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UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

CARRERA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA

MACHALA2016

AVILA CAMPOVERDE JHON JAIRO

EFECTO ANTIFÚNGICO DE SEIS EXTRACTOS VEGETALES SOBRE ELHONGO MYCOSPHAERELLA SP EN EL CULTIVO DE BANANO



MACHALA2016

AVILA CAMPOVERDE JHON JAIRO

EFECTO ANTIFÚNGICO DE SEIS EXTRACTOS VEGETALESSOBRE EL HONGO MYCOSPHAERELLA SP EN EL CULTIVO DE

BANANO



MACHALA2016

AVILA CAMPOVERDE JHON JAIROINGENIERO AGRÓNOMO

EFECTO ANTIFÚNGICO DE SEIS EXTRACTOS VEGETALES SOBRE EL HONGOMYCOSPHAERELLA SP EN EL CULTIVO DE BANANO

Machala, 19 de octubre de 2016

JARAMILLO AGUILAR EDWIN EDISON

TRABAJO DE TITULACIÓNTRABAJO EXPERIMENTAL

Urkund Analysis Result Analysed Document: AVILA CAMPOVERDE JHON JAIRO.pdf (D21266820)Submitted: 2016-08-01 15:29:00 Submitted By: [email protected] Significance: 3 %

Sources included in the report:

http://www.taxateca.com/ordenlamiales.html

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2

U R K N DU

DEDICATORIA

Quiero dedicar este trabajo de investigación con mucho amor a las

personas que en todo momento me apoyaron para no desmallar y lograr a culminar con

éxito la meta trazada como lo es ser un buen profesional.

A mi madre Sra. Lilia V. Campoverde Campoverde, quien con su ternura y sabios

consejos supo poner en mi corazón toda la fortaleza necesaria para lograr con éxito lo

mejor que la vida nos puede brindar.

A mi padre Sr. Raul S. Avila Sánchez, quien con su dedicación, humildad y

responsabilidad, supo poner en mí esa mística de responsabilidad y humildad en todo lo

que un hombre pueda aportar tanto en el trabajo como en el hogar.

A mi hermana Srta. Evelyn C. Avila Campoverde, quien me brindó su apoyo incondicional

en el transcurso de mi carrera.

A mí querida novia Srta. Jessica K. Obando Saldarriaga quien con su amor puro e

incondicional supo brindarme toda la fortaleza para superar las adversidades emocionales

y de trabajo para seguir adelante.

Jhon Jairo Avila Campoverde

AGRADECIMIENTO

En primer lugar quiero agradecer a DIOS que me han dado la oportunidad y la suficiente

inteligencia para poder aprender y prepararme para enfrentarme a la vida.

A la Universidad Técnica de Machala y en especial a la Facultad de Ciencias

Agropecuarias, Escuela de Ingeniería Agronómica, quienes con la dedicación de aporte a

la Ciencia por parte de todos sus titulares académicos para brindarnos los conocimientos

necesarios en todas y cada una de las asignaciones relacionadas a nuestra carrera y

ejecutarlas en el campo profesional.

Al Sr. Ing. Agr. Edwin Jaramillo Aguilar, quien aportó con sus conocimientos técnicos y

científicos para el desarrollo y culminación de este trabajo de investigación y que sirve de

guía para la sociedad que tiene afinidad con la producción de banano.

A los Sres. Miembros del Honorable Concejo Directivo Ing. Agr. Sara Castillo, Ing. Agr.

Abraham Cervantes, quienes me brindaron su apoyo y confianza en la culminación y

exposición de mi trabajo de titulación.

A mis amigos Adrián Rubio, Iván Zhiñin y especialmente a Cinthia Calva, por su

cooperación en el presente trabajo ayudándome así a culminar con éxito mi trabajo de

titulación.

A todos mis compañeros de aula, autoridades y personal administrativo de nuestra

Facultad que de una u otra manera colaboraron en mi proyecto.

El autor.

EFECTO ANTIFÚNGICO DE SEIS EXTRACTOS VEGETALES SOBRE EL HONGO

Mycosphaerella sp EN EL CULTIVO DE BANANO

Avila Campoverde, Jhon;

Jaramillo Aguilar, Edison

RESUMEN

El presente trabajo se realizó en la Unidad Académica de Ciencias Agropecuarias, de la

Universidad Técnica de Machala. Debido a la problemática que se presenta en el cultivo

de banano a causa del hongo Mycosphaerella sp., es un ascomiceto que ataca

principalmente a la parte foliar de la planta, reduciendo su capacidad fotosintética e

impidiendo que la planta pueda desarrollarse con un alto vigor vegetativo, causando

pérdida de peso en los racimos y precocidad en la madures del fruto del banano,

afectando de gran manera los intereses tanto de productores como comerciantes del

sector bananero. El sector bananero Ecuatoriano en el año 2012 exportó USD

2,078,239.38 millones de dólares por divisas y 5,196,065.09 toneladas ubicando a esta

fruta como el principal producto de exportación del país El uso excesivo de fungicidas en

los cultivos agrícolas, los hongos han desarrollado un sistema de resistencia antes estos

productos fúngicos, contaminación ambiental y riesgos de salud pública, de tal manera se

está desarrollando extractos que inactiven la actividad anti fúngica, para la búsqueda de

nuevas alternativas en el control de hongos y sus micotoxinas. Los extractos vegetales

poseen un origen biológico, son biodegradables y presentan un mínimo impacto negativo

contra el medio ambiente y la salud humana; los extractos y aceites esenciales de plantas

contienen muchas de ellas actividad antimicrobiana y antifúngica los cuales dichos

conocimientos son conocidos desde la antigüedad. Las especies vegetales constituyen

una fuente de estructuras bioactivas las cuales poseen actividad intrínseca y servir para el

uso de fungicidas orgánicos y seguros. En el laboratorio de fitopatología se realizaron

pruebas para comprobar el efecto antifúngico que contienen los extractos de las plantas

de hierba luisa (Cymbopogon citratus Staff.), borraja (Borago officinalis L.), romero

(Rosmarinus officinalis L), cedrón (Aloysia triphylla L) e hinojo (Foeniculum vulgare M.). Se

recolectaron hojas de banano infectadas con el hongo de la sigatoka negra

(Mycosphaerella sp.), se aisló a nivel in vitro usando como medio de cultivo PDA (papa +

dextrosa + agar), evaluando los diferentes extractos vegetales. Para el ensayo se realizó

6 tratamientos con 5 repeticiones, incluido el testigo, tomando variables como crecimiento

radial del micelio y porcentaje de control del hongo Mycosphaerella sp, Los extractos

vegetales evaluados fueron Hierba luisa (T1), Hinojo (T2), Cedrón (T3), Romero (T4),

Borraja (T5) y un Testigo (T6). Se utilizó un Diseño Completamente al Azar (DCA), por

las condiciones homogéneas que presenta el ensayo. Las variables se evaluaron cada 10

días después de la inoculación en un periodo de duración de 30 días. De acuerdo a los

resultados obtenidos los mejores extractos que presentan efecto antifúngico son el T1, T3

y T4, siendo el T1 el mejor de ellos con un porcentaje de control de 64,52% en relación al

tratamiento testigo; el efecto antifúngico de la hierba luisa se debe a que contienen aceite

esencial (0.5 – 0.7 %) citral, Geranial y neral. Triterpenoides (cimbopogana, cimboponal) y

flavonoides (luteolina, isoorientina y derivados); la Borraja (T5) mostró un efecto

estimulante en el crecimiento radial del micelio superando al testigo con una diferencia del

4,42%.

Palabras clave: Mycosphaerella sp., PDA, extracto vegetal, micelio, variables, antifúngico

ANTIFUNGAL EFFECT OF SIX PLANT EXTRACTS ON THE FUNGUS Mycosphaerella

sp IN THE CULTIVATION OF BANANAS

Avila Campoverde, Jhon;

Jaramillo Aguilar, Edison

SUMMARY

The present work was carried out in the Academic Unit of Agricultural Sciences of the

Technical University of Machala. Due to the problem that is presented in the cultivation of

bananas at the cause of the fungus Mycosphaerella sp., is a ascomiceto that primarily

strikes to the part of the plant leaf, reducing its photosynthetic capacity and preventing the

plant can be developed with a high force vegetative, causing loss of weight in the clusters

and precocity in the madures of the fruit of the banana, affecting in a big way the interests

of both producers and traders in the banana sector. The Ecuadorian banana sector in the

year 2012 exported USD 2,078,239.38 million dollars for foreign currency and

5,196,065.09 Tons placing this fruit as the main export product of the country the

excessive use of fungicides in agricultural crops, fungi have developed a system of

resistance before these fungal products, environmental pollution and public health risks, so

is developing extracts that inactivate the anti fungal, to the search for new alternatives in

the control of fungi and the mycotoxins. The plant extracts have a biological origin, are

biodegradable and have a minimum negative impact against the environment and human

health; extracts and essential oils from plants contain many of them antimicrobial activity

and antifungal which such knowledge are known since antiquity. The plant species are a

source of bioactive structures which possess intrinsic activity and serve to the use of

organic fungicides and insurance. In the plant pathology laboratory tests were conducted

to check the antifungal effect that contain extracts from plants Luisa Herb (Cymbopogon

citratus Staff.), borage (borago officinalis L.), rosemary (Rosmarinus officinalis L), Cedrón

(Aloysia triphylla L) and fennel (Foeniculum vulgare M.). Were collected banana leaves

infected with the fungus of the black Sigatoka (Mycosphaerella sp.), was isolated at the

level in vitro using as a culture medium PDA (potato dextrose agar), evaluating the

different plant extracts. The trial was conducted for 6 treatments with 5 replicates,

including the witness, taking variables such as radial growth of mycelium and percentage

of control of the fungus Mycosphaerella sp, the plant extracts were evaluated grass luisa

(T1), Fennel (T2), Cedrón (T3), Rosemary (T4), Borage (T5) and a control (T6). It was

used a Completely Randomized Design (DCA), by homogeneous conditions that presents

the test. The variables were assessed every 10 days after inoculation in a duration of 30

days. According to the results obtained the best extracts which have antifungal effect are

the T1, T3 and T4, being T1 the best of them with a percentage control of 64,52% in

relation to the witness; the treatment antifungal effect of the grass luisa is due to that

contain essential oil (0.5 - 0.7 %) citral, Geranial and neral. Triterpenoids (cimbopogana,

cimboponal) and flavonoids (luteolina, isoorientina and derivatives); Borage (T5) showed a

stimulating effect on the radial growth of mycelium surpassing the witness with a difference

of 4.42%.

