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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
DETECCIÓN DE TÍTULOS DE ANTICUERPOS CONTRA LA
ENFERMEDAD DE Anemia Infecciosa Aviar (AIA) EN AVES DE COMBATE
EN LA PROVINCIA DE PICHINCHA
Trabajo de grado presentado como requisito parcial para optar el título de
Médico Veterinario y Zootecnista
AUTORA:
María Bernarda Jara Domínguez
TUTOR:
Dr. Marco Vinicio Cisneros Tamayo Msc.
QUITO – ECUADOR
20 de Enero de 2015
ii
DEDICATORIA
Dedico este trabajo a Dios por no soltarme nunca la mano, a mis hijos que
estuvieron todo el tiempo cerca, esperando por mí y ofreciéndome su cariño
permanente, a mi esposo que en todo momento estuvo para ser el apoyo
que necesité.
María Bernarda Jara D.
iii
AGRADECIMIENTO
Agradezco a mis hijos, Francisco José, Juan Diego y José María quienes
sacrificaron su derecho al tiempo de mamá dándome todo su amor, a mí
esposo Francisco que estuvo apoyando cada etapa con su presencia y sus
palabras de aliento, a mis padres por su fe en mí y sus demostraciones de
cariño.
A mi tutor Dr. Marco Cisneros, a la Dra. María Belén Cevallos y al Dr.
Christian Vinueza, por orientarme y ayudarme en durante el proceso de la
tesis.
Al Dr. Bolívar Valencia por facilitarme la utilización del laboratorio LAFAVET
para realizar el trabajo práctico.
A mi Facultad que me brindó la oportunidad de conseguir mi sueño y con ella
a cada profesor que me ayudó a ver el vaso medio lleno cuando yo lo veía
medio vacío.
Al personal administrativo, y los que laboran en la facultad, a todos y cada
uno de mis compañeros de aula, de algunos años, de los que aprendí mucho
y a los que espero volver a ver.
Y sobre todo a Dios, que una vez más me mostró que él siempre está a ahí
cuando lo necesito.
iv
v
vi
vii
ÍNDICE
CONTENIDO pp
DEDICATORIA ................................................................................................ ii
ÍNDICE DE CUADROS ................................................................................. viii
ÍNDICE DE GRAFICOS .................................................................................. ix
RESUMEN ...................................................................................................... x
INTRODUCCIÓN ............................................................................................ 1
CAPITULO I .................................................................................................... 3
EL PROBLEMA ............................................................................................... 3
Planteamiento del problema ........................................................................ 3
Justificación ................................................................................................. 5
Objetivos ..................................................................................................... 7
CAPITULO II ................................................................................................... 8
MARCO TEÓRICO ......................................................................................... 8
Antecedentes de la investigación ................................................................ 8
Fundamentación Teórica ............................................................................. 8
CAPITULO III ................................................................................................ 21
METODOLOGÍA ........................................................................................... 21
Determinación de métodos a utilizar ......................................................... 21
Diseño de investigación ............................................................................ 21
Población objeto de estudio ...................................................................... 21
Muestra ..................................................................................................... 23
viii
CAPITULO IV ................................................................................................ 27
RESULTADOS .............................................................................................. 27
Presentación de Resultados...................................................................... 27
CAPITULO V................................................................................................. 35
DISCUSION DE RESULTADOS ................................................................... 35
Discusión ................................................................................................... 35
CAPITULO VI ................................................................................................ 38
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ................................................ 38
Conclusiones ............................................................................................. 38
Recomendaciones ..................................................................................... 39
BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................. 40
ANEXOS ....................................................................................................... 46
ÍNDICE DE CUADROS
Cuadro 1. Ubicación de 10 criaderos de Aves de Combate de la provincia de
Pichincha ...................................................................................................... 22
Cuadro 2. Sueros positivos y negativos. ....................................................... 27
Cuadro 3. Resultados de Ratio S/N .............................................................. 28
Cuadro 4. Resultados sexo vs positividad. ................................................... 29
Cuadro 5. Resultados según sexo. ............................................................... 30
Cuadro 6. Número de criaderos por cantón .................................................. 31
Cuadro 7. Positividad vs ubicación. .............................................................. 32
ix
ÍNDICE DE GRAFICOS
Gráfico 1. Virus de anemia infecciosa aviar. ................................................... 9
Gráfico 2. Prueba de ELISA directo para AIA. .............................................. 17
Gráfico 3. Ubicación geográfica de los criaderos de los que se va a tomar las
muestras ....................................................................................................... 22
Gráfico 4. Número de aves positivas y negativas. ........................................ 27
Gráfico 5. Valores de S/N y cantidad de muestras en cada caso. ................ 28
Gráfico 6. Número de hembras y machos muestreados. .............................. 29
Gráfico 7. Resultados según el sexo de los animales muestreados. ............ 30
Gráfico 8. Porcentaje de criaderos por cantón. ............................................. 31
Gráfico 9. Positividad según ubicación. ........................................................ 32
Gráfico 10. Resultados según ubicación urbana o rural. .............................. 33
Gráfico 11. Resultados según la procedencia de las aves. .......................... 34
x
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
DETECCIÓN DE TÍTULOS DE ANTICUERPOS CONTRA LA
ENFERMEDAD DE Anemia Infecciosa Aviar (AIA) EN AVES DE
COMBATE EN LA PROVINCIA DE PICHINCHA
RESUMEN
La Anemia infecciosa de las aves (AIA), es una enfermedad que se caracteriza por producir anemia aplásica, con reducción marcada de linfocitos, hemorragias subcutáneas e intramusculares e inmunosupresión, se transmite en forma vertical y horizontal. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de anticuerpos de AIA mediante ELISA Chicken CAV de la marca IDEXX® en aves de combate en la provincia de Pichincha. La prueba de ELISA utilizada fue de tipo directa. Se tomaron 27 muestras de forma aleatoria en diez criaderos de aves de combate dando un total de 270 muestras. A este ELISA fueron positivas176 muestras, de las cuales155 presentaron títulos protectivos menores a 0,2 S/N, 71 demostraron positividad sin títulos protectivos con un rango de 0.2 a 0.6 S/N, y 44 negativos por poseer un rango mayor a 0,6 S/N. Demostrando así la presencia de virus de campo ya que es una población que no ha sido vacunada. De las muestras estudiadas se en parroquias rurales se obtuvo 201 que fueron positivas a AIA y 42 negativos; en la parroquia urbana se obtuvo como resultado 26 positivos y 1 negativo. En el caso de aves reproductoras esta es una enfermedad en donde el mayor problema está en “no tenerla”, ya que los mecanismos de control que podemos utilizar se basan en que las aves se infecten a una edad apropiada.
