UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS AGRÍCOLAS

CARRERA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA

Persistencia de Monilinia fructicola (Winter) Honey en estructuras

vegetales de durazno después de la aplicación de productos fungistáticos

Trabajo de titulación presentado como requisito previo a la obtención del título de

Ingeniero Agrónomo

Autor: Román Campos Jorge Anibal

Tutor: Ing. Agr. Sebastián Gonzalo Yánez Segovia, M.Sc.

Quito, Marzo 2017

DERECHOS DE AUTOR

Yo Jorge Aníbal Román Campos en calidad de autor del trabajo de investigación:PERSISTENCIA DE Monüinia fructicola (Winter) Honey EN ESTRUCTURASVEGETALES DE DURAZNO DESPUÉS DE LA APLICACIÓN DE PRODUCTOSFUNGISTATICOS autorizo a la Universidad Central del Ecuador a hacer uso del contenidototal o parcial que me pertenecen, con fines estrictamente académicos o de investigación.

Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente autorización,seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5, 6, 8; 19y de pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento.

También, autorizo a la Universidad Central del Ecuador realizar la digitalizacion ypublicación de este trabajo de investigación en el repositorio virtual, de conformidad a lodispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior.

Jorge Aníbal Román Campos

CC. N° 1721603411

INÍÍ1P

Tumbaco, 10 de febrero de 2017

CERTIFICADO

A quien corresponda:

El Programa de Fruticultura del INIAP, certifica, que el señor Jorge AníbalRomán Campos, portador de la cédula de identidad Nro. 172160341-1,egresado de la Universidad Central del Ecuador, de la Facultad de CienciasAgrícolas, desarrollo su tema de tesis titulado "Persistencia de Moniliniafmcticola (Winter) Honey en estructuras vegetales de durazno despuésde la aplicación de productos fungistáticos". Esta tesis puede ser publicadaen el internet (web), requisito previo a la obtención del título de IngenieroAgrónomo.

Atentamente,

•. Wiliam Viej^LMBA. MSc.Director del Programa Fruticultura I.N.LA.P

\\

APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN

Yo, Yánez Segovia Sebastián Gonzalo en mi calidad de tutor del trabajo de titulación,modalidad Proyecto de Investigación, elaborado por: ROMÁN CAMPOS JORGEANÍBAL; cuyo título es: PERSISTENCIA DE Monilinia fluctícola (Wiiiter) HoneyEN ESTRUCTURAS VEGETALES DE DURAZNO DESPUÉS DE LAAPLICACIÓN DE PRODUCTOS FUNGISTÁTICOS, previo a la obtención deGrado de Ingeniero Agrónomo; considero que el mismo reúne los requisitos y méritosnecesarios en el campo metodológico y epistemológico, para ser sometido a la evaluaciónpor parte del tribunal examinador que se designe, por lo que lo APRUEBO, a fin de queel trabajo sea habilitado para continuar con el proceso de titulación determinado por laUniversidad Central del Ecuador.

En la ciudad de Quito, a los 14 días del mes de febrero de 2017

lug, Agr. Sebastian Yánez S., M.Sc.DOCENTE-TUTORC.C.171J201059

ni

PERSISTENCIA DE MonÜinia fructicola (Winter) Houey EN ESTRUCTURASVEGETALES DE DURAZNO DESPUÉS DE LA APLICACIÓN DEPRODUCTOS FUNGISTÁTICOS

APROBADO POR:

Ing. Agr. Sebastián Yánez S., M.Sc.TUTOR

Ledo. Diego Salazar V., Mag.PRESIDENTE DEL TRIBUNAL

Jng. Agr. Clara Iza. M.Sc.PRIMER VOCAL DEL TRIBUNAL

Ing. Agr. Jorge Caicedo, M.Sc,SEGUNDO VOCAL DEL TRIBUNAL

2017

IV

v

AGRADECIMIENTOS

A la Facultad de Ciencias Agrícolas de la Universidad Central del Ecuador, por la formación académica. Al Instituto Nacional Autónomo de Investigaciones Agropecuarias (INIAP), especialmente al Programa de Fruticultura, por haberme proporcionado el financiamiento y las herramientas que permitieron desarrollar y culminar esta investigación. A los ingenieros; Sebastián Yánez, Juan Pazmiño por su apoyo y colaboración durante la investigación y redacción del documento. Al Ing. William Viera, Jefe del Departamento del Programa de Fruticultura de la Granja Experimental Tumbaco del INIAP, por la apertura, orientación, conocimientos y amistad brindados para la realización de este proyecto. Al Dr. PhD Charles Barnes y a quienes trabajan en la Granja Experimental Tumbaco, por su apoyo en esta investigación. A mis amigos quienes estuvieron a mi lado brindándome su apoyo, en todo momento

vi

DEDICATORIA A mi Dios por quien cada día me da

fuerzas y me influye aliento; a mi madre

quien siempre me brinda su apoyo

incondicional, a mi familia y a todas las

personas que colaboraron en la

realización de este trabajo, a mis amigos

por sus ánimos.

vii

INDICE DE CONTENIDO

CAPÍTULOS

PÁGINAS

1 INTRODUCCIÓN 1

2 REVISIÓN DE LITERATURA 3

2.1 Persistencia de Monilinia spp. 3

2.2 Detección en estructuras vegetales 3

2.3 Ascomycetes patógeno de Prunus Persica L. 4

2.3.1 Ciclo de infección y epidemiología de Monilinia spp 4

2.3.1.1 Reproducción asexual 5

2.3.1.2 Reproducción sexual 5

2.3.2 Taxonomía de M. fructicola 5

2.4 Interacción con otras enfermedades 5

2.5 Producción de Prunus persica L. en el Ecuador 6

2.5.1 Origen e Introducción de la variedad “Diamante” en el país 6

2.5.1.1 Descripción general de la variedad Diamante 6

2.6 Control de M. fructicola 7

2.6.1 Acción fungistática 7

2.6.2 Control biológico 7

2.6.2.1 Bacillus subtilis 7

2.6.3 Control químico 8

2.6.3.1 Benzimidazoles. 8

2.6.3.2 fosfito de potasio 8

3 MATERIALES Y MÉTODOS 10

3.1. Ubicación 10

3.2 Características agroclimáticas 10

3.3 Georreferenciación 10

3.4 Elaboración del croquis de la investigación 11

3.5 Colecta de muestras e identificación 11

3.6 Materiales 11

3.6.1 Material vegetal 11

3.6.2 Material es de campo 11

3.6.3 Equipos y materiales de laboratorio 12

3.7 Método 12

3.7.1 Fase de laboratorio 12

3.7.1.1 Aislamiento e identificación de M. fructicola 12

3.7.1.2 Aislación e identificación de Bacillus subtilis 13

3.7.1.3 Bioensayos de la enfermedad 13

3.7.2 Fase de campo 13

3.7.2.1 Selección y división de etapas fenológicas 13

3.7.2.2 Aplicaciones de los productos fungistáticos 14

3.7.2.3 Registro de datos 14

3.8 Factores en estudio 14

3.8.1 Tipo de inóculo patogénico en el fitoplano 15

3.8.2 Productos fungistáticos 15

3.9 Tratamientos 15

3.10 Unidad experimental 15

3.11 Variables 15

viii

CAPÍTULOS PÁGINAS

3.12 Esquema de análisis de la varianza 17

3.13 Análisis funcional 18

3.14 Diseño del proyecto 18

4 RESULTADOS Y DISCUSIÓN 19

4.1 Identificación de signos de M. fructicola 19

4.2 Incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno 19

4.2.1 Tercio bajo del árbol 19

4.2.2 Tercio medio del árbol 24

4.3.3 Tercio alto del árbol 27

4.3 Severidad de infección de M. fructicola en frutos de durazno 31

4.3.1 Tercio bajo del árbol 31

4.3.2 Tercio medio del árbol 32

4.3.3 Tercio alto del árbol 33

4.4 Área bajo la curva del progreso de la enfermedad (AUDPC) 34

4.4.1 Tercio bajo del árbol 34

4.4.2 Tercio medio del árbol 35

4.4.3 Tercio alto del árbol 36

4.5 Eficacia de los tratamientos 37

5 FASE DE LABORATORIO (BIOENSAYOS) 38

5.1 Persistencia de M. fructicola en flores completas y estructuras florales

de durazno.

38

5.1.1 Persistencia de M. fructicola en flores completas de durazno. 38

5.1.2 Persistencia de M. fructicola en pétalos de las flores de durazno. 38

5.1.3 Persistencia de M. fructicola en anteras de las flores de durazno. 39

5.1.4 Persistencia de M. Fructicola en estambres de las flores de durazno. 40

5.1.5 Persistencia de M. Fructicola en sépalos de las flores de durazno. 40

5.2 Persistencia de infección de M. Fructicola en lenticelas de Prunus

persica

41

5.3 Crecimiento de M. fructicola en frutos de Prunus persica en pos-

cosecha.

41

6 CONCLUSIONES 43

7 RECOMENDACIONES 44

8 RESUMEN 45

SUMMARY 47

9 REFERENCIAS 49

10 ANEXOS 53

ix

INDICE DE CUADROS

CUADROS

PÁGINAS

1 Ubicación del sitio experimental 10

2 Características agroclimáticas 10

3 Tratamientos a utilizarse para el control de M. fructicola 15

4 Escala de clasificación de síntomas de M. Fructicola 16

5 Esquema para el análisis de ANOVA 17

6 Análisis de la varianza para incidencia de infección de M. fructicola en

frutos de durazno en el tercio bajo del árbol. Granja Experimental

Tumbaco 2016

22

7 Pruebas de Tukey al 5% de significancia para los inóculos de Monilinia

y Monilinia +roya en la variable incidencia de infección de M. fructicola

en frutos de durazno en el tercio bajo del árbol. Granja Experimental

Tumbaco 2016

22

8 Pruebas de Tukey al 5% de significancia para los productos en la variable

incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio

bajo del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

22

9 Pruebas de Tukey al 5% de significancia para incidencia de infección de

infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio bajo del árbol

23

10 Análisis de la varianza para incidencian de infección de M. fructicola en

frutos de durazno en el tercio medio del árbol. Granja Experimental

Tumbaco 2016

26

11 Pruebas de Tukey al 5% de significancia para los inóculos de Monilinia

y Monilinia +roya en la variable incidencia de infección de M. fructicola

en frutos de durazno en el tercio medio del árbol. Granja Experimental

Tumbaco 2016

26

12 Pruebas de Tukey al 5% de significancia para los productos en la variable

incidencia de infección de infección de M. fructicola en el tercio medio

del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

26

13 Pruebas de Tukey al 5% de significancia para incidencia de infección de

M. fructicola en frutos de durazno en el tercio medio del árbol

27

14 Análisis de la varianza para incidencia de infección de M. fructicola en

frutos de durazno en el tercio alto del árbol. Granja Experimental

Tumbaco 2016

30

15 Pruebas de Tukey al 5% de significancia los inóculos de Monilinia y

Monilinia +roya en la variable incidencia de infección de M. fructicola

en el tercio alto del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

30

16 Pruebas de Tukey al 5% de significancia para los productos en la variable

incidencia de infección de M. fructicola en el tercio alto del árbol. Granja

Experimental Tumbaco 2016

30

17 Pruebas de Tukey al 5% de significancia para incidencia de infección de

M. fructicola en frutos de durazno en el alto del árbol. Granja

Experimental Tumbaco 2016

31

18 Análisis de severidad de infección utilizando Friedman al 5% de

significancia para el tercio bajo del árbol. Granja Experimental Tumbaco

2016

32

x

CUADROS

PÁGINAS

19 Análisis de significancia para severidad de infección utilizando Friedman

al 5% de significancia el tercio medio del árbol. Granja Experimental

Tumbaco 2016

33

20 Análisis de significancia de severidad utilizando Friedman al 5% de

significancia para el tercio alto del árbol. Granja Experimental Tumbaco

2016

33

21 AUDPC para la variable incidencia de de infección M. fructicola en el

tercio bajo del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

34

22 AUDPC para la variable incidencia de infección de M. fructicola en el

tercio medio del árbol. Granja Experimental Tumbaco

35

23 AUDPC para la variable incidencia de infección de M. fructicola en el

tercio alto del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

36

24 Porcentaje de eficacia de los tratamientos con respecto al testigo. Granja

Experimental Tumbaco 2016

38

25 Persistencia de M. fructicola en lenticelas de P. persica. Granja

Experimental Tumbaco 2016

41

xi

INDICE DE GRÁFICOS

GRÁFICOS PÁGINAS

1 Localización geográfica, mediante imagen satelital, le lotes de durazno

en la Granja Experimental del INIAP en Tumbaco. Granja Experimental

Tumbaco 2016

11

2 Distribución de los tratamientos para la persistencia de M. fructicola.

Granja Experimental Tumbaco 2016

14

3 A) Infección de M. fructicola en el fruto de P. persica en el tercio medio

del árbol localizado en la Granja Experimental del INIAP en Tumbaco.

B) Fruto infectado con M. fructicola, del tercio medio del árbol con

severidad 3, proveniente de la Granja Experimental. C) M. fructicola en

PDA del tercio medio del árbol localizado en la Granja Experimental del

INIAP en Tumbaco. D) Conidios de M. fructicola (100X)

19

4 Incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio

bajo del árbol atreves del tiempo. Granja Experimental Tumbaco 2016

23

5 Número de conidias en la evaluación de M. fructicola para

comparaciones ortogonales consecutivas. A) Tercio bajo del árbol B)

Tercio medio del árbol C) Tercio alto del árbol

23

6 Incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio

medio del árbol atreves del tiempo. Granja Experimental Tumbaco 2016

27

7 Incidencia de la infección de M. fructicola en frutos de durazno en el

tercio alto del árbol atreves del tiempo. Granja Experimental Tumbaco

2016

31

8 AUDPC para la variable incidencia de infección de M. fructicola en

durazno en el tercio bajo del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

35

9 AUDPC para la variable incidencia de infección de M. fructicola en

durazno en el tercio medio del árbol. Granja Experimental Tumbaco

2016

36

10 AUDPC para la variable incidencia de infección de Monilinia en durazno

en el tercio alto del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

37

11 Bioensayo de la persistencia de M. fructicola en flores completas. Granja

Experimental Tumbaco 2016

38

12 Bioensayo de la persistencia de M. fructicola en pétalos de P. persica..

Granja Experimental Tumbaco 2016

39

13 Bioensayo de la persistencia de M. fructicola en anteras de P. persica..

Granja Experimental Tumbaco 2016

39

14 Bioensayo de la persistencia de M. fructicola en estambres de P.

persica.. Granja Experimental Tumbaco 2016

40

15 Bioensayo de la persistencia de M. fructicola en sépalos de P. persica..

Granja Experimental Tumbaco 2016

40

16 Crecimiento de M. fructicola en el plano ecuatorial Granja Experimental

Tumbaco 2016

42

17 Crecimiento de M. fructicola en el plano polar Granja Experimental

Tumbaco 2016

42

xii

INDICE DE ANEXOS

ANEXOS

PÁGINAS

1 Cuadro de incidencia de infección de M. fructicola en flores de Prunus persica. 53

2 Severidad de la infección de M. fructicola en frutos de durazno en los tercios

alto medio y bajo.

53

3 Área bajo la curva de progreso de la enfermedad (AUDPC) en frecuencia

acumulada para la variable de M. fructicola de durazno en los tercios alto, medio

y bajo del árbol.

55

4 Curva del progreso de enfermedad de la roya causada por M. fructicola en frutos

de durazno, Granja Experimental Tumbaco 2016.

56

5 Ciclo de M. fructicola fase sexual y asexual 57

6 Aislación e identificación de Bacillus subtilis 57

7 Cuadros del crecimiento de M. fructicola en pos-cosecha 58

8 Pruebas de normalidad, homogeneidad y homocedasticidad para la variable

incidencia de infección de M. fructicola

59

9 Fotografías de la investigación en campo 64

xiii

TEMA: Persistencia de Monilinia fructicola (Winter) Honey en estructuras vegetales de durazno después de la aplicación de productos fungistáticos

Autor: Jorge Anibal Román Campos Tutor: Ing. Agr. Sebastián Gonzalo Yánez Segovia, M.Sc.

RESUMEN

Monilinia fructicola W. permanece latente después de la cosecha en frutos momificados y estructuras florales. El uso indiscriminado de fungicidas causa niveles de resistencia. El

objetivo de esta investigación fue evaluar la persistencia de M. fructicola en estructuras

vegetales de durazno después de la aplicación de distintos productos fungistáticos. La

incidencia de M. fructicola presentó en promedio general 77,08%; el tratamiento con menor

porcentaje fue Monilinia + Carbendazim con un promedio de 41,00%. La severidad de M.

fructicola en promedio general fue de 78,60%, los tratamientos con menor porcentaje fueron:

Monilinia + Carbendazim y (Monilinia + roya) + Carbendazim con 60,20% y 53,75%

respectivamente. La aplicación de los productos fungistáticos en etapas tempranas fue un factor significativo en la reducción de la incidencia y severidad de M. fructicola.

PALABRAS CLAVES: MORFOLOGÍA FLORAL / NIVELES DE RESISTENCIA /

PATOGENO

xiv

TITLE: Persistance of Monilinia fructicola (Winter) Honey in plant structures of peach after the aplication of fungistatic products.

Author: Jorge Anibal Román Campos Tutor: Ing. Agr. Sebastián Gonzalo Yánez Segovia, M.Sc.

SUMMARY

Monilinia fructicola W. remains latent after the harvest in mummified fruits and floral

structures. The indiscriminate use of fungicides causes levels of resistance. The objective of

this research was to evaluate the persistence of M. fructicola in plant structures of peach after

the application of different fungistatic products. The incidence of M. fructicola presented,

the general average of 77.08%; the lowest percentage treatment was Monilinia +

Carbendazim with an average of 41.00%. The severity of M. fructicola in the general average

was 78.60%, the treatments with the lowest percentage were: Monilinia + Carbendazim and

(Monilinia + roya) + Carbendazim with 60.20% and 53.75% respectively. The application

of fungistatic products in the early stages was a significant factor in the reduction of the

incidence and severity of M. fructicola.

KEY WORDS: FLORAL MORPHOLOGY, RESISTANCE LEVELS, PATHOGEN

CERTIFICADO

Yo, Sebastián Yánez, en calidad de tutor de trabajo de graduación cuyo título es "Persistencia

de Monilinia fructicola (Winter) Honey en estructuras vegetales de durazno después de la

aplicación de productos fungí siálicos", presentado por el señor JORGE ANÍBAL ROMÁN

CAMPOS, previo a obtención del Título de Ingeniero Agrónomo, certifico haber revisado ycorregido e! ABSTRAC para el Trabajo de grado, aprobado el mismo, después de realizadas lasobservaciones por los miembros del tribunal, por lo que apruebo el mismo, para el empastado

final.