Key words: Mycosphaerella sp., PDA, vegetal extract, mycelium, variables, antifúngico

ÍNDICE DE CONTENIDO

TEMA PÁGINA

1. INTRODUCCIÓN ..................................................................................................................... 1

2. REVICION DE LITERATURA ................................................................................................... 2

2.1. Caracteristicas del cultivo de banano ............................................................................... 2

2.2. Enfermedad en el cultivo de banano ................................................................................. 2

2.3. Sintomologia de la enfermedad. ........................................................................................ 3

2.4. Reproducción del patógeno ............................................................................................... 3

2.5. Extractos vegetales ............................................................................................................. 4

A) Hierba Luisa ..................................................................................................................... 5

B) Borraja ............................................................................................................................... 6

C) Romero ............................................................................................................................. 7

D) Cedrón............................................................................................................................... 8

E) Hinojo ................................................................................................................................ 9

3. MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................................... 11

3.1. Materiales ....................................................................................................................... 11

3.1.1. Ubicación política ................................................................................................... 11

3.1.2. Ubicación geográfica ............................................................................................. 11

3.1.3. Clima y ecología .................................................................................................... 11

3.1.4. Materiales y equipos utilizados ............................................................................ 11

3.1.5. Tratamientos ........................................................................................................... 12

3.1.6. Variables evaluadas ............................................................................................. 12

3.1.7. Medición de las variables ..................................................................................... 12

3.2. Métodos .......................................................................................................................... 13

3.2.1. Preparación de medio de cultivo pda .................................................................. 13

3.2.2. Extracción por maceración ................................................................................... 13

3.2.3. Aislar “in vitro” Mycosphaerella sp., agente causal de la enfermedad de la

sigatoka negra en el cultivo de banano, usando como medio de cultivo p.d.a.

(papa+dextrosa+agar) .......................................................................................................... 13

3.2.4. Evaluar el efecto antifúngico de extractos vegetales sobre Mycosphaerella

sp en el cultivo de banano.................................................................................................... 14

3.2.5. Diseño experimental .............................................................................................. 14

3.2.6. Modelo matemático ............................................................................................... 14

3.2.7. Hipótesis ................................................................................................................. 15

4. RESULTADOS Y DISCUSIONES ...................................................................................... 16

4.1. Crecimiento radial del micelio de Mycosphaerella sp., a los 10 días después de

inoculación.................................................................................................................................. 16

4.2. Crecimiento radial del micelio de Mycosphaerella sp., a los 20 días después de

inoculación.................................................................................................................................. 18

4.3. Crecimiento radial del micelio de Mycosphaerella spp., a los 30 días después de

inoculación.................................................................................................................................. 21

5. CONCLUSIONES .................................................................................................................. 25

6. RECOMENDACIONES ........................................................................................................ 25

7. BIBLIOGRAFÍA ..................................................................................................................... 26

8. APÉNDICE ............................................................................................................................. 29

ÍNDICE DE CUADROS

TEMA PÁGINA

Cuadro 1. Tratamientos que se utilizara en control antifúngico de extractos vegetales

sobre Myscospherella sp., en condiciones de laboratorio. 2016 ........................................... 12

Cuadro 2. ANOVA, para determinar el crecimiento micelial del hongo Mycosphaerella sp.,

a los 10 días después de la inoculación. ................................................................................... 17

Cuadro 3. Test de Tukey con significancia α= 00.5, para diámetro a los 10 días después

de la inoculación. ........................................................................................................................... 18


a los 20 días después de la inoculación. ................................................................................... 20



Cuadro 6. ANOVA, para determinar el crecimiento micelial del hongo Mycosphaerella

spp., a los 30 días después de la inoculación. .......................................................................... 22



ÍNDICE DE FIGURAS

TEMA PÁGINA

Figura 1.Representación del ciclo de vida de la sigatoka negra (Mycosphharella sp) ......... 4

Figura 2. Crecimiento radial de micelio del hongo Mycosphaerella sp., a los 10 días

después de la inoculación. ........................................................................................................... 16

Figura 3. Porcentaje de control del hongo Mycosphaerella sp., a los 10 días después de la

inoculación. .................................................................................................................................... 17

Figura 4. Test de Tukey con significancia α= 00.5, para diámetro a los 10 días después de

la inoculación. ................................................................................................................................ 18

Figura 5. Radio de crecimiento de micelio del hongo Mycosphaerella sp., a los 20 días

después de la inoculación ............................................................................................................ 19


inoculación. .................................................................................................................................... 19


la inoculación. ................................................................................................................................ 20

Figura 8. Radio de crecimiento de micelio del hongo Mycosphaerella spp., a los 30 días


Figura 9. Porcentaje de control del hongo Mycosphaerella spp., a los 30 días después de

la inoculación. ................................................................................................................................ 22

Figura 10. Test de Tukey con significancia α= 00.5, para diámetro a los 30 días después


Figura 11. Crecimiento radial del hongo Mycosphaerella sp., a los 10, 20 y 30 días

después de la inoculación. ........................................................................................................... 24

Figura 12. Porcentaje de control del hongo Mycosphaerella sp., a los 10, 20 y 30 días


1

1. INTRODUCCIÓN

El principal problema que se presenta en las plantaciones de banano es causada por el

hongo ascomiceto Mycospharella fijiensis que ataca el sistema foliar de la planta,

reduciendo la acción de la fotosíntesis e impidiendo que la planta pueda concluir con su

floración y un buen desarrollo vegetativo, dando como resultado racimos con poco peso

muy por debajo de los estándares comerciales requeridos (Durán, 2016).

La planta de banano tiene el aspecto de árbol por su tamaño y apariencia, es en realidad

una planta herbácea perenne gigante, que alcanza de 3.5 a 7.5 metros de altura y cuyo

“tallo” consiste en un cilindro formado por los pecíolos de las hojas, las cuales están

dispuestas en forma de espiral, de diverso tamaño (Cedeño, 2015).

Durante el curso de su desarrollo los frutos se doblan hacia atrás geotrópicamente. A su

madurez un racimo puede contener de 5 a 10 manos, cada una con 2 a 20 frutos color

amarillo verdoso, amarillo, amarillo-rojizo o rojo, según la variedad (Moreno, 2006).

Ante lo expuesto es necesario realizar esta investigación con la finalidad de controlar el

ataque de este hongo por medio de las acciones anti fúngicas de extractos vegetales,

disminuyendo la aplicación de productos químicos, ya que alteran nuestro ecosistema y

ocasionan problemas tóxicos en nuestro organismo.

Objetivo general

- Evaluar el efecto antifungico de extractos vegetales sobre el hongo

Mycosphaerella sp.

Objetivo especifico

- Determinar el efecto inhibitorio del crecimiento micelial del hongo Mycosphaerella

sp en condiciones de laboratorio.

- Determinar a nivel in vitro el porcentaje de control de los extractos vegetales sobre

Mycosphaerella sp.

2

2. REVISIÓN DE LITERATURA

2.1. CARACTERÍSTICAS DEL CULTIVO DE BANANO

El banano en el Ecuador es considerado un producto tradicional de exportación, el cual

tiene un alto nivel de competitividad entre países latinoamericanos. El puesto número uno

le corresponde a Ecuador, seguido de Belgica, Filipinas, Costa Rica y Colombia

(Versesoto, 2016).

El sector bananero Ecuatoriano en el año 2012 exportó USD 2,078,239.38 millones de

dólares por divisas y 5,196,065.09 toneladas ubicando a esta fruta como el principal

producto de exportación del país (Inversiones, 2013).

El banano comprende un 12 % de producción total de frutas en el mundo. En el 2003, la

superficie de cultivo de banano en el mundo fue de 4,494,686 hectáreas. (ANACAFE,

2013). (Paiz, 2013).

Este cultivo pertenece a la familia musácea del género musa de especies acuminata y

balbisiana. Mediante la formación de híbridos ha dado origen a los plátanos que son

partenocárpicos comestibles. El cultivo de banano en climas tropicales y subtropicales,

tiene una actividad vegetativa continua, generando crecimientos y fructificación todo el

año. (Rodriguez Huamanchay, 2013) (Guerrero, 2010).

2.2. ENFERMEDAD EN EL CULTIVO DE BANANO

En el cultivo de banano uno de sus mayores problemas es el causado por el hongo de la

familia Mycosphaerellaceae (sigatoka negra) el cual centra su daño en el follaje de este

cultivo provocando necrosidad y perdida intensa de follaje. (Yangali, 2014).