Descriptores:
ANEMIA INFECCIOSA AVIAR / INMUNOSUPRESIÓN / ELISA / TRASMISIÓN / AVES DE COMBATE.
xi
DETECTION OF ANTIBODIES TITRES AGAINST THE AVIAN INFECTIOUS ANEMIA (AIA) IN FIGHTING COCKS IN THE PROVINCE OF PICHINCHA ABSTRACT The Avian Infectious Anemia (AIA) is a disease characterized by producing aplastic anemia with marked reduction of lymphocytes, subcutaneous and intramuscular hemorrhage and immunosuppression. It is transmitted vertically and horizontally. The aim of this study is to determine the presence of antibodies of AIA through ELISA Chicken CAV ® on fighting cocks in the province of Pichincha. A direct type of ELISA Test was used. 27 samples were taken randomly in ten poultry farms of fighting cocks. A total of 270 samples were obtained. 176 samples were positive under the ELISA test, of which 155 presented protective titers lower than 0.2 S/N 71 showed positive results without protective titers with a range of 0.2 to 0.6 S / N, and 44 showed negative results since they had a range greater than 0.6 S/N. It was then demonstrated the presence of field virus since it is a population that has not been vaccinated. From the samples, studied it was determined that in rural parishes 201 samples showed a positive result of AIA and 42 were negative; in the urban parish it was obtained as result 26 positive samples and 1 negative. In the case of breeding flocks, this is a disease where the biggest problem is "not having it", as the control mechanism that can be used is basically that the birds can get infected at an appropriate age. Descriptors: AVIAN INFECTIOUS ANEMIA / IMMUNOSUPPRESSION / ELISA / TRANSMISSION / FIGHTING COCKS
1
INTRODUCCIÓN
El virus de la Anemia Infecciosa Aviar (AIA) es el agente causante de una
enfermedad en los pollos, que se caracteriza por anemia e infecciones
bacterianas secundarias cuando los pollos se infectan antes de las 2
semanas de edad (Urdaneta et al., 2007).
La enfermedad ocurre generalmente durante las primeras tres semanas de
vida y se produce por transmisión vertical o la exposición al salir del
cascaron. Los pollos a cualquier edad son susceptibles a la infección por vía
oral o respiratoria, pero no muestran signos aparentes de enfermedad a
causa de un agente asociado a la resistencia con la maduración del sistema
inmune. El período de susceptibilidad a la enfermedad puede extenderse a
principios de la exposición al virus de la bursitis infecciosa, de la enfermedad
de Marek, o Reovirus aviares seleccionados que interfieren con el desarrollo
normal del sistema inmune (Rosemberger & Cloud, 1997).
Los pollos con anticuerpos maternos de anemia infecciosa aviar están
protegidos de la enfermedad clínica (García, Noguera, Valera, Bermudez, &
Salem, 2006).
La infección de pollos con AIA en o después de 3 semanas de edad resulta
en la formación de anticuerpos neutralizantes del virus, antes de que
aparezcan los síntomas clínicos, aunque subclínicamente pueden aparecer
problemas de inmunosupresión (Toro, Van Santen, Hoerr, & Breedlo, 2009).
El virus de la anemia infecciosa aviar, conocido también como CAA (Chicken
Anemia Agent) o CAV (Chicken Anemia Virus), es el virus ADN más pequeño
clasificado en el género Gyrovirus de la familia Circoviridae. Desde su
primera identificación en el año 1979 (McNulty, 1991), el virus ha causado
grandes pérdidas económicas para la industria avícola, debido a su grave
potencial inmunosupresor y capacidad para predisponer a múltiples
infecciones bacterianas secundarias(Todd, 2000); jugando un papel clave en
2
la etiología de varias enfermedades multifactoriales (Schat, 2009),
deprimiendo la inmunidad y la producción de anticuerpos para anemia
infecciosa aviar en desafío de campo (Toro, Ewald, & Hoerr, 2006). Junto con
características notables como la transmisión vertical, capacidad de contagio,
resistencia y naturaleza propagada (Bhatt et al., 2011).
Sin embargo una población en la que no está demostrada la presencia del
virus es en las aves de combate que son criadas a nivel de traspatio y
representan un recurso zoogenético importante en el país(Aguirre 2013).
Elisa es una prueba de alta sensibilidad, que permite identificar la presencia
de anticuerpos específicos para determinados agentes infecciosos,
comparable en el tiempo (Vásquez, 2009). Seleccionándole como técnica
para el estudio de la población de aves de combate en la provincia de
Pichincha.
3
CAPITULO I
EL PROBLEMA
Planteamiento del problema
La Anemia infecciosa de las aves (AIA), es una enfermedad que se caracteriza por
producir anemia aplásica, con reducción marcada de linfocitos, hemorragias
subcutáneas e intramusculares e inmunosupresión, en consecuencia, en aves
afectadas hay una reducción en el número de glóbulos rojos, trombocitos,
heterófilos y linfocitos T (Urdaneta et al., 2007).