Ing. Agr. Sebastián Yánez, M.Sc.

DOCENTE-TUTOR

C.C.1713201059

1

1. INTRODUCCIÓN De acuerdo a la epidemiología en campo, se conoce que Monilinia fructicola (Winter) Honey permanece latente después de la cosecha e inverna principalmente en frutos momificados que se pueden encontrar tanto en el árbol como en el suelo, en brotes y chancros (Gell et al., 2008). Cuando las condiciones climáticas son óptimas para la producción de las conidias, estos órganos pueden actuar como fuente de inóculo primario, ya que las mismas se pueden dispersar por el aire, agua o mediante insectos; pudiendo llegar así a estructuras como, flores, yemas, brotes o frutos sanos. Cuando se dan las condiciones óptimas para la infección, las conidias penetran a través de heridas o aberturas naturales y colonizan los tejidos con rapidez (Casals et al., 2015). El factor más importante para que se dé la infección es la presencia de agua libre sobre el fruto y elevada humedad relativa. A 25°C solo son necesarias 5 horas para que se produzca la infección en la flor; mientras que en frutos maduros, a 23°C con poco más de 3 horas, ya se podría dar la infección (Biggs y Northover, 1988; Luo y Michailides, 2001). En el caso de que se desarrolle la enfermedad en los tejidos infectados, se producirán las conidias, que constituirán el inóculo secundario para infectar nuevos tejidos; si estos tejidos son frutos de un mes antes de la cosecha, la cantidad de enfermedad puede llegar a aumentar exponencialmente de semana en semana (Casals et al.,2015). El desarrollo de la enfermedad en un fruto infectado se puede dar en pocos días, y una vez podrido, se puede arrugar, secar y convertir en momias, características de la enfermedad, no obstante, si el fruto podrido se cae al suelo antes de momificarse, con frecuencia será descompuesto, sin posibilidad a la momificación (Byrde y Willetts, 1977). En el Ecuador, el cultivo de durazno, Prunus persica L., se ve afectado por M. fructicola, la cual se le considera, una de la más importantes que daña a los frutos, ramas y flores; denominada podredumbre morena o parda. Esta infección causada por este hongo altera el rendimiento de este frutal, presentándose pérdidas superiores al 50% (Salgado, 2011). El uso indiscriminado de fungicidas sintéticos en la agricultura causa efectos negativos en el ambiente; los mismos que exigen una solución alternativa a los plaguicidas convencionales; ya que las enfermedades generan niveles de resistencia. Con un agente fungistático se puede reducir el crecimiento del hongo, capaz de suspender su germinación e incluso su desarrollo (Salgado, 2011). De acuerdo a los parámetros en este estudio, la utilización de productos fungistáticos presentará persistencia de Monilinia fructicola (G. Winter) Honey en plantaciones experimentales establecidas de durazno variedad “Diamante”. En esta investigación se propuso la disminución de la persistencia de M. fructicola en estructuras vegetales de durazno después de la aplicación de tres productos fungistáticos. El objetivo de este estudio fue evaluar la persistencia de M. fructicola en estructuras vegetales de durazno después de la aplicación de distintos productos fungistáticos; para esto se establecieron tres tipos de productos con efecto fungistáticos los cuales son: Carbendazim, Bacillus subtilis y fosfito de potasio; también, se estableció dos diferentes tipos de complejos patogénicos, los cuales son: Monilinia y Monilinia + roya. Específicamente se planteó determinar la incidencia de infección de M. fructicola frente a las aplicaciones de los productos fungistáticos; determinar la severidad de M. fructicola frente a las aplicaciones de los productos fungistáticos; determinar la eficacia del mejor tratamiento y analizar

2

el Área Bajo la Curva del Progreso de la Enfermedad (AUDPC) en M. fructicola; establecer en que estructuras vegetales existen mayor o menor persistencias de M. fructicola.

3

2. REVISIÓN DE LITERATURA 2.1. Persistencia de Monilinia spp. Monilinia spp. genera una lesión circular firme, de color castaño, que aumenta de tamaño rápidamente. Las unidades con síntomas de pudrición quedan adheridas a la planta momificándose, o caen al suelo y se descomponen. Sobre los distintos órganos atacados suele observarse el signo del hongo, una especie de moho gris constituidos por la esporulación y el micelio (Rossini et al., 2007). La fuente primaria del inóculo de Monilinia spp. está constituidos por las momias, pedúnculos, brotes y ramas infectadas que no son retiradas de la plantación y destruidas. El micelio sobrevive en estos restos, produce conidias e infecta las flores en el siguiente ciclo (Smith et al., 1992). El patógeno inverna principalmente en forma de micelio o conidias sobre las momias que se encuentran en el árbol o en el suelo, o sobre los brotes y ramas infectadas (Ogawa et al., 1995; Melgarejo et al., 2000). El primer órgano en ser atacado es la flor, que se marchita. Los estambres, pistilos, pétalos o sépalos pueden ser invadidos por el hongo. Se producen pequeñas manchas marrones, que se extienden a toda la flor para luego tomar un aspecto atizonado. Monilinia spp. avanza hacia los meristemas, con un cancro característico deprimido, de coloración oscura, y en condiciones de alta humedad se observa exudado gomoso sobre estos (Rossini et al., 2007). Las hojas ubicadas en los brotes afectados mueren quedando adheridas a estos. La flor atizonada puede caerse o permanecer adherida a la rama. Monilinia spp. también afecta brotes y meristemas produciendo cancros y la muerte de la porción basal hasta el ápice. En los frutos ocasiona podredumbres en el árbol, como después de cosechados. En ataques severos, las ramas que sostienen a los frutos se secan y mueren (Smith et al., 1992). En la cosecha, el fruto infectado se pudre rápidamente contagiando a los frutos contiguos, esto puede provocar una destrucción total de la cosecha durante el transporte, almacenamiento y comercialización. Existe también reducción de rendimientos por el ataque a las flores y pérdida del vigor del árbol por la muerte de yemas y ramas desde la brotación a la cosecha (Xu et al., 2001).

2.2. Detección en estructuras vegetales El primer indicio de la enfermedad es la rápida muerte de flores que, a medida que se vuelven marrones se colocan en la ramita en una masa gomosa, convirtiéndose más tarde en cubierta con un color grisáceo a bronceado de masa de esporas. Con frecuencia, después de la colonización de la flor, el hongo penetra en el rodaje donde causa un cáncer en el que también se producen esporas (Agrios, 2005) El tizón se produce si el hongo circunda el cultivo, las hojas en estos brotes se convierten a marrón y pueden permanecer unidos durante varias semanas. Los cancros que se forman en las siguientes flores o infección de la fruta aparecen como parduscos, áreas hundidas, que a menudo están cubiertas de goma. Estos cancros apoyan la formación de conidios en tiempo húmedo y albergan el hongo durante el invierno. Por lo general, el árbol es capaz de restringir cancros a pequeñas áreas ovales en el cruce de la sesión y la flor o fruta infectada (Biggs y Northover, 2007).

4

En el fruto, el incremento de la susceptibilidad está asociada con el contenido de azúcar cuando los mismos maduran. Inicialmente, manchas circulares de color canela-marrón son visibles en el fruto. En condiciones de humedad, las masas de ceniza-gris-marrón de conidios se desarrollan en estas lesiones. Si las condiciones ambientales son húmedo y caliente durante la maduración del fruto, toda la cosecha, literalmente, puede ser destruido "durante la noche" (Ritchie, 2009).

2.3. Ascomycetes patógenos de Prunus persica L. Los ascomicetos producen un micelio que posee septos, esporas sexuales (ascosporas), dentro de un saco o asca, esporas asexuales (conidios). La etapa sexual de los ascomicetos se le denomina con frecuencia la fase perfecta o teleomorfa, mientras que la fase asexual o conidial es la etapa imperfecta o anamorfa. En la mayoría de los ascomicetos fitopatógenos, el hongo sobrevive durante la etapa de crecimiento en forma de micelio; se reproduce y ocasiona la mayoría de las infecciones en su fase conidial o asexual (Agrios, 2005). Tanto los conidios como las ascosporas producen infecciones de las inflorescencias de P. persica. Los conidios son llevados por el viento, el agua de lluvia y salpicaduras o los insectos hacia los verticilios florales. Las ascosporas que salen con fuerza del asca forman una "nube" blanquesina. Las corrientes de aire las llevan entonces hacia las flores. Los conidios y las ascoporas germinan; producen infección al cabo de unas cuantas horas (Holst-Jensen et al., 1997). A nivel mundial se han reportado tres especies de Monilinia causantes de la podredumbre morena: Monilinia laxa H., Monilinia fructigena H. y Monilinia fructicola (Fulton, 1999). Las principales características para distinguir las tres especies son: tamaño de conidias, modo de ramificación y morfologías. M. laxa es la que más causa la enfermedad en las ramas y en las flores. M. fructífera causa solo un 10 a 15% de la enfermedad. M. fructicola es capaz de atacar tanto flores, ramas y frutos. En varias partes del mundo dos de las tres especies coexisten. M. laxa y M. fructigena coexisten en Europa y Asia. M. frutícola y M. laxa coexisten en Latinoamérica, América del norte y Australia (INTA, 2003).

2.3.1. Ciclo de infección y epidemiología de Monilinia spp. La Podredumbre morena o parda, causada por Monilinia spp., es una de las enfermedades más importantes que afecta a los frutales de hueso, como drupas y pomos; los cuales incluyen a duraznos, cerezos, ciruelas y almendros; los mismos que poseen un mesocarpio carnoso y un endocarpio endurecido (Gell et al., 2008). Esta enfermedad es más severa en frutales de la familia Rosaceae a la cual pertenece P. persica. El patógeno sobrevive en frutos momificados y cancros formados en infecciones de años anteriores y, luego de iniciada la floración, en pedúnculos, anteras, flores y brotes muertos. Los conidios se forman con temperaturas mayores a 5 °C. Luego de invadir el ovario y el pedúnculo la infección avanza sobre el brote. Las flores marchitas quedan cubiertas por una masa de conidioforos. La muerte del brote lleva al marchitamiento del resto de las flores. Los frutos pueden ser infectados inmediatamente después del cuajado, manifestándose la enfermedad antes o después de la cosecha. La infección del fruto se produce directamente a través de la cutícula, en la base de los tricomas o a través de rajaduras y heridas. Estas últimas pueden ser causadas por insectos (mosca de la fruta, abejas, hormigas). La temperatura óptima para el desarrollo de M. fructicola es entre 20 y 25 °C. Para que la infección tenga éxito son suficientes de 3 a 5 horas de humedad. Después de 24 horas de humedad, la infección es independiente de la temperatura entre valores de 5 a 30 °C (Rossini et al., 2007).

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El micelio del hongo, en particular cuando el clima es húmedo, produce hifas cortas que se reúnen, ejercen presión en la epidermis, saliendo al exterior, y formando numerosos esporodoquios conidiales sobre los restos florales, desde donde se liberaran nuevas conidias. Al mismo tiempo el micelio avanza rápidamente hacia el brote y fruto recién formado. Si la enfermedad progresa en los brotes se forman chancros que pueden llegar a estrangularlos (Byrde, 1952). Las lesiones típicas de la infección se presentan como manchas cafés en la superficie de inflorescencias y/o frutos, los cuales se tornan de color grisáceo, ya que los conidios (fase asexual) del hongo recubren su superficie (Fulton et al., 1999). La podredumbre morena, conocida así por atizonar la fruta, puede llegar a causar una condición, que en el durazno se ha denominado “momia” o fruto momificado (Agrios, 1995) el mismo que constituye el principal reservorio de esporas del hongo y puede adherirse a las ramas atizonándolas (Gell et al., 2008). El árbol de durazno, independientemente de la variedad, es más susceptible a contraer la enfermedad de podredumbre morena en el periodo de floración y madurez del fruto. Es por esto que la infección causada por Monilinia puede presentarse cuando la fruta se encuentra aún en el huerto, así como en la etapa post-cosecha, llegando a alcanzar pérdidas mayores al 75% en los cultivos de duraznos a nivel mundial (Agrios, 2005).

2.3.1.1. Reproducción asexual Los conidios (esporas asexuales) se producen en mechones de conidióforos llamados esporodoquios. Los conidios son hialinos (incoloros), en forma de limón, y producido de una manera moniloide. En condiciones ideales, los conidios germinan dentro de 3 a 5 horas. Amplio crecimiento del micelio se puede producir dentro de las 24 horas (Ritchie, 2009).

2.3.1.2. Reproducción sexual Los hongos de podredumbre parda son ascomicetos. Producen ascosporas (esporas sexuales) en sacos tubulares denominadas ascas que se encuentran en la superficie superior de una estructura de copa o en forma de disco, conocido como un apotecio. Los apotecios pueden ser de 5-20 mm (hasta casi una pulgada) de diámetro y son transmitidas en la fruta momificada que han caído al suelo. Aunque se describe comúnmente en los libros de texto, apotecios rara vez se observan en la mayoría de las áreas (Ritchie, 2009).

2.3.2. Taxonomía de Monilinia fructicola M. fructicola está clasificada dentro de los hongos superiores. Pertenece a la subdivisión de los Ascomycetos. Sus ascas o sacos contienen grupos de ocho esporas sexuales denominadas ascosporas. La fase asexual del hongo se denomina Monilinia y se produce cuando cada hifa termina en conidios, los cuales son las esporas asexuales externas (Agrios, 1995). Las ascas que se forman en la superficie tienen apariencia de copa por lo que están dentro de la clase de los Discomycetes, pertenece al orden Helotiales y a la familia Sclerotiniaceae (Fulton, 1999).

2.4. Interacción con otras enfermedades Tranzschelia discolor (Fuckel) Tranzchel & Litvinov, es una enfermedad que tiene amplia distribución en el mundo, ocurre esporádicamente, causando serios daños en años de excesiva humedad relativa, durante la estación de desarrollo vegetativo y reproductivo del cultivo (INIAP, 2005).

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Ocasiona pústulas pequeñas, anaranjadas, sobre el follaje, ramitas, así como pequeñas heridas en el fruto, lo cual le hace más vulnerable para el ataque M. fructicola. La perpetuación de T. discolor se produce en las lesiones de ramas tiernas, hojas y frutos; también en órganos vegetales esparcidos en el suelo, principalmente frutos. La diseminación ocurre por el viento, agua de lluvia e insectos. Cuando el ataque es severo se origina una cierta defoliación de la planta causando que sus defensas bajen y puedan interactuar otros patógenos como M. fructicola (Aponte, 2004).

2.5. Prunus persica L. en el Ecuador Algunas reseñas históricas dan referencia de la existencia de plantaciones de duraznos en el Ecuador desde hace aproximadamente 100 años. En la década de los 70’s el Ministerio de Agricultura a través del Programa de Fomento Agrícola, introdujo las variedades “Fortuna”, “Diamante” y otras precoces. El programa de Fruticultura del INIAP, en colaboración con la Cooperación Técnica Suiza (COTESU) realizó trabajos de investigación en frutales de clima templado, en las Granjas de Píllaro y Tumbaco entre los años de 1981 y 1983, especialmente direccionados para la solución de problemas fitosanitarios y de productividad (MAGAP, 2010).

2.5.1. Origen e Introducción de la variedad “Diamante” en el país La variedad de Durazno Diamante, fue desarrollada en el Centro Nacional de Pesquisa de Fruteiras Templadas (CNPFT). Pelotas. RS-Brasil, perteneciente a la Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaria (EMBRAPA). Es una variedad precoz, de bajo requerimiento de horas frio (HF) (150-200); empleada como doble propósito para el consumo en fresco o en conserva. Se introdujo al país en 1992, a la Granja Experimental Nagsiche (Salcedo-Cotopaxi). En 1993 a la Granja La Pradera (Chaltura-Imbabura); a finales de 1996, se introduce y evalúa en la Granja Experimental Tumbaco del INIAP (INIAP, 2000).

2.5.1.1. Descripción general de la variedad Diamante De acuerdo al boletín de la variedad Diamante (INIAP, 2000) y sus características agro productivas (INAMHI, 2015) los promedios anuales son:

Altura planta: Puede alcanzar entre 2,5 a 3,5 m. Ancho de la copa: Alcanzan en promedio 3 m. de ancho, obteniendo formas semiabiertas. Hojas: Alternas de 16 cm. de largo x 3,8 cm. de ancho, de color verde oscuro. Flores: El árbol florece abundantemente. Las flores son de color rosado con

fórmula floral K5, C5, A30, G1; la flor se autofecunda, transcurre diez días desde el inicio de floración a plena floración y 7 días hasta caída de pétalos.

Frutos: Son ligeramente cónicos, con punta pequeña, de calibre medio a grande de color amarillo intenso con tintes rojizos, la pulpa es amarilla-oscura casi anaranjada. El peso varía de 65 a 120 g., es firme (4,13 - 5,22kgF), dulce (11,6 – 13°Brix), buen comportamiento poscosecha.

Plagas: roya (Tranzschelia discolor), Monilla (Monilinia frutícola), Cloca (Taphrina deformans), Mancha de Fruto (Cladosporium sp.).

Mosca de la fruta (Anastrepha sp.). Zonas de cultivo: Áreas correspondientes a los Valles Interandinos y zonas altas de la Sierra

ecuatoriana. Tipo de Suelo: Franco arenoso a franco arcilloso. Distancias de plantación:

2,5 x 4 m. (1000 plantas.ha-1); 3 x 4 m. (833 plantas.ha-1) ; 3 x 5 m. (666 plantas.ha-1).

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Altitud: 2000 a 2700 m.s.n.m. Temperatura: 14,2 a 18,2°C Precipitación: 487 a 961 mm. Humedad relativa:

60 a 80% Días flor-Cosecha: 115 días. Ciclo total: 7 meses. Rendimiento: 25 a 36 ton.ha-1.año-1. Almacenamiento: 4 a 5 días al ambiente; ±15 días refrigeración a 4°C.

2.6. Control de Monilinia fructicola La ubicación es importante, los árboles plantados en huertos que tienen pobre circulación de aire, y por lo tanto las condiciones de secado lento, son más propensos a tener tizón de la flor y de la podredumbre parda. El manejo exitoso de la muerte de las flores y de la podredumbre parda implica una combinación de prácticas fitosanitarias para reducir la cantidad de inóculo inicial y el uso de fungicidas. Cuando se compara con los resultados de un buen saneamiento y las prácticas culturales; el control biológico ha tenido poco éxito en el huerto (Ritchie, 2009).