Clasificación científica

Reino: Fungi

Filo: Ascomycota

Clase: Dothideomycetes

Orden: Capnodiales

Familia: Mycosphaerellaceae

Género: Mycosphaerella

Especie: M. fijiensis Morelet

3

2.3. SINTOMATOLOGÍA DE LA ENFERMEDAD.

Este hongo se lo pueden reconocer a través de seis estados (HORTA, 2009).

Estado 1. Pequeñas lesiones o puntos de color blanco-amarillento a marrón, de 1

mm de longitud, denominadas pizcas, apenas visibles en el envés de las hojas.

Estado 2. Rayas o estrías cloróticas de 3–4 mm de longitud por 1 mm de ancho,

de color marrón.

Estado 3. Las rayas o estrías se alargan y amplían dando la impresión de haber

sido pintadas con pincel, sin bordes definidos y de color café, que pueden

alcanzar hasta 2 cm de longitud.

Estado 4. Manchas ovaladas de color café en el envés y negro en el haz.

Estado 5. Manchas negras rodeadas de un anillo negro y a veces un halo

amarillento y centro seco y semihundido.

Estado 6. Manchas con centro seco y hundido, de coloración marrón clara,

rodeadas de tejido clorótico. (SUÁREZ, 2015).

2.4. REPRODUCCIÓN DEL PATÓGENO

El hongo Mycospharella sp tiene tres cuerpos de fructificación (Perdomo, 2015).

Peritecio

Espermogonios

Conidióforo

Estas son producidas por Mycospharella musicola en una cámara bajo los

estomas de la hoja. (Cuéllar Quintero, 2011).

Peritecio: presenta la forma de una pera de pared gruesa color café oscuro, y con

cuello grueso que emerge a través de la estoma de la hoja. Cada peritecio

puede llegar a producir 150 ascosporos. (Hidalgo S. , 2012).

Espermogonios: representan los órganos sexuales masculinos del hongo,

presentan una forma de pera en los cuales se producen centenares de espermas

sin color alguno. Cuando maduran fluyen suavemente hacia la superficie de la

hoja en roció o lluvia. (Hidalgo S. , 2012).

Conidióforo: son filamentos fungales que emergen a través del estoma de la hoja,

en el extremo final de estos se produce el conidio sin unión sexual, como en el

4

caso de los ascorporas. Los conidios solamente cuando hay presente una

película de agua en la hoja o cuando la atmosfera está saturada de vapor de

agua. Cuando la temperatura es superior a 21ºC en una sola noche se puede

producir una cosecha de conidios, pudiendo una sola mancha producir un

promedio de seis cosechas antes de extinguirse, en la figura 1 se muestra su

ciclo de vida. (Hidalgo S. , 2012).

Figura 1. Representación del ciclo de vida de la sigatoka negra (Mycosphharella sp)

(Hidalgo, 2012)

2.5. EXTRACTOS VEGETALES

Son una mezcla compleja, que contienen compuestos químicos, obtenidos mediante

procesos físicos, químicos y/o microbiológicos, partiendo de una fuente. (Zapata, 2002).

Los extractos vegetales poseen un origen biológico, son biodegradables y presentan un

mínimo impacto negativo contra el medio ambiente y la salud humana. (Segura Contreras,

2015).

Concentrado obtenido de productos vegetales con solventes como agua, etanol,

elementos solubles o procesos mecánicos, fisicoquímicos. Estos contienen principios

activos y sustancias inertes extraídos de partes de las plantas ya sean secas o frescas.

(Elington, 2015).

Debido al usos excesivo de fungicidas en los cultivos agrícolas, los hongos han

desarrollado un sistema de resistencia antes estos productos fúngicos, contaminación

ambiental y riesgos de salud pública, de tal manera se está desarrollando extractos que

5

inactiven la actividad anti fúngica, para la búsqueda de nuevas alternativas en el control

de hongos y sus mico toxinas (Centeno S, 2013).

La planta de hierva luisa contiene un alto rendimiento de actividad antifúngica además no

presenta Fito toxinas, tal manera que no afecta la actividad agrícola, recomendado su

aplicación e investigaciones. En un estudio reciente realizado en la Universidad Técnica

de Machala de aceites esenciales demuestra que existe un mayor rendimiento de control

fúngico de Mycosphharella sp con la utilización de Hierva luisa (Sánchez, 2015).

Los extractos y aceites esenciales de plantas contienes muchas de ellas actividad

antimicrobiana y antifúngica los cuales dichos conocimientos son conocidos desde la

antigüedad (Valdés Oderlaise, 2016).

Las especies vegetales constituyen una fuente de estructuras bioactivas las cuales

poseen actividad intrínseca y servir para el uso de insecticidas orgánicos y seguros

(Albrecht A, 2015).

a) HIERBA LUISA

Nombre científico: Cymbopogon citratus (DC) Staff.

Nombre vulgar: caña santa, cañita de limón, hierba luisa

Familia botánica: Poacea

Origen: Sureste Asiático

Características botánicas

Hojas: aromáticas (con aroma alimonada), agrupadas cerca de la base, lineares, de hasta

casi 1 metro de longitud, con el borde cortante, de 6 a 10 decímetros, sus ramas

alargadas y un tanto penduladas.

Tallos: muy ramificado de 1 a 2 metros de alto con los nudos ceríferos.

Flores: se reúnen en espiguillas en pares.

Principios activos:

Las hojas contienen aceite esencial (0.5 – 0.7 %) citral, Geranial y neral. Triterpenoides

(cimbopogana, cimboponal) y flavonoides (luteolina, isoorientina y deerivados).

(Altamirano F, 2016).

6

Según un estudio realizado el 2010 mencionan que el extracto de hierba luisa mostro un

efecto auntifúngico del hongo sigatoka negra (Mycosphaerella fijiensis), en condiciones

semicontroladas (Morales Lian, 2011).

Según estudio realizado por Karen Montesinos declara que el aceite esencial de hierba

luisa presenta un efecto antifúngico ante el crecimiento del hongo Mycosphaerella fijiensis

(Montesinos, 2014).

El extracto de hierba luisa (Cymbopogon citratus) presento un excelente resultado sobre

Fusarium controlándolo a un 100%, en cambio el aceite esencial alcanzo un porcentaje de

control de 50 y 75% (Cabrera Arévalo, 2009).

El aceite esencial de hierba luisa (Cymbopogon citratus), para control de Fusarium

demostró un resultado positivo inhibiendo por completo su crecimiento (Cárdenas

Verdezoto, 2014).

Para el control de Fusarium oxysporum f. sp., se realizaron pruebas con aceite esencial

de (Cymbopogon citratus), obteniendo buenos resultados en la inhibición de su

crecimiento (Villa Martinez., 2015).

Trabajo realizado en el cultivo de melocotón determinan que el aceite esencial de hierba

luisa (Cymbopogon citratus) a concentración de 0,15 y 0,20% posee propiedades

antifúngicas contra Monilinia fructicola agente causal de la podredumbre parda (Pansera

M, 2015).

b) BORRAJA

Nombre científico: Borago officinalis L.

Nombre vulgar: borraga, borracha, bora, corrago, alcohelo.

Familia botánica: Boragináceas

Origen: Europa y el norte de África


Es una planta de 60 cm robusta cubierta por pelos ásperos muy rígidos, de gruesa y

prolongada de raíz

Hojas: esparcidas y oscuras muy gruesas.

Tallos: erectos cubiertos de cerdas

Flores: azueles, blancas o violáceas que forman ramilletes

7

Principios activos

Contienen mucílagos (sustancias gelatinosas), taninos, saponina, ácido salicílico, nitrato

de potasio, sales minerales, alantoína, vitamina A. Las hojas jóvenes poseen bastante

vitamina C.

La borraja es rica en GLA (Ácido Gamma Linoleico), un ácido graso precursor de las

protaglandinas antiinflamatorias, y perteneciente a la familia de los omega 6, e importante

para la salud de la piel. Por ello se elabora el aceite de borraja, que puedes adquirir en

herbolarios para aplicar sobre la piel.

Según estudio realizado por Cuvi Jemberly, señala que el extracto de Bixa orellana a

concentraciones de 1,5 y 0,5 mg/mL estimula el crecimiento del hongo del genero

Sclerotium., y a una concentración de 1.5 y 3 0,5 mg/mL estimulo el crecimiento del

genero Sclerotinia sp. También se evidencio quien el extracto de Carica papaya a

concentración de 0,5, 1,5 y 3 mg/mL estimulo el crecimiento del hongo del genero

Sclerotium y Sclerotinia sp., (Cuvi Cuvi, 2013).

Estudio realizado en la Universidad del Azuay mencionan que el extracto de borraja

(Borago officinalis L.) presenta actividad biocontroladora sobre Alternaria sp., (Cabrera

Arévalo, 2009).

c) ROMERO

Nombre científico: Rosmarinus officinalis L

Nombre vulgar: Romero

Familia botánica: Lamiáceae

Origen: península ibérica


Es un arbusto aromática pude medir de 1 a 2 metros de altura

Hojas: crecen sobre el tallo sin pedúnculo de forma abundante siendo de forma larga y

estrecha, una longitud de 1,5 a 3 cm y de 2 a 3 de anchura

Tallos: erectos

Flores: azueles, rojas o violáceas que forman ramilletes en la unión del tallo con la hoja

8

Principios activos

En las hojas contienen ácido ascórbico, acido nicótico, vitaminas como (beta - caroteno),

colina, además existen minerales como calcio, hierro, magnesio y fosforo. (Tránsito

Lopez, 2008).

