Técnicas para Química sanguínea

( POINT )

MÉTODO ENZIMÁTICO

Blanco Standard Muestra

Reactivo 1ml 1ml 1ml

Incubar 5 - 10 min. a 37ºC

Standard 10 µl

Muestra 10 µl

Mezclar e incubar 10 min. a 37ºC y leer 505 nm.

VALORES DE REFERENCIA: 70 – 105 mg/dl

LINEARIDAD: 0 – 500 mg/dl

(BIOCYSTEMS)

MÉTODO ENZIMÁTICO

PROCEDIMIENTO: ( STAR DUST MC 15)

MUESTRA: Suero


Reactivo 500 μl 500 μl 500 μl

Incubar 5- 10 min. a 37 ºC

Agua Des. 5 µl

Standard 5 µl

Muestra 5 µl

Mezclar e incubar 5 min. a 37 ºC y leer a 500 nm.

VALORES DE REFERENCIA: Suero o plasma: 70 – 105 mg %

LINEARIDAD: 0 - 500 mg% > Dil con soluc. Fis. (1+4)

( HUMAN )

METODO ENZIMATICO COLORIMÉTRICO


MUESTRA: Suero


Reactivo 500 μl 500 μl 500 μl


Agua Des. 5 µl

Standard 5 µl

Muestra 5 µl


VALORES DE REFERENCIA: Suero o plasma: 75 – 115 mg %

LINEARIDAD: 0 - 700 mg% > Dil con soluc. Fis. (1+1)

(WIENER)

MÉTODO ENZIMÁTICO: (Uremia calorimétrico).

MUESTRA: suero /plasma

PROCEDIMIENTO:


Agua dest. II gotas II gotas II gotas

Stándard 20 µl

Muestra 20 µl

Ureasa I gota I gota I gota

Mezclar por agitación suave e incubar 5 min. a 37°C.

Reactivo 1 1 ml 1ml 1ml

Reactivo 2 1ml 1ml 1ml


Agua dest.10ml 10ml 10ml

Mezclar por inversión y retirar del baño después de 10 min. Leer frente a blanco de reactivo a 540 nm.

VALORES DE REFERENCIA: suero / plasma 20 – 45 mg/dl


(BIOSYSTEMS)

MÉTODO COLORIMETRICO

PROCEDIMIENTO: (STAR DUST MC 15 )

MUESTRA: suero

Blanco Stándar Muestra

Reactivo1. 500 μl 500 μl 500 μl

Stándard 5 µl

Muestra 5 µl


Reactivo 2 500 μl 500 μl 500 μl


Leer a 600 nm.

VALORES DE REFERENCIA: suero 15 – 39 mg/dl

LINEARIDAD: 0 – 300 mg/dl > Dil con H2O destil. (1+4)

(HUMAN)

MÉTODO CINÉTICO

PREPARACIÓN:

1. Preparación de reactivo 1: En un frasco medir 1 cc de OH Na + 4 cc de agua destilada mezclar en vortex.

2. Preparación del reactivo de trabajo: Medir 500 μl de reactivo 1 y 500 μl de ácido pícrico

PROCEDIMIENTO:

Rvo. de trabajo 1ml.

Realizar la lectura del blanco con el reactivo 490 – 510 nm

Standard 100 µl

Mezclar en vortex por 10-15 min. Y leer a 490 - 510 nm.

Rvo. De Trabajo 1ml.

Muestra 100 µl

Mezclar en vortex por 10-15 min. Y leer a 490 - 510 nm.

VALORES DE REFERENCIA: Mujeres 0,5 - 0,9 mg/dl

Varones 0,6 – 1,1 mg/dl


( POINT )

MÉTODO ENZIMÁTICO

PROCEDIMIENTO:




Agua Des. 25 µl

Standard 25 µl

Muestra 25 µl


VALORES DE REFERENCIA: Suero o plasma: 2.5 – 7.7 mg/dl


PROTI 2

PROTEINAS TOTALES (WIENER)

PROCEDIMIENTO:


Rvo.EDTA/Cu 3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml

Agua destilada 50 µl

Standard 50 µl

Muestra 50 µl

Mezclar con varilla e incubar a 37 ºC por 15 min. leer a 540 nm.

.

VALORES DE REFERENCIA: Proteínas totales: 6.1 -7.9 g/dl

(Wiener)

PROCEDIMIENTO:


Rvo. BCF 3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml

Agua destilada 10 µl

Standard 10 µl

Muestra 10 µl

Mezclar con varilla e incubar a Tº ambiente por 10 min. leer 625 nm.

