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��H/�)/���I ,�5� El profesor Explicara, que es un exudado faríngeo o nasofaringeo, un urocultivo y un coprocultivo. ¿En que caso clínico están indicados? ¿Porque se utilizan diferentes medios de cultivo para su siembra? ¿Cuales son los microorganismos patógenos más frecuentemente asociados a una faringoamigdalitis, infección de vías urinarias y gastroenteritis y que medios de cultivo selectivos y diferenciales se emplean para su crecimiento?. EL PROFESOR EXPLICARA EL DESARROLLO DE LA PRACTICA

1. Exudado nasofaringeo � Selección de los medios de cultivo � Toma de exudado nasofaringeo y manejo

de la muestra clínica

• Técnica de sembrado para la obtención de colonias aisladas.

• Condiciones y tiempo de incubación 2. Urocultivo

• Manejo de la muestra de orina

• Selección de los medios de cultivo

• Técnica de sembrado de la muestra clínica (cultivo cuantitativo)

• Condiciones y tiempo de incubación 3. Coprocultivo

• Selección de los medios de cultivo

• Técnica de sembrado de la muestra clínica, para la obtención de colonias aisladas

• Condiciones y tiempo de incubación 4. Cultivo de flora bacteriana de piel Relación que guarda la densidad bacteriana con el aseo de las manos Participación del lavado de manos en la prevención de diseminación de enfermedades infecciosas bacterianas. Selección de los medios de cultivo Técnica de inoculación en las placas de cultivo Condiciones y tiempo de incubación

I.- Objetivos El alumno: Conocerá los medios selectivos y diferenciales que se utilizan para sembrar un exudado faríngeo, un urocultivo, un coprocultivo y flora bacteriana de piel. Descubrirá el tipo de flora bacteriana predominante en piel y su variación en la densidad de acuerdo a la técnica de lavado de manos. Se familiarizará con las técnicas de sembrado y de tinción que se utilizarán en el laboratorio de bacteriología. Comprenderá la importancia de manejar la siembra de las muestras clínicas en un campo de esterilidad. II. Material

1. Asas bacteriológicas 2. Portaobjetos de 26 x 75 mm 3. Frasco gotero con agua destilada estéril 4. Puente para tinción 5. Reactivos para tinción de Gram 6. Mecheros 7. Aceite de inmersión 8. Papel limpia lentes 9. Microscopios 10. Preparaciones fijas y teñidas de bacterias

III. Metodología Se emplearán los medios de cultivo sólidos y líquidos sembrados para realizar frotes y tinción de Gram para su observación. Preparación de frotes

1. Trabajar en un área de aproximadamente 10 cm de distancia de la flama del mechero (zona de esterilidad).

2. Esterilizar el asa, flamearla y enfriarla. 3. Tomar una pequeña porción de una colonia

aislada con el asa estéril.

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4. Resuspender el material del asa en una gota de agua destilada, colocada previamente en un portaobjeto, mezclar y extender la suspensión en un área no mayor de 2 cm de diámetro.

5. Secar la preparación al aire libre. 6. Fijar la preparación con el calor del

mechero, evitando el calentamiento excesivo.

7. Marcar cada preparación con un marcador indeleble.

8. Colocar el frote sobre el puente de tinción. Tinción de Gram

1. Cubrir los frotes con cristal violeta, durante un minuto.

2. Lavar con agua corriente ligeramente. 3. Cubrir con lugol bacteriológico durante un

minuto. 4. Lavar con agua corriente ligeramente. 5. Decolorar el frote con un a mezcla de

alcohol-acetona (5 a 7 gotas). 6. Lavar con agua corriente ligeramente. 7. Cubrir con safranina durante 30 segundos. 8. Lavar con agua corriente. 9. Secar al aire libre. 10. Observar al microscopio.

Interpretación Las bacterias que retienen el colorante inicial y se tiñen de color violeta son Gram positivas y las que se decoloran y se tiñen con el colorante de contraste son Gram negativas.