Mientras que en la planta se encuentra ácidos acético y láctico, azucares como arabinosa

y galactosa, además presenta fibra, mucilago, taninos y alcaloides. (Avila Sosa, 2011).

Un estudio realizado por Alex Ruilova menciona que el aceite esencial de romero

(Rosmarinus officinalis L), tuvo un buen comportamiento en el control del crecimiento de

la bacteria Pseudomona siringae. y en control de hongos fitopatógenos este aceite

esencial de romero presenta una eficiencia para el control de Alternaria sp., (Ruilova

Reyes, 2007).

El aceite esencial de romero (Rosmarinus officinalis L), para el control de Fusarium no

mostro ninguno control en la inhibición del crecimiento del hongo (Cárdenas Verdezoto,

2014).

d) CEDRÓN

Nombre científico: Aloysia triphylla (L’Hérit.) Britt.

Nombre vulgar: cedrón, hierba luisa o verbena de Indias

Familia botánica: Verbenaceae

Origen: Originaria de la región montañosa de Argentina (Catamarca, La Rioja, Salta),

Chile y Perú, en donde se la puede encontrar silvestre. Se la cultiva en numerosas partes

del mundo: América, desde Estados Unidos, hasta la Argentina; Europa, en el sur; África,

en el norte y en el sur (CIID, 1998).


Arbusto caducifolio, de entre 3 a 7 m de altura, con tallos sub leñosos o leñosos en la

parte superior.

Hojas: verticiladas de hasta 7 cm, de forma lanceolada, apicada, con el margen liso o

dentado y el pecíolo muy corto, son de color verde claro por el haz, con el envés marcado

por glándulas oleosas bien visibles. Despiden una fuerte fragancia a limón.

Flores pequeñas blanquecinas o blanquecino-violáceas, agrupadas en espigas. También

tiene flores de color rosa. Florece en verano, formando inflorescencias en espigas laxas,

9

de hasta 10 cm de largo, de color pálido o lila. El cáliz posee dos labios laterales; la corola

es acampanada, simpétala, con los lóbulos imbricados. El gineceo está formado por dos

carpelos unidos. (Elington, 2015).

Fruto es una drupa dividida en dos núculas monoseminadas.

Principios activos

Aceite esencial (0,1-0,3 %):

Monoterpenos: limoneno (6%).

Sesquiterpenos (1 8%).

Alcoholes alifáticos (1-1,5%).

Monoterpenoles (15-16%): a-terpineol, citronelol, nerol, geranio.

Sesquilerponoles (4-5%).

Esteres terpenicos (6%).

Aldehidos (39-40%)

Óxidos terpénicos.

Furocumarinas.

Flavonoides (Rojas, 2012).

Estudio realizado determino que el aceite esencial de cedrón (Aloysia triphylla) a

concentraciones de 0.03% inhibió la presencia de hongos y bacterias en germinación de

orquídeas (in vitro) (Serrano R, 2013).

El extracto de cedrón (Aloysia triphylla) mostro actividad larvicida a concentración de 5000

mg/L controlando hasta el 40% de las larvas del mosquito (Aedes aegypti). Para el control

de Fusarium verticillioides por medio de extractos vegetales demostraron que el aceite de

cedrón (Aloysia triphylla) presento capacidad hinibidora para este hongo (Albrecht A,

2015).

e) HINOJO

Nombre científico: Foeniculum vulgare M.

Familia botánica: Solanaceae

Origen: Europa meridional, Asia. Cultivada, cosmopolita. Terrenos incultos, colinas secas.

Se encuentra en los ribazos y eriales de la península Ibérica y Baleares.

10


Planta vivaz de 0.80 - 2 m de altura

Hojas: envainadoras, finamente pinnadas, verdes azuladas

Tallos: Tallos ramoso, verde estriado de azul, brillante, pleno.

Flores: amarillas, en grandes umbelas.

Fruto: gris oscuro, fusiforme, estriado, glabro. Olor aromático, sabor picante amargo.

Principios activos

La planta, y particularmente las semillas, contienen un aceite esencial (Ol. Foeniculi), en

el que hay un 50 - 60% de anetol (de sabor azucarado) y un 20% de fenchona (amarga y

acre), así como una decena de otros compuestos como sales minerales, vitaminas A, B,

C. (Sanches, 1997).

El aceite esencial de hinojo (Foeniculum vulgare M.) presenta una actividad

biocontroladora frente a Alternaria sp (Ruilova Reyes, 2007).

Estudio realizado demostró que el extracto de hinojo (Foeniculum vulgare M.) en hojas

frescas induce la resistencia a nivel sistemático sobre la infección causada por Botrytis

cinérea P. en cultivo de Phaseolus vulgaris L. (Rey Casal, 2014).

11

3. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1. MATERIALES

3.1.1. UBICACIÓN POLÍTICA

El presente trabajo se realizó en la granja experimental Santa Inés de la Facultad de

Ciencias Agropecuarias de la Universidad Técnica de Machala, ubicada en el km 5,5 vía

Paquisha, perteneciente a la parroquia El Cambio, provincia de El Oro Ecuador.

3.1.2. UBICACIÓN GEOGRÁFICA

La ubicación geográfica del ensayo está ubicada en las siguientes coordenadas:

3.1.3. CLIMA Y ECOLOGÍA

Según la zona de vida natural de Holdridge y el mapa ecológico del Ecuador, corresponde

a un monte espinoso Tropical (me – T) con temperatura de 24 a 25° C, una precipitación

de 400 a 500 mm anuales y humedad relativa de 80 %.

3.1.4. MATERIALES Y EQUIPOS UTILIZADOS

Para la obtención de muestras del hongo se usaron hojas de banano con síntomas del

patógeno de Mycosphaerella sp., en estadio uno y dos, el medio de cultivo que se utilizo

es papa dextrosa agar (PDA), para la esterilización del medio y materiales se utilizó

autoclave 121 °C, etanol 70%, hipoclorito de sodio 1%, agua destilada esterilizada,

mechero de alcohol, para la medición de volúmenes utilizamos pipetas, erlenmeyer, para

la realización del bioensayo se utilizó una cámara de flujo laminar, incubadora 25-28 °C,

cajas petri, tubos de ensayos, para garantizar condiciones estériles, para la medición del

diámetro de las colonias se utilizó una regla, las plantas que utilizamos fueron Hierba

luisa, Borraja, Romero, Cedrón, Hinojo y un testigo.

12

3.1.5. TRATAMIENTOS

Los tratamientos de los extractos vegetales evaluados consistieron en una dosis de 750

ppm, los cuales tuvieron cada uno 4 repeticiones respectivamente y un testigo absoluto.

Cuadro 1. Tratamientos utilizados en el control antifúngico de extractos vegetales sobre

Myscospherella sp., en condiciones de laboratorio. 2016

TRATAMIENTOS COMPUESTO DOSIS (PPM)

T1 Hierba luisa 750

T2 Hinojo 750

T3 Cedrón 750

T4 Romero 750

T5 Borraja 750

T6 Testigo -

3.1.6. VARIABLES EVALUADAS

- Crecimiento radial del micelio de Mycosphaerella sp., a los 10 días.



- Porcentaje de control del hongo Mycosphaerella sp., a los 10 días.



3.1.7. MEDICIÓN DE LAS VARIABLES

Crecimiento radial del micelio de Mycosphaerella sp., cada 10 días después de la

inoculación, para esta evaluación se mide el micelio con la ayuda de una regla,

observando su crecimiento.

Porcentaje de control del hongo Mycosphaerella sp., cada 10 días después de la

inoculación, para esta medición de esta variable de porcentaje de control se usa para el

cálculo la siguiente formula usando la media de repeticiones de testigo (control) para cada

observación a analizar:

13

3.2. MÉTODOS

3.2.1. PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO PDA

Para preparar 1 lt de medio de cultivo, se procedió a pesar 39 gr de papa dextrosa agar

(PDA) y se adicionó 1 lt de agua en un Erlenmeyer o vaso de precipitación. Se calentó el

envase por 1 hora a Baño María, después de enfriar, se colocó en vaso de precipitación y

se tapó con papel aluminio, para llevarlo al autoclave a eterizarlo, por 20 minuto a 121°C.

3.2.2. EXTRACCIÓN POR MACERACIÓN

La extracción por maceración sigue el procedimiento descrito a continuación.

Aproximadamente 100 gramos de follaje de las plantas en estudio fueron colocadas en un

matraz, y sumergidos en 200 ml de agua hirviendo. Se dejó en reposo a temperatura

ambiente y oscuridad por 48 horas.

Luego de este periodo el material de maceración se filtró, en volúmenes de 1ml,

debidamente identificados. Con las soluciones obtenidas se desarrollaron los bioensayos

posteriores.

3.2.3. AISLAR “IN VITRO” Mycosphaerella sp., AGENTE CAUSAL DE LA

ENFERMEDAD DE LA SIGATOKA NEGRA EN EL CULTIVO DE BANANO, USANDO

COMO MEDIO DE CULTIVO P.D.A. (PAPA+DEXTROSA+AGAR)

Se seleccionaron hojas de banano con síntomas de sigatoka negra, de primer y segundo

estadio, de la bananera de la UACA, las muestras fueron puestas en fundas de papel y

transportadas al laboratorio de fitopatología para seleccionar las partes con mayor

presencia del hongo. En la cámara de flujo laminar se recortaron pedazos de 3x3 mm

estos son esterilizados por 5 minutos en etanol 70%, luego por 8 minutos en hipoclorito de

sodio al 1% y enjuagados con agua destilada.