2.6.1. Acción fungistática La acción fungistática es capaz de suspender el crecimiento y el desarrollo de los hongos, o la germinación de sus esporas. A diferencia de los fungicidas, los fungistáticos no matan necesariamente a los hongos, pero sí los paralizan y los detienen en su crecimiento. En botánica y agronomía, el término utilizado es micetostático o micostático (Graybill, 2004). 2.6.2. Control biológico Debido a las repercusiones ambientales que tienen los agentes de control químico se han buscado métodos biológicos para minimizar el crecimiento y esporulación de M. fructicola (Thomson, 1994). Algunos estudios en laboratorio, realizando cultivos duales, sugieren que se podría usar hongos antagónicos para contrarrestar la podredumbre morena. Trichoderma es uno de los candidatos para ser usado en ensayos de control biológico (Cundom et al., 2000). También se ha sugerido el uso de bacterias mesófilas, como Bacillus subtilis C. ya que, en estudios de campo realizados en cultivos de duraznos, se logró obtener una reducción del 90% de la enfermedad en la etapa post- cosecha (Zhou et al.,2008). El control biológico de los patógenos es generalmente muy específico y utiliza organismos que atacan o interfieren con patógenos específicos. En algunos casos es posible encontrar una única cepa microbiana que sea eficaz en muchos ambientes, pero en la mayoría de los casos, se requieren cepas diferentes por localidades (Gardini, 1993).

2.6.2.1. Bacillus subtilis C. Es una bacteria Gram positiva, produce endosporas termorresistentes, además, resiste factores físicos perjudiciales como la desecación, radiación, ácidos y desinfectantes químicos. Produce enzimas hidrofílicas extracelulares que descomponen polisacáridos y ácidos nucleicos permitiendo que el organismo empleé estos productos como fuente de carbono y electrones, producen antibióticos como la bacitricina, polimixina, gramicidina y circulina. Fermentan la caseína y el almidón, vive dentro de los límites de 55 a 70°C. Es un gran controlador biológico, B. subtilis promueve el desarrollo de las plantas y previene las enfermedades (Cuervo, 2010).

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Taxonómicamente la bacteria B. subtilis presenta la siguiente clasificación (Cuervo, 2010).

Reino: Bacteria

Filo: Firmicutes

Clase: Bacilli

Orden: Bacillales

Familia: Bacillaceae

Género: Bacillus

Especie: B. subtilis Cohn

2.6.3. Control químico

En el mercado se encuentran disponibles dos tipos de fungicidas: sistémicos y de contacto. Los primeros penetran los tejidos de la planta y le brindan a ésta, protección total contra el hongo (Thomson, 1994). Por otro lado, los fungicidas de contacto, protegen a la planta, en la superficie donde han sido roseados (Gregori, 2005). La podredumbre morena ha sido controlada con varios tipos de fungicidas, entre éstos los más importantes han sido los benzimidazoles (benomyl), dicarboximidas, inhibidores de la biosíntesis del ergosterol y fenilamidas, además de compuestos como cobre, azufre y captan (Thomson, 1994). Actualmente, se conoce que el uso persistente de dicarboximidas en frutales de durazno, específicamente en Corea, ha hecho que M. fructicola desarrolle niveles de resistencia a este compuesto (Lim y Byeongjin, 2003).

2.6.3.1. Benzimidazoles (Carbendazim) La mayoría se convierten en la superficie de las plantas al compuesto metil benzimidazol carbamato; el cual, interfiere en la mitosis, división nuclear y celular de los hongos sensibles. El modo de acción de estos fungicidas, está basado en sus efectos sobre la integridad de la tubulina,

una parte esencial del citoesqueleto y alternadas, en la formación del huso y en la segregación de los cromosomas en la división celular. Controla una gran variedad de pústulas y manchas foliares, tizones, pudriciones, roñas y enfermedades de semillas y otras que causan los patógenos del suelo. Tiene la característica particular de ser bastante efectivo para el control de las cenicillas en todos los cultivos, roñas de manzanas, duraznos, pudrición café de frutos de hueso, pudriciones de frutos en general, manchas foliares ocasionadas por Cercospora, el carbón descubierto y cubierto del trigo (Agrios, 2005).

2.6.3.2. Fosfito de potasio El fosfito de potasio pertenece al grupo químico de los fosfanatos, de bajo impacto ambiental; es decir, que la aplicación del fosfito de potasio es poco peligrosa al hombre, a los animales y el ambiente. Es comercializado como fertilizante y fungicida (Lovatt y Mikkelsen, 2006). En diferentes estudios se ha comprobado el efecto de los fosfitos en la inducción de resistencia en vegetales, ya que interfieren la incidencia y gravedad de enfermedades de las plantas. La interacción entre el carácter sistémico, la absorción rápida por diferentes partes aéreas de la planta y el control debe ser estudiado de acuerdo con el tipo de la planta y características del patógeno a ser controlados (Alves Y May De Mio, 2008).

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Mucho se ha estudiado el efecto de la nutrición de las plantas sobre su sanidad. En este sentido, es sabido que excesos o deficiencias en los contenidos de determinados nutrientes repercuten en los aspectos fitosanitarios. El desarrollo y prosperidad de ciertas enfermedades dependen de la interacción entre tres factores: el hospedero (planta), el patógeno y el ambiente. La fertilización produce cambios en el hospedero que pueden hacerlo más resistente o susceptible a los diferentes patógenos. Paralelamente, la nutrición puede determinar cambios en el ambiente, dados por el mayor o menor crecimiento de los cultivos. Uno de los ejemplos más conocidos es la influencia de los niveles de fertilización nitrogenada en la Fito sanidad de determinados cultivos (Lim y Byeongjin, 2003).

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3. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1. Ubicación

La presente investigación se realizó en la Granja Experimental Tumbaco del Instituto Nacional de Investigaciones Agropecuarias (INIAP) (Cuadro 1), en el lote establecido de durazno variedad Diamante de 10 años de plantación, entre los meses de abril a agosto del 2016.

Cuadro 1. Ubicación del sitio experimental

Provincia Pichincha

Cantón Quito

Parroquia Tumbaco

Sector INIAP Granja experimental Tumbaco

Altitud 2348 m.s.n.m.

Latitud 00° 13' 1,22"S

Longitud 78° 24' 47,69"O.

3.2. Características agroclimáticas. Las características agroclimáticas de la Granja Experimental de Tumbaco del INIAP se encuentran descritas en el siguiente (Cuadro 2). Cuadro 2. Características agroclimáticas

3.3. Georreferenciación La información obtenida referente a los sistemas tróficos circundantes a las parcelas experimentales en durazno (Var. Diamante) de la granja de Tumbaco INIAP, se realizó con la ayuda de un GPS, identificando cada zona potencial para el estudio.

Temperatura promedio anual (°C) 16,30

Precipitación promedio anual (mm.) 870,30

Humedad relativa promedio anual (%) 70,86

Heliofania (horas.luz-1) 171,70

Velocidad de viento (m/s-1) 7,58

tipo de suelo Franco arenoso

Pendiente (%) Inferior a 5

Sistema de riego Inundación

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3.4. Elaboración del croquis de la investigación Mediante la herramienta informática de Google earth se procedió a ubicar a la plantación de durazno de la Granja Experimental del INIAP en Tumbaco. Con el programa SASPlanet se descargó la imagen satelital para la obtención de un croquis de la plantación (Gráfico 1), identificando en que etapas fenológicas se encuentran y el registro de los árboles con información básica para la ejecución del experimento en el programa ArcGis 10.3.

Gráfico 1. Localización geográfica, mediante imagen satelital, de los lotes de durazno en la Granja Experimental del INIAP en (Tumbaco-Pichincha)

3.5. Colecta de muestras e identificación

Las muestras se colectaron al azar dentro del sitio experimental del cultivo de durazno donde se presentó expresión sintomatológica de M. fructicola. Las muestras de frutos se transportaron en bolsas de plástico al laboratorio de la Granja Experimental INIAP, para su evaluación e identificación.

3.6. Materiales 3.6.1. Material vegetal Árboles de duraznero de 15 años variedad ¨Diamante¨ en etapa fenológica de latencia, después de agostamiento, con un sistema de plantación Tres bolillos y Marco real

3.6.2. Material de campo - Etiquetas de identificación - Rótulos - Tijeras de podar Felco F-7 - Bomba de fumigar tipo mochila de 20 L. marca Bp - fosfito de potasio (FosCrop-K®) - Bacillus subtilis (MildOut®) - Carbendazim (Magnific®) - Urea (46-0-0) - Sulfato de potasio y magnesio (KMag)

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- Fundas de papel de 15x20 cm. - Plástico de invernadero Agroplast N. calibre 6, de 9 m. - Azadón - Rastrillo - Pala plana - Libreta de campo hojas INEN tamaño A4 - Cámara Fotográfica NIKON D5200 - Laptop DELL XPS13 - GPS Garmin eTrex 30

3.6.3. Equipos y materiales de laboratorio

- Cámara de flujo laminar BioChemGARD Modelo EG-4252 - Incubadora Memmert 100-800 - Hipoclorito de sodio al 6% - Cajas Petri® de plástico de 250 mL. - Bisturí Bioquip Nº 15 - Agua destilada 1 N. - Autoclave All American Modelo 75X - Pizeta de 500 mL. - Sacabocados - Microscopio óptico Olympus BX41 - DB DifcoTM PDA - DB DifcoTM Potato Dextrose Broth - Safranina X 250ml colorante Gram - Lugol Gram X 500 mL. - Violeta de Genciana Supramed 60mL. - Agua Oxigenada - Vasos de precipitación de 500 mL. PYREX - Asa bacteriológica tipo anillo de 1/1000 3 mm.

3.7. Métodos 3.7.1. Fase de laboratorio

3.7.1.1. Aislamiento e identificación de Monilinia fructicola.

Para aislar M. fructicola, se frotarón los frutos colectados con agua destilada estéril. Con un Bisturí Bioquip Nº 15, se cortó el área semi-afectada del fruto para obtener pequeños tejidos afectados y sanos (0,2 x 0,4 cm.); se sumergieron durante 2 minutos las secciones en alcohol al 96% en un plato

Petri®. Se lavarón las secciones en agua destilada estéril, se colocaron las secciones sobre un papel toalla estéril; con las pinzas estériles sumergimos en el medio de cultivo PDA; la parte afectada de cada sección, trasladamos los aislamientos a una incubadora regulada a 27 °C y permanecieron hasta que aparezca el micelio y conidios del hongo. Identificamos el hongo en base de sus características morfológicas, debido a que éstos tenían características que correspondían con la descripción presentada por las claves taxonómicas (Streets, 1982 y EPPO, 2009). De las colonias del hongo desarrollado se raspó el micelio. Un fruto sano se lavó con agua estéril y se desinfectó con alcohol al 96%, luego con palillos ya previamente con el micelio del hongo lo incrustamos y se lo dejo en una bolsa de polietileno estéril conteniendo un papel toalla humedecido con agua destilada estéril; se selló la funda y la dejamos reposar en una parte oscura. Se realizó plaqueamiento para las muestras de estructuras y se conservó el inoculo primario en aceite mineral.

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3.7.1.2. Aislamiento e identificación de Bacillus subtilis

Se procedió a tomar una muestra de 5 mL de producto comercial en un tubo de ensayo estéril, se sembró en medio PDA, 1000 µL del producto que contiene esporas de B. subtilis con una concentración de 2 x 1010 UFC.ml-1 y se incubó durante 72 h. a 30 ± 1 °C con el objetivo de realizar pruebas bioquímicas que comprueben la presencia de la bacteria en el producto comercial. - Para la realización de la prueba de tinción Gram se procedió con una muestra de cepa de B.

subtilis, un frotis con un asa bacteriológica previamente flameada y enfriada en la caja Petri®, esta muestra se colocó en un cubreobjetos con una gota de agua estéril. Se colocó Violeta de Genciana, por un minuto y se lavó la placa, para aplicar lugol por un minuto, se lavó con alcohol al 50%, acetona al 50%, para colocar Safranina en la placa por un minuto. Se lavó y esperó a secar la placa al ambiente. Para la observación con el lente de 100X, donde se aplicó una gota de aceite de inmersión, se observó, clasificó y determinó en el microscopio.

- Para la realización de la prueba de Lugol se procedió a tomar de la cepa de B. subtilis una

muestra en la que se colocó el reactivo de Lugol en toda la caja Petri®, durante 72 h. a 30± 1°C, para observar su reacción.

- Para la realización de la prueba de la Catalasa se procedió a abrir una caja Petri® con la cepa de

B. subtilis y se aplicó agua oxigenada, para reportar su reacción. 3.7.1.3. Bioensayos de la enfermedad

En un plato Petri® con PDA, se colocaron las flores completas colectadas de cada tratamiento. Se evaluó la presencia de M. fructicola en medio de cultivo PDA que exprese signos potenciados. Cuando el patógeno se identificó en el medio de cultivo con flores completas. Se analizó en que estructuras florales existe la presencia del patógeno, separando las estructuras florales y colocando

en un plato Petri® con PDA para la identificación en qué estructura floral el patógeno se encuentra en forma sintomática y asintomática.

Para el análisis de lenticelas se colocó en un plato Petri® con PDA. De los ocho tratamientos, se evaluó la presencia de M. fructicola. Para obtener el resultado de presencia o ausencia del patógeno en lenticelas se dio como resultado positivo o negativo por expresión y cualificación de signos. Para el análisis de M. fructicola en frutos en pos cosecha se tomó de cada tratamiento una muestra de 5 frutos de durazno. Se midió en centímetros el crecimiento de la enfermedad de la parte polar y ecuatorial, se evaluó 9 días consecutivos a partir de la cosecha, con un intervalo de 3 días. Se realizó un promedio de los 5 frutos al final de los 9 días de la toma de datos.

3.7.2. Fase de campo 3.7.2.1. Selección y división de las etapas fenológicas Obtenida la distribución de la plantación, con la información de las zonas potenciales para el estudio, se procedió a seleccionar los árboles que se encontraban en una etapa fenológica de latencia, después del agostamiento, los cuales tienen un promedio de 2,5m. de altura, para lo cual se ha dividido los árboles en tres secciones: tercio bajo, medio y alto a un promedio de 0,85 m. para cada tercio, en los diferentes tratamientos. Para ello se registraron un total de 256 árboles para todos los tratamiento y repeticiones (Gráfico 2).

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R I R II

T8 T7 T6 T5

T6 T8 T7 T5

x Xx xx xx xx x x xx xx xx xx x

x Xx xx xx xx x x xx xx xx xx x

x Xx xx xx xx x x xx xx xx xx x

x Xx xx xx xx x x xx xx xx xx x

x Xx xx xx xx x

x xx xx xx xx x

x Xx xx xx xx x x xx xx xx xx x

T4 T3 T2 T1 T1 T3 T5 T4

R III

R IV

T1 T2 T3 T4 T1 T3 T2 T4

x Xx xx xx xx x x xx xx xx xx x

x Xx xx xx xx x x xx xx xx xx x

x Xx xx xx xx x x xx xx xx xx x

x Xx xx xx xx x x xx xx xx xx x

x Xx xx xx xx x x xx xx xx xx x

x Xx xx xx xx x x xx xx xx xx x

T6 T7 T8 T5 T5 T8 T7 T6

Gráfico 2. Distribución de los tratamientos y las repeticiones en el sitio experimental.

3.7.2.2. Aplicaciones de los productos fungistáticos

Una vez seleccionados los árboles se procedió a la aplicación de sulfato de cobre para la defoliación de los árboles seleccionados y así comenzar todos uniformes, después de 8 días se aplicó DORMEX para la inducción de horas frio, tomando en cuenta que para ello se debe eliminar el efecto borde. Después de 15 días se realizó la primera aplicación de los productos fungistáticos, en los que se emplearon dosis de 20 mL. en 20 L. de agua para Carbendazim, para fosfito de potasio se utilizó la dosis de 20 mL en 20 L. de agua y para B. subtilis se utilizó la dosis de 25 mL. en 20 L de agua; también se debe tomar en cuenta que durante las aplicaciones los árboles seleccionados deben estar rodeados con barreras físicas para impedir error por aplicaciones. Las aplicaciones se efectuaron cada 20 días hasta llegar a la cosecha.

3.7.2.3. Registro de datos

Después de las aplicaciones se tomaron los datos de las variables de esta investigación con frecuencia de 10(±) 2 días, en la que se utilizaron matrices con la codificación de los tratamientos, para recolectar la respectiva información.

3.8. Factores en estudio

Para esta investigación se plantearon dos factores en estudio: Tipo de inóculo de patógeno en el Fitoplano y Productos fungistáticos.

L

O

T

E

1

L

O

T

E

2

L

O

T

E

3

L

O

T

E

4

15

3.8.1. Tipo de inóculo patogénico en el Fitoplano Se seleccionaron dos tipos de inóculos patogénicos y se colocaron en los tratamientos asignados según correspondan: i1= inóculo de Monilinia i2= (inóculo de Monilinia + roya)

3.8.2. Productos fungistáticos

Los productos seleccionados fueron aplicados a todas las etapas fenológicas del cultivo con diferente mecanismo de acción y la adición del testigo: p1=fosfito de potasio p2= Bacillus subtilis p3= Carbendazim p0= Testigo

3.9. Tratamientos Cuadro 3. Tratamientos para el control de M. fructicola

Tratamiento Código Descripción

T1 i1p1 Inóculo Monilinia + fosfito de potasio

T2 i1p2 Inóculo Monilinia + Bacillus subtilis

T3 i1p3 Inóculo Monilinia + Carbendazim

T4 i2p1 (Inoc. Monilinia + roya) + fosfito de potasio

T5 i2p2 (Inoc. Monilinia + roya) + Bacillus subtilis

T6 i2p3 (Inoc. Monilinia + roya) + Carbendazim

T7 i1p0 Inóculo Monilinia + Testigo

T8 i2p0 (Inoc. Monilinia + roya) + Testigo

3.10. Unidad Experimental

La unidad experimental fueron los mecanismos de acción de diferentes productos fungistáticos que se encuentran en el mercado para el control de M. fructicola en durazno para cualquier etapa fenológica del cultivo. Área neta del experimento: 1024 m2. Área total del experimento: 4096 m2. Distancia entre arboles: 3 m. x 4 m. y 4 m. x 4 m. Número de árboles por unidad experimental: 2 arboles

3.11. Variables

- Incidencia de infección de Monilinia fructicola en frutos de durazno Esta dado por el porcentaje de frutos infectados con M. fructicola en, comparación con número total de frutos (12 frutos x planta) de acuerdo con la ecuación (Townsend y Heuberger, 1945).

%𝐼𝑁𝐶 =𝑁° 𝑑𝑒 𝑓𝑟𝑢𝑡𝑜𝑠 𝑖𝑛𝑓𝑒𝑐𝑡𝑎𝑑𝑜𝑠

𝑁° 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑓𝑟𝑢𝑡𝑜𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠

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- Severidad de la infección de Monilinia fructicola en frutos de durazno

Al momento de la cosecha se clasificarán los frutos de acuerdo a los síntomas que se presentarán Para realizar las evaluaciones se utilizó la escala de clasificación de síntomas (Cuadro 4).