VALORES DE REFERENCIA: Albúmina: 3.5 - 4.8 g/dl

Rel. Alb/Glob: 1.2 - 2.2

(WIENER)

PREPARACIÓN DEL REACTIVO PRECIPITANTE:

En un frasco medir 2.5 ml de reactivo dextran Añadir 2.5 ml de reactivo magnesio Mezclar por inversión

PROCEDIMIENTO:

En un tubo medir 500µl de muestra Agregar 50µl de reactivo precipitante, homogeneizar por rotación o

con golpes suaves en la palma de la mano por 20 seg. Dejar 30 a 40 min en refrigerador a 4 a 10 ºC Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m.

Blanco Estándar Muestra

Rvo. Trabajo de Col.

1 ml 1 ml 1 ml

Preincubar 5 – 10 min a 37 ºC

Standard de Col. 10 µl

Sobrenadante 50 µl

Mezclar e incubar 5 min a 37 ºC y leer a 505 nm.

VALORES DE REFERENCIA: 40 – 60 mg/dl


(WIENER)

PROCEDIMIENTO: En un tubo medir 100 µl de muestra Agregar 50µl de reactivo precipitante, homogeneizar con movimientos

suaves por 20 seg. Dejar 15 min. en baño de agua de 20 – 25 ºC Centrifugar 15 min. a 3000 r.p.m.


Rvo. Trabajo de Col.

1 ml 1 ml 1 ml

Incubar 5 – 10 min a 37 ºC

Standard de Col. 10 µl

Sobrenadante 50 µl

Mezclar e incubar 5 min a 37 ºC y leer a 505 nm.

VALORES DE REFERENCIA: menor de 129 mg/dl

LINEARIDAD:

CALCULO MANUAL LDL:

LDL = Colesterol total – HDL- Triglicérido

5

(WIENER)

GPO /PAP

PROCEDIMIENTO:

PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO: Disolver el vial con el buffer. (Según inserto)



Incubar 5- 10 min. a 37ºC

Standard 10 µl

Muestra 10 µl


VALORES DE REFERENCIA: menor a 150 mg/dl

LINEARIDAD: 0 - 1000 mg/dl

(WIENER)

PROCEDIMIENTO:

PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO: Disolver el vial con el buffer. (Según inserto)



Preincubar 5 a 10 min. 37 ºC

Standard 10µl

Muestra 10µl

Mezclar e incubar 5 min. 37 ºC y leer 505 nm.

VALORES DE REFERENCIA: menor a 200 mg/dl


(WIENER)

PREPARACIÓN:

Sustrato: Transferir el contenido del frasco de NaFF directamente en el frasco de Buffer, mezclándolo hasta su completa disolución Rvo. De color: disolver el contenido del envase en 500ml de agua destilada y dejar a Tº ambiente en frasco ambarado y protegido de la luz.

PROCEDIMIENTO:


Sustrato 0.5ml 0.5ml 0.5ml

Incubar en baño de agua a 37 ºC unos minutos

Standard 50 µl

Muestra 50 µl

Mezclar e incubar 10 min.

Rvo. de Color 2.5ml 2.5ml 2.5ml

Mezclar cada tubo y retirar del baño y leer a 520 nm.

VALORES DE REFERENCIA: Adultos: 68 – 240 UI/L Niños: 100 – 400 UL/L

LINEARIDAD: 0 – 800 UI/L

(HUMAN)

MÉTODO CINÉTICO

PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO: se mide 2cc de sustrato (GOT) y se transfiere al frasco de buffer (GOT) que contiene 8 cc. Mezclar y rotular

PROCEDIMIENTO:


Realizar la lectura del blanco con el reactivo 340 nm

Muestra 100 µl

Mezclar y leer a 340nm.

VALORES DE REFERENCIA: Varones 0 – 37 U/L Mujeres 0 – 31 U/L

LINEARIDAD: 0 – 350 U/L Diluir con soluc. Fis. ( 1+9 )

(TECO DIAGNOSTICS)

METODO CINÉTICO


MUESTRA: suero

Reconstituir el reactivo.

Blanco Muestra

Reactivo GOT 500 μl 500 μl

Incubar 5 min. a 37ºC

Muestra 50 µl

Mezclar y leer a 340 nm.

VALORES DE REFERENCIA: Suero hasta 40 UI/ L


(HUMAN)

MÉTODO CINÉTICO

PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRAJAJO: se mide 2cc de sustrato (GPT) y se transfiere al frasco de buffer (GPT) que contiene 8 cc. Mezclar y rotular

PROCEDIMIENTO:


Realizar la lectura del blanco con el reactivo 340 nm

Muestra 100 µl

Mezclar y leer a 340nm.

VALORES DE REFERENCIA: Varones 42 U/L

Mujeres 32 U/L

LINEARIDAD: 0 – 350 UI/L > Diluir con soluc. Fis. (1+9 )

(TECO DIAGNOSTICS)

METODO CINÉTICO


MUESTRA: suero

Reconstituir el reactivo.