Se las coloco en papel filtro para ser secadas los pedazos de hojas, estos fueron

ubicados en las cajas de petri con el envés frente al medio de cultivo PDA para la

descarga de ascosporas. Estas son incubadas a 25 °C por 15 días para el desarrollo del

hongo. Cuando el patógeno estuvo desarrollado se colocaron pequeñas porciones de

colonias en tubos de ensayos con 5 ml de PDA en una incubadora para su conservación

por 20 días para inocular en cajas de petri con medio cultivo envenados con los extractos

antifúngicos.

14

3.2.4. EVALUAR EL EFECTO ANTIFÚNGICO DE EXTRACTOS VEGETALES SOBRE

Mycosphaerella sp EN EL CULTIVO DE BANANO.

Para realizar la concentración de los extractos vegetales en ppm (partes por millón), se

utilizó esta fórmula:

ppm = x/y

De donde: x = ml del extracto vegetal; y = litro de agua

Con la ayuda de pipeta se medirá 2 ml de extracto vegetal, se mezcló en un vaso de

precipitación con 48 ml de agua destilada esterilizada obteniendo una concentración

patrón. Las dosis se calculó en 100 ml de medio de cultivo PDA para alcanzar 750 ppm

del extracto vegetal en el medio de cultivo y para el tratamiento control solo se usó agua

destilada esterilizada.

Con la ayuda de un sacabocados, en los aislados del hongo se obtiene 5 mm de diámetro

de micelios de Mycosphaerella sp., que fueron ser colocados en las cajas de petri con

PDA envenenado con los extractos vegetales, colocando el micelio en el centro la caja

petri en cada uno de los tratamientos. Se mantuvo en una incubadora a 25 °C por el lapso

de 30 días realizando las medidas de las variables en el crecimiento del diámetro del

hongo y el porcentaje de inhibición de los extractos vegetales en cada tratamiento.

3.2.5. DISEÑO EXPERIMENTAL

Se utilizó un Diseño Completamente al Azar (DCA) debido a las condiciones

homogéneas que presenta el ensayo. Se establecieron 6 tratamientos con 5 repeticiones,

obteniendo 30 unidades experimentales, las variables se evaluaron cada 10 días después

de la inoculación en un periodo de duración de 30 días.

3.2.6. MODELO MATEMÁTICO

El modelo matemático del diseño completamente al azar, viene simbolizado mediante la

siguiente ecuación:

Yij = μ+ τi + εij

i= 1,2,………t (número de tratamientos)

j=1,2,……….b (número de repeticiones)

15

Dónde:

Yij = Variable evaluada.

μ = Promedio general del ensayo.

τi = Efectos de los tratamientos.

εij = Error experimental

3.2.7. HIPÓTESIS

La hipótesis nula y alternativa de los tratamientos fue:

Ho: Los efectos de los tratamientos no difieren significativamente.

Ha: Al menos un tratamiento es estadísticamente diferente.

16

4. RESULTADOS Y DISCUSIONES

4.1. CRECIMIENTO RADIAL DEL MICELIO DE Mycosphaerella sp., A LOS 10 DÍAS

DESPUÉS DE INOCULACIÓN

En la figura 1 se observa el crecimiento radial del hongo Mycosphaerella sp., a los 10 días

después de la inoculación en los diferentes tratamientos con sus respectivos extractos

vegetales, podemos mencionar que el extracto de hierba luisa (Cymbopogon citratus)

presenta una acción inhibidora del crecimiento micelial de este hongo, tomando en

consideración lo expuesto por Morales (2011) que indica que el extracto de hierba luisa

(Cymbopogon citratus) mostró un efecto antifúngico sobre el hongo causante de la

sigatoka negra.

Figura 2. Crecimiento radial de micelio del hongo Mycosphaerella sp., a los 10 días

después de la inoculación.

En la figura 2 se muestra el porcentaje de control a los 10 días después de la inoculación

realizada en los distintos tratamientos, el extracto de borraja tuvo un efecto estimulante,

estadísticamente significativo, en el crecimiento del hongo con respecto al testigo, Cuvi

(2013) menciona que el extracto de Bixa orellana estimuló el crecimiento del hongo

Sclerotium a concentración de 1,5 y 0,5 mg/mL y para el género Sclerotinia sp a

concentraciones de 1.5 y 3 0,5 mg/mL, además el extracto de Carica papaya a

concentraciones de 0,5, 1,5 y 3 mg/mL estimuló el crecimiento del hongo del genero

Sclerotium y Sclerotinia sp. En cuanto al extracto de hinojo que presenta un control de

2.47%, es estadísticamente igual al testigo, a diferencia del extracto de cedrón y romero

0.55

0.79

0.68 0.68

1.06

0.81

0.00

0.20

0.40

0.60

0.80

1.00

1.20

HIERBALUISA

HINOJO CEDRÓN ROMERO BORRAJA TESTIGO

crec

imie

nto

rad

ial d

el m

ice

lio (

cm)

TRATAMIENTOS

17

que presentaron un control medio, pero estadísticamente significativo hacia el testigo. El

extracto de hierba luisa sigue siendo el que mejor control.


inoculación.

En la determinación del crecimiento micelial de Mycosphaerella sp., el análisis de varianza

(Cuadro 2) mostró significancia entre los tratamientos, tomando en cuenta el p-valor

0.0001 es menor que al valor de α=0.05, por lo tanto se rechaza la hipótesis nula y se

acepta la hipótesis alternativa, teniendo un coeficiente de variación de 12.746. En el test

de Tukey (Cuadro 3) a los 10 días de evaluación se evidencia distintos agrupamientos

entre los tratamientos. Se observa que la borraja (T5) mostró un efecto estimulante,

estadísticamente significativo, en el crecimiento micelial del hongo; los tratamientos

Testigo (T6) y Hinojo (T2) son estadísticamente iguales, mientras que el Cedrón (T3) no

presenta diferencia significativa al Romero (T4) y Hierba luisa (T1).


a los 10 días después de la inoculación.

Fuente Gl Suma de

cuadrados Cuadrado

media F.

calculada Pr > F

Tratamientos 5 0.755 0.151 15.96 < .0001

Error 24 0.227 0.009

Total 29 0.982

C.V. 12.746

32.1

2.47

16.05 16.05

0 0 0

5

10

15

20

25

30

35

HIERBALUISA


% C

ON

TRO

L

TRATAMIENTOS

18


de la inoculación.

Agrupamiento Media N Tratamiento

A 1.062 5 T5

B 0.814 5 T6

B 0.794 5 T2

C B 0.678 5 T3

C B 0.678 5 T4

C 0.554 5 T1


la inoculación.

4.2. CRECIMIENTO RADIAL DEL MICELIO DE Mycosphaerella sp., A LOS 20 DÍAS




vegetales, en lo que podemos evidenciar que el extracto de borraja tiene un crecimiento

estimulante del hongo superando al tratamiento testigo.

A 1.062

B 0.814

B 0.794 C B

0.678 C

0.678 C 0.554

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

T5 =BORRAJA

T6 = TESTIGO T2 = HINOJO T4 =ROMERO

T3 = CEDRÓN T1 = HIERBALUISA

CR

ECIM

IEN

TO D

EL M

ICEL

IO (

cm)

TRATAMIENTOS

19

Figura 5. Radio de crecimiento de micelio del hongo Mycosphaerella sp., a los 20 días

después de la inoculación

El porcentaje de control del hongo a los 20 días después de la inoculación (figura 5), el

extracto de hierba luisa es el mejor tratamiento con un 55.92 % de control seguido del

extracto de cedrón con un 28.29 %. El extracto de borraja no presenta control inhibitorio

del hongo ya que estimula su crecimiento micelial.


inoculación.

El análisis de varianza (Cuadro 4) presenta una significancia estadística entre los

tratamientos siendo el p-valor 0.0001 es menor al 0.05 de significancia, rechazando la

hipótesis nula y aceptando el alternativa que al menos un tratamiento es diferente.

0.67

1.43

1.09

1.33

1.72

1.52

0.00

0.50

1.00

1.50

2.00

HIERBA LUISA HINOJO CEDRÓN ROMERO BORRAJA TESTIGOCR

ECIM

IEN

TO R

AD

IAL

DEL

M

ICEL

IO (

cm)

TRATAMIENTOS

55.92

5.92

28.29

12.5

0 0 0

10

20

30

40

50

60

HIERBA LUISA HINOJO CEDRÓN ROMERO BORRAJA TESTIGO

% C

ON

TR

OL

TRATAMIENTOS

20


a los 20 días después de la inoculación.

Fuente Gl Suma de

cuadrados Cuadrado

media F.

calculada

Pr > F

Tratamientos 5 3.444 0.688 25.99 <.0001

Error 24 0.636 0.026

Total 29 4.08

C.V. 12.578

A los 20 días después de la inoculación del hongo, en el test de Tukey (Cuadro 5), nos

muestra que el extracto de hierba luisa (T1) es diferente estadísticamente al testigo (T6),

el extracto de cedrón (T3) y romero (T4) son iguales estadísticamente entre ellos, pero

muestran diferencia estadística en relación al tratamiento testigo (T6).


de la inoculación.