Cuadro 4. Escala de clasificación de síntomas de M. fructicola

VALOR

INTERNA

(% AFECTADO)

EXTERNA

(SINTOMAS)

FOTO

0

0

Fruto sano

1

25

Presencia de manchas

2

50 Presencia de anillos

concéntricos

3

75

Presencia de manchas

concéntricas que cubre hasta la

cuarta parte de la fruta

17

4

>76

Presencia de micelio que cubre más de la cuarta parte de la fruta

- Eficacia de los tratamientos con respecto al testigo Porcentaje de eficacia Abbott Determina la eficacia de los tratamientos con respecto al testigo sin protección química (Abbott,1925.). Eficacia Abbott = % Daño Testigo Abs - % Daño Trat x 100

% Daño Testigo Abs El método Townsend / Abbott es preciso y se recomienda debido a lecturas visuales

- Área bajo la curva de progreso de la enfermedad (AUDPC) Los valores de incidencia de infección fueron integrados por el modelo trapezoidal (Kowata et al., 2012), calculando así el valor del área bajo la curva de progreso de la enfermedad (AUDPC) Los valores se transformaron en el área debajo del efecto de la curva de progreso (AACPI)para incidencia de infección (AACPI) de acuerdo con la siguiente ecuación:

Dónde: yi + y1 y: dos valores de lecturas consecutivas la incidencia de infección. ti + 1- ti: fechas de las dos lecturas.

3.12. Esquema del análisis de la varianza

Cuadro 5. Esquema para el ANOVA

FUENTE DE VARIACION GRADOS DE LIBERTAD

TOTAL 31

BLOQUES 3

TRATAMIENTOS 7

Factor A (inóculo) 1

Factor B (productos) 3

A x B 3

Uniforme 1

Binomial 1

Polinomial 1

ERROR 21

18

3.13. Análisis funcional

De establecerse diferencias estadísticas en los tratamientos se procedió a realizar las pruebas de significación estadística HSD Tukey al 5 % de significancia. Para la variable de severidad de infección se estableció la Prueba de Friedman al 95% de nivel de

confianza. 3.14. Diseño del proyecto

El diseño para esta investigación fue un Diseño de bloques completos al azar (DBCA), con arreglo factorial de (2 x 4), con 4 repeticiones.

19

4. Resultados y Discusión 4.1. Identificación de signos de Monilinia fructicola

Previo el análisis de la varianza para las variables en estudio se realizaron pruebas de normalidad, homogeneidad y homocedasticidad (Anexo 8). Para el caso de M. fructicola, los síntomas observados en la fruta fueron, pudrición morena, la misma que consiste en una pudrición firme, de color marrón que avanza rápidamente por todo el fruto. Morfológicamente, los conidios observados tuvieron la misma forma y estructura con un promedio de 18,23 µm de largo, y un ancho de 14,53 µm (Gráfico 3); estos valores son similares a los obtenidos por Phillips (1982), el cual reporta un rango promedio de 6-19 µm de largo y 14-28 µm de ancho; por otro lado, Wiley y Sons (2009) determinaron que M. fructicola tiene conidios en su mayoría de 17- 21 µm de largo y 10-14 µm de ancho.

Gráfico 3. A) Infección de M. fructicola en el fruto de P. persica en el tercio medio del árbol localizado en la Granja Experimental del INIAP en Tumbaco. B) Fruto infectado con M. fructicola, del tercio medio del árbol con severidad 3, proveniente de la Granja Experimental. C) M. fructicola en PDA del tercio medio del árbol localizado en la Granja Experimental del INIAP en Tumbaco. D) Conidios de M. fructicola (100X)

4.2. Incidencia de infección de Monilinia fructicola en frutos de durazno 4.2.1. Tercio bajo del árbol

En el análisis de varianza (Cuadro 6), para las variables de incidencia de infección de M. fructicola en durazno, en el tercio bajo del árbol, evaluadas en ocho lecturas consecutivas. Se observó que el coeficiente de variación es 18,65%; mientras que el promedio general es de 43,64%; por otro lado, a los 20 días después de la aplicación, se reflejaron diferencias altamente significativas para: inóculo y producto; con un promedio general de 31,25% y un coeficiente de variación del 32,66 %; a los 32 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: producto; con un promedio general de 37,5% y un coeficiente de variación del 27,22%; a los 40 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: producto; con un promedio general de

A

D C

B

20

43,75% y un coeficiente de variación del 23,33%; a los 58 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: producto y la interacción IxP; con un promedio general de 50% y un coeficiente de variación del 21,82%; a los 69 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: producto y la interacción IxP; con un promedio general de 51,56% y un coeficiente de variación del 17,94%; a los 80 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: inóculo y producto; con un promedio general de 65,63% y un coeficiente de variación del 15,55%; a los 90 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: inóculo y producto con un promedio general de 71,88% y un coeficiente de variación del 10,73%. De acuerdo a los rangos de significación estadística utilizando Tukey al 5% de significancia para los inóculos Monilinia Vs. Monilinia + roya en durazno en el tercio bajo del árbol (Cuadro 7), se apreció que a los 80 días después de la aplicación, se identificaron dos rangos de significación estadística obteniendo la menor incidencia de infección el inoculo de Monilinia con un promedio de 59,38% mientras que el inoculo Monilinia + roya presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 71,88%; a los 90 días después de la aplicación, se identificaron dos rangos de significación estadística obteniendo la menor incidencia de infección el inoculo de Monilinia con un promedio de 65,63% mientras que el inoculo Monilinia + roya presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 78,13% De acuerdo a los rangos de significación estadística utilizando Tukey al 5% de significancia para los productos Carbendazim, B. subtilis, fosfito de potasio y el testigo en durazno, en el tercio bajo del árbol (Cuadro 8), se observó que a los 20 días después de la aplicación, se detectaron dos rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección los productos Carbendazim y B. subtilis con un promedio de 18,75% mientras fosfito de potasio y el testigo presentaron mayor incidencia de infección con un promedio de 37,5% y 50% respectivamente. A los 32 días después de la aplicación, se detectó dos rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección los productos Carbendazim, B. subtilis y fosfito de potasio con un promedio de 25%, 31,25% y 37,5% respectivamente; mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 56,25%. A los 40 días después de la aplicación, se detectó tres rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección el producto de Carbendazim con un promedio de 31,25% mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 56,25%. A los 58 días después de la aplicación, se detectó tres rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección el producto de Carbendazim con un promedio de 31,25% mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 68.75%. A los 69 días después de la aplicación, se detectó tres rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección el producto de Carbendazim con un promedio de 37,5% mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 68,75%. A los 80 días después de la aplicación, se detectó dos rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección el producto de Carbendazim con un promedio de 43,75% mientras que los tratamientos B. subtilis, fosfito de potasio y testigo presentaron mayor incidencia de infección con un promedio de 68,75%, 68,75% y 81,25%. A los 90 días después de la aplicación, se detectó cuatro rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección con el producto Carbendazim con un promedio de 43,75% mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 93,75%. De acuerdo a los rangos de significación estadística utilizando Tukey al 5% de significancia para la interacción Producto Vs. Inoculo, para los ocho tratamientos de incidencia de infección de M. fructicola en durazno en el tercio bajo del árbol (Cuadro 9), se observó que a los 20 días después de la aplicación existió tres rangos de significación estadística, teniendo la menor incidencia de infección los tratamientos Monilinia +Bacillus, Monilinia + Carbendazim con un promedio de 12,5%.

21

A los 32 días después de la aplicación, existió tres rangos de significación estadística, presentándose la menor incidencia de infección los tratamientos Monilinia +Bacillus, Monilinia + Carbendazim y (Monilinia + roya)+Carbendazim con un promedio de 25%. Desde los 40, 58, 69, 80 Y 90 días después de la aplicación, se encontraron de tres a cinco rangos de significación estadística donde se obtuvo la menor incidencia de infección el tratamiento de Monilinia + Carbendazim con promedios de: 25%, 25%, 25%, 37,5% y 37,5% respectivamente; considerando que los testigos presentaron daños superiores al 70% hasta el final de la investigación. En las comparaciones ortogonales realizadas para la incidencia de infección de M. fructicola después de la aplicación de los productos fungistáticos, se identificó que se ajusta a una distribución Uniforme - Lineal (Gráfico 5); debido a que la fuente primaria de inoculo de M. fructicola se encuentran en momias, pedúnculos, brotes y ramas que no se retiran de la plantación (Smith et al., 1992). El micelio sobrevive en estos restos y cuando existen condiciones adecuadas, producen conidias e infectan a las flores. El desarrollo óptimo de M. fructicola es de 15- 25°C (Xu y Robinson, 2000); este rango de temperaturas son similares a las condiciones dadas en las evaluaciones. El potencial de infección se incrementa con la maduración del fruto; otros factores que intervienen en la infección son la luz, humedad relativa alta, circulación del aire y la fertilidad de la planta (Sarasola y Rocca, 1975). La infección de flores dependerá de la humedad y la temperatura; la esporulación requiere 18h a 10°C y disminuye a 5h con 25°C mientras que los periodos largos de sequía, la inhiben (Ogawa et al., 1995) En nuestro estudio al igual que otros Carbendazim de acuerdo a su modo de acción, está basado en sus efectos sobre la integridad de la tubulina, en la formación del huso y en la segregación de los cromosomas en la división celular. Controla una gran variedad de pústulas y manchas foliares, tizones, pudriciones, roñas y enfermedades de semillas, (Agrios, 2005).

Por otro en los ensayos realizados por Chen et al.,(2014); observaron que existen resultados de alta sensibilidad de M. fructicola frente a Carbendazim; también obtuvieron una eficiencia del 50%. En la presente investigación los diferentes tratamientos experimentaron un incremento de incidencia de infección a partir de los 32 días después de la aplicación de los productos fungistático, donde se indica que las respuesta Monilinia + Carbendazim mantuvo el porcentaje más bajo con 37,50%. Chen et al.,(2014) mencionan que existe una resistencia a varios fungicidas por el motivo de la capacidad de adaptación del patógeno a los productos, por lo que recomiendan realizar una mezcla de fungicidas con otros productos como Propiconazol para que así pueda tener el potencial de control frente a la enfermedad, estos resultados son similares a los obtenidos en esta investigación. M. fructicola se sabe que es una de las enfermedades más destructivas de frutas de hueso de todo el mundo y una de las especies de hongos que muestran alta resistencia al fungicida bencimidazol (Zhonghua et al., 2003 ). Eldon, (2000) Indico que los problemas con la resistencia podrían resultar por el uso exclusivo de Benomyl durante toda la temporada o el uso sólo durante la floración y la cosecha.

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Cuadro 6. Análisis de varianza para incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio bajo del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016 F de V GL CUADRADO MEDIO

20 Díasi 32 Díasii 40 Díasiii 58 DíasiV 69 DíasV 80 DíasVi 90 DíasVii Promedio general

Total 31

I Inóculo 1 312,5** 0 ns 0 ns 0 ns 78,13 ns 1250** 1250**

P Producto 3 1875** 1458,33** 1041,67** 2083,33** 1536,46** 1979,17** 3645,83**

IxP 3 104,17 ns 208,33 ns 208,33 ns 416,67** 703,13** 0 ns 0 ns

Uniforme 1 10,92 ns 11,01 ns 11,01ns 31,22ns 109,47ns 0ns 0ns

Binomial 1 68,75* 18,75 ns 18,75 ns 152,10** 233,33** 0ns 0ns

Polinomial 1 24,50* 178,57** 178,57** 233,35** 360,33** 0ns 0ns

Rep 3 104,17 ns 104,17 ns 104,17 ns 0 ns 26,04 ns 104,17 ns 416,67 ns

Error 21 104,17 104,17 104,17 119,05 85,57 104,17 59,52

Promedio (%) 31,25 37,50 43,75 50,00 51,56 65,63 71,88 43,94

CV (%) 32,66 27,22 23,33 21,82 17,94 15,55 10,73 18,65

i= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 19 de mayo del 2016 ii= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 2 de junio del 2016 iii= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 10 de junio del 2016 iv= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 24 de junio del 2016 v= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 5 de julio del 2016 vi= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 16 de julio del 2016 vii= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 29 de julio del 2016

Cuadro 7. Pruebas de Tukey al 5% de significancia para los inóculos de Monilinia y Monilinia +roya

en la variable incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio bajo del

árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Cuadro 8. Pruebas de Tukey al 5% de significancia para los productos en la variable incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio bajo del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Detalle 20 Días 32 Días 40 Días 58 Días 69 Días 80 Días 90 Días

Monilinia 28,13 a 37,5 a 43,75 a 50,00 a 50,00 a 59,38 a 65,63 a

Monilinia +roya 34,38 a 37,5 a 43,75 a 50,00 a 53,13 a 71,88 b 78,13 b

Detalle 20 Días 32 Días 40 Días 58 Días 69 Días 80 Días 90 Días

Carbendazim 18,75 a 25,00 a 31,25 a 31,25 a 37,50 a 43,75 a 43,75 a

B. subtilis 18,75 a 31,25 a 37,50 ab 43,75 ab 43,75 ab 68,75 b 68,75 b

fosfito de potasio 37,50 b 37,50 a 50,00 bc 56,25 bc 56,25 bc 68,75 b 81,25 c

testigo 50,00 b 56,25 b 56,25 c 68,75 c 68,75 c 81,25 b 93,75 d

23

Cuadro 9. Pruebas de Tukey al 5% de significancia para incidencia de infección de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio bajo del árbol

Gráfico 4 Incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio bajo del árbol

atreves del tiempo. Granja Experimental Tumbaco 2016

Gráfico 5 Número de conidias en la evaluación de M. fructicola para comparaciones ortogonales consecutivas. A) Tercio bajo del árbol B) Tercio medio del árbol C) Tercio alto del árbol

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

10 20 30 40 50 60 70 80 90

% IN

CID

ENC

IA D

E IN

FEC

CIÓ

N

DIAS A LA TOMA DE DATOS

(Monilla + Roya) + B subtilis (Monilla + Roya) + Carbendazim (Monilla + Roya) + Fosfito potasio

(Monilla + Roya) + testigo Monilla+ B subtilis Monilla+ Carbendazim

Monilla+ fosfito Monilla+ testigo

Trat Detalle 20 Días 32 Días 40 Días 58 Días 69 Días 80 Días 90 Días

1 Monilinia +fosfito 37,50 bc 37,50 ab 50,00 bc 62,50 bc 62,50 cd 62,50 bc 75,00 cd

2 Monilinia + B. subtilis 12,50 a 25,00 a 37,50 ab 37,50 ab 37,50 ab 62,50 bc 62,50 bc

3 Monilinia + Carbendazim 12,50 a 25,00 a 25,00 a 25,00 a 25,00 a 37,50 a 37,50 a

4 ( Monilinia +roya)+fosfito 37,50 bc 37,50 ab 50,00 bc 50,00 abc 50,00 bc 75,00 cd 87,50 de

5 ( Monilinia +roya)+ B. subtilis 25,00 ab 37,50 ab 37,50 ab 50,00 abc 50,00 bc 75,00 cd 75,00 cd

6 ( Monilinia +roya)+Carbendazim 25,00 ab 25,00 a 37,50 ab 37,50 ab 50,00 bc 50,00 ab 50,00 ab

7 Monilinia + testigo 50,00 c 62,50 c 62,50 c 62,50 bc 75,00 c 75,00 cd 87,50 de

8 ( Monilinia +roya)+testigo 50,00 c 50,00 bc 50,00 bc 75,00 c 62,50 cd 87,50 d 100,00 e

A B C

24

4.2.2. Tercio medio del árbol

En el análisis de varianza (Cuadro 10), para las variables de incidencia de infección de M. fructicola en durazno en el tercio medio del árbol, evaluadas en ocho lecturas consecutivas. Se observó que el coeficiente de variación es del 21,76%; mientras que el promedio general es de 56,47%; por otro lado, a los 20 días después de la aplicación, Se reflejaron diferencias altamente significativas para: inóculo y producto, con un promedio general de 35,16% y un coeficiente de variación del 32,57 %. A los 32 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: inóculo y producto con un promedio general de 46,09% y un coeficiente de variación del 28,15%. A los 40 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: inóculo y producto con un promedio general de 52,34% y un coeficiente de variación del 23,67%. A los 58 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: inóculo y producto con un promedio general de 57,81% y un coeficiente de variación del 18,58%. A los 69 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: inóculo y producto con un promedio general de 59,38% y un coeficiente de variación del 20,03%. A los 80 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: inóculo y producto con un promedio general de 68,75% y un coeficiente de variación del 18,18%. A los 90 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: inóculo y la producto interacción IxP con un promedio general de 75,78% y un coeficiente de variación del 11,17%. De acuerdo a los rangos de significación estadística utilizando Tukey al 5% de significancia para los inóculos Monilinia Vs. Monilinia + roya en durazno en el tercio medio del árbol (Cuadro 11), se observó que a los 20 días después de la aplicación, se detectaron menor incidencia de infección en el inoculo de Monilinia con un promedio de 28,13% mientras que el inoculo Monilinia + roya presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 42,19%. A los 32 días después de la aplicación, se detectó menor incidencia de infección en el inoculo de Monilinia con un promedio de 37,5% mientras que el inoculo Monilinia + roya presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 54,69%. A los 40 días después de la aplicación, se detectó menor incidencia de infección en el inoculo de Monilinia con un promedio de 46,88% mientras que el inoculo Monilinia + roya presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 57,81%. A los 58 días después de la aplicación, se detectó menor incidencia de infección en el inoculo de Monilinia con un promedio de 53,13% mientras que el inoculo Monilinia + roya presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 62,5%. A los 69 días después de la aplicación, se detectó menor incidencia de infección en el inoculo de Monilinia con un promedio de 54,69% mientras que el inoculo Monilinia + roya presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 64,06%. A los 80 días después de la aplicación, se detectó menor incidencia de infección en el inoculo de Monilinia con un promedio de 62,5% mientras que el inoculo Monilinia +roya presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 75%. A los 90 días después de la aplicación, se detectó menor incidencia de infección en el inoculo de Monilinia con un promedio de 67,19% mientras que el inoculo Monilinia + roya presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 84,38%. De acuerdo a los rangos de significación estadística utilizando Tukey al 5% de significancia para los productos Carbendazim, B. subtilis, fosfito de potasio y el testigo en durazno en el tercio medio del árbol (Cuadro 12), se observó que a los 20 días después de la aplicación existió dos rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección los productos Carbendazim y B. subtilis con un promedio de 25% y 28,13% respectivamente mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 50%. A los 32 días después de la aplicación, existió dos rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección los productos Carbendazim y B. subtilis con un promedio de 31,25% y 43,75% respectivamente, mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 62,5%. A los 40 días después de la aplicación, existió tres rangos de significación estadística obteniéndose la menor

