enzimas de restricción rompen la doblecadena de ADN al reconocer una secuencia especifica de bases,el cual consiste en deshacer la unión que forma el grupo fosfatoentre dos moléculas de desoxirribosa de la hebra de ADN.




ANÁLISIS DE LA ACTIVACIÓNDE LA PROTEÍNA AKT EN LOS

TEJIDOS AFECTADOS,MEDIANTE LA FOSFORILACIÓNDE ANTICUERPOS ESPECÍFICOS(WESTERN BLOT OINMUNOBLOT)



WESTERN BLOT O INMUNOBLOT SDS- PAGE Poliacrilámida gel electroforesis

ProteínasSDS = detergente polaridad (-)

Transferencia a filtro : Incubación con anticuerpos.

Ac + filtro = identificación proteína

Separación proteínas de extractos celulares por electroforesis según el tamaño




El análisis de seguimiento se efectúo por la secuencia de

Sanger (didesoxinucleotidos) y digestión enzima derestricción , utilizando métodos para la polimerasa dereacción en cadena (PCR)



Sindrome de ProteusPCR (polymerase-chain-reaction): tecnica desarrollada con el

objetivo de amplificación in vitro directa de un gen ofragmento de DNA o indirecta de RNA.

- Principio del método:

Desnaturalizacion del DNA para dar hebras sencillas.

Hibridacion especifica: “primer”

Replicacion: DNA polimerasa.

- Utilidad: rastreo de mutaciones AKT 1



RESULTADOS

• FILTRACION DE LA VARIANTE

Sindrome de Proteus

FILTROS

IDENTIFICO AKT1, c.49G→A

a.a.17Lys por

Gln

Análisis de variaciones



RESULTADOS • VALIDACION: MUTACIÓN AKT1/ SINDROME DE

PROTEUS

Secuenciación de Sanger

Consistentes con datos de secuenciación deexones

Hipotesis: insensibilidad a bajos niveles demosaicismo



RESULTADOS DIGESTION POR ENZIMA DE RESTRICCIÓN

Mutación ausente en 25 linajes celulares y 2

muestras de tejido fresco en sujetos que nopresentaban el síndrome.

De 29 pacientes con el síndrome de Proteus, 26tenian mutación somática con activación de AKT1. Lo cual corresponde al 90% de la muestra.



RESULTADOS

Western blot imágenes de luminiscencia



CONCLUSION

• La mutación del gen, es un factor predisponente para lafosforilación de la proteína AKT1.

• En el síndrome de Proteus, el aminoácido en el que la

fosforilación se produce mayor es la serina.

• La activación de la AKT1 por fosforilación se relacionacon el crecimiento excesivo de tejido en el síndrome de

Proteus.

• La mutación somática que caracteriza al síndrome deProteus, que hace de él un trastorno no hereditario.

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