A 1.724 5 T5

B A 1.522 5 T6

B A 1.428 5 T2

B C 1.332 5 T4

C 1.092 5 T3

D 0.668 5 T1

Figura 7. Test de Tukey con significancia α= 0.05, para diámetro a los 20 días después de la inoculación.

A 1.724

B A 1.522

B A 1.428

B C 1.332 C

1.092 D

0.668

0

0.5

1

1.5

2

T5 =BORRAJA

T6 =TESTIGO

T2 = HINOJO T4 =ROMERO

T3 =CEDRÓN

T1 = HIERBALUISA

CR

ECIM

IEN

TO D

EL M

ICEL

IO

(cm

)

TRATAMIENTOS

21

4.3. CRECIMIENTO RADIAL DEL MICELIO DE Mycosphaerella spp., A LOS 30 DÍAS




vegetales, en lo que podemos evidenciar que el mejor tratamiento en nuestro estudio es el

extracto de hierba luisa (Cymbopogon citratus) ya que presenta una acción inhibidora del

crecimiento micelial de este hongo, afirmando lo expuesto por Morales (2010), Rojas

(2014) que menciona que el extracto de hierba luisa (Cymbopogon citratus) presenta un

antifúngico sobre el hongo causante de la sigatoka negra. Además Villa (2015), menciona

que el aceite esencial de hierba luisa tiene un control sobre Fusarium oxysporum.

Figura 8. Radio de crecimiento de micelio del hongo Mycosphaerella spp., a los 30 días

después de la inoculación

El porcentaje de control del crecimiento micelial del hongo Mycosphaerella sp., a los 30

días después de la inoculación (Figura 8), determina que el extracto de hierba luisa

presento un control de 64.52%. Según Cabrera (2009) declara que el extracto de hierba

luisa tiene control antifúngico del 100% sobre Fusarium y el aceite esencial de hierba

luisa controla entre un 50 y 75%; el extracto de cedrón presenta un porcentaje de control

de 36,41%, afianzando lo expuesto por Serrano (2013) que menciona sobre el aceite

esencial de cedrón inhibe el crecimiento de hongos y bacterias en la germinación de

orquídeas (in vitro) a concentración de 0.03%. El extracto de hinojo solo controlo un 2.3%

de crecimiento micelial del hongo causante de la sigatoka negra, estudio realizado por

0.77

2.12

1.38

1.85

2.266 2.17

0.00

0.50

1.00

1.50

2.00

2.50

HIERBALUISA

HINOJO CEDRÓN ROMERO BORRAJA TESTIGOCR

ECIM

IEN

TO R

AD

IAL

DEL

MIC

ELIO

(c

m)

TRATAMIENTOS

22

Rey (2014) menciona que el extracto de hinojo reduce la resistencia de infección causada

por Botrytis Cinérea P.

El extracto de romero presentó un control de 14.75%, según Cárdenas (2014) menciona

que el aceite esencial de romero (Rosmarinus officinalis L) no tiene efecto antifúngico

sobre el hongo Fusarium.

Figura 9. Porcentaje de control del hongo Mycosphaerella spp., a los 30 días después de

la inoculación.

El análisis de varianza (Cuadro 6), muestra que existe diferencia entre los tratamientos ya

que el valor Pr >F 0.0001 es menor al 0.05 de significancia, rechazando la hipótesis nula y

aceptando el alternativa que al menos un tratamiento es diferente y el coeficiente de

variación es de 7.33 dando homogeneidad entre las repeticiones de los tratamientos

analizados.

Cuadro 6. ANOVA, para determinar el crecimiento micelial del hongo Mycosphaerella

spp., a los 30 días después de la inoculación.

Fuente Gl Suma de

cuadrados Cuadrado

media F.

calculada Pr > F

Tratamientos 5 8.392 1.678 100.85 <.0001

Error 24 0.399 0.016

Total 29 8.791

C.V. 7.33

64.52

2.3

36.41

14.75

0 0 0

10

20

30

40

50

60

70

HIERBA LUISA HINOJO CEDRÓN ROMERO BORRAJA TESTIGO

% C

ON

TRO

L

TRATAMIENTOS

23

Los agrupamientos de los tratamientos expuestos por el test de Tukey (Cuadro 7)

determinan que el extracto de hierba luisa (T1) es el mejor tratamiento en este ensayo, ya

que es estadísticamente diferente a los demás tratamientos. El extracto de romero (T4) y

el extracto de cedrón (T3) muestran que son estadísticamente diferentes al testigo (T6),

mientras que el extracto de borraja (T5) e hinojo (T2) son estadísticamente iguales al

testigo (T6).


de la inoculación.


A 2.266 5 T5

A 2.17 5 T6

A 2.12 5 T2

B 1.85 5 T4

C 1.38 5 T3

D 0.774 5 T1

Figura 10. Test de Tukey con significancia α= 0.05, para diámetro a los 30 días después

de la inoculación.

En la Figura 10 y 11 nos muestra las evaluaciones tomadas a lo largo del ensayo,

confirmando que el extracto vegetal con mejores propiedades antifúngicas, sobre el

crecimiento micelial de Mycosphaerella sp., es el extracto de hierba luisa (T1)

A 2.266

A 2.17

A 2.12 B

1.85 C

1.38

D 0.774

0

0.5

1

1.5

2

2.5

T5 =BORRAJA

T6 =TESTIGO

T2 =HINOJO

T4 =ROMERO

T3 =CEDRÓN

T1 = HIERBALUISAC

REC

IMIE

NT

O R

AD

IAL

DEL

MIC

ELIO

(c

m)

TRATAMIENTOS

24

Figura 11. Crecimiento radial del hongo Mycosphaerella sp., a los 10, 20 y 30 días


Figura 12. Porcentaje de control del hongo Mycosphaerella sp., a los 10, 20 y 30

días después de la inoculación

0.554

0.794 0.678 0.678

1.062

0.814

0.668

1.428

1.092

1.332

1.724

1.522

D 0.774

A 2.12

C 1.38

B 1.85

A 2.266 A

2.17

0

0.5

1

1.5

2

2.5

T1 HIERBALUISA

T2 HINOJO T3 CEDRÓN T4 ROMERO T5 BORRAJA T6 TESTIGO

CR

ECIM

IEN

TO R

AD

IAL

DEL

MIC

ELIO

(cm

)

TRATAMIENTOS

10 DÍAS

20 DÍAS

30 DÍAS

32.1

2.47

16.05 16.05

0 0

55.92

5.92

28.29

12.5

0 0

64.52

2.3

36.41

14.75

0 0 0

10

20

30

40

50

60

70

HIERBALUISA


% C

ON

TRO

L

TRATAMIENTOS

10 DÍAS20 DÍAS30 DÍAS

25

5. CONCLUSIONES

El extracto de hierba luisa presento el mejor porcentaje de control sobre

Mycosphaerella sp.

El extracto de cedrón presento un nivel medio en el porcentaje de control sobre el

hongo Mycosphaerella sp.

El extracto de romero presento un bajo nivel de control sobre el hongo Mycosphaerella

sp.

El extracto de hinojo no presento control sobre el hongo Mycosphaerella sp.

El extracto de borraja a dosis de 750 ppm estimulo el crecimiento del hongo

Mycosphaerella sp.

6. RECOMENDACIONES

Con los resultados obtenidos se recomienda seguir investigando las propiedades

antifúngicas, pero en dosis crecientes para los extractos de hierba luisa, cedrón y

romero; probar a nivel in vitro.

Realizar un análisis de los extractos vegetales con un cromatografo de gases

acoplado a un espectrofotómetro de masas, para determinar los componentes que

inhiben el crecimiento micelial del hongo Mycosphaerella sp.

26

7. BIBLIOGRAFÍA

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29

8. APÉNDICE

Apéndice 1. Datos del crecimiento del micelio tomadas de cada una de las

unidades experimentales.

Tratamiento Replica Fecha Lados Crecimiento micelial (cm)