Blanco Muestra

Reactivo GPT 500 μl 500 μl

Incubar 5 min. a 37 ºC

Muestra 50 µl


VALORES DE REFERENCIA: suero hasta 38 UI/ L


(WIENER)

BILIRRUBINA COLORIMETRICO:

Muestra: Suero, plasma heparinizado no hemolizado o liquido amniótico (proteger de luz natural o artificial).

INSTTRUCCIONES: Desarrollador listo para usar. Reactivo Sulfanilico listo para usarAmbos estables a temperatura ambiente hasta la fecha de vencimiento indicada. Diazoreactivo mezclar una parte de nitrito de sodio mas 21 partes de reactivo sulfanilico.Estable en frasco de vidrio color caramelo de 2 – 10 ºC 3 meses a partir de la fecha de su preparación.

SUEROS ICTERICOS:

De acuerdo a la severidad de la ictericia: Para una ictericia moderada se uso 50 µl de suero y multiplicar el resultado obtenido por

3.79. Para una ictericia intensa se requiere solo 20 µl de suero y multiplicar el resultado por 9.38.

Blanco Directa Total

Muestra (suero) 200 µl 200 µl 200 µl

Agua destilada 2.5 ml 2.5ml

Desarrollador 2.5 ml

R. sulfanilico 200 µl

Diazoreactivo 200 µl 200 µl

Mezclar de inmediato cada tubo por inversión, antes de los 5 minutos se realiza la lectura del blanco a 530 nm. Las lecturas pueden efectuarse entre 5 – 15 min., EXCEPTO para la bilirrubina directa que deben leerse a los 5 min. Exactos.VALORES DE REFERENCIA

Suero / plasma adultos: Total hasta 1.0 mg/dl Directa hasta 0.2 mg/dlSuero/ plasma recién nacidos a termino: Total hasta las 24 hrs = 6.0 mg/dl Hasta las 48 hrs. = 7.5 mg/dl Del 3º al 5º dia = 12.0 mg/dlSuero / plasma recién nacidos prematuros: Total hasta las 24 hrs = 8.0 mg/dl Hasta las 48 hrs = 12.0 mg/dl Del 3º al 5º dia = 24.0 mg/dl

Los valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el nivel promedio del adulto al mes de nacimiento. En los prematuros, los niveles de bilirrubina tardan mas en alcanzar la normalidad, dependiendo del grado de inmadurez hepática.

(TECO DIAGNOSTICS)

METODO CINÉTICO

PROCEDIMIENTO: ( STAR DUST MC 15) MUESTRA: suero

Blanco Muestra

Reactivo 500 μl 500 μl

Incubar 5 min. a 37ºC

Muestra 12,5 µl


VALORES DE REFERENCIA: Suero hasta 96 UI/ L


(HUMAN)

RPR: (REAGINA PLASMATICA RAPIDA)

RPR TEST:El reactivo se conserva de 2 – 8˚C. no congelar. Proteger de la luz.Muestra: suero o plasma

PROCEDIMIENTO:

En una placa de fondo blanco colocar: (50 µl de suero o plasma).

Extender el suero sobre toda la superficie del círculo. Agitar el reactivo antes de usar para lograr una completa homogeneización.Dejar caer las primeras tres gotas para eliminar el aire de la aguja en un extremo de la cartilla Poner la gota del antigeno no mezclar, luego absorber las gotas eliminadas antes del procedimiento.Inmediatamente agitar durante 8 minutos lentamente en un rotador automático a 100 r.p.m.

INTERPRETACION: No reactivo: suspensión homogénea, sin floculación Reactivo: floculación gruesa en el centro y en la superficie del círculo,

entonces realizar prueba cuantitativa.

PRUEBA CUANTITATIVA:

Realizar diluciones de la muestra con solución salina (0.9%) (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc.)Muestras reactivas calificar por diluciones.

Nota: cuando la dilución es mayor a 1/16 se recomienda preparar una dilución en tubo. Que se realiza colocando 150 µl de Soluc fisiológica y 10µl de suero del paciente

(HUMAN)

CRP:

Prueba rápida para determinación de proteína C reactiva en suero.El reactivo se conserva hasta su fecha de vencimiento cuando se mantiene entre 2 – 8 ºC. Proteger de la luz. Agitar el reactivo antes de usar para lograr una completa homogeneización.

MUESTRA: suero

En una placa de fondo negro colocar:

Extender el fluido sobre toda la superficie, mezclar inmediatamente durante 2 minutos lentamente en un rotador automático a 100 r.p.m o manual.INTERPRETACION:

Negativo: suspensión homogénea. Positivo: aglutinación que aparece dentro los 2 minutos entonces

realizar la prueba semi-cuantitativa.

