HEMATOXILINA Y EOSINA

Nota: cuando haga preguntas o ponga imágenes, las respuestas correctas y referencias las pongo en blanco, asi primero lo piensan y después se fijan si esta bien lo que pensaron

La técnica de H y E, también llamada técnica convencional, utiliza como fundamento la afinidad de las moléculas ácidas y básicas para atraer a su opuesto. Así, una molécula ácida tendrá afinidad por una molécula básica, y viceversa. En esta técnica el colorante básico es la hematoxilina, mientras que el ácido es la eosina.  

La hematoxilina, que es de color azulado violáceo, tenderá a unirse a moléculas ácidas (por ser de naturaleza básica).

 ¿Qué moléculas son ácidas en una célula?

Núcleo celular: por ser rico en ACIDO Desoxirribonucleico (ADN). El nucleolo tambien es basofilo ya que es rico en ARN.Ribosomas y polirribosomas: ricos en ACIDO Ribonucleico (ARN)Retículo Endoplasmático Rugoso (REG): rico en RIBOSOMAS. CONCLUSIÓN: Toda molécula ácida, se unirá al colorante básico hematoxilina. En este caso, la molécula se define como basófila (baso = básico, filia = afinidad)

Entonces, veamos imágenes

 Célula del páncreas (célula productora de proteínas). Flecha blanca: núcleo. Flecha amarilla: nucleolo. Flecha roja: REG (no veo el REG, se que está ahí porque veo una región basofila en el citoplasma

Con lo expuesto podemos concluir que una célula productora de proteínas tiene las siguientes características:

- Núcleo con cromatina laxa (ya que debe tener sus hebras de ADN separadas para poder transcribirse)

- Nucleolo evidente (acuérdense que en el nucleolo se sintetizan los RIBOSOMAS

- Citoplasma basófilo porque la organela que predomina es el REG

La eosina, que es de color rojo pálido o rosado, tenderá a unirse a moléculas básicas (por ser de naturaleza ácida). ¿Qué moléculas son básicas en una célula?Mitocondrias: por estar cargadas de enzimas (proteínas)Proteínas intracelulares: como la actina y la miosina del tejido muscularProteínas extracelulares: como el colágeno del tejido conectivo.

CONCLUSIÓN: Toda molécula básica, se unirá al colorante ácido eosina. En este caso, la molécula se define como acidófila (o eosinófila, por su afinidad al colorante eosina). Veamos una imagen:

Célula parietal del estomago

Célula parietal del estomago. Flecha amarilla: núcleo. Flecha roja: citoplasmaLa función de la célula parietal es la de secretar protones y cloruro para formar el acido clorhídrico. Para poder secretarlas en contra de gradiente necesita energía y por lo tanto tener muchas mitocondrias. Por ende en este caso el citoplasma es acidófilo ya que la organela que predomina es la mitocondria. De lo dicho anteriormente podemos entonces sacar una conclusión:

La coloración final de un citoplasma depende SIEMPRE de la organela que predomine en su interior.

 Así, una célula que sintetice proteínas, tendrá mayor cantidad de REG que de mitocondrias, y por ende se teñirá su citoplasma basófilo.  Lo mismo ocurre con una célula encargada de la contracción (tejido muscular). Si bien tiene polirribosomas para la síntesis de proteínas endógenas (las proteínas contráctiles), son estas últimas las que predominan en su interior, y por ende muestran un citoplasma acidófilo. Una excepción lo constituye el fibroblasto del tejido conectivo. Dicha célula está encargada de la síntesis de proteínas (como lo es el colágeno). Por ende, presenta abundantes cantidades de REG en su interior. Las micrografías electrónicas demuestran que efectivamente es así. Sin embargo, al teñirlas con H y E, su citoplasma se ve acidófilo. Esta aparente paradoja histológica se explica fácilmente cuando uno conoce la información teórica de la célula. Si bien tiene abundante REG, en su interior almacena a los precursores de la proteína colágena en vesículas de almacenamiento.

Dichas vesículas enmascaran al REG, dándole al citoplasma una sutil acidofilia. ...Ahora, cuando una parte del preparado teñido con la técnica de H y E no se tiñe, ¿debo inferir que ahí se encuentra una molécula neutra? NO!!!!!!!!!!! Muchas veces ocurre que vemos una célula cuyo citoplasma no se ha teñido. No necesariamente significa que haya estructuras neutras. Puede darse el caso, como lo representan los lípidos, que no soportan el pasaje de alcoholes de la técnica de H y E. De esta manera, al perderse el contenido, no hay nada que teñir.

Entonces, que no se tiñe con H y E????- aire o agua (por ejemplo las luces!)- lípidos: Los lípidos tienen una técnica específica que preserva su contenido, llamada Técnica de Sudán.- hidratos de carbono: Las estructuras con alto contenido en glúcidos, como el glucógeno, proteoglicanos y mucopolisacáridos, también pueden dar una imagen negativa (no se tiñen) con la técnica convencional. Las estructuras glucídicas presentan una técnica selectiva para su tinción, llamada técnica de PAS (Peryodic Acid - Schiff).

SUDAN  ¿Qué estructuras son sudanófilas? Todas las estructuras ricas en lípidos

 Tejido adiposo blanco: presenta una gran vacuola lipídica que ocupa todo su citoplasma.Vainas de mielina de las neuronasVesículas de almacenamiento de colesterol de las células productoras de hormonas esteroideas: como el espongiocito de la corteza suprarrenal.Retículo endoplasmático Liso (REL). Hay dos colorantes:Sudan rojo: tiñe triglicéridos (adipositos)Sudan negro: tiñe fosfolípidos (vainas de mielina)

Imágenes:

Técnica de PAS ¿Qué estructuras dan positivas a la reacción de PAS?Todas aquellas ricas en glúcidos

 Vacuolas de células caliciformesVesículas de almacenamiento de glándulas mucosas (como los acinos mucosos o mixtos)Vesículas de almacenamiento de glucógeno: como en el hepatocito o las células muscularesGlucocálixImágenes:

1) Acino mucoso: PAS + H y E

2) Mucus producido por celulas del estomago (lo que se ve rojo es PAS)

3) celula caliciforme

CONCEPTOS FINALES 

Se torna imprescindible comprender las distintas afinidades tintoriales que tienen las estructuras intracelulares, para comprender la visión al microscopio, y poder sacar conclusiones veraces. 

A su vez, el núcleo de una célula SIEMPRE es basófilo. Podrá ser intenso (si la cromatina está condensada) o leve (si la cromatina esta laxa). Pero siempre está en la gama de lo basófilo. 

Es el citoplasma de una célula el que tiene variaciones en la coloración. Esto depende fundamentalmente de las organelas que se encuentren en su interior. 

Una célula que sintetice proteínas de exportación, tendrá en su citoplasma grandes cantidades de REG. Esto no significa que UNICAMENTE tenga REG. También tiene mitocondrias.

 Nota: los contenidos desarrollados en este documento NO REEMPLAZAN bajo ningún aspecto la BIBLIOGRAFIA existente, ni son suficientes para cumplir los OBJETIVOS de la materia. El enfoque del mismo es práctico y NO se desarrollan contenidos puramente teóricos.