1 1 20/05/2016 Izquierda 0.5

1 1 20/05/2016 Derecha 0.4

1 1 20/05/2016 Superior 0.5

1 1 20/05/2016 Inferior 0.5

1 2 20/05/2016 Izquierda 0.6

1 2 20/05/2016 Derecha 0.5

1 2 20/05/2016 Superior 0.6

1 2 20/05/2016 Inferior 0.5

1 3 20/05/2016 Izquierda 0.6

1 3 20/05/2016 Derecha 0.6

1 3 20/05/2016 Superior 0.7

1 3 20/05/2016 Inferior 0.6

1 4 20/05/2016 Izquierda 0.6

1 4 20/05/2016 Derecha 0.6

1 4 20/05/2016 Superior 0.6

1 4 20/05/2016 Inferior 0.5

1 5 20/05/2016 Izquierda 0.6

1 5 20/05/2016 Derecha 0.5

1 5 20/05/2016 Superior 0.6

1 5 20/05/2016 Inferior 0.4

2 1 20/05/2016 Izquierda 0.8

2 1 20/05/2016 Derecha 0.7

2 1 20/05/2016 Superior 0.8

2 1 20/05/2016 Inferior 0.7

2 2 20/05/2016 Izquierda 0.8

2 2 20/05/2016 Derecha 0.9

2 2 20/05/2016 Superior 0.8

2 2 20/05/2016 Inferior 0.6

2 3 20/05/2016 Izquierda 0.8

2 3 20/05/2016 Derecha 0.8

2 3 20/05/2016 Superior 0.8

2 3 20/05/2016 Inferior 0.7

2 4 20/05/2016 Izquierda 0.8

2 4 20/05/2016 Derecha 1

2 4 20/05/2016 Superior 0.9

2 4 20/05/2016 Inferior 0.6

30

2 5 20/05/2016 Izquierda 0.9

2 5 20/05/2016 Derecha 0.8

2 5 20/05/2016 Superior 0.8

2 5 20/05/2016 Inferior 0.8

3 1 20/05/2016 Izquierda 0.3

3 1 20/05/2016 Derecha 0.5

3 1 20/05/2016 Superior 0.5

3 1 20/05/2016 Inferior 0.3

3 2 20/05/2016 Izquierda 0.8

3 2 20/05/2016 Derecha 0.8

3 2 20/05/2016 Superior 0.8

3 2 20/05/2016 Inferior 0.7

3 3 20/05/2016 Izquierda 0.5

3 3 20/05/2016 Derecha 0.8

3 3 20/05/2016 Superior 0.6

3 3 20/05/2016 Inferior 0.6

3 4 20/05/2016 Izquierda 0.7

3 4 20/05/2016 Derecha 0.8

3 4 20/05/2016 Superior 0.8

3 4 20/05/2016 Inferior 0.6

3 5 20/05/2016 Izquierda 0.8

3 5 20/05/2016 Derecha 0.8

3 5 20/05/2016 Superior 1

3 5 20/05/2016 Inferior 0.8

4 1 20/05/2016 Izquierda 0.6

4 1 20/05/2016 Derecha 0.7

4 1 20/05/2016 Superior 0.8

4 1 20/05/2016 Inferior 0.6

4 2 20/05/2016 Izquierda 0.7

4 2 20/05/2016 Derecha 0.7

4 2 20/05/2016 Superior 0.6

4 2 20/05/2016 Inferior 0.5

4 3 20/05/2016 Izquierda 0.8

4 3 20/05/2016 Derecha 0.7

4 3 20/05/2016 Superior 0.6

4 3 20/05/2016 Inferior 0.6

4 4 20/05/2016 Izquierda 0.7

4 4 20/05/2016 Derecha 0.6

4 4 20/05/2016 Superior 0.6

4 4 20/05/2016 Inferior 0.7

4 5 20/05/2016 Izquierda 0.7

31

4 5 20/05/2016 Derecha 0.7

4 5 20/05/2016 Superior 0.9

4 5 20/05/2016 Inferior 0.7

5 1 20/05/2016 Izquierda 0.7

5 1 20/05/2016 Derecha 0.9

5 1 20/05/2016 Superior 0.9

5 1 20/05/2016 Inferior 0.9

5 2 20/05/2016 Izquierda 1.3

5 2 20/05/2016 Derecha 1.2

5 2 20/05/2016 Superior 1.3

5 2 20/05/2016 Inferior 1

5 3 20/05/2016 Izquierda 1

5 3 20/05/2016 Derecha 1.4

5 3 20/05/2016 Superior 1.1

5 3 20/05/2016 Inferior 1

5 4 20/05/2016 Izquierda 1.1

5 4 20/05/2016 Derecha 1

5 4 20/05/2016 Superior 1

5 4 20/05/2016 Inferior 1.4

5 5 20/05/2016 Izquierda 1.3

5 5 20/05/2016 Derecha 0.9

5 5 20/05/2016 Superior 0.7

5 5 20/05/2016 Inferior 1.1

6 1 20/05/2016 Izquierda 0.8

6 1 20/05/2016 Derecha 0.9

6 1 20/05/2016 Superior 0.9

6 1 20/05/2016 Inferior 0.7

6 2 20/05/2016 Izquierda 0.8

6 2 20/05/2016 Derecha 0.8

6 2 20/05/2016 Superior 0.9

6 2 20/05/2016 Inferior 0.7

6 3 20/05/2016 Izquierda 0.8

6 3 20/05/2016 Derecha 0.7

6 3 20/05/2016 Superior 0.9

6 3 20/05/2016 Inferior 0.7

6 4 20/05/2016 Izquierda 0.8

6 4 20/05/2016 Derecha 0.7

6 4 20/05/2016 Superior 1

6 4 20/05/2016 Inferior 0.8

6 5 20/05/2016 Izquierda 0.6

6 5 20/05/2016 Derecha 1.1

32

6 5 20/05/2016 Superior 1

6 5 20/05/2016 Inferior 0.7

1 1 30/05/2016 Izquierda 0.6

1 1 30/05/2016 Derecha 0.6

1 1 30/05/2016 Superior 0.6

1 1 30/05/2016 Inferior 0.6

1 2 30/05/2016 Izquierda 0.7

1 2 30/05/2016 Derecha 0.7

1 2 30/05/2016 Superior 0.7

1 2 30/05/2016 Inferior 0.6

1 3 30/05/2016 Izquierda 0.7

1 3 30/05/2016 Derecha 0.7

1 3 30/05/2016 Superior 0.8

1 3 30/05/2016 Inferior 0.7

1 4 30/05/2016 Izquierda 0.7

1 4 30/05/2016 Derecha 0.7

1 4 30/05/2016 Superior 0.7

1 4 30/05/2016 Inferior 0.6

1 5 30/05/2016 Izquierda 0.7

1 5 30/05/2016 Derecha 0.7

1 5 30/05/2016 Superior 0.6

1 5 30/05/2016 Inferior 0.7

2 1 30/05/2016 Izquierda 1.6

2 1 30/05/2016 Derecha 1.5

2 1 30/05/2016 Superior 1.5

2 1 30/05/2016 Inferior 1.5

2 2 30/05/2016 Izquierda 1.4

2 2 30/05/2016 Derecha 1.2

2 2 30/05/2016 Superior 1.7

2 2 30/05/2016 Inferior 1.5

2 3 30/05/2016 Izquierda 1.6

2 3 30/05/2016 Derecha 1.7

2 3 30/05/2016 Superior 1.5

2 3 30/05/2016 Inferior 1.3

2 4 30/05/2016 Izquierda 1.6

2 4 30/05/2016 Derecha 1.6

2 4 30/05/2016 Superior 1.5

2 4 30/05/2016 Inferior 1.4

2 5 30/05/2016 Izquierda 1.4

2 5 30/05/2016 Derecha 0.9

2 5 30/05/2016 Superior 0.8

33

2 5 30/05/2016 Inferior 1.3

3 1 30/05/2016 Izquierda 1.1

3 1 30/05/2016 Derecha 0.8

3 1 30/05/2016 Superior 0.9

3 1 30/05/2016 Inferior 1.2

3 2 30/05/2016 Izquierda 1

3 2 30/05/2016 Derecha 1.1

3 2 30/05/2016 Superior 1

3 2 30/05/2016 Inferior 1

3 3 30/05/2016 Izquierda 1

3 3 30/05/2016 Derecha 1

3 3 30/05/2016 Superior 1

3 3 30/05/2016 Inferior 1.1

3 4 30/05/2016 Izquierda 1

3 4 30/05/2016 Derecha 0.9

3 4 30/05/2016 Superior 1.5

3 4 30/05/2016 Inferior 0.6

3 5 30/05/2016 Izquierda 1.4

3 5 30/05/2016 Derecha 1.4

3 5 30/05/2016 Superior 1.5

3 5 30/05/2016 Inferior 1.3

4 1 30/05/2016 Izquierda 1.2

4 1 30/05/2016 Derecha 1.4

4 1 30/05/2016 Superior 1.4

4 1 30/05/2016 Inferior 1.2

4 2 30/05/2016 Izquierda 1.3

4 2 30/05/2016 Derecha 1.4

4 2 30/05/2016 Superior 1.2

4 2 30/05/2016 Inferior 1.2

4 3 30/05/2016 Izquierda 1.5

4 3 30/05/2016 Derecha 1.3

4 3 30/05/2016 Superior 1.3

4 3 30/05/2016 Inferior 1.3

4 4 30/05/2016 Izquierda 1.3

4 4 30/05/2016 Derecha 1.2

4 4 30/05/2016 Superior 1.2

4 4 30/05/2016 Inferior 1.4

4 5 30/05/2016 Izquierda 1.4

4 5 30/05/2016 Derecha 1.6

4 5 30/05/2016 Superior 1.5

4 5 30/05/2016 Inferior 1.3

34

5 1 30/05/2016 Izquierda 1

5 1 30/05/2016 Derecha 1.4

5 1 30/05/2016 Superior 1.3

5 1 30/05/2016 Inferior 1.2

5 2 30/05/2016 Izquierda 1.9

5 2 30/05/2016 Derecha 2

5 2 30/05/2016 Superior 1.6

5 2 30/05/2016 Inferior 1.7

5 3 30/05/2016 Izquierda 1.7