Los pollos, pavos y otras aves domésticas que se encuentran en un
medioambiente de producción, pueden estar expuestas a factores estresantes y a
enfermedades infecciosas que afectarían eventualmente la inmunidad innata y
adquirida comprometiendo la salud general y el bienestar, disminuyendo los
potenciales genético y nutricional para una producción eficiente (Urdaneta et al.,
2007). La inmunidad innata puede afectarse por eventos fisiológicos estresantes
relacionados al nacimiento y a factores ambientales durante la primera semana de
vida. La exposición al amoniaco del ambiente y una nutrición deficiente pueden
disminuir la inmunidad innata. La enfermedad infecciosa de la bolsa de Fabricio, la
anemia infecciosa aviar y la enfermedad de Marek son enfermedades infecciosas
que incrementan la susceptibilidad a enfermedades virales, bacterianas y
parasitarias e interfieren con la inmunidad adquirida mediante la vacunación. Una
característica compartida es una infección capaz de suprimir la función inmune
(Hoerr, 2010).
4
El impacto económico de la presencia de este virus puede variar desde muy
elevado (presentación clínica), mediano (presentación subclínica) interactuando
con otras entidades o hasta imperceptibles (infección a edades en que las aves ya
son resistentes) (Cardoso, 2006).
Numerosos estudios han demostrado que la AIA es un factor importante para un
número de enfermedades de las aves. En infecciones experimentales de AIA con
el virus de la enfermedad de Marek (MDV) se produjo un aumento en la mortalidad
que con el virus de Marek sólo (Toro et al., 2009).Los programas vacunales de los
criaderos de aves de combate se basan en la inmunización de las aves contra
enfermedades como el Marek, Gumboro, Newcastle, Bronquitis infecciosa, Viruela,
y Coriza pasando por alto la AIA de la cual desconocen muchos criadores
(Salinas, 2002).
Esta falta de conocimiento puede provocar que se esté desatendiendo o dejando
de lado la importancia de controlar la inmunosupresión provocada por AIA. Todas
las gallináceas son susceptibles de AIA, las aves de combate son una población
que no ha sido sujeto de estudio para evidenciar en nuestro país si este virus está
circulando en este segmento epidemiológico constituyendo en un eslabón de
mantenimiento y difusión de la AIA.
5
Justificación
Las diversas enfermedades aviares son un desafío constante en la producción de
proteína animal en el país y el mundo, lo que hace inminente su estudio e
investigación. Entre las enfermedades menos estudiadas, tenemos a las
enfermedades inmunosupresoras que presentan muy pocos signos clínicos
patognomónicos permitiendo que otros agentes patógenos se expresen
sintomatológicamente, incluso causando mortalidad. Una de ellas es la Anemia
Infecciosa Aviar (AIA) que fue descrita por primera vez en 1979 por Yuasa, en
Japón y actualmente es una enfermedad extendida a nivel mundial (Cardoso,
2006)
La Anemia infecciosa aviar afecta únicamente a las especie Gallus, siendo los
animales menores a tres semanas los que presentarán la enfermedad ya sea por
vía vertical u horizontal, cabe destacar que las aves son sensibles a contraer el
virus toda la vida, pero a medida que avanza la edad van adquiriendo resistencia
al virus (Biarnés, 2014).
La enfermedad se caracteriza por producir en pollos jóvenes anemia aplásica,
atrofia de los órganos linfoides asociada a inmunosupresión, hemorragias y
aumento de la mortalidad, todo ello seguido de un incremento a la susceptibilidad
a infecciones secundarias ya sea por otros virus, bacterias u hongos (Cardoso,
2006; Buscaglia, 2011).
Esta enfermedad tiene gran importancia económica por la transmisión vertical y
por la inmunosupresión que causa al asociarse con otros agentes patógenos ya
que se ha detectado AIA en todos los países que tienen explotación industrial de
pollos (Buscaglia, 2011; Rosenberg & Cloud, 1997).
En el Ecuador existen algunos estudios que determinan la presencia de la
enfermedad en aves comerciales, sin embargo no existen datos en aves de
traspatio ni aves de combate, siendo importante su estudio ya que estas podrían
6
actuar como reservorio de virus hacia aves comerciales (Kurian, Neumann, Hall &
Marks,2011; Buscaglia, 2011).
Existen varias técnicas serológicas para demostrar la presencia de la enfermedad
como es Virus Neutralización (VN), ELISA (enzyme-linked inmunosorbant assay),
Inmunofluorecencia Indirecta (IFI), ELISA es la prueba de rutina de diagnóstico en
el laboratorio por ser rápida y confiable (Biarnés, 2014).
ELISA en aves de corral nos permite demostrar ausencia o presencia de la
enfermedad, así como los títulos (cantidad de anticuerpos presentes en una
muestra) que permite valorar la eficiencia de una vacuna (Kurian et al., 2011).
En todo el territorio ecuatoriano hay criaderos de aves de combate, sin embargo
no se puede contar con un censo de la cantidad de aves que existen, los lugares
inscritos en AGROCALIDAD que refieren a aves de combate son únicamente los
que actúan como sitios de cuarentena para animales que vienen de otros países,
que en la provincia son dos (Santillana I., comunicación personal, 2014).
En el Ministerio de Agricultura Ganadería Acuacultura y Pesca del Ecuador se
encuentra inscrito el 18 de Octubre de 2012 en el registro general de asociaciones
con No. 6060 folio 2999 orden 321ASOGAPI (Asociación de criadores de gallos de
combate y exhibición de Pichincha) con 18 socios fundadores, de los cuales 10 de
ellos tienen criaderos de aves de combate, es en los criaderos de los miembros de
esta asociación donde se tomarán las muestras para este estudio los que
facilitarán las aves para realizar la toma de muestras (MAGAP Secretaría de
Asociaciones, investigación directa, 2014).
Los hallazgos de este trabajo pueden poner en evidencia a una enfermedad poco
estudiada en esta población, la misma que causa problemas de morbilidad y
pérdidas económicas por tratamientos sintomatológicos de otros agentes que
afectan a los individuos contaminados.
7
Objetivos
General
Detectar títulos de anticuerpos del virus de Anemia Infecciosa Aviar en aves
de combate de la provincia de Pichincha mediante la prueba de ELISA.
