Una nova visió de l’oligomerització de receptors

acoblats a proteïna G

Jorge GandíaGrup de Neurofarmacologia i Dolor

Facultat de Medicina-BellvitgeUniversitat de Barcelona

GPCRs

Els GPCR oligomeritzen

Més llocs al·lostèrics per modulació

GPCRoligomer

Modulació de les cascades de senyalització

G protein arrestin

+

Moldulació en la selectivitat de proteïnes G

++

Oligòmer específic de malaltia

Desequilibri oligomèric en malaltia

PatologiaCondicions normals

PatologiaCondicions normals

Paper patofisiològic

+

Modulació de l’activació de proteïnes G

X

+

Els oligòmers de GPCR formen una gran xarxa de proteïnes

Sorgeix un nou repte: identificar nous oligòmers de GPCR i altres proteïnes que hi interactuin

MYTH

A2AR

The Receptorsome Project

GPR37

GPCR orfe, pertany a la família I

També conegut com Pael-R (Parkin associated endothelin-like receptor): relacionat amb una forma juvenil de la malaltia de Parkinson

Involucrat en el metabolisme de la dopamina:

GPR37

A2AR/GPR37 co-distributionL’oligòmer A2AR/GPR37

Co-distribució

1: A2A2: GPR37yfp

3: A2A + GPR37yfp

Mr(kDa)

80 -

Crude anti-GFP1 2 3 1 2 3

40 -

anti-A2AR1 2 3

IP:

IB: anti-A2AR

IB: anti-GPR37

100 -

GPR37YFP

A2AR

L’oligòmer A2AR/GPR37Co-immunoprecipitació

Rluc

Coelenterazine H 530

< 100 Ǻ

530513Coelenterazine H 480

Rluc> 100 Ǻ

YFPYFP

L’oligòmer A2AR/GPR37Interacció in vivo: BRET

GPR37-Rluc

0 25 50 75 100 125 1500

1

2A2A-YFPA1-YFP

YFP/RLuc

BR

ET u

nits

A2A-RLuc

0 10 20 300

1

2

3 GPR37-YFPCD4-YFP

YFP/RLuc

BR

ET u

nits

L’oligòmer A2AR/GPR37Rellevància funcional (I)

Expressió en superfície

80 -

Whole cell Cell surface

1 2 3 1 2 3

40 -

IB: anti-A2AR

IB: anti-GPR37GPR37YFP

A2AR1: A2A2: GPR373: A2A + GPR37

Mr (kDa)

L’oligòmer A2AR/GPR37Rellevància funcional (II)

Producció d’AMPc

A2A 2A2A/1GPR0

100

200

300

400 -CGSHA+CGS

%

- CGS

+ CGS

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

Arb

itrar

y U

nits

+GPR37

+GPR37

L’oligòmer A2AR/GPR37Anàlisi estructural de GPR37

1-no transf.2-wt3-delta5634-delta5715-delta6136-delta563-8

Sup. cel·lular

Total

1 2 3 4 5 6

L’oligòmer A2AR/GPR37Condicions oxidatives/reductores

Activació de canals de calci (FLUO4)

Bateria de pèptids anàlegs a HA

- OX RD - OX RD

wt Delta 563-8

Cell surface

Whole cell

0 50000 100000 1500000.0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.733nM100nMIONO

ms

L’oligòmer A2AR/GPR37Generació de ratolins gpr37 -/-

Animals hemiparkinsonians vs individus control en presència/absència d’un antagonista del receptor A2A

Una nova visió de l’oligomerització de receptors

acoblats a proteïna G

Jorge GandíaGrup de Neurofarmacologia i Dolor

Facultat de Medicina-BellvitgeUniversitat de Barcelona