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incidencia de infección el producto de Carbendazim con un promedio de 34,38% mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 68,75%. A los 58 días después de la aplicación, existió dos rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección el producto de Carbendazim con un promedio de 43,75% mientras que fosfito de potasio y el testigo presentaron mayor incidencia de infección con un promedio de 62,5% y 68,75% respectivamente. A los 69 días después de la aplicación, existió dos rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección el producto de Carbendazim con un promedio de 43,75% mientras que B. subtilis, fosfito de potasio y el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 62,5%, 62,5% y 68,75% respectivamente. A los 80 días después de la aplicación, existió tres rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección el producto de Carbendazim con un promedio de 43,75% mientras que fosfito de potasio y el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 81,25% y 87,5% respectivamente. A los 90 días después de la aplicación, existió tres rangos de significación estadística obteniéndose la menor incidencia de infección el producto de Carbendazim con un promedio de 53,13% mientras que fosfito de potasio y el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 87,5% y 93,75% respectivamente. De acuerdo a los rangos de significación estadística utilizando Tukey al 5% de significancia para la interacción Producto Vs. Inoculo, para los ocho tratamientos de incidencia de infección de infección de M. fructicola en durazno en el tercio medio del árbol (Cuadro 13), se observó que a los 20 días después de la aplicación, existió dos rangos de significación estadística, ubicándose con menor incidencia de infección a la enfermedad los tratamientos Monilinia +Bacillus, Monilinia + fosfito, Monilinia + Carbendazim y (Monilinia + roya)+Carbendazim con un promedio de 25%; desde los 32, 40, 58, 69, 80 y 90 días después de la aplicación se encontraron de tres a cinco rangos de significación estadística donde se obtuvo la menor incidencia de infección el tratamiento de Monilinia + Carbendazim con promedios de: 25%, 25%, 37,5%, 37,5%, 37,5% y 37,5% respectivamente; los testigos presentaron daños superiores al 70% hasta el final de la investigación. En las comparaciones ortogonales realizadas para la incidencia de infección de M. fructicola después de la aplicación de los productos fungistáticos, se identificó que se ajusta a una distribución Uniforme – Lineal (Grafico 5), debido a que M. fructicola es un hongo que sobrevive en los frutos momificados ramas y llagas de ramas infectadas (Hong y Michailides 1999), y a su vez, sirven como fuentes de inóculo para la pudrición de flores y frutos del siguiente ciclo. Xu y Robinson, (2000) mencionan que el grado de incidencia de infección aumenta con las heridas en el fruto y maduración del mismo. El factor más importante para que de la infección es la presencia de una elevada humedad relativa, con una temperatura de 20-25°C; solo son necesarios cinco horas para que se produzca la infección en la flor, mientras que en frutos maduros, a 23°C con 3 horas ya existe presencia de infección (Biggs y Northover, 1988; Luo et al., 2001). Estos resultados confirman lo realizado por Chen et al.,(2013), quienes determinan que con Carbendazim existe un fuerte control en las frutas tratadas, obteniendo una eficacia de control del 90% en el experimento; mientras que en los otros tratamientos realizados obtienen una incidencia de enfermedad mayores al 70%, se identificaron en el experimento varios niveles de sensibilidad del patógeno para varios fungicidas; en la presente investigación los diferentes tratamientos experimentaron un incremento de incidencia de infección a partir de los 32 días después de la aplicación de los productos fungistático, donde se indica que las respuesta Monilinia + Carbendazim mantuvo el porcentaje más bajo con 37,50%, se determinó que la mejor respuesta fue un benzimidazol por el efecto de acción el cual inhiben la síntesis de tubulina, a comparación de los otros fungicidas obteniendo mayor incidencia a la enfermedad el cual uno de ellos fue Propiconazol, con esto se confirma lo expuesto por Kowatta et al., (2012) quienes obtienen resultados similares a los conseguidos actualmente en el experimento. Recientemente, en Corea, la distribución de M.

26

fructicola que causa la podredumbre marrón en durazno registro resistencia a carbendazim se ha informado según (Lim y Cha, 2003). Cuadro 10. Análisis de la varianza para incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio medio del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016 F de V GL CUADRADO MEDIO

20 Díasi 32 Díasii 40 Díasiii 58 Díasiv 69 Díasv 80 Díasvi 90 Díasvii Promedio general

Total 31

I Inóculo 1 1582,03** 2363,28** 957,03** 703,13** 703,13** 1250** 2363,28**

P Producto 3 1009,11** 1321,61** 1634,11** 911,46** 937,5** 3125** 2727,86**

IxP 3 332,03 ns 71,61 ns 123,70 ns 78,13 ns 78,13 ns 208,33 ns 175,78**

Dis. Uniforme 1 68,75ns 4,95ns 13,02ns 4,06ns 4,06ns 83,33* 30,73*

Dis. Binomial 1 152,61** 24,26ns 37,96ns 21,86ns 21,86ns 75,20* 89,09*

Dis. Polinomial 1 110,67** 42,40* 72,72* 52,21* 52,21* 49,80* 55,96*

Rep 3 71,61 ns 19,53 ns 332,03 ns 234,38 ns 156,25 ns 156,25 ns 592,45 ns

Error 21 131,14 168,34 153,46 115,33 141,37 156,25 71,61

Promedio (%) 35,16 46,09 52,34 57,81 59,38 68,75 75,78 56,47

CV (%) 32,57 28,15 23,67 18,58 20,03 18,18 11,17 21,76

i= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 19 de mayo del 2016 ii= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 2 de junio del 2016 iii= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 10 de junio del 2016 iv= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 24 de junio del 2016 v= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 5 de julio del 2016 vi= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 16 de julio del 2016 vii= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 29 de julio del 2016

Cuadro 11. Pruebas de Tukey al 5% de significancia para los inóculos de Monilinia y Monilinia +roya en la variable incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio medio del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Cuadro 12. Pruebas de Tukey al 5% de significancia para los productos en la variable incidencia de infección de infección de M. fructicola en el tercio medio del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Detalle 20 Días 32 Días 40 Días 58 Días 69 Días 80 Días 90 Días

Monilinia 28,13 a 37,50 a 46,88 a 53,13 a 54,69 a 62,50 a 67,19 a

Monilinia +roya 42,19 b 54,69 b 57,81 b 62,50 b 64,06 b 75,00 b 84,38 b

Detalle 20 Días 32 Días 40 Días 58 Días 69 Días 80 Días 90 Días

Carbendazim 25,00 a 31,25 a 34,38 a 43,75 a 43,75 a 43,75 a 53,13 a

B. subtilis 28,13 a 43,75 a 50,00 ab 56,25 ab 62,50 b 62,50 b 68,75 b

fosfito de potasio 37,50 ab 46,88 ab 56,25 bc 62,50 b 62,50 b 81,25 c 87,50 c

testigo 50,00 b 62,50 b 68,75 c 68,75 b 68,75 b 87,50 c 93,75 c

27

Cuadro 13. Pruebas de Tukey al 5% de significancia para incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio medio del árbol

Gráfico 6 Incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio medio del árbol atreves del tiempo. Granja Experimental Tumbaco 2016

4.2.3. Tercio alto del árbol

En el análisis de varianza (Cuadro 14), para la variable de incidencia de infección de M. fructicola en durazno, en el tercio alto del árbol, evaluadas en ocho lecturas, se observó que el coeficiente de variación es del 17,96% mientras que el promedio general es de 53,71%; por otro lado a los 20 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: producto con un promedio general de 32,81% y un coeficiente de variación del 45,15 %. A los 32 días después de la aplicación existió diferencias altamente significativas para: producto con un promedio general de 44,53% y un coeficiente de variación del 26,44%. A los 40 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: producto y a la interacción Inoculo por Producto (interacción IxP) con un promedio general de 58,59% y un coeficiente de variación del 17,80%. A los 58 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: inóculo,

0

20

40

60

80

100

120

10 20 30 40 50 60 70 80 90

% IN

CID

ENC

IA D

E IN

FEC

CIÓ

N

DÍAS A LA TOMA DE DATOS

(Monilla + Roya) + B subtilis (Monilla + Roya) + Carbendazim (Monilla + Roya) + Fosfito potasio

(Monilla + Roya) + testigo Monilla+ B subtilis Monilla+ Carbendazim

Monilla+ fosfito Monilla+ testigo

Trat Detalle 20 Días 32 Días 40 Días 58 Días 69 Días 80 Días 90 Días

1 Monilinia +fosfito 25,00 a 37,50 ab 50,00 abc 50,00 ab 56,25 ab 75,00 bcd 81,25 bcde

2 Monilinia+ B. subtilis 25,00 a 37,50 ab 50,00 abc 62,50 ab 62,50 ab 62,50 abc 62,50 b

3 Monilinia + Carbendazim 25,00 a 25,00 a 25,00 a 37,50 a 37,50 a 37,50 a 37,50 a

4 ( Monilinia +roya)+fosfito 31,25 a 56,25 bc 62,50 bc 62,50 ab 68,75 b 87,50 cd 93,75 de

5 ( Monilinia +roya)+ B. subtilis 50,00 ab 50,00 bc 50,00 abc 62,50 ab 62,50 ab 62,50 abc 75,00 bcd

6 ( Monilinia +roya)+Carbendazim 25,00 a 37,50 ab 43,75 ab 50,00 ab 50,00 ab 50,00 ab 68,75 bc

7 Monilinia + testigo 37,50 ab 50,00 bc 62,50 bc 62,50 ab 62,50 ab 75,00 bcd 87,50 cde

8 ( Monilinia +roya)+testigo 62,50 b 75,00 c 75,00 bc 75.00 b 75.00 b 100,00 d 100,00 e

28

producto y a la interacción (interacción IxP) con un promedio general de 61,72% y un coeficiente de variación del 16,90%. A los 69 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: producto con un promedio general de 68,75% y un coeficiente de variación del 14,85%. A los 80 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: inóculo, producto y a la interacción (interacción IxP), con un promedio general de 79,69% y un coeficiente de variación del 11,61%. A los 90 días después de la aplicación, existió diferencias altamente significativas para: inóculo, producto y a la interacción (interacción IxP) con un promedio general de 83,59% y un coeficiente de variación del 11,13%. De acuerdo a los rangos de significación estadística utilizando Tukey al 5% de significancia para los inóculos Monilinia Vs. Monilinia + roya en durazno en el tercio alto del árbol (Cuadro 15), existió dos rangos de significación estadística en las últimas cuatro lecturas de la investigación, a los 58 días después de la aplicación, existió menor incidencia de infección en el inoculo de Monilinia con un promedio de 56,25% mientras que el inoculo Monilinia + roya presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 67,19%. A los 80 días después de la aplicación, existió menor incidencia de infección en el inoculo de Monilinia con un promedio de 75% mientras que el inoculo Monilinia + roya presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 84,38%. A los 90 días después de la aplicación, existió menor incidencia de infección en el inoculo de Monilinia con un promedio de 79,69% mientras que el inoculo Monilinia + roya presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 87,5%. De acuerdo a los rangos de significación estadística utilizando Tukey al 5% de significancia para los productos Carbendazim, B. subtilis, fosfito de potasio y el testigo, en durazno en el tercio alto del árbol (Cuadro 16), se observó que a los 20 días después de la aplicación, se detectaron dos rangos de significación estadística obteniendo la menor incidencia de infección los productos Carbendazim, B. subtilis y fosfito de potasio con un promedio de 25%, 28,13% y 28,13% respectivamente mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 50%. A los 32 días después de la aplicación, se detectó dos rangos de significación estadística obteniendo la menor incidencia de infección el producto de Carbendazim y B. subtilis con un promedio de 25% y 34,38% respectivamente, mientras que fosfito de potasio y el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 56,25% y 62.5% respectivamente. A los 40 días después de la aplicación, se detectó tres rangos de significación estadística obteniendo la menor incidencia de infección el producto Carbendazim con un promedio de 37,5% mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 78,13%. A los 58 días después de la aplicación, se detectó tres rangos de significación estadística obteniendo la menor incidencia de infección el producto Carbendazim con un promedio de 37,5% mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 87,5%. A los 69 días después de la aplicación, se detectó tres rangos de significación estadística obteniendo la menor incidencia de infección el producto Carbendazim con un promedio de 50% mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 90,63%. A los 80 días después de la aplicación, se detectó tres rangos de significación estadística obteniendo la menor incidencia de infección el producto Carbendazim con un promedio de 62,5% mientras que el testigo presenta mayor incidencia de infección con un promedio de 100%. A los 90 días después de la aplicación, se detectó tres rangos de significación estadística obteniendo la menor incidencia de infección el producto Carbendazim con un promedio de 62,5% mientras que el testigo presentó mayor incidencia de infección con un promedio de 100%. De acuerdo a los rangos de significación estadística utilizando Tukey al 5% de significancia para la interacción Producto Vs. Inoculo, para las ocho lecturas consecutivas de la variable incidencia de infección de M. fructicola en durazno en el tercio alto del árbol (Cuadro 17), se apreció que a los 20 días después de la aplicación, existió dos rangos de significación estadística, teniendo la menor incidencia de infección los tratamientos Monilinia +Bacillus, Monilinia + fosfito, Monilinia +

29

Carbendazim y (Monilinia + roya)+Carbendazim con un promedio de 25% mientras que el tratamientos que presenta mayor incidencia de infección es Monilinia + testigo con un promedio de 62,5%. A los 32 días después de la aplicación, existió dos rangos de significación estadística, ubicándose con menor incidencia de infección a la enfermedad los tratamientos Monilinia + Carbendazim y (Monilinia + roya)+Carbendazim con un promedio de 25%. A los 40 días después de la aplicación, existió tres rangos de significación estadística, ubicándose con menor incidencia de infección a la enfermedad el tratamiento Monilinia + Carbendazim con un promedio de 25%. A los 58 días después de la aplicación, existió cuatro rangos de significación estadística, ubicándose con menor incidencia de infección a la enfermedad el tratamiento Monilinia + Carbendazim con un promedio de 25%. A los 69 días después de la aplicación, existió tres rangos de significación estadística, ubicándose como menor incidencia de infección a la enfermedad los tratamientos Monilinia + Carbendazim y (Monilinia + roya) + Carbendazim, con un promedio de 50% ambos. A los 80 días después de la aplicación, existió tres rangos de significación estadística, ubicándose con menor incidencia de infección a la enfermedad el tratamiento Monilinia + Carbendazim con un promedio de 50%. A los 90 días después de la aplicación, existió tres rangos de significación estadística, ubicándose con menor incidencia de infección a la enfermedad el tratamiento el Monilinia + Carbendazim con un promedio de 50,00% los testigos presentaron daños superiores al 70,00% hasta el final de la investigación. En las comparaciones ortogonales realizadas para la incidencia de infección de M. fructicola después de la aplicación de los productos fungistáticos, en este tercio del árbol, se identificó que se ajusta a una distribución Polinomial (Grafico 5). Brynde y Willetts (1977), mencionan que el patógeno permanece en latencia todo el ciclo del cultivo en flores, yemas, ramas y en momias, que se encuentran en el árbol o en el suelo; no obstante se conoce que la susceptibilidad de infección varía en función del estado fenológico del fruto haciéndole más susceptible a la enfermedad cuando el mismo se encuentra maduro. En este sentido Gell et al., (2008) demostraron que los periodos de máxima susceptibilidad a las infecciones latentes son los periodos de maduración y 7 días antes de la cosecha. A su vez, la incidencia de infección también dependerá de las condiciones climatológicas, así como también de la concentración de inoculo existente. Estos resultados confirman lo expuesto por Chen et al.,(2013), quienes realizan un experimento con diferentes fungicidas entre ellos Carbendazim y observaron que M. fructicola tienen niveles de resistencia para varios fungicidas; pero con Carbendazim, apreciaron una disminución y estabilidad en la enfermedad. Recomiendan la prevención de la podredumbre marrón antes de la cosecha para la reducción de los niveles de resistencia. En la presente investigación los diferentes tratamientos experimentaron un incremento de incidencia de infección a partir de los 40 días después de la aplicación de los productos fungistático, donde se indica que las respuesta Monilinia + Carbendazim mantuvo el porcentaje más bajo con 50%, una posible explicación de los resultados es que el modo de acción de Carbendazim, el cual actúa sobre la división celular del patógeno. Cuando se realizó el experimento en varias localidades y no se realizó la prevención adecuada, la estrategia de control no fue sostenible existiendo alta incidencia de M. fructicola (Luo y Schnabel, 2008). Las condiciones ambientales como la alta humedad, implica que los agricultores realicen la pulverización de fungicidas con más frecuencia, con esta actividad la enfermedad conduce eventualmente a la resistencia (Lim y Cha, 2003). M. fructicola es un patógeno policíclico en el que se producen numerosos ciclos secundarios a lo largo del año de crecimiento del fruto (Byrde y Willets, 1977). Las conidias se dispersan por el aire, el agua o los insectos (Luo y Michalides, 2001). Las infecciones secundarias (bien activas o bien latentes) de M. fructicola proceden del inóculo producido tras la multiplicación del hongo en las infecciones primarias Byrde y Willetts, (1977) y aparecen en todas las fases del desarrollo de la enfermedad: flor, fruto verde y fruto maduro.