Específicos
Detectar la presencia de Anemia Infecciosa Aviar en aves de combate por
el método de ELISA.
Identificar las zonas en la provincia de Pichincha con presencia seropositiva
de Anemia Infecciosa Aviar en aves de combate.
8
CAPITULO II
MARCO TEÓRICO
Antecedentes de la investigación
En el Ecuador no existen estudios realizados sobre la Anemia Infecciosa Aviar en
el grupo poblacional de aves de pelea. Cevallos y Hernández (2006), a través de
la prueba de Elisa en gallinas reproductoras determinando los niveles de
anticuerpos en aves vacunadas y no vacunadas, utilizando la prueba serológica
Elisa CAV, esto se realizó en 3 grupos de distintas edades y se analizó si los
títulos eran protectivos
Hernández et al. (2006), realizó un estudio en aves de traspatio en Noroeste
Ecuador, donde se determinó por medio de ELISA que una de las causas de
mortalidad de las aves de traspatio era la Anemia Infecciosa Aviar.
En Argentina, una encuesta serológica preliminar del virus de anemia infecciosa
en aves domésticas de traspatio y silvestres, de vida libre, determinó un 91% de
positividad a Anemia Infecciosa Aviar, en el primer grupo (Buscaglia, 2011).
Fundamentación Teórica
Historia de la anemia aviar
El virus de la anemia del pollo (AIA) fue descrito por primera vez por Yuasa,
Taniguchi & Yoshida (1979) en pollos de producción comercial; desde entonces, el
virus ha sido detectado por aislamiento o serología en la mayoría de países, tanto
en ponedoras y pollos de engorde(Schat, 2009).
9
El primer informe de un aislamiento AIA en los EE.UU. fue por Rosenberger &
Cloud (1997), este autor hace una investigación serológica retrospectiva y
evaluaciones clínicas que indica que el virus ha existido por lo menos 25años en
los EE.UU.
Taxonomía y Características del virus de AIA
Es un virus sin envoltura, estable y muy resistente al ambiente y a los
desinfectantes, posee una cadena circular simple de ADN, todos los virus de
anemia que se conocen hasta ahora pertenecen a un mismo serotipo, lo que
significa que no existen diferencias antigénicas mayores, aunque puedan existir
diferencias en el genoma del virus (Cardoso, 2006).
Es el virus de ADN más pequeño clasificado en el género Gyrovirus de la familia
Circoviridae, de 25 nm, la etiología detrás de AIA, ha ganado mucha importancia
como patógeno aviar emergentes en todo el mundo (Bhatt et al., 2011).
Gráfico 1. Esquema de la estructura del virus de AIA.
Obsérvese la forma icosaedrica del virus de AIA.
Tomado de: Biarnés (2014)
10
El genoma del virus de AIA consiste en una sola cadena en sentido negativo con
una región promotora-potenciadora codificación tres proteínas virales (VP1, VP2, y
VP3) a través del uso de codones de inicio alternativos (Miller,
Jarosinski&Schat,2005).
El virus por tener un genoma muy pequeño depende en alto grado de la
maquinaria de replicación de ADN de la célula hospedadora. Por eso, se replica
mucho más rápido en células de multiplicación rápida (Cardoso, 2006).
Epidemiología
El único huésped para el virus de Anemia son las gallinas, está diseminado en
todo el mundo principalmente en países de producción industrial, la susceptibilidad
de las aves disminuye con la edad (Bülow& Schat, 1988).
Tras la infección por AIA, se produce una viremia y una difusión del virus a la
médula ósea, órganos linfoides, hígado, corazón, pulmón etc (Zhanget al.,2013).
Debido a la hemocitoblastosis en la médula ósea, la deplexión de linfocitos en el
córtex del timo y a las alteraciones en otros órganos del sistema inmunitario, los
pollos sufrirán anemia e inmunodeficiencias (Biarnés, 2014).
Cuando un lote de reproductoras negativas a AIA se infecta durante el periodo de
puesta ocurre la transmisión vertical, que empezara de los 7 a 14 días pos
infección y puede durar de 3 a 9 semanas en función de la difusión del virus dentro
del lote (Zhanget al., 2013) y de cuando las reproductoras seroconviertan y
alcancen los niveles de anticuerpos neutralizantes suficientemente altos, para
evitar la transmisión vertical. (AboElkhair,Abd El-Razak& Metwally, 2014). Las
reproductoras no tendrán síntomas ni lesiones mientras que los pollos nacidos
infectados congénitamente padecerán la enfermedad, el primer síntoma es un
incremento de la mortalidad a partir de los 10 a 14 días de vida con el pico a los 21
días, y por transmisión horizontal un segundo pico entre 30 y 33 días (Biarnés,
2014).
11
Patogénesis
La vía de entrada del virus es determinante en la gravedad de la infección y
tiempo de aparición de los signos clínicos y generación de inmunidad (van Santen
et al., 2004).La inoculación experimental de AIA vía intramuscular en pollos libres
de patógenos específicos (SPF) menores a 4 semanas de vida determina anemia
que se inicia 8 a 10 días post inoculación (PI) mientras que pollos inoculados por
la vía oral demuestran una reducción menos severa que se inicia al día 14 PI (van
Santen et al., 2004).
La anemia ocurre como consecuencia de la destrucción de células eritroblastos
en la médula ósea. Los pollos afectados muestran médulas óseas de color
amarillento en lugar del rojo característico de una médula ósea normal (Zhanget
al.,2013). El hematocrito usualmente se ha restablecido a niveles normales en
pollos sobrevivientes al rededor del día 28 PI(Cardona, Wendelien& Schat, 2000).
El virus de AIA se caracteriza además de producir anemia aplásica en provocar la
atrofia del timo, hemorragias intramusculares y subcutáneas, y la inmunosupresión
de pollos jóvenes (Oluwayelu, Todd & Olaleye, 2008).