5 3 30/05/2016 Derecha 2.2

5 3 30/05/2016 Superior 2

5 3 30/05/2016 Inferior 1.8

5 4 30/05/2016 Izquierda 1.5

5 4 30/05/2016 Derecha 1.8

5 4 30/05/2016 Superior 1.8

5 4 30/05/2016 Inferior 2.2

5 5 30/05/2016 Izquierda 2.1

5 5 30/05/2016 Derecha 1.6

5 5 30/05/2016 Superior 1.6

5 5 30/05/2016 Inferior 2

6 1 30/05/2016 Izquierda 1.5

6 1 30/05/2016 Derecha 1.6

6 1 30/05/2016 Superior 1.6

6 1 30/05/2016 Inferior 1.4

6 2 30/05/2016 Izquierda 1.6

6 2 30/05/2016 Derecha 1.5

6 2 30/05/2016 Superior 1.7

6 2 30/05/2016 Inferior 1.6

6 3 30/05/2016 Izquierda 1.5

6 3 30/05/2016 Derecha 1.5

6 3 30/05/2016 Superior 1.6

6 3 30/05/2016 Inferior 1.4

6 4 30/05/2016 Izquierda 1.6

6 4 30/05/2016 Derecha 1.4

6 4 30/05/2016 Superior 1.8

6 4 30/05/2016 Inferior 1.7

6 5 30/05/2016 Izquierda 1.4

6 5 30/05/2016 Derecha 1.8

6 5 30/05/2016 Superior 1.6

6 5 30/05/2016 Inferior 1.6

1 1 09/06/2016 Izquierda 0.7

35

1 1 09/06/2016 Derecha 0.7

1 1 09/06/2016 Superior 0.7

1 1 09/06/2016 Inferior 0.8

1 2 09/06/2016 Izquierda 0.9

1 2 09/06/2016 Derecha 0.9

1 2 09/06/2016 Superior 0.8

1 2 09/06/2016 Inferior 0.7

1 3 09/06/2016 Izquierda 0.8

1 3 09/06/2016 Derecha 0.8

1 3 09/06/2016 Superior 0.8

1 3 09/06/2016 Inferior 0.8

1 4 09/06/2016 Izquierda 0.9

1 4 09/06/2016 Derecha 0.7

1 4 09/06/2016 Superior 0.7

1 4 09/06/2016 Inferior 0.8

1 5 09/06/2016 Izquierda 0.7

1 5 09/06/2016 Derecha 0.8

1 5 09/06/2016 Superior 0.6

1 5 09/06/2016 Inferior 0.8

2 1 09/06/2016 Izquierda 2.2

2 1 09/06/2016 Derecha 2.1

2 1 09/06/2016 Superior 2

2 1 09/06/2016 Inferior 2.1

2 2 09/06/2016 Izquierda 2.2

2 2 09/06/2016 Derecha 2.2

2 2 09/06/2016 Superior 2.1

2 2 09/06/2016 Inferior 1.9

2 3 09/06/2016 Izquierda 2.1

2 3 09/06/2016 Derecha 2.1

2 3 09/06/2016 Superior 2

2 3 09/06/2016 Inferior 2.2

2 4 09/06/2016 Izquierda 2

2 4 09/06/2016 Derecha 2.3

2 4 09/06/2016 Superior 2.4

2 4 09/06/2016 Inferior 2.1

2 5 09/06/2016 Izquierda 2.2

2 5 09/06/2016 Derecha 2.1

2 5 09/06/2016 Superior 2

2 5 09/06/2016 Inferior 2.1

3 1 09/06/2016 Izquierda 1.3

3 1 09/06/2016 Derecha 1.3

36

3 1 09/06/2016 Superior 1.5

3 1 09/06/2016 Inferior 1.4

3 2 09/06/2016 Izquierda 1.4

3 2 09/06/2016 Derecha 1

3 2 09/06/2016 Superior 1.1

3 2 09/06/2016 Inferior 1.2

3 3 09/06/2016 Izquierda 1.3

3 3 09/06/2016 Derecha 1.4

3 3 09/06/2016 Superior 1.3

3 3 09/06/2016 Inferior 1.5

3 4 09/06/2016 Izquierda 1.5

3 4 09/06/2016 Derecha 0.7

3 4 09/06/2016 Superior 2

3 4 09/06/2016 Inferior 0.7

3 5 09/06/2016 Izquierda 1.6

3 5 09/06/2016 Derecha 1.8

3 5 09/06/2016 Superior 2

3 5 09/06/2016 Inferior 1.5

4 1 09/06/2016 Izquierda 1.6

4 1 09/06/2016 Derecha 1.8

4 1 09/06/2016 Superior 1.9

4 1 09/06/2016 Inferior 1.9

4 2 09/06/2016 Izquierda 1.9

4 2 09/06/2016 Derecha 2

4 2 09/06/2016 Superior 1.8

4 2 09/06/2016 Inferior 1.7

4 3 09/06/2016 Izquierda 2

4 3 09/06/2016 Derecha 1.8

4 3 09/06/2016 Superior 1.9

4 3 09/06/2016 Inferior 1.7

4 4 09/06/2016 Izquierda 1.8

4 4 09/06/2016 Derecha 1.7

4 4 09/06/2016 Superior 1.7

4 4 09/06/2016 Inferior 1.8

4 5 09/06/2016 Izquierda 2

4 5 09/06/2016 Derecha 2.1

4 5 09/06/2016 Superior 2

4 5 09/06/2016 Inferior 1.9

5 1 09/06/2016 Izquierda 1.9

5 1 09/06/2016 Derecha 2.2

5 1 09/06/2016 Superior 1.9

37

5 1 09/06/2016 Inferior 2

5 2 09/06/2016 Izquierda 2.1

5 2 09/06/2016 Derecha 2.4

5 2 09/06/2016 Superior 1.7

5 2 09/06/2016 Inferior 2.2

5 3 09/06/2016 Izquierda 2.2

5 3 09/06/2016 Derecha 2.7

5 3 09/06/2016 Superior 2.5

5 3 09/06/2016 Inferior 2.3

5 4 09/06/2016 Izquierda 2.4

5 4 09/06/2016 Derecha 2.3

5 4 09/06/2016 Superior 2.3

5 4 09/06/2016 Inferior 2.6

5 5 09/06/2016 Izquierda 2.8

5 5 09/06/2016 Derecha 2.1

5 5 09/06/2016 Superior 2.1

5 5 09/06/2016 Inferior 2.6

6 1 09/06/2016 Izquierda 2.1

6 1 09/06/2016 Derecha 2.2

6 1 09/06/2016 Superior 2.2

6 1 09/06/2016 Inferior 2

6 2 09/06/2016 Izquierda 2.3

6 2 09/06/2016 Derecha 2.1

6 2 09/06/2016 Superior 2.2

6 2 09/06/2016 Inferior 2.1

6 3 09/06/2016 Izquierda 2.2

6 3 09/06/2016 Derecha 2.1

6 3 09/06/2016 Superior 2.1

6 3 09/06/2016 Inferior 2.2

6 4 09/06/2016 Izquierda 2.1

6 4 09/06/2016 Derecha 2

6 4 09/06/2016 Superior 2.4

6 4 09/06/2016 Inferior 2.3

6 5 09/06/2016 Izquierda 2.1

6 5 09/06/2016 Derecha 2.1

6 5 09/06/2016 Superior 2.2

6 5 09/06/2016 Inferior 2.2

38

Apéndice 2. Tratamientos con su respectivo promedio de crecimiento micelial y su porcentaje de control a los 10, 20 y 30 días


10 DIAS 20 DIAS 30 DIAS

TRATAMIENTOS 20/05/2016 PROMEDIO % DE CONTROL 30/05/2016 PROMEDIO % DE CONTROL 09/06/2016 PROMEDIO % DE CONTROL

HIERBA LUISA

T1 0.48

0.55 32.1

T1 0.6

0.67 55.92

T1 0.73

0.77 64.52

T1 0.55 T1 0.68 T1 0.83

T1 0.63 T1 0.73 T1 0.8

T1 0.58 T1 0.68 T1 0.78

T1 0.53 T1 0.65 T1 0.73

HINOJO

T2 0.75

0.79 2.47

T2 1.53

1.43 5.92

T2 2.1

2.12 2.3

T2 0.78 T2 1.45 T2 2.1

T2 0.78 T2 1.53 T2 2.1

T2 0.83 T2 1.53 T2 2.2

T2 0.83 T2 1.1 T2 2.1

CEDRON

T3 0.4

0.68 16.05

T3 1

1.09 28.29

T3 1.38

1.38 36.41

T3 0.78 T3 1.03 T3 1.18

T3 0.63 T3 1.03 T3 1.38

T3 0.73 T3 1 T3 1.23

T3 0.85 T3 1.4 T3 1.73

ROMERO

T4 0.68

0.68 16.05

T4 1.3

1.33 12.5

T4 1.8

1.85 14.75

T4 0.63 T4 1.28 T4 1.85

T4 0.68 T4 1.35 T4 1.85

T4 0.65 T4 1.28 T4 1.75

T4 0.75 T4 1.45 T4 2

BORRAJA

T5 0.85

1.06 0

T5 1.23

1.72 0

T5 2

2.27 0

T5 1.2 T5 1.8 T5 2.1

T5 1.13 T5 1.93 T5 2.43

T5 1.13 T5 1.83 T5 2.4

T5 1 T5 1.83 T5 2.4

TESTIGO

T6 0.83

0.81

T6 1.53

1.52

T6 2.13

2.17

T6 0.8 T6 1.6 T6 2.18

T6 0.78 T6 1.5 T6 2.17

T6 0.83 T6 1.38 T6 2.2

T6 0.83 T6 1.6 T6 2.17

39

Apéndice 3. Proceso de aislamiento de hongo causante de la sigato kegra a nivel in vitro

40

Apéndice 4. Diferencia del crecimiento del hongo Mycosphaerella sp., por cada

tratamiento.

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UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS …repositorio.utmachala.edu.ec/bitstream/48000/7634/1/DE00025... · tratamiento testigo; el efecto antifúngico de la hierba luisa se debe a que contienen