RECOGIDA Y MANIPULACIRECOGIDA Y MANIPULACIÓÓN DE MUESTRASN DE MUESTRASCOLORANTES EN HEMATOLOGCOLORANTES EN HEMATOLOGÍÍAA

1. La sangre. Normas para su correcta extracción.

- Características de la punción venosa- Características de la punción capilar

2. Anticoagulantes usados en hematología

3. Extensión de sangre

4. Características de los colorantes en hematología

- Tipos de tinciones- Términos de la coloración celular.

RECOGIDA Y MANIPULACIRECOGIDA Y MANIPULACIÓÓN DE MUESTRASN DE MUESTRASCOLORANTES EN HEMATOLOGCOLORANTES EN HEMATOLOGÍÍAA

Plasma Extracto leucocitario

Eritrocitos

40%

60%

•Células sanguíneas →→→→ Medula ósea: célula pluripotente

•Plama →→→→ sangre con anticoagulantes (incoagulable)

•Suero →→→→ sangre sin fibrinógeno (sin anticoagulantes)

#Punción venosa•Región antecubital, yugular o femoral en RN, dorso dela mano y pie en ancianos y obesos

•Punción limpia. Evitar coágulos

•En pacientes con terapia de anticoagulante se debepresionar la herida durante 10 min.

•Procedimiento

�Brazo caliente y cinta elástica en el brazo

�Cerrar el puño para ver las venas

�Limpiar con solución desinfectante

�Realizar punción limpia

�Liberar el compresor

�Abrir puño y extraer aguja. Presionar

NORMAS PARA CORRECTA EXTRACCIÓN SANGUÍNEA

#Punción venosa•Tubos estériles al vacío con anticoagulante

•En el caso de jeringa y aguja se llenan de sangre los tubos

(que llevan anticoagulante), quitando previamente la aguja y

resbalando la sangre por la pared de los tubos, y se mezcla por

inmersión

•Tubos bien identificados. Botón rojo muestras infecto-

contagiosas

NORMAS PARA CORRECTA EXTRACCIÓN SANGUÍNEA

#Punción capilar•Muestras de sangre pequeñas o dificultades pararealizar la venopunción

•Pulpejo del dedo, lóbulo oreja o talón del pie (RN)

•Lancetas estériles con un tope

•Técnica:

�Vasodilatación

�Desinfectar y secar

�Pinchar con la lanceta, desechar las primeras gotas y llenar el capilar o pipetas

•Extensiones de sangre periférica, Hematocrito, Hb

NORMAS PARA CORRECTA EXTRACCIÓN SANGUÍNEA

#Utilidades anticoagulantes•Obtener plasma o muestras de sangre total

•Estudiar características morfológicas

•Realizar recuentos celulares

#Propiedades anticoagulantes•No alterar la morfología de los leucocitos

•No alterar el tamaño eritrocitario

•No producir hemólisis

•Impedir agregación plaquetaria

•Máximo tiempo de conservación de la muestra

ANTICOAGULANTES EN HEMATOLOGÍA

#EDTA•Efecto quelante sobre el Ca

•EDTA-Na2

•EDTA-K3. Para recuento celular en autoanalizador

•Puede producir pseudotrombopenia

#Heparina•Impide el paso protrombina →→→→ trombina

•No modifica las características celulares de leucocitos y

eritrocitos, pero proporciona color azul en los frotis de

tinciones panópticas

ANTICOAGULANTES EN HEMATOLOGÍA

#Citrato sódico•Impide ionización del Ca

•Se utiliza en:

�Pruebas de hemostasia (1:9)

�VSG (1:4)

#Oxalato sódico•Pruebas de hemostasia (1:4)

#ACD (Ácido cítrico 0,9 g; Citrato sódico 2 g; Dextrosa 2 g;

H2O 120 mL)

•Bancos de sangre (1:4)

ANTICOAGULANTES EN HEMATOLOGÍA

#Para el laboratorio de hemostasia (citrato Na)

•PPP (1500 g 15 min.): TP, TTPA, fibrinógeno

•PRP (<500 g 15 min.): Determinación de plaquetas

#Para el laboratorio de hematimetría (EDTA-K3)

•Recuentos celulares

•Recuento de reticulocitos

•Hb

•Hematocrito

•Índices eritrocitarios

•Índices plaquetarios

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

Materiales: Portaobjetos esmerilados, limpios y libres de grasaCubreobjetos

Método de los dos portaobjetos:Depositar una gota de sangre en un extremo del portaobjetos

Colocar otro portaobjetos sobre el anterior con la gota de sangre, con una inclinación de 45º

Desplazarlo hacia atrás hasta entrar en contacto con la gota y permitir que, por capilarización, la gota se extienda a lo largo del canto del portaobjetos

Deslizar el segundo portaobjetos inclinado sobre el primero de manera suave y rápida, para permitir que la gota de sangre queda extendida

A mayor inclinación, extensión más gruesa. Menor inclinación = extensión más fina

Secado a temperatura ambiente

EXTENSIONES DE SANGRE

Realización de un frotis

EXTENSIONES DE SANGRE

Métodos de los dos cubreobjetos:

Dos cubres sin grasa limpios y secos

Colocar en uno una pequeña gota de sangre

Sujetarlo por los vértices e invertirlo colocándolo sobre el otro rotándolo 45 º

Por capilaridad se extiende la gota

Secar

Método de los dos cubreobjetosPartes de un frotis

EXTENSIONES DE SANGRE

#Fijación•calor seco•alcoholes•formaldehído•acetona•metanol (el mejor para morfología)

#Objetivo de las tinciones•Identificar células•Identificar estructuras subcelulares

#Formas de transmitir el color un colorante•Su propio color•Un color distinto →→→→ Metacromasia•Más de un color →→→→ Alocromasia

COLORANTES EN HEMATOLOGÍA

#Tipos de colorantes•Básicos (catiónicos): basofilia

•Ácidos (aniónicos): acidofilia

•Neutros (aniónicos y catiónicos): acidofilia o basofilia

#Tipos de tinciones•Tinción pancromática: azul de metileno, eosina, Wright

•Tinción panóptica: May-Grünwald-Giemsa

COLORANTES EN HEMATOLOGÍA

#Terminología•Acidofilia: Avidez por colorantes ácidos (e.g. eosinófilos)

•Basofilia: Avidez por colorantes básicos (e.g. basófilos)

•Azurofilia: Coloración violácea-rojiza (y no azul)

•Hipocromía: Falta de intensidad en la coloración(e.g. Anemia ferropénica)

•Hipercromía: Refuerzo de la tinción

•Anisocromía: Distintas intensidades de la coloraciónen el mismo tipo de células

•Policromasia: Distinto color en el mismo tipo celular

COLORANTES EN HEMATOLOGÍA