Es frecuente observar hemorragias en diferentes puntos de la carcasa de pollos
afectados por AIA incluyendo la musculatura. La causa de las hemorragias es la
trombocitopenia, que al reducir la concentración de plaquetas, disminuye la
capacidad de coagulación(Toro et al., 2009).
La ganancia de peso se ve reducida siguiendo un patrón temporal similar al
observado en el hematocrito(Toro et al., 2009). Así, pollos inoculados por la vía
intramuscular reducen el peso a partir de los 8 a 10 días PI mientras que la
inoculación oral disminuye la ganancia de peso a partir del día 14 PI (Oluwayelu et
al., 2008). La disminución de peso es más drástica en pollos infectados por la vía
parenteral. A diferencia del hematocrito, la pérdida de peso no se ha restablecido
hasta el día 28 PI con diferencias de hasta un 35% menor respecto de controles
no inoculados (Toro et al., 2009).
12
AIA induce destrucción de linfoblastos particularmente en el timo. Las lesiones
histopatológicas en el timo se caracterizan por depleción linfoblastoide
particularmente en la corteza del lóbulo tímido, presencia de cuerpos de inclusión
intranucleares y células con alteración apoptótica (Toro 2011).
Factores de Patogenicidad
El genoma del virus de AIA, está formado por ADN monocatenario
circular(Cardoso, 2006), que está codificado por tres proteínas virales: VP1, es la
proteína de cápside estructural de 52KDa; VP2, una proteína no estructural de 28
kDa, VP2 se ha demostrado que tienen actividad de fosfatasa y puede tener un
papel en la formación de la cápside, tales como un andamio o acompañante para
el plegamiento apropiado de VP1(Varela et al.,2014), ya que se requieren tanto las
proteínas VP1 y VP2 para inducir inmunidad protectora; y la proteína VP3 o
apoptina, de 13 kDa aproximadamente, que estimula la apoptosis en las células
infectadas, especialmente precursores de eritrocitos y timocitos, lo que resulta en
la inmunodeficiencia(Moeini, Omar,Rahim & Yusoff, 2011).
Entre estas proteínas la VP1 es la proteína principal de protección que induce
anticuerpos neutralizantes (Moeini et al., 2011).
Hospedadores y distribución mundial
El único hospedador para el virus son las gallináceas, está diseminado en todo el
mundo principalmente en los países de producción industrial. El virus ha sido
aislado Japón, USA, Brasil, Alemania, Dinamarca, Inglaterra, México, Argentina,
Chile entre otros. En otros países se ha reconocido la seroconversión como
evidencia de la presencia del virus (Colombia, Perú, Ecuador, Australia, Nueva
Zelanda y Malasia) (Cardoso, 2006).
En Argentina en el año 2011, se encontraron anticuerpos contra el virus de AIA en
aves de traspatio en el programa Pro Huerta luego de hacer una encuesta
13
serológica preliminar del virus en aves domésticas y silvestres de vida libre
(Buscaglia, 2011).
En Granada, país insular del mar Caribe se encuentra el virus de AIA ampliamente
distribuido en líneas comerciales de pollos Broiller (Sharma et al., 2013).
Se ha encontrado una alta prevalencia del virus de la anemia infecciosa del pollo,
en parvadas de engorde en Irán, este es el primer informe de una encuesta
serológica que confirma de la infección por AIA en Irán comercial existe una
amplia distribución del virus y una considerablemente alta incidencia de la
infección entre las aves de corral (Mahzounieh, Karimi & Zahraei 2005).
En España en el año 2009, se determinó la positividad de AIA en
las provincias de Catalunya y Aragón (Biarnés, Blanco, Camprubí, Canals & Porta,
2009).
Trasmisión
La transmisión horizontal se produce por el contacto directo con aves enfermas e
indirecta con material infectado. La vía de entrada del virus es por ingestión o
inhalación (Biarnés, 2014).
El virus, cuando se transmite por la ruta transovárica, puede producir una
enfermedad grave en la progenie, caracterizada por anemia, hemorragia
subcutánea, y una disminución de la resistencia a las enfermedades bacterianas
secundarias tales como dermatitis como gangrena (Smuts, 2014). Las aves
afectadas, si son coinfectados con el virus de la bursitis infecciosa, pueden
desarrollar una inmunosupresión profunda con mayor susceptibilidad a una amplia
gama de patógenos virales y bacterianas (Rosemberger & Cloud, 1997).
Forma Clínica de la enfermedad
Se presenta cuando los pollitos susceptibles se infectan muy temprano
(reproductoras con infección activa) (Sawanta, 2014).Es de presentación aguda,
ocurre entre los 7 y 14 días de edad. Las aves presentan depresión y la mortalidad
14
puede ser más de 60%, más comúnmente entre 5 y 10%. Se presenta un pico de
mortalidad entre 17 a 24 días de edad. Puede haber un segundo pico de
mortalidad a los 30 a 34 días de edad, siendo éste probablemente debido a la
transmisión horizontal (Schat, 2009).
Forma subclínica de la enfermedad
Los anticuerpos maternales permanecen por 2 a 3 semanas, luego de las cuales
las aves se tornan susceptibles a la infección (Rollano, 2014). La infección
subclínica lleva a una disminución del rendimiento productivo con las
consecuentes pérdidas económicas(Carter, Wise & Flores, 2005).
La infección subclínica del AIA resulta en inmunosupresión. Las evidencias
indirectas incluyen respuestas inadecuadas a la vacunación como Newcastle,
Laringotraqueítis y Marek (Eregae, 2014); mortalidad inicial alta y problemas de
Marek en pollitas además de un incremento en la patogenicidad de varios agentes
como Marek, Reovirus, Gumboro, Newcastle, Hepatitis por cuerpos de inclusión,
Staphylococcus aureus y Cryptosporidium spp.(Cardoso, 2006)
El virus inoculado en aves de más de 6 semanas de edad puede ser encontrado
en varios órganos. Es muy difícil el aislamiento del virus después de 2 semanas de
infección. Después de la atrofia natural del timo es más difícil encontrar el virus o
lesiones. Las aves bursectomizadas pueden sufrir de la forma clínica por más
tiempo (Cardoso, 2006).
