TECNICA DE GOTA GRUESA Y PROTIS PARA IDENTIFICAR PLASMODIUM

PRINCIPIOS GENERALES

GOTA GRUESA: es la extensión de una gota de sangre en forma cuadrangular de un diámetro aproximado de 1 a 1.5 cm. Con la gota gruesa se puede detectar la presencia de plasmodium .

EL PROTIS SANGUINEO: Es la extensión de una gota de sangre de tal manera que se puede observar al microscopio tanto los eritrocitos como0 los parásitos en un solo plano. Y con el protis sanguineo se puede diferenciar claramente la especie de plasmodium.

ELABORACIÓN DE GOTA GRUESAY FROTIS.

Es la muestra de elección para el diagnóstico de la malaria.

La gota gruesa concentra de 6 a 20 veces más sangre que un frotis. Sin embargo el frotis da otros insumos para el diagnóstico.

Gota gruesa

Frotis

FROTIS Y GOTA GRUESA

Porqué son importantes las gotas gruesas?

Por tener mayor cantidad de muestra en un espacio menor que el frotis, el diagnóstico se hace más rápidamente.

La distribución parasitaria es uniforme en toda la muestra.

Permite identificar prontamente las parasitemias escasas.

Por qué es importante el frotis?

Permite determinar la especie de Plasmodium presente en la muestra dadas las caracteristicas morfológicas del globulo rojo parasitado, ya que para cada especie estas son diferentes.

Antes de realizar la tinción, el frotis se fija con metanol, esto hace que el glóbulo rojo no se destruya y por lo tanto la morfología del parásito se mantiene intacta en su interior.

Elementos necesarios para la toma de gota gruesa y frotis.

• Alcohol• Algodón ( 2 motitas )• Lanceta (descartable)• Papelería: formulario

respectivo• Lámina portaobjetos• Lápiz grafito

1) Escoger un dedo de la mano izquierda, limpiarlo con algodón humedecido en alcohol, luego, secarlo bien con un algodón seco .

Elaboración de la gota gruesa y el frotis

2) Punzar el dedo con lanceta descartable y eliminar la primera gota de sangre con algodón seco.

Elaboración de la gota gruesa y el frotis

3) En un portaobjetos limpio colocar la muestra de sangre a 1.0 cm del borde.

Elaboración de la gota gruesa y el frotis

4) Con la lámina extensora hacer la gota gruesa.

Elaboración de la gota gruesa y el frotis

5) Se coloca una gota de sangre en una esquina de la lámina extensora y esta gota se coloca a ½ cm de la gota gruesa. Se deja fluir la sangre por capilaridad sobre la superficie ancha del porta objeto extensor teniendo el cuidado de dejar ½ cm a ambos lados de la lámina extensora, formando un ángulo de 45º,se esparce la sangre suavemente moviendo la lámina extensora hacia delante.

Elaboración de la gota gruesa y el frotis

6) Luego de que la lámina se seque, proceda a identificarla, en la cabeza del frotis con la clave respectiva de cada evaluador y el número del paciente. Realizar esta identificación haciendo uso de un lápiz de grafito.

Elaboración de la gota gruesa y el frotis

C.V

.M.-2

10

Llevar las muestras al laboratorio lo más rápido posible (máximo 7 días) pues el tiempo, el alcohol y el calor fijan la hemoglobina, afectando el proceso de deshemoglobinazción durante la tinción.

Mantener las muestras cubiertas, para protejerlas de derrames, de los insectos( pues se las comen) y además mantenerlas alejadas de la luz solar pues las fija.

Es importante anotar en la boleta, el incio de síntomas junto con los datos del paciente, para poder construir la curva epidémica.

Recomendación generales

COLORACION DE LA GOTA GRUESA Y PROTIS

MATERIALES:Probetas de 10, 50 y 100 ml.Beaker o vaso plastico de trabajo.Un agitador de vidrio.Una gradilla para portaobjetos.Un cronometro o reloj con segundero.Un frasco gotero con metanol.Colorante giemsa (solucion madre).Agua amortiguada o agua de lluvia.

PROCEDIMIENTO

METODO PARA COLOREAR DE 1 A 10 LAMINAS:

1.- En una probeta de vidrio preparar colorante de giemsa diluido al 5% con agua amortiguaga (ph 7.2)

2.- Mesclar suavemente con la varilla de vidrio.

3.- Si solo es una lamina (gota gruesa) para colorear se necesita aproximadamente 1.5 ml de solucion preparada.

4.- Antes de colorear verificar si las claves de la lamina coinciden.

5.- Colorear las laminas a través de dos varillas de vidrio.

6.- Dejar reposar las laminas con el colorante por 10 min.

7.- Lavar suavemente el colorante de la lamina añadiendo un chorro suave de agua limpia.

8.- Colocar en una gradilla las laminas con la cara de sangre teñidas hacia abajo.

MORFOLOGÍA E IDENTIFICACIÓN

Por lo regular cuatro especies infectan al ser humano:

Plasmodium vivax Plasmodium ovale Plasmodium falciparum Plasmodium malarie

Trofozoitos - Plasmodium falciparum: Los trofozoitos dentro del eritrocito siempre están en forma de “anillo”, a

demás de que sólo en P. falciparum se presentan múltiples trofozoitos en una célula.

Trofozoitos - Plasmodium vivax:  Los eritrocitos infectados por P. vivax son a veces más

grandes que los eritrocitos normales. Aproximadamente cabría 1.5  eritrocitos

normales en uno infectado..

Trofozoitos - Plasmodium malariae: La característica de los trofozoitos de P. malariae

muestran la forma de “anillo” y una ligera tendencia de que los eritrocitos normales sean

de tamaño normal o más pequeños.

Trofozoítos

Gametocito-plasmodiumFalciparum, el gametocito tieneForma de plátano

Gametocito-plasmodium ovale: El gametocito es más grande que los eritrocitos normales. Tiene una apariencia granular parecidos a los puntos de Schuffner

Gametocito, plasmodium malarie: Los gametocitosP. Malarie tiene una apariencia redonda cercana a la de los eritrocitos, tieneademás una apariencia granular

Esquizonte - Plasmodium malariae: Un esquizonte tiene de 6 a 12 merozoitos, dándole una apariencia granular.

Esquizonte P. vivax. Un esquizonte muestra El gran número de merozoítos típicos en su especie( de 16-24), además se puede notar el mayor tamaño en Comparación con los eritrocitos normales

Esquizontes

Desarrollo del plasmodium

MUCHAS GRACIAS