30

Bosch et al., (1992) Realizaron un ensayo en el cual trataron con agentes biológicos a M. fructicola; trataron las frutas con suspensiones de (10 8-10 9 unidades formadoras de colonias . mL-1) de B. subtilis, Pseudomonas cepacia P. y Pseudomonas Corrugata R. y luego desafiados con el patógeno M. fructicola. B. subtilis proporcionó el mejor efecto inhibitorio con el control de 98%, seguido por P. corrugata y P. cepaciacon el control 60 y 23%, respectivamente. Cuadro 14. Análisis de la varianza para incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio alto del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

F de V GL CUADRADO MEDIO

20 Díasi 32 Díasii 40 Díasiii 58 Díasiv 69 Díasv 80 Díasvi 90 Díasvii Promedio general

Total 31

I Inóculo 1 78,13ns 175,78ns 175,78ns 957,03** 312,50ns 703,13** 488,28**

P Producto 3 1067,71** 2519,53** 2259,11** 3352,86** 2343,75** 1953,13** 2050,78**

IxP 3 442,71ns 71,61ns 488,28** 540,36** 156,25ns 286,46** 279,95**

Dis. Uniforme 1 46,88 ns 32,24 ns 81,25* 46,88ns 40,50 ns 83,33* 48,2 ns

Dis. Binomial 1 208,33** 20,29 ns 127,61** 270,77** 75,00** 143,23** 89,33*

Dis. Polinomial 1 187,50** 19,08ns 279,42** 222,71** 40,75 ns 59,9* 142,42**

Rep 3 26,04ns 19,53ns 19,53ns 19,53ns 0ns 26,04ns 71,61ns

Error 21 219,49 138,58 108,82 108,82 104,17 85,57 86,50

Promedio (%) 32,81 44,53 58,59 61,72 68,75 79,69 83,59 53,71

CV (%) 45,15 26,44 17,80 16,90 14,85 11,61 11,13 17,98

i= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 19 de mayo del 2016 ii= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 2 de junio del 2016 iii= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 10 de junio del 2016 iv= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 24 de junio del 2016 v= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 5 de julio del 2016 vi= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 16 de julio del 2016 vii= Evaluación de incidencia de infección tomada días después de la aplicación de los productos 29 de julio del 2016

Cuadro 15. Pruebas de Tukey al 5% de significancia los inóculos de Monilinia y Monilinia +roya en la variable incidencia de infección de M. fructicola en el tercio alto del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Cuadro 16. Pruebas de Tukey al 5% de significancia para los productos en la variable incidencia de infección de M. fructicola en el tercio alto del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Inóculo 20 Días 32 Días 40 Días 58 Días 69 Días 80 Días 90 Días

Monilinia 34,38 a 46,88 a 56,25 a 56,25 a 65,63 a 75,00 a 79,69 a

Monilinia +roya 31,25 a 42,19 a 60,94 a 67,19 b 71,88 a 84,38 b 87,50 b

Producto 20 Días 32 Días 40 Días 58 Días 69 Días 80 Días 90 Días

Carbendazim 25,00 a 25,00 a 37,50 a 37,50 a 50,00 a 62,50 a 62,50 a

B. subtilis 28,13 a 34,38 a 56,25 b 59,38 b 62,50 ab 75,00 ab 81,25 b

fosfito de potasio 28,13 a 56,25 b 62,50 b 62,50 b 71,88 b 81,25 b 90,63 bc

testigo 50,00 b 62,50 b 78,13 c 87,50 c 90,63 c 100,00 c 100,00 c

31

Cuadro 17. Pruebas de Tukey al 5% de significancia para incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el alto del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Gráfico 7 Incidencia de infección de M. fructicola en frutos de durazno en el tercio alto del árbol

atreves del tiempo. Granja Experimental Tumbaco 2016

4.3. Severidad de la infección de Monilinia fructicola en frutos de durazno 4.3.1. Tercio bajo del árbol En el análisis de pruebas de significación estadística utilizando Friedman al 5% de significancia, para los ocho tratamientos de serveridad de M. fructicola en durazno en el tercio bajo del árbol (Cuadro 18), se pudo apreciar que existió cinco rangos de significación estadística en severidad, ubicándose con la menor severidad al tratamiento (Monilinia + roya) Carbendazim y Monilinia + Carbendazim con una media de rango de 3,17 y 3,22 respectivamente y ubicándose con mayor severidad los Testigos. Estos resultados confirman lo expresado por Luo y Schnabel, (2008), los mismos que realizaron un experimento con diferentes fungicidas entre ellos un sistémico y observaron que existió adaptación para el control de M. fructicola; por lo que se concluye, que los productos sistémicos tienen un

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% IN

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E IN

FEC

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N

DIAS A LA TOMA DE DATOS

(Monilla + Roya) + B subtilis (Monilla + Roya) + Carbendazim (Monilla + Roya) + Fosfito potasio(Monilla + Roya) + testigo Monilla+ B subtilis Monilla+ CarbendazimMonilla+ fosfito Monilla+ testigo

Trat. Detalle 20 Días 32 Días 40 Días 58 Días 69 Días 80 Días 90 Días

1 Monilinia +fosfito 25,00 a 62,50 b 62,50 bc 62,50 bc 68,75 ab 75,00 b 87,50 bc

2 Monilinia + B. subtilis 25,00 a 37,50 ab 62,50 bc 62,50 bc 62,50 ab 75,00 b 81,25 bc

3 Monilinia + Carbendazim 25,00 a 25,00 a 25,00 a 25,00 a 50,00 a 50,00 a 50,00 a

4 (Monilinia +roya)+fosfito 31,25 ab 50,00 ab 62,50 bc 62,50 bc 75,00 b 87,50 bc 93,75 bc

5 (Monilinia +roya)+ B. subtilis 31,25 ab 31,25 a 50,00 b 56,25 bc 62,50 ab 75,00 b 81,25 bc

6 (Monilinia +roya)+Carbendazim 25,00 a 25,00 a 50,00 b 50,00 b 50,00 a 75,00 b 75,00 b

7 Monilia + testigo 62,50 b 62,50 b 75,00 c 75,00 c 81,25 bc 100,00 c 100,00 c

8 (Monilinia +roya)+testigo 37,50 ab 62,50 b 81,25 c 100,00 d 100,00 c 100,00 c 100,00 c

32

eficiente control para esta enfermedad, ya que se movilizan efectivamente debido a su translocación por el tejido xilemático; también se registraron una adaptación rápida a dosis significativamente mayores a fungicidas no relacionados, con esto observan la disminución de la severidad de M. fructicola. Casals et al., (2012) Evaluaron a B. subtilis en fruta herida y no herida, en dos diferentes concentraciones y a tres diferentes temperaturas, la fruta fue inoculado artificialmente con M. fructicola, obtuvieron como resultado que B. subtilis actuó con un efecto preventivo, así reduciendo la incidencia de la podredumbre parda a menos del 15% para los dos casos. Cuadro 18. Análisis de severidad de infección utilizando Friedman al 5% de significancia para el tercio bajo del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Trat. Detalle Min Max Media de los rango

1 Monilinia +fosfito 0,00 75,00 5,48 d e

2 Monilinia + B. subtilis 0,00 75,00 3,58 a b

3 Monilinia + Carbendazim 0,00 75,00 3,22 a

4 (Monilinia +roya) +fosfito 0,00 100,00 4,39 b c

5 (Monilinia +roya) + B. subtilis 0,00 50,00 4,66 c d

6 (Monilinia + roya) +Carbendazim 0,00 50,00 3,17 a

7 Monilinia + testigo 0,00 100,00 5,83 e

8 (Monilinia +roya) +testigo 0,00 100,00 5,67 e

4.3.2. Tercio medio del árbol

En el análisis de pruebas de significación estadística utilizando Friedman al 5% de significancia, para los ocho tratamientos de severidad de M. fructicola en durazno en el tercio medio del árbol (Cuadro 19), se pudo apreciar que existió tres rangos de significación estadística, ubicándose con menor severidad al tratamiento Monilinia + Carbendazim y (Monilinia + roya) Carbendazim con una media de rango de 3,64% y 3,34% respectivamente y ubicándose con mayor severidad al tratamiento (Monilinia + roya) + Testigo obteniendo mayor media de rango con 5,5%. Estos resultados confirman lo expresado por Cox et al., (2007), quienes realizaron un experimento con un fungicida de ingrediente activo Propiconazol; el cual genera varios niveles de resistencia a través de los periodos de evaluación generando niveles altos de esporulación observados durante la segunda evaluación obteniendo como resultados alta severidad y resistencia a M. fructicola; ya que los Triazoles tienen bajos niveles de control para M. fructicola, con esto se confirman los resultados ya pare este experimento se utilizó un fungicida sistémico Carbendazim el cual existió resultados en la severidad. Pusey y Wilson, (1984) realizaron un ensayo en el cual observaron el control de B. subtilis sobre M. fructicola en pos-cosecha, notaron que existe un control significativo a los tres días después aplicación a comparación de Pseudomonas spp. que obtuvo efectos mínimos de control a la enfermedad a pesar que realizaron cuatro aplicaciones más que B. subtilis

33

Cuadro 19. Análisis de significancia para severidad de infección utilizando Friedman al 5% de significancia el tercio medio del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Trat. Detalle Min Max Media de los

rangos

1 Monilinia +fosfito 0,00 100,00 5,31 c

2 Monilinia + B. subtilis 0,00 75,00 5,25 c

3 Monilinia + Carbendazim 0,00 75,00 3,64 a

4 (Monilinia +roya) +fosfito 0,00 100,00 4,11 a b

5 (Monilinia +roya) + B. subtilis 0,00 75,00 4,16 a b

6 (Monilinia + roya) +Carbendazim. 0,00 50,00 3,34 a

7 Monilinia + testigo 0,00 100,00 4,69 b c

8 (Monilinia +roya) +testigo 0,00 100,00 5,50 c

4.3.3. Tercio alto del árbol

En el análisis de pruebas de significación estadística utilizando Friedman al 5% de significancia, para los ocho tratamientos severidad de M. fructicola en durazno en el tercio alto del árbol (Cuadro 20), se pudo apreciar que existió cinco rangos de significación estadística, ubicándose con la menor severidad de infección al tratamiento Monilinia + Carbendazim, con una media de rango de 2,38 y ubicándose con mayor severidad los Testigos. Estos resultados confirman lo expresados por Chen et al.,(2014), los mismos que encuentran sensibilidad significativa a Carbendazim ya que inhiben la formación de los microtúbulos, generando disminución en cuanto a esporulación, germinación de esporas y crecimiento durante las diferentes etapas de la investigación, con esto se obtiene resultados similares a los conseguidos actualmente. En el caso de infección de frutos inmaduros, que generalmente da lugar a infecciones que permanecen latentes, estos dos factores climáticos explican más del 90% de la variación de su incidencia (Gell et al.,2008). Dada la aparición de alta frecuencia de cepas de M. fructicola resistentes a carbendazim recomienda no usar más de una vez este principio activo durante todo el ciclo de cultivo. Monitoreos realizados en la EEA INTA San Pedro en la campaña 2004/2005 (Mitidieri, 2005). Cuadro 20. Análisis de significancia de severidad utilizando Friedman al 5% de significancia para el tercio alto del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Trat. Detalle Min Max Media de los rangos

1 Monilinia + fosfito 0,00 100,00 4,33 b c

2 Monilinia + B. subtilis 0,00 75,00 3,84 b

3 Monilinia + Carbendazim 0,00 50,00 2,38 a

4 (Monilinia +roya) + fosfito 0,00 100,00 5,16 c d e

5 (Monilinia +roya) + B. subtilis 0,00 75,00 4,78 c d

6 (Monilinia + roya) + Carbendazim. 0,00 50,00 4,30 b c

7 Monilinia + testigo 0,00 100,00 5,36 d e

8 (Monilinia +roya) +testigo 0,00 100,00 5,86 e

34

4.4. Área Bajo la Curva de Progreso de la Enfermedad (AUDPC) 4.4.1. Tercio bajo del árbol

En el análisis de AUDPC (Cuadro 21), para la variable incidencia de infección en el tercio bajo se observó que la menor respuesta a la incidencia de infección presentó el tratamiento Monilinia + Carbendazim con un promedio de rAUDPC de 0,327; considerando que Monilinia + testigo presentaron el rAUDPC más alto con 2,607 (Grafico 8). Estos resultados confirman lo expuesto por Chen et al., (2014), los cuales obtienen reducción de la enfermedad frente a Carbendazim ya que es un producto específico para Ascomycetes mientras que Cox et al., (2009), encuentran resistencia a Propiconazol en diferentes cepas de M. fructicola, ya que Propiconazol tiene mayor control sobre Basidiomicetos y Deuteromicetos que en Ascomycetes, dándonos como resultado la disminución de la enfermedad a la aplicación de Carbendazim, reduciendo la virulencia obteniendo menor germinación y esporulación del patógeno; con esto se obtiene del patógeno resultados afirmando el control de M. fructicola con

Carbendazim.

El número de momias en los árboles al inicio explica el 65% de la podredumbre causadas por M.

fructicola (Villarino et al., 2010). Para evitar la aparición de cepas resistentes, recomienda rotar los fungicidas de diferentes familias. Ensayos recientes realizados en la EEA INTA San Pedro demostraron la efectividad en el control de podredumbre morena, de productos constituidos por mezclas de funguicidas de la familia de las estrobilurinas + anilida y anilinopirimidinas + fenilpirroles (Mitidieri, 2005). Cuadro 21. AUDPC para la variable incidencia de de infección M. fructicola en el tercio bajo del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Trat.

Detalle AUDPC rAUDPC

3 Monilinia + Carbendazim 29896,875 0,327 2 Monilinia + B. subtilis 43178,125 0,473 6 (Monilinia + roya) + Carbendazim 61831,25 0,677 5 (Monilinia + roya) + B. subtilis 97921,875 1,072 1 Monilinia + fosfito 124075 1,359 4 (Monilinia + roya) + fosfito potasio 124231,25 1,360 8 (Monilinia + roya) + testigo 193975 2,124 7 Monilinia + testigo 238112,5 2,607

35

Gráfico 8. AUDPC para la variable incidencia de infección de M. fructicola en durazno en el tercio bajo del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

4.4.2. Tercio medio del árbol

En el análisis de AUDPC (Cuadro 22) para la variable incidencia de infección en el tercio medio se observó que la menor respuesta a la incidencia de infección de presentarón el tratamiento Monilinia + Carbendazim con un promedio de rAUDPC de 0,406; considerando que (Monilinia +roya)+testigo presento el rAUDPC más alto con 2,683 (Grafico 9). Estos resultados confirman lo expuesto por Chen et al.,(2014), los cuales encuentran reducción significativa de la severidad de M. fructicola, frente a Carbendazim ya que inhibe la formación de micrutúbulos formados por tubulina alfa y beta, mientras que con otros fungicidas existe alta severidad del patógeno durante las diferentes etapas de la investigación con esto se obtiene resultados similares a los conseguidos actualmente. Cuando las condiciones climáticas son desfavorables, las infecciones en frutos pueden permanecer latentes hasta la madurez de éstos, manteniendo al patógeno hasta el momento óptimo de desarrollo de la enfermedad (Byrde y Willetts, 1977). Cuadro 22. AUDPC para la variable incidencia de infección de M. fructicola en el tercio medio del árbol. Granja Experimental Tumbaco

Trat. Detalle AUDPC rAUDPC

3 Monilinia + Carbendazim 49487,5 0,406 6 (Monilinia + roya) + Carbendazim 90578,125 0,744 1 Monilinia + fosfito 105343,75 0,865 2 Monilinia + B. subtilis 111125 0,912 5 (Monilinia + roya) + B. subtilis 172548,438 1,417 4 (Monilinia + roya) + fosfito potasio 174600 1,430 7 Monilinia + testigo 187478,125 1,539 8 (Monilinia + roya) + testigo 326840,625 2,683

0

50

100

1020

3240

5869

8090

% IN

CID

ENC

IA D

E IN

FEC

CÓ

N

AC

UM

ULA

DA

DIAS A LA TOMA DE DATOS

Monilinia+ Carbendazim Monilinia+ testigo

AUDPC= 193975

AUDPC= 29896,875

36

Gráfico 9. AUDPC para la variable incidencia de infección de M. fructicola en durazno en el tercio medio del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

4.4.3. Tercio alto del árbol

En el análisis de AUDPC (Cuadro 23) para la variable incidencia de infección en el tercio alto se observó que la menor respuesta a la incidencia presentó el tratamiento Monilinia + Carbendazim con un promedio de rAUDPC de 0,418; considerando que (Monilinia +roya)+testigo presento el rAUDPC más alto con 2,352 (Grafico 10). Estos resultados confirman lo expuesto por Chen et al., (2013), los mismos que realizaron un experimento con diferentes fungicidas entre ellos Carbendazim se observaron que M. fructicola es resistente a varios fungicidas, pero con Carbendazim se estableció una disminución y estabilidad en la enfermedad. Zehr et al., (1999), quienes obtienen reducción de la severidad de M. fructicola con un benzimidazol, dicho químico inhibe la formación de los microtúbulos y por lo tanto se impide la división de la célula y se crea una desorganización citoplasmática de tipo general, con esto confirmamos los resultados obtenidos en el experimento realizado. En la mayoría de casos, la resistencia de M. fructicola se ha demostrado que se asocia con mutaciones puntuales en el gen de la β-tubulina que se traducen en secuencias de aminoácidos alteradas en el sitio de unión con bencimidazol (Koenraadt et al.,1992). Cuadro 23. AUDPC para la variable incidencia de infección de M. fructicola en el tercio alto del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Trat.