Síntomas y lesiones
En pollos infectados a edades muy tempranas los signos que presentan no son
específicos de la enfermedad como: depresión, retraso en el crecimiento, plumas
erizadas, incremento de las bajas a partir de los 10 a 14 días pos infección
(Rimondi, 2014). La mortalidad suele estar entre un 5 y 10% aunque dependiendo
de la patogenicidad de la cepa las infecciones concomitantes pueden provocar
niveles mucho más altos; la morbilidad dentro del lote es casi del 100% con las
consecuentes disminuciones productivas (Biarnés, 2014).
15
Las lesiones macroscópicas son más frecuentemente observadas en la necropsia,
con una médula ósea pálida o amarillenta debido a la anemia, atrofia severa del
timo, hemorragias en la mucosa del proventrículo así como musculares y
subcutáneas (Rimondi, 2014). En este último caso pueden aparecer en el ala, y
pueden complicarse con infecciones bacterianas secundarias y una dermatitis
gangrenosa o ala azul. El hematocrito que en condiciones normales está alrededor
del 27%, estará por debajo del 20% en pollos que sufren anemia a partir de los 8 a
10 días pos infección (Biarnés, 2014).
Prevención y control
El control de las enfermedades inmunosupresoras depende de la bioseguridad
para evitar la exposición a las causas de las enfermedades inmunosupresoras, y
el aumento de la resistencia para soportar el desafío de agentes
inmunosupresores a través de la inmunización y selección genética (Hoerr, 2010).
Hoy, con la expansión de los lotes y la producción, la cama se reutiliza debido a
las limitaciones económicas y ambientales, limpieza y desinfección deben
convertirse en eventos de temporada en vez de ocurrir después de cada lote
(Craig, Rimondi & Delamer, 2009).
Estrategias para el control de la inmunosupresión en pollos de engorde y
ponedoras comerciales se basan en gran medida en los programas de vacunación
para los criadores y la progenie de pollos de engorde, y la gestión a minimizar el
estrés durante la cría(Hoerr, 2010).
16
Diagnóstico
Para el Diagnóstico de AIA debemos tomar encuentra algunos factores como: que
los signos y lesiones sean sugestivos a AIA, la edad de presentación, los
parámetros productivos, entre otros. Al ser un virus de distribución mundial es
relativamente fácil encontrarlo (Biarnés, 2014).
Como métodos directos de diagnóstico se puede realizar el aislamiento vírico y
detección de material genético, mediante biología molecular (PCR) o
inmunoflorescencia directa (IFD) (Craig et al., 2009). También podemos
diagnosticarlo mediante técnicas serológicas como la virus neutralización (VN),
ELISA e inmunoflorecencia indirecta (IFI). De las tres la más sensible y efectiva es
VN pero demasiado compleja como técnica de rutina, la prueba de ELISA es fiable
y práctica para monitorización de aves (Biarnés, 2014).
La Prueba de ELISA
Este método diagnóstico nos permite determinar la presencia de anticuerpos
específicos para determinados agentes infecciosos, con alta sensibilidad, tiempo
corto, económica y comprable en el tiempo (Vásquez, 2009).
El contacto de un antígeno con el organismo del ave genera una respuesta
inmunológica denominada seroconversión, que se expresa por incremento en
anticuerpos específicos (Kurian,Neumann, Hall& Marks, 2011).
ELISA es una técnica que se basa en el uso de un antígeno o de un anticuerpo
marcado con una enzima, al estar uno de estos componentes marcado y fijado a
un soporte se interrumpe la relación antígeno anticuerpo, posteriormente se le
agrega un sustrato específico sobre la enzima que producirá un color determinado,
observable a simple vista o cuantificable por espectrofotómetro (Vásquez, 2009).
Existen diversos tipos de ELISA en los que se marca el anticuerpo: directo,
indirecto y sándwich (Kurianet al., 2011).
17
En el ELISA indirecto se fija el antígeno al soporte, se coloca la muestra problema,
se lava para eliminar los no fijados, se adiciona los anticuerpos marcados con la
enzima para que reaccionen con el antígeno y que solubilizando el complejo se
lava para eliminar anticuerpos que no reaccionaron y se agrega un sustrato
específico para la enzima, al final se observa la coloración (IDEXX®,2014).
Como se puede observar en el Gráfico 2 los pasos para un ELISA indirecto que
fue la técnica utilizada en este estudio.
Gráfico 2. Prueba de ELISA indirecto para AIA. En esta prueba el soporte se encuentra tapizado de antígenos específicos, se
realizado para eliminar antígenos fijados deficientemente, se adiciona anticuerpos
marcados con una enzima, si son los anticuerpos reaccionan con el antígeno el
anticuerpo quedará solubilizado, se adiciona un sustrato que sea capaz de actuar
con enzima marcadora para luego hacer lectura visual o colorimétrica del producto
final. Como positivos los pocillos que tienen color celeste o claro y negativo los
que presentan color azul.
Tomado de: IDEXX® (2014)
18
Control de la enfermedad
La avicultura industrial necesita la inmunización de las aves reproductoras, con el
fin de evitar la trasmisión horizontal del virus y proveer títulos de anticuerpos
maternos que brinden protección masiva a la progenie (Moeini et al., 2011). Las
vacunas que se disponen son virus vivos atenuados, que deben suministrarse
entre 6 y 18 semanas de edad (Cardoso, 2006).
El sistema inmune aviar
El sistema inmunitario aviar se activa con la reacción que produce el antígeno con
el anticuerpo en la que las moléculas de las membranas celulares deben
expresarse con la secreción de proteínas mediadoras de la respuesta inmune
(citosinas), los factores que alteren la coordinación entre la calidad de la respuesta
inmune y el antígeno pueden afectar la capacidad de defensa del individuo
(Hoerr, 2010).