PRUEBA SEMI CUANTITATIVA:

Realizar diluciones de la muestra con solución salina (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc.)Para la concentración se multiplica la última dilución positiva por el factor de conversión 6 y reportar el resultado en mg/dl.

VALORES DE REFERENCIA: Menor a 6 mg/dl

(WIENER)

PROCEDIMIENTO:

40 μl de muestra + I gota reactivo PCR

PREPARACION DE ERITROCITOS:

- Lavar los glóbulos rojos O Rh (+) 3 veces con solución fisiológica a 3000 rpm, los 2 primeros por 5 minutos y el último a 15 minutos.- En el sobrenadante no debe aparecer hemólisis- Con los eritrocitos lavados una vez descartado el sobrenadante preparar una suspensión del 3 al 5 % con buffer PH 6.5 (según inserto del kit).

ESTREPTOLISINA – O:

Disolver cada vial con el volumen de Buffer indicado en el rotulo mezclando por inversión hasta su disolución completa

PREPARAR DILUCIONES: En 3 tubos

1:10 = 0.2 ml de suero + 1.8 ml Buffer 1:100 = 0.5 ml de dilución (1:10) + 4.5 ml Buffer 1:500 = 1 ml de dilución (1:100 )+ 4 ml Buffer

Dilución del suero 1:10 1:100 1:500 controles

Tubo nº 1 3 5 7 9 12- 13+

Suero diluido (ml) 0.2 0.8 0.4 1 0.6 - -Buffer ml 0.8 0.2 0.6 - 0.4 1.5 1

EstreptolisinaO (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 - 0.5

Mezclar y mantener a baño Maria a 37 ºC por 15 min.

Eritrocitos 3 – 5% (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 - 0.5

Mezclar agitando ligeramente y mantener en baño Maria a 37ºC durante 15 min. Agitar nuevamente y continuar en baño Maria 30 min. Posteriormente centrifugar 3 min. a 1500 rpm y leer

Unidades Todd /ml 50 125 250 500 833 (-) (+)

Se expresa mediante la inversa de la mayor dilución en la cual se observa hemólisis

VALORES DE REFERENCIA: 0-200 Unidades Todd/ml

LATEX FR- HUMAN

El reactivo se conserva de 2 a 8 ºC. No congelar, proteger de la luz.

MUESTRA: Suero, no utilizar plasma ni sueros bemolizados ni lipémicos.

Agitar el reactivo antes de usar para lograr una completa homogeneización.

En la placa de fondo claro colocar:

Extender el fluido sobre toda la superficie, mezclar inmediatamente durante 2 minutos lentamente en un rotador automático a 100 r.p.m o manual.

INTERPRETACION:

Negativo: suspensión homogénea. Positivo: aglutinación que aparece dentro los dos minutos entonces

realizar la prueba semi-cuantitativa.

PRUEBA SEMI CUANTITATIVA:

Realizar diluciones de la muestra con solución salina (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc.)Para la concentración se multiplica la última dilución positiva por 12.

VALORES DE REFERENCIA: Menor a 12 mg/dl

PROTI U/LCR (WIENER)

40 µl de muestra + I gota reactivo látex

PROCEDIMIENTO:

Orina de 24 hrs. medir el volumen, tomar una muestra representativa. Centrifugar por 5 min. a 2000 r.p.m. (en caso de orinas turbias u

opalescentes)


Rvo. Rojo Pirogalol 1ml 1ml 1ml

Incubar 5 – 10 min. a 37 ºC

Standard 20 μl

Muestra 20 μl

Mezclar e incubar durante 10 min. a 37 ºC y leer a 600 nm.

Para obtener el resultado multiplicar la lectura obtenida por el volumen en litros

Lectura x Vol. L

VALORES DE REFERENCIA: Orina 24 hrs. 30-140 mg / 24hrs. Ocasional: 25 mg / dl

Nota. Mujeres embarazadas V R = 30-160 mg /24 hrs.

LINEARIDAD: 150 mg/dl

(WIENER)

MÉTODO CINÉTICO

PROCEDIMIENTO: (STAR FAX)

Preparación del reactivo de trabajo: Se mide 200 ml de sustrato (Fosfatasa Alcalina) y se transfiere al frasco de buffer (Fosfatasa Alcalina) que contiene 800 ml mezclar y rotular.

PROCEDIMIENTO:

Reactivo de trabajo 1 ml

Preincubar 5 min. Realizar la lectura del blanco con el reactivo a 405 nm

muestra 10 ul

Mezclar 10 a 15 seg. En vortex y leer a 405 nm.

VALORES DE REFERENCIA: Adultos: 65 – 300 UI /L

Niños: Hasta 645 UI /L

LINEARIDAD: 0 – 1500 UI /L

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Técnicas para Química sanguínea