Detalle AUDPC rAUDPC

3 Monilinia + Carbendazim 53237,5 0,418 6 (Monilinia + roya) + Carbendazim 80112,5 0,629 5 (Monilinia + roya) + B. subtilis 111859,375 0,878 2 Monilinia + B, subtilis 120812,5 0,948 4 (Monilinia + roya) + fosfito potasio 166698,438 1,308 1 Monilinia + fosfito 169360,938 1,329 7 Monilinia + testigo 272740,625 2,140 8 (Monilinia + roya) + testigo 299812,5 2,352

0

50

100

1020

3240

5869

8090%

INC

IDEN

CIA

DE

INFE

CC

IÓN

A

CU

MU

LAD

A

DÍA A LA TOMA DE DATOSMonilinia+ Carbendazim (Monilinia + Roya) + testigo

AUDPC= 326840,62

AUDPC= 49487,50

37

Gráfico 10. AUDPC para la variable incidencia de infección de M. fructicola en durazno en el tercio alto del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

4.5. Eficacia de los tratamientos

En el (Cuadro 24), se observó el porcentaje promedio de eficacia que presentaron los tratamientos al final de la investigación, después de los cuatro meses de la primera aplicación de los productos fungistáticos. Las mejores respuestas para la eficacia presentaron los tratamientos Monilinia + Carbendazim, Monilinia + B. subtilis, (Monilinia + roya) + Carbendazim con 69%, 51% y 51% respectivamente, los cuales al final de la investigación, mantuvieron su eficacia por encima del 50%. El tratamiento (Monilinia + roya) + fosfito potasio, incluido en esta investigación presentó el porcentaje de eficacia más bajo con un 30%. Estos resultados confirman lo expuesto Chen et al., (2014), los cuales realizaron el experimento en el que se observó la eficiencia de Carbendazim frente a M. fructicola con un 50% con respecto a los otros tratamientos; esto sucede ya que los benzimidazoles impiden la realización de la mitosis, deteniendo cualquier tipo de desarrollo del patógeno ya sea germinación de esporas, crecimiento del micelio, apresorios u haustorios, quedando el patógeno, totalmente impedido para tomar alimento a su alrededor, confirmando lo expuesto por Kowatta et al., (2012), quienes obtienen resultados del ineficiente control con fosfito de potasio los mismos se asemejan los resultados de la investigación realizada. Yossen et al.,(2014) Realizaron ensayos de eficacia con productos sistémicos entre uno de ellos Carbendazim el cual fue el más efectivo para el control de la enfermedad de un Ascomycete, obteniendo como conclusión que los fungicidas de distintos modos de acción y grupos químicos no relacionados, pueden integrarse en un programa de manejo de la enfermedad así minimizando la aparición de resistencia de los patógenos. Román M., (2006) realizo un ensayo el cual empleo una mezcla de medio de cultivo con varios fungicidas entre uno de ellos un Carbendazim el cual obtuvo una eficacia del 80% a M. fructicola, a comparación de un Propiconazol el cual obtuvo a un 60% de eficacia hacia la enfermedad; así concluyendo que Carbendazim obtuvo disminución de la enfermedad. La densidad de M. fructicola sobre la superficie de los frutos durante las dos últimas semanas antes de la cosecha, explican el 83% de la podredumbre de estos frutos en post-cosecha. (Emery et al., 2000)

0

50

100

10 2032

4058

6980

90% IN

CID

ENC

IA D

E IN

FEC

CIÓ

N

AC

UM

ULA

DA

DÍAS A LA TOMA DE DATOS

Monilinia+ Carbendazim (Monilinia + Roya) + testigo

AUDPC= 299812,50

AUDPC= 53237,50

38

Cuadro 24 Porcentaje de eficacia de los tratamientos con respecto al testigo. Granja Experimental Tumbaco 2016

Trat. DETALLE PROMEDIO DE EFICACIA DESVIACION ESTANDAR

3 Monilinia + Carbendazim 69% 4

2 Monilinia + B. subtilis 51% 7

6 (Monilinia + roya) + Carbendazim 51% 13

5 (Monilinia + roya) + B. subtilis 42% 8

1 Monilinia + fosfito 39% 10

4 (Monilinia + roya) + fosfito potasio 30% 9

5. Fase de laboratorio. (Bioensayos)

5.1. Persistencia de Monilinia fructicola en flores completas y estructuras florales de

durazno. 5.1.1 Persistencia de Monilinia fructicola en flores completas de durazno. En el análisis que se realizó para determinar la persistencia de M. fructicola en flores completas de P. persica los tratamiento: Monilinia + Carbendazim, se obtuvo 50% de persistencia a M. fructicola en el análisis de laboratorio (Gráfico 11), esto confirma el mecanismo de acción de Carbendazim ya que inhibe la síntesis de la beta-tubulina que es esencial para la formación del huso cromático en la división celular del hongo, mientras que los tratamientos: Monilinia + fosfito, Monilinia + Testigo y (Monilinia + roya) + Testigo; obtuvieron 100% de persistencia a M. fructicola en el análisis de laboratorio. Con esto se llevó acabo los análisis de los diferentes órganos florales para obtener de forma específica donde se encuentra de forma persistente del patógeno.

Gráfico 11. Bioensayo de la persistencia de M. fructicola en flores completas. Granja Experimental Tumbaco 2016

5.1.2. Persistencia de Monilinia fructicola en pétalos de las flores de durazno.

En el análisis que se realizó para determinar la presencia de M. fructicola en pétalos, se observó en los tratamiento: Monilinia + Carbendazim, Monilinia + B. subtilis, (Monilinia + roya) + Carbendazim y (Monilinia + roya) + B. subtilis se obtuvo 25% de persistencia a M. fructicola en el análisis de laboratorio (Gráfico 12), los tratamientos: Monilinia + Testigo, (Monilinia + roya) + Testigo y

39

Monilinia + fosfito obtuvieron 100% de persistencia a M. fructicola respectivamente con estos resultados podemos determinar que el fosfito de potasio no funciona para el control de M. fructicola.

Gráfico 12. Bioensayo de la persistencia de M. fructicola en pétalos de P. persica. Granja Experimental Tumbaco 2016

5.1.3. Persistencia de Monilinia fructicola en anteras de las flores de durazno.

En el análisis que se realizó para determinar la presencia de M. fructicola en anteras, se observó que los tratamientos: Monilinia + Carbendazim y (Monilinia + roya) + Carbendazim se obtuvo 25% de persistencia a M. fructicola en el análisis de laboratorio (Gráfico 13), los tratamientos: Monilinia + fosfito, (Monilinia + roya) + fosfito, Monilinia + Testigo y (Monilinia + roya) + Testigo obtuvieron 75%, 75%, 100% y 100% de persistencia a M. fructicola respectivamente, con estos resultados podemos determinar que el fosfito de potasio no funciona para el control de M. fructicola.

Gráfico 13. Bioensayo de la persistencia de M. fructicola en anteras. Granja Experimental Tumbaco 2016

40

5.1.4. Persistencia de Monilinia fructicola en estambres de las flores de durazno.

En el análisis que se realizó para determinar la presencia de M. fructicola en estambres, se observó que los tratamiento Monilinia + Carbendazim, (Monilinia + roya) + Carbendazim, (Monilinia + roya) + B. subtilis, Monilinia + B subtilis se obtuvo 50% de persistencia a M. fructicola en el análisis de laboratorio (Gráfico 14), los tratamientos: Monilinia + fosfito, (Monilinia + roya) + fosfito, Monilinia + Testigo y (Monilinia + roya) + Testigo obtuvieron 75%, 75%, 100% y 100% de persistencia a M. fructicola respectivamente, con estos resultados podemos determinar que el fosfito de potasio no funciona para el control de M. fructicola.

Gráfico 14. Bioensayo de la persistencia de M. fructicola en estambres de P. persica. Granja Experimental Tumbaco 2016

5.1.5. Persistencia de Monilinia fructicola en sépalos de las flores de durazno.

En el análisis que se realizó para determinar la presencia de M. fructicola en sépalos, se observó en los tratamiento Monilinia + Carbendazim se obtuvo 25% de persistencia a M. fructicola en el análisis de laboratorio (Gráfico 15) los tratamientos: Monilinia + fosfito, (Monilinia + roya) + fosfito, Monilinia + Testigo y (Monilinia + roya) + Testigo obtuvieron 75%, 75%, 100% y 100% de persistencia a M. fructicola respectivamente, con estos resultados podemos determinar que el fosfito de potasio no funciona para el control de M. fructicola.

Gráfico 15. Bioensayo de la persistencia de M. fructicola en sépalos de P. persica. Granja Experimental Tumbaco 2016

41

5.2. Persistencia de Monilinia fructicola en lenticelas de P. persica.

En el análisis que se realizó para determinar la presencia de M. fructicola en lenticelas, se observó en el (Cuadro 25) los tratamiento que presentaron ausencia de M. fructicola son; Monilinia + Carbendazim, (Monilinia + roya) + Carbendazim, (Monilinia + roya) + B. subtilis, Monilinia + B. subtilis los cuales fueron negativos, en el análisis de laboratorio, con estos resultados no significa que estén libres del patógeno ya que al transcurrir el tiempo puede existir presencia del mismo por el ineficiente control de la pudrición morena, los tratamientos que presentaron presencia de M. fructicola son; Monilinia + Testigo y (Monilinia + roya) + Testigo, Monilinia + fosfito y ( Monilinia + roya)+ fosfito, con estos resultados podemos determinar que el fosfito de potasio no funciona para el control de M. fructicola.

Cuadro 25. Persistencia de M. fructicola en lenticelas de P. persica. Granja Experimental Tumbaco 2016

Tratamientos Detalle Resultado

1 Monilinia + fosfito +

2 Monilinia + B. subtilis -

3 Monilinia + Carbendazim -

4 (Monilinia + roya) + fosfito potasio +

5 (Monilinia + roya) + B. subtilis -

6 (Monilinia + roya) + Carbendazim -

7 Monilinia + testigo +

8 (Monilinia + roya) + testigo + +: Presencia de M. fructicola en lenticelas en los ocho tratamientos -: Ausencia de M. fructicola en lenticelas en los ocho tratamientos

5.3. Crecimiento de Monilinia fructicola en frutos de P. persica en pos-cosecha.

En el análisis que se realizó para determinar el crecimiento ecuatorial de M. fructicola en pos-cosecha se observó en el (Gráfico 16) que en los tratamientos que tienen menor persistencia a la enfermedad son: Monilinia + Carbendazim y (Monilinia + roya) + Carbendazim; los cuales presentaron un crecimiento de la enfermedad al final de los 9 días de la toma de datos, menor a 3 cm. de expresión sintomatológica en el plano ecuatorial; mientras que los que presentaron mayor persistencia a la enfermedad fueron; Monilinia + Testigo y (Monilinia + roya) + Testigo; obteniendo al final de los 9 días de la toma de datos, mayor a 45cm. de expresión sintomatológica en el plano ecuatorial. En el (Gráfico 17) se observó que los tratamientos que tienen menor persistencia de crecimiento en el plano polar frente a la enfermedad después de la cosecha son: Monilinia + Carbendazim y (Monilinia + roya) + Carbendazim, los cuales obtuvieron un crecimiento de la enfermedad al final de los 9 días de la toma de datos, menor a 3cm. de expresión sintomatológica, mientras que los que presentaron mayor persistencia de la enfermedad fueron: Monilinia + Testigo y (Monilinia + roya) + Testigo, obteniendo al final de los 9 días de la toma de datos, mayor a 48 cm en el plano polar.

42

Gráfico 16. Crecimiento de Monilinia fructicola en el plano ecuatorial Granja Experimental

Tumbaco 2016

Gráfico 17. Crecimiento de Monilinia fructicola en el plano polar Granja Experimental Tumbaco

2016

43

6. CONCLUSIONES

- El nivel promedio de incidencia de infección para M. fructicola en los tres tercios del fitoplano

en los tratamientos en estudio al final de la investigación fue de 77,08%. El tratamiento en el cual se observó menor incidencia de infección de M. fructicola fue: Monilinia + Carbendazim con un promedio de 41,00%; mientras que Monilinia + fosfito de potasio, (Monilinia + roya) + fosfito de potasio y los testigos obtienen una incidencia de infección mayor al 80,00%.

- La severidad de infección promedio de M. fructicola en los tres tercios del fitoplano frente a

las aplicaciones de los productos fungistáticos en los tratamientos en estudios fue de 78,60%. Los tratamientos que presentaron menor severidad fueron; Monilinia + Carbendazim y (Monilinia + roya) + Carbendazim con 60,20% y 53,75% respectivamente.

- Con la aplicación de los productos fungistáticos se consiguió controlar la pudrición morena de manera significativa, demostrando así la eficiencia de Carbendazim con un 69,00% en los frutos de durazno.

- En el análisis promedio del Área Bajo la Curva se observó el progreso de la enfermedad

durante los 90 días de la evaluación. La menor respuesta en los tres tercios del fitoplano en estudio fue: Monilinia + Carbendazim con una área bajo la curva de 132621,88; mientras que en el tratamiento que obtuvo mayor respuesta en los tres tercios del fitoplano fue: (Monilinia + roya) + testigo con una área bajo la curva de 820628,13 obteniendo mayor progreso de la enfermedad de M. fructicola.

- Se determinó en laboratorio que existe mayor persistencia de infección de M. fructicola en estambres, de flores de P. persica. Se obtuvo 50% de incidencia de infección de M. fructicola en los tratamientos: Monilinia + Carbendazim, (Monilinia + roya) + Carbendazim, (Monilinia + roya) + B. subtilis y Monilinia + B. subtilis en análisis de laboratorio. En los pétalos de la flor de P. persica existe menor persistencia de M. fructicola obteniendo 25% de incidencia de infección de la enfermedad en los tratamientos: Monilinia + fosfito, (Monilinia + roya) + fosfito, Monilinia + Testigo y (Monilinia + roya) + Testigo

44

7. RECOMENDACIONES

- Carbendazim resulto un buen controlador de M. Fructicola, pero existe alto riesgo a largo plazo ya que puede generar resistencia en la población del patógeno. Por lo cual se debe realizar la aplicación con una mezcla de otro fungicida.

- Continuar la evaluación de los productos fungistáticos que demostraron eficiencia para el control de M. fructicola; es conveniente que la aplicación se realice durante la floración para reducir la severidad y la incidencia de infección de M. Fructicola.

- Para un control óptimo del inóculo primario de M. fructicola se debe eliminar todos los

tipos de momias y brotes necróticos de los árboles de durazno.

- Implementar mayor interés al tratamiento de B. Subtilis, ya que puede reducir la incidencia de infección del patógeno pero debe estar establecido el inóculo através del tiempo en el cultivo, si se logra establecer el inóculo podría controlar a M. fructicola así reduciendo los costos y se realiza una agricultura orgánica.

45

8. RESUMEN

De acuerdo a la epidemiología en campo, se conoce que Monilinia fructicola (Winter) Honey permanece latente después de la cosecha e inverna principalmente en frutos momificados que se pueden encontrar tanto en el árbol como en el suelo, en brotes y chancros (Gell et al., 2008). Cuando las condiciones climáticas son óptimas para la producción de las conidias, estos órganos pueden actuar como fuente de inóculo primario, ya que las mismas se pueden dispersar por el aire, agua o mediante insectos; pudiendo llegar así a estructuras como, flores, yemas, brotes o frutos sanos. Cuando se dan las condiciones óptimas para la infección, las conidias penetran a través de heridas o aberturas naturales y colonizan los tejidos con rapidez (Casals et al., 2015). El factor más importante para que se dé la infección es la presencia de agua libre sobre el fruto y elevada humedad relativa. A 25°C solo son necesarias 5 horas para que se produzca la infección en la flor; mientras que en frutos maduros, a 23°C con poco más de 3 horas, ya se podría dar la infección (Biggs y Northover, 1988; Luo y Michailides, 2001). En el caso de que se desarrolle la enfermedad en los tejidos infectados, se producirán las conidias, que constituirán el inóculo secundario para infectar nuevos tejidos; si estos tejidos son frutos de un mes antes de la cosecha, la cantidad de enfermedad puede llegar a aumentar exponencialmente de semana en semana (Casals et al.,2015). En el Ecuador, el cultivo de durazno, Prunus persica L., se ve afectado por M. fructicola, la cual se le considera, una de la más importantes que daña a los frutos, ramas y flores; denominada podredumbre morena o parda. Esta infección causada por este hongo altera el rendimiento de este frutal, presentándose pérdidas superiores al 50% (Salgado, 2011). La presente investigación se realizó en la Granja Experimental Tumbaco del Instituto Nacional de Investigaciones Agropecuarias (INIAP), en el lote establecido de durazno variedad Diamante de 10 años de plantación entre los meses de abril a agosto del 2016. El objetivo de este estudio fue evaluar la persistencia de M. fructicola en estructuras vegetales de durazno después de la aplicación de distintos productos fungistáticos; para esto se establecieron tres tipos de productos con efecto fungistáticos los cuales son: Carbendazim, Bacillus subtilis y fosfito de potasio; también, se estableció dos diferentes tipos de complejos patogénicos, los cuales son: Monilinia y Monilinia + roya. Específicamente se planteó determinar la incidencia de infección de M. fructicola frente a las aplicaciones de los productos fungistáticos; determinar la severidad de M. fructicola frente a las aplicaciones de los productos fungistáticos; determinar la eficacia del mejor tratamiento y analizar el Área Bajo la Curva del Progreso de la Enfermedad (AUDPC) en M. fructicola; establecer en que estructuras vegetales existen mayor o menor persistencias de M. fructicola. El nivel promedio de incidencia de infección para M. fructicola en los tres tercios del fitoplano en los tratamientos en estudio al final de la investigación fue de 77,08%. El tratamiento en el cual se observa menor incidencia de infección de M. fructicola fue: Monilinia + Carbendazim con un promedio de 41,00%; mientras que Monilinia + fosfito de potasio, (Monilinia + roya) + fosfito de potasio y los testigos obtienen una incidencia de infección mayor al 80,00%, esto se correlaciona en las últimas etapas de maduración del fruto.

La severidad de infección promedio de M. fructicola en los tres tercios del fitoplano frente a las aplicaciones de los productos fungistáticos en los tratamientos en estudios fue de 78,60%. Los

46

tratamientos que presentaron menor severidad fueron; Monilinia + Carbendazim y (Monilinia + roya) + Carbendazim con 60,20% y 53,75% respectivamente. Con la aplicación de los productos fungistáticos se consiguió controlar la pudrición morena de manera significativa, demostrando así la eficiencia de Carbendazim con un 69,00% en los frutos de durazno. En el análisis promedio del Área bajo la curva se observó el progreso de la enfermedad durante los 90 días de la evaluación. La menor respuesta en los tres tercios del fitoplano en estudio fue: Monilinia + Carbendazim con una área bajo la curva de 132621,88; mientras que en el tratamiento que obtuvo mayor respuesta en los tres tercios del fitoplano fue: (Monilinia + roya) + testigo con una área bajo la curva de 820628,13 obteniendo mayor progreso de la enfermedad de M. fructicola. Se determinó en laboratorio que existe mayor persistencia de infección de M. fructicola en estambres, de flores de P. persica. Se obtuvo 50% de incidencia de infección de M. fructicola en los tratamientos: Monilinia + Carbendazim, (Monilinia + roya) + Carbendazim, (Monilinia + Roya) + B. subtilis y Monilinia + B. subtilis en análisis de laboratorio. En los pétalos de la flor de P. persica existe menor persistencia de M. fructicola obteniendo 25% de incidencia de infección de la enfermedad en los tratamientos: Monilinia + fosfito, (Monilinia + roya) + fosfito, Monilinia + Testigo y (Monilinia + roya) + Testigo Carbendazim resulto un buen controlador de M. Fructicola, pero existe alto riesgo a largo ya que

puede generar resistencia en la población del patógeno. Por lo cual se debe realizar la aplicación

con una mezcla de otro fungicida, para un control optimo del inóculo primario de M. fructicola se

debe eliminar todos los tipos de momias y brotes necróticos de los árboles de durazno,

implementar mayor interés al tratamiento de B. Subtilis, ya que puede reducir la incidencia de

infección del patógenos pero debe estar establecido el inóculo atreves del tiempo en el cultivo, si

se logra establecer el inóculo podría controlar a M. fructicola así reduciendo los costos y realizando

una agricultura orgánica.