Más que una enfermedad, la inmunosupresión es un síndrome que no tiene signos
clínicos; sin embargo, el desempeño deficiente, problemas de uniformidad, baja
ganancia de peso, aumento en la conversión alimentaria, reacciones post
vacunales frecuentes, mortalidad elevada, infecciones bacterianas secundarias y
atrofia de los órganos linfoides son problemas indicativos de inmunosupresión
(Zekarias et al., 2002).
Órganos linfoides de las aves
Los órganos primarios de las aves son:
Médula ósea
Bolsa de Fabricio
El timo
Los órganos secundarios son:
El bazo
19
Tejido linfoide asociado a los bronquios y al intestino(Todd, 2000).
Médula ósea
La médula ósea es un órgano hematopoyético de producción de células
sanguíneas es también órgano linfoide primario donde maduran los linfocitos.
Posee dos compartimentos, uno hematopoyético y otro vascular que se alternan
en capas en forma de cuya dentro de los huesos largos(Hoerr, 2010). En las
zonas hematopoyéticas se encuentran precursores de todas las células
sanguíneas así como macrófagos y linfocitos. El compartimento vascular posee
sinuosidades sanguíneas revestidas por células endoteliales y atravesada por
células reticulares y macrófagos (Toro et al., 2009).
Bolsa de Fabricio
Es el sitio de maduración de los linfocitos B, se encuentra en la parte dorsal de la
cloaca, se trata de un órgano linfoepitelial de estructura redonda en forma de
saco, que en su interior se extienden grandes pliegues de epitelio en los que se
encuentran los folículos linfoides(Toro et al., 2009).
Timo
Localizado en dos canales de la región cervical es una glándula que contiene
células epiteliales agrupadas en forma laxa. Posee cuatro lóbuilos que se
encuentran cubiertos por una cápsula de tejido conectivo. Su parte externa
llamada corteza aparece densamente infiltrada de linfocitos, en cambio la médula
(la parte interna) contiene menos linfocitos células epiteliales se observan con
claridad (Hoerr, 2010).
Bazo
Se encuentra en posición dorsal al proventrículo, es un órgano oval que filtra la
sangre extrayendo partículas antigénicas localizadas en el torrente circulatorio,
como células envejecidas (Toro et al., 2009). Es sitio de almacenamiento de
eritrocitos y plaquetas. Durante la vida fetal participa en eritropoyesis; tiene dos
20
compartimentos: pulpa roja, encargada de almacenamiento y captación de
eritrocitos y pulpa blanca, donde se produce la respuesta inmune (Hoerr, 2010).
Inmunoglobulinas
Las inmunoglobulinas se encuentran en la sangre y en los tejidos vascularizados
de todos los vertebrados. Son glicoproteínas que presentan actividad de
anticuerpos (Hoerr, 2010).
En el pollo se han caracterizado tres isotipos de inmunoglobulinas:
• IgM, anticuerpos activos sobre toxinas bacterianas, bacterias y virus. Aparecen
precozmente en la respuesta inmune.
• IgG (también denominada IgY), atraviesan la pared del saco vitelino del huevo;
anticuerpos activos sobre toxinas bacterianas, bacterias y virus. Aparecen
tardíamente en la respuesta inmune.
• IgA, importante como anticuerpo secretorio en las mucosas(Zekarias et al.,
2002).
21
CAPITULO III
METODOLOGÍA
Determinación de métodos a utilizar
Tipo de investigación
El tipo de investigación del cual se sustentó el presente proyecto fue cualitativo, no
experimental, no probabilístico.
Diseño de investigación
En la presente investigación se utilizó un diseño transversal descriptivo. Ya que las
variables de interés se observaron una sola vez a manera de un corte en el
tiempo.
Población objeto de estudio
ASOGAPI tiene un total de 10 criaderos activos en la Provincia de Pichincha, el
promedio de aves por criadero es de 150 que determina un total de población de
1500 aves, de las cuales vamos a tomar únicamente las adultas que son el 60%
siendo así 900 el número de nuestra población total (Aguirre P., comunicación
personal, 2014).
22
Cuadro 1. Ubicación de 10 criaderos de Aves de Combate de la provincia de Pichincha
CRIADERO UBICACIÓN
A Vicentina Baja
B Papallacta
C Pifo
D Llano Chico
E Capelo
F Sangolquí
G SJ Minas
H
I
J
Tumbaco
Mitad del Mundo
Tambillo
Elaboración: La autora
Gráfico 3. Ubicación geográfica de los criaderos de los que se va a tomar las
muestras
23
Mediante letras se ubica en el mapa de la provincia de pichincha los criaderos de aves de combate
en los cuales se realizó la presente investigación.
Tomado de: Ministerio de Obras Públicas, 2014
Muestra
( ) ” (Supo, 2014)
Determinación del número de animales a muestrear.
( )( )( )( )
( )( ) ( )( )( )
( )( )( )( )
( )( ) ( )( )( )
“Donde:
• N = Total de la población
• Zα= 1.96 al cuadrado (si la seguridad es del 95%)
• p = proporción esperada (en este caso 50% = 0.5)
• q = 1 – p (en este caso 1-0.5 = 0.5)
• d = precisión (en esta investigación use un 5%).” (Supo 2014)
Para realizar el muestreo se dividió el número de animales para el número de
criaderos con lo que se determinó que se debía tomar 27 muestras de cada uno.
24
Las muestras se tomaron previamente realizando un censo de aves adultas en el
que se anotaron los números de placas de 90 animales, posteriormente se realizó
un sorteo, esto es un muestreo probabilístico, el cual se realiza a partir de una
selección aleatoria de los elementos, a fin de que se garantice que cada uno de
ellos tenga una probabilidad determinada, o sea que cada ave tenga la
probabilidad de 1/270 de ser muestreada (Jaramillo & Martínez, 2010).
Procedimiento de la investigación
1.- Fase de campo
Identificación y toma de datos de los criaderos que colaboran en el estudio.