47

SUMMARY

According to field epidemiology, it is known that Monilinia fructicola (Winter) Honey remains latent after harvest and winter mainly in mummified fruits that can be found both in the tree and in the soil, in shoots and chancres (Gell et al., 2008). When climatic conditions are optimal for the production of conidia, these organs can act as source of primary inoculum, as they can be dispersed by air, water or insects; This reaching structures such as flowers, buds, shoots or healthy fruits. When conditions are optimal for infection, conidia penetrate through natural wounds or openings and colonize tissues rapidly (Casals et al., 2015). The most important factor for the infection is the presence of free water on the fruit and high relative humidity. At 25 ° C only 5 hours are necessary for infection to occur in the flower; While in mature fruits, at 23 ° C with little more than 3 hours, infection could already occur (Biggs and Northover, 1988; Luo and Michailides, 2001). In the event that the disease develops in the infected tissues, the conidia will be produced, which will constitute the secondary inoculum to infect new tissues; If these tissues are fruits one month before harvest, the amount of disease can increase exponentially from week to week (Casals et al., 2015) In Ecuador, the cultivation of peach, Prunus persica L., is affected by M. fructicola, which is considered one of the most important that damages fruits, branches and flowers; Called brown or brown rot. This infection caused by this fungus alters the yield of this fruit, with losses exceeding 50% (Salgado, 2011). The present research was carried out in the Tumbaco Experimental Farm of the National Institute of Agricultural Research (INIAP), in the established batch of peach variety Diamante of 10 years of planting between the months of April and August of 2016. The objective of this study was to evaluate the persistence of M. fructicola in plant structures of peach after the application of different fungistatic products; For this we established three types of products with fungistatic effect which are: Carbendazim, Bacillus subtilis and Phosphite of potassium; Also, two different types of pathogenic complexes were established, which are: Monilinia and Monilinia + roya. Specifically, it was proposed to determine the incidence of M. fructicola in relation to the applications of fungistatic products; To determine the severity of M. fructicola in relation to the applications of fungistatic products; Determine the efficacy of the best treatment and analyze the Area Under the Disease Progression Curve (AUDPC) in M. fructicola; To establish in which plant structures exist more or less persistence of M. fructicola. The average level of infection incidence for M. fructicola in three thirds of the phytoplankton in the treatments under study at the end of the investigation was 77.08%. The treatment with the lowest incidence of M. fructicola was: Monilinia + Carbendazim with an average of 41.00%; While Monilinia + Potassium Phosphite, (Monilinia + roya) + Potassium Phosphite and the controls obtain an incidence greater than 80.00%, this is correlated in the last stages of fruit maturation The average infection severity of M. fructicola in the three thirds of the phytoplank compared to the applications of fungistatic products in treatments in studies was 78.60%. The treatments that presented less severity were; Monilinia + Carbendazim and (Monilinia + roya) + Carbendazim with 60.20% and 53.75% respectively.

48

With the application of fungistatic products it was possible to control the brown rot significantly, thus demonstrating the efficiency of Carbendazim with 69.00% in the peach fruits. In the average analysis of the Area under the curve the disease progression was observed during the 90 days of the evaluation. The lowest response in the three thirds of the phytoplano under study was: Monilinia + Carbendazim with an area under the curve of 132621,88; (Monilinia + roya) + control with an area under the curve of 820628,13 obtaining greater progress of M. fructicola disease. It was determined in laboratory that there is a greater persistence of infection of M. fructicola in stamens, of flowers of P. persica. In the treatments: Monilinia + Carbendazim, (Monilinia + roya) + Carbendazim, (Monilinia + roya) + B. subtilis and Monilinia + B. subtilis were obtained in laboratory analysis. In the petals of P. persica flower there is a lower persistence of M. fructicola obtaining 25% incidence of disease in the treatments: Monilinia + Phosphite, (Monilinia + roya) + Phosphite, Monilinia + Witness and (Monilinia + roya) + Witness Carbendazim proved to be a good controller of M. fructicola, but there is a high risk in the long run, since it can generate resistance in the pathogen population. Therefore, the application with a mixture of another fungicide should be carried out. For optimum control of the primary inoculum of M. fructicola, all types of mummies and necrotic shoots of peach trees should be eliminated. Subtilis, since it can reduce the incidence of pathogens but must be established the inoculum for some time in the crop, if it is possible to establish the inoculum could control M. fructicola thus reducing costs and organic farming.

49

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53

10. ANEXOS

Anexo 1Cuadro de incidencia de infección de M. fructicola en flores de Prunus persica. Cuadro 1. Incidencia de infección de M. fructicola en flores y en estructuras florales de Prunus persica.

Tratamientos FLORES COMPLETAS PETALOS ANTERAS ESTAMBRES SEPALOS

Monilinia + fosfito 4 3 3 3 1

Monilinia + B subtilis 3 3 2 3 2

Monilinia + Carbendazim 2 1 1 2 1

(Monilinia + roya) + fosfito potasio 3 1 3 2 3

(Monilinia + roya) + B subtilis 4 1 2 4 1

(Monilinia + roya) + Carbendazim 3 1 1 2 2

Monilinia + testigo 4 4 4 3 3

(Monilinia + roya) + testigo 4 4 4 3 3

Anexo 2. Severidad de la infección de Monilinia en frutos de durazno en los tercios alto medio y bajo.

Gráfico 1 Análisis de significancia de severidad utilizando Friedman para el tercio bajo del árbol

54

Gráfico 2 Análisis de significancia de severidad utilizando Friedman para el tercio medio del árbol

Gráfico 3 Análisis de significancia de severidad utilizando Friedman para el tercio alto del árbol

55

Anexo 3. Área bajo la curva de progreso de la enfermedad (AUDPC) en frecuencia acumulada para la variable de Monilinia de durazno en los tercios alto, medio y bajo del árbol.

Gráfico 1. AUDPC en frecuencia acumulada para la variable de M. fructicolade durazno en el tercio bajo del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Gráfico 2. AUDPC en frecuencia acumulada para la variable de M. fructicola de durazno en el tercio medio del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

Gráfico 3. AUDPC en frecuencia acumulada para la variable de M. fructicola de durazno en el tercio alto del árbol. Granja Experimental Tumbaco 2016

56

Anexo 4. Curva del progreso de enfermedad de la roya causada por M. fructicola en frutos de durazno, Granja Experimental Tumbaco 2016.

Grá

fico

1.

Afe

ctac

ión

de

la h

um

edad

rel

ativ

a en

la i

nci

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cia

de

infe

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on

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Ro

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daz

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Mo

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nia

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el á

rbo

l. G

ran

ja E

xper

imen

tal

Tum

bac

o 2

01

6

57

Anexo 5. Ciclo de M. fructicola fase sexual y asexual

Fuente: Imagen adaptada de fotos por MathKnight y Zachi Evenor 2012

Anexo 6. Aislación e identificación de Bacillus subtilis

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Codificación Tinción Gram Amilasa Catalasa

Bacillus subtilis positiva ++ +-

Referencia de la codificación = + (Reacción positiva); - (Reacción negativa); ++(Reacción fuerte); +- (Reacción débil); F (Fermentación).

58

Anexo7. Cuadros del crecimiento de M. fructicola en pos-cosecha Cuadro 1. Crecimiento de M. fructicola en el plano ecuatorial. Granja Experimental Tumbaco 2016

TRATAMIENTOS DETALLE 19/8/2016 22/8/2016 25/8/2016

1 Monilinia + fosfito 1,484 13,186 36,988

2 Monilinia + B subtilis 0,948 1,58 5,23

3 Monilinia + Carbendazim 0,908 1,21 2,634

4 (Monilinia + roya) + fosfito potasio 1,024 7,7 40,44

5 (Monilinia + roya) + B subtilis 1,45 1,69 24,664

6 (Monilinia + roya) + Carbendazim 1,76 1,17 1,57

7 Monilinia + testigo 15,33 29,89 41,65

8 (Monilinia + roya) + testigo 18,21 38,07 47,3

Cuadro 2. Crecimiento de M. fructicola en el plano ecuatorial. Granja Experimental Tumbaco 2016

TRATAMIENTOS DETALLE 19/8/2016 22/8/2016 24/8/2016

1 Monilinia + fosfito 1,396 12,558 37,228

2 Monilinia + B subtilis 0,88 1,27 10,61

3 Monilinia + Carbendazim 0,776 1,2 2,608

4 (Monilinia + roya) + fosfito potasio 0,876 13,81 50

5 (Monilinia + roya) + B subtilis 1,69 1,89 22,19

6 (Monilinia + roya) + Carbendazim 1,86 1,51 2,02

7 Monilinia + testigo 13,57 39,92 49,02

8 (Monilinia + roya) + testigo 16,71 43,7 48,18

59

Anexo 8. Pruebas de normalidad, homogeneidad y homocedasticidad para la variable incidencia

de infección de M. fructicola

Cuadro 1. Prueba de normalidad Skeness/kurtosis para la variable incidencia de infección de M.

fructicola en el tercio bajo

Variable | Obs Pr(Skewness) Pr(Kurtosis) adj chi2(2) Prob>chi2

i1t1bajo | 32 . . . .

i2t1bajo | 32 0.391 0.330 1.81 0.4037

i3t1bajo | 32 0.042 0.983 4.27 0.1184

i4t1bajo | 32 1.000 0.886 0.02 0.9898

i5t1bajo | 32 1.000 0.100 2.95 0.2283

i6t1bajo | 32 0.858 0.432 0.68 0.7120

i7t1bajo | 32 0.237 0.560 1.87 0.3921

i8t1bajo | 32 0.350 0.654 1.14 0.5650

Cuadro 2. Prueba de normalidad Shapiro- Wilk W para la variable incidencia de infección de M.

fructicola en el tercio bajo

Variable | Obs W V z Prob>z

i2t1bajo | 32 0.97063 0.980 -0.042 0.51687

i3t1bajo | 32 0.86280 4.577 3.158 0.00080

i4t1bajo | 32 0.93730 2.091 1.532 0.06278

i5t1bajo | 32 0.99831 0.056 -5.969 1.00000

i6t1bajo | 32 0.99775 0.075 -5.374 1.00000

i7t1bajo | 32 0.99074 0.309 -2.438 0.99262

i8t1bajo | 32 0.96362 1.213 0.402 0.34397

Cuadro 3. Prueba de normalidad Shapiro- Francia W para la variable incidencia de infección de M.

fructicola en el tercio bajo

Variable | Obs W' V' z Prob>z

i1t1bajo | 32 . . . 0.00001

i2t1bajo | 32 1.00000 0.000 -23.202 1.00000

i3t1bajo | 32 0.99940 0.022 -7.614 1.00000

i4t1bajo | 32 0.99776 0.082 -4.868 1.00000

i5t1bajo | 32 0.99358 0.000 -2.917 0.99710

i6t1bajo | 32 0.99999 0.000 -18.608 1.00000

i7t1bajo | 32 0.99407 0.218 -2.917 0.99823

i8t1bajo | 32 0.99864 0.050 -5.900 1.00000

60

Cuadro 4. Prueba de normalidad Skeness/kurtosis para la variable incidencia de infección de M.

fructicola en el tercio medio

Variable Obs Pr(Skewness) Pr(Kurtosis) adj chi2(2) Prob>chi2

i1t1medio | 32 . . . .

i2t1medio | 32 0.083 0.477 3.79 0.1503

i3t1medio | 32 0.529 0.089 3.60 0.1652

i4t1medio | 32 0.702 0.053 4.10 0.1286

i5t1medio | 32 0.621 0.549 0.63 0.7304

i6t1medio | 32 0.316 0.468 1.65 0.4388

i7t1medio | 32 0.846 0.283 1.27 0.5304

i8t1medio | 32 0.086 0.675 3.41 0.1817

Cuadro 5. Prueba de normalidad Shapiro- Wilk W para la variable incidencia de infección de M.

fructicola en el tercio bajo

Variable | Obs W V z Prob>z

i2t1medio | 32 0.91781 2.742 2.094 0.01814

i3t1medio | 32 0.98448 0.518 -1.367 0.91420

i4t1medio | 32 0.99629 0.124 -4.338 0.99999

i5t1medio | 32 0.94794 1.736 1.146 0.12598

i6t1medio | 32 0.92102 2.635 2.011 0.02215

i7t1medio | 32 0.98654 0.449 -1.662 0.95179

i8t1medio | 32 0.91577 2.810 2.145 0.01599

Cuadro 6. Prueba de normalidad Shapiro- Francia W para la variable incidencia de infección de M.

fructicola en el tercio medio

Variable | Obs W' V' z Prob>z

i1t1medio | 32 . . . 0.00001

i2t1medio | 32 0.98974 0.378 -1.848 0.96773

i3t1medio | 32 0.99992 0.003 -12.183 1.00000

i4t1medio | 32 0.99997 0.001 -14.078 1.00000

i5t1medio | 32 0.99875 0.046 -6.065 1.00000

i6t1medio | 32 0.99963 0.014 -8.666 1.00000

i7t1medio | 32 0.99901 0.037 -6.546 1.00000

i8t1medio | 32 0.99119 0.324 -2.143 0.98395

61

Cuadro 7. Prueba de normalidad Skeness/kurtosis para la variable incidencia de infección de M.

fructicola en el tercio alto

Variable | Obs Pr(Skewness) Pr(Kurtosis) adj chi2(2) Prob>chi2

i1t1alto | 32 . . . .

i2t1alto | 32 0.077 0.275 4.42 0.1098

i3t1alto | 32 0.327 0.044 4.96 0.0838

i4t1alto | 32 0.663 0.738 0.30 0.8598

i5t1alto | 32 0.796 0.501 0.54 0.7639

i6t1alto | 32 0.295 0.136 3.63 0.1631

i7t1alto | 32 0.499 0.221 2.12 0.3473

i8t1alto | 32 0.141 0.313 3.48 0.1757

Cuadro 8. Prueba de normalidad Shapiro- Wilk W para la variable incidencia de infección de M.

fructicola en el tercio alto

Variable | Obs W V z Prob>z

i2t1alto | 32 0.98437 0.521 -1.352 0.91180

i3t1alto | 32 0.97476 0.842 -0.357 0.63942

i4t1alto | 32 0.94272 1.911 1.344 0.08945

i5t1alto | 32 0.99710 0.097 -4.846 1.00000

i6t1alto | 32 0.96666 1.112 0.221 0.41269

i7t1alto | 32 0.98477 0.508 -1.405 0.92004

i8t1alto | 32 0.94286 1.906 1.339 0.09025

Cuadro 9. Prueba de normalidad Shapiro- Francia W para la variable incidencia de infección de M.

fructicola en el tercio alto

Variable | Obs W' V' z Prob>z

i1t1alto | 32 . . . 0.00001

i2t1alto | 32 0.98695 0.481 -1.385 0.91703

i3t1alto | 32 0.99950 0.018 -8.012 1.00000

i4t1alto | 32 0.99797 0.075 -5.064 1.00000

i5t1alto | 32 0.99927 0.027 -7.198 1.00000

i6t1alto | 32 0.99969 0.011 -9.050 1.00000

i7t1alto | 32 0.99999 0.000 -16.450 1.00000

i8t1alto | 32 0.99927 0.027 -7.211 1.00000

62

Cuadro 10. Prueba de homocedasticidad para la variable incidencia de infección de M. fructicola

en el tercio bajo del árbol

Cuadro 11. Prueba de homocedasticidad para la variable incidencia de infección de M. fructicola

en el tercio medio del árbol

** Existe significación en la interacción inoculo x producto (IxP) en los primeros días ya que los

frutos estaban inmaduros y M. fructicola no se expresa muy bien en los primeros días.

Cuadro 12. Prueba de homocedasticidad para la variable incidencia de infección de M. fructicola

en el tercio alto del árbol

F de V GL CUADRADO MEDIO

20 Díasi 32 Díasii 40 Díasiii 58 DíasiV 69 DíasV 80 DíasVi 90 DíasVii

Total 31 I Inóculo 1 175,78 ns 19,53 ns 19,63 ns 0 ns 78,13 ns 175,78 ns 0 ns

P Producto 3 123,7 ns 123,70 ns 123,7 ns 0 ns 58,59 ns 19,53 ns 0 ns

IxP 3 19,53 ns 71,61 ns 71,61 ns 416,67 ns 195,31 ns 23,7 ns 0 ns

Rep 3 0 ns 0 ns 0 ns 0 ns 0 ns 0 ns 0 ns

Error 21 0 ns 0 ns 0 ns 0 ns 0 ns 0 ns 0 ns

F de V GL CUADRADO MEDIO

20 Díasi 32 Díasii 40 Díasiii 58 DíasiV 69 DíasV 80 DíasVi 90 DíasVii

Total 31 I Inóculo 1 175,78** 19,53 ns 30,52 ns 19,53 ns 43,95 ns 0 ns 1,22 ns

P Producto 3 209,96** 180,05** 69,58** 78,13 ns 69,99 ns 66,73 ns 1,22 ns

IxP 3 87,89** 71,61 ns 150,96 ns 71,61 ns 69,99** 133,46 ns 4,48 ns

Rep 3 29,30 ns 20,75 ns 7,32 ns 0 ns 4,88 ns 27,67 ns 3,87 ns

Error 21 8,84 9,47 0 ns 0 ns 16,04 21,16 14,33

F de V GL CUADRADO MEDIO

20 Díasi 32 Díasii 40 Díasiii 58 DíasiV 69 DíasV 80 DíasVi 90 DíasVii

Total 31

I Inóculo 1 1,22 ns 147,71** 9,23 ns 9,23 ns 175,78 ns 0 ns 1,91 ns

P Producto 3 368,25** 203,96** 176,67 ns 286,53 ns 214,84 ns 239,26 ns 125,20 ns

IxP 3 172,93 ns 43,74** 113,40 ns 3,53 ns 58,59 ns 0 ns 9,23 ns

Rep 3 3,66 ns 7,63 ns 4,55 ns 4,55 ns 19,53 ns 26,04 ns 5,77 ns

Error 21 13,2 4,37 5,83 5,83 8,37 19,53 16,64

63

Grafico 1. Prueba de homogeneidad de la variable incidencia de infección para el tercio bajo del

árbol.

Grafico 2. Prueba de homogeneidad de la variable incidencia de infección para el tercio medio del

árbol.

Grafico 3. Prueba de homogeneidad de la variable incidencia de infección para el tercio alto del

árbol.

020

40

60

80

10

0

I1T1BAJO I2T1BAJO

I3T1BAJO I4T1BAJO

I5T1BAJO I6T1BAJO

I7T1BAJO I8T1BAJO

020

40

60

80

10

0

I1T1MEDIO I2T1MEDIO

I3T1MEDIO I4T1MEDIO

I5T1MEDIO I6T1MEDIO

I7T1MEDIO I8T1MEDIO

020

40

60

80

10

0

I1T1ALTO I2T1ALTO

I3T1ALTO I4T1ALTO

I5T1ALTO I6T1ALTO

I7T1ALTO I8T1ALTO

64

Anexo 9. Fotografías de la investigación en campo

Gráfico 2. Colocación de plástico previo a la fumigación. Granja Experimental Tumbaco 2016

Gráfico 1. Colocación de los datalawyers para las 4 repeticiones. Granja Experimental Tumbaco 2016

Gráfico 3. Identificación de los árboles de

durazno para los tratamientos Granja

Experimental Tumbaco 2016

Gráfico 4. Presencia de M. fructicola en

durazno. Granja Experimental Tumbaco 2016