Visita a los criaderos y toma de muestras.
Toma de muestras de sangre
Las muestras de sangre se tomarán de aves de pelea adultas, a nivel de la vena
braquial del ala.
El protocolo para la extracción de sangre fue:
Se expone la vena retirando las plumas en la superficie ventral de la región
humeral del ala.
Se realiza la antisepsia con una torunda remojada en alcohol
Se inserta la aguja calibre 22. Se mantiene al animal bajo sujeción durante
la extracción.
Se extrae aproximadamente 2-3 ml de sangre y se deposita
cuidadosamente en un tubo de ensayo sin anticoagulante el cual se tapa.
Se dejan en reposo para favorecer la formación del coágulo y se lleva a
centrifugación.
Luego de formado el coágulo se extrae el suero de las muestras y mantiene
en refrigeración entre 3 y 4ºC para ser transportados al laboratorio.
Manejo de la muestra
25
Se espera 8 horas en refrigeración hasta la retracción del coagulo completa, luego
se decanta el suero de la muestra utilizando una pipeta y se coloca en microplacas
limpias y esterilizadas para su almacenamiento a 0°C.
2.- Fase de laboratorio
Una vez completa la recolección de muestras son llevadas al laboratorio LAFAVET
donde son congeladas hasta la recolección total, ya cuando estuvieron completas
se descongeló los sueros y se realizó la prueba serológica de ELISA utilizando el
kit comercial ELISA IDEXX CAV® de acuerdo al protocolo sugerido por el
fabricante.
Dilución para Exposición de Campo:
Se diluye las muestras de suero 1:10 con el diluyente de la muestra.
Preparación de la solución de lavado: Se deja que el concentrado del
lavado 10X alcance la temperatura ambiente (22°c a 27°C) y mezclé
para garantizar la disolución de las sales precipitadas. El
concentrado de lavado debe tener una proporción de 1:10 con agua
destilada o desionizada antes de ser empleado.
Procedimiento de la Prueba de ELISA Chicken CAV®:
Los reactivos deben alcanzar temperatura ambiente de 18 a 26°C, posterior a esto
deben ser agitados por inversión y con un movimiento circular.
1. Obtener la placa y separar los pocillos a utilizar.
2. Se vierte 100 µl de control negativo NO DILUIDOS en los pocillos por
duplicado.
3. Se vierte 100 µl de control positivo NO DILUIDOS en los pocillos por
duplicado.
4. Se vierte 100 µl de muestra diluida en los pocillos correspondientes.
5. Se incuba por 60 minutos a temperatura entre 18 y 26°C.
26
6. Lavar cada pocillo de 3 a 5 veces con 350 ul de solución de lavado.
7. Se vierte 100 µl. de conjugado a cada pocillo
8. Se incuba durante 30 minutos a temperatura entre 18 y 26°C.
9. Se repite el paso 6.
10. Se vierte 100 µl. de la solución de sustrato TMB en cada pozo.
11. Se incuba durante 15 minutos a temperatura entre 18 y 26°C.
12. Se vierte 100 µl. de la solución de frenado en cada pocillo.
Lectura de resultados:
Con el lector de ELISA, VIOTEK modelo ELX800, se realiza la lectura de las
placas.
1. Calibrar el lector en blanco con aire.
2. Se mide y anota los valores de absorbancia a 650 nm.
Interpretación de resultados:
Para que el ensayo sea válido, la densidad óptica del control negativo (650nm)
deberá ser mayor o igual a 0,60 y el S/N (razón muestra a negativo) del control
positivo deberá ser menor o igual a 0,59.
Análisis de datos y análisis estadístico:
Con los resultados obtenidos tenemos que: 227 muestras son positivas y 43 son
negativas.
Entre las muestras positivas tenemos 155 con títulos protectivos y 72 con títulos
no protectivos.
27
CAPITULO IV
RESULTADOS
Presentación de Resultados
Los resultados indican que del total de las muestras sanguíneas (270), fueron a la
prueba de ELISA 227 positivos y 43 negativos como se muestra en el gráfico 4 y el
cuadro 2.
Cuadro 2. Sueros positivos y negativos.
CANTIDAD SUEROS RESULTADO
227 Positivo
43 Negativo
Elaboración: La autora
Gráfico 4. Número de aves positivas y negativas.
Fuente: Investigación directa
Elaboración: La Autora
Aves positivos; 227
Aves negativos; 43
28
Como muestra el gráfico 5 y cuadro 3 en los valores de S/N registrados en la
prueba se obtuvieron 155 muestras positivas menores a 0,2; positivos entre 0,2 a
0,6 son 72 sueros y negativos mayores a 0,6 son 43 sueros.
Cuadro 3. Resultados de Ratio S/N
S/N* CANTIDAD DE AVES PORCENTAJE (%)
<0,2 155 57
0,2-0,6 72 27
>0,6 43 16
*S/N: razón muestra negativo
Elaboración: La Autora
Gráfico 5. Valores de S/N y cantidad de muestras en cada caso.
Fuente: Investigación directa
Elaboración: La Autora
0
20
40
60
80
100
120
140
160155
72
43
Nú
me
ro d
e a
ves
Ratio S/N
<0,2 TITULOSPROTECTIVOS
0,2-0,6 TITULOS NOPROTECTIVOS
>0,6 NEGATIVO
29
En cuanto a la relación entre machos y hembras se muestrearon 114 hembras y
156 machos como indica el cuadro 4 y gráfico 6.
Cuadro 4. Resultados sexo vs positividad.
SEXO CANTIDAD PORCENTAJE (%)
Hembras 114 42%
Machos 156 58%
Elaboración: La Autora
Gráfico 6.Número de hembras y machos muestreados.
Fuente: Investigación directa
Elaboración: La Autora
114
156
HEMBRAS
MACHOS
30
En cuanto a los resultados tomando en cuenta el sexo de las aves tenemos que
98 ( 86%) fueron positivas y 129 (83%) machos fueron positivos, esto se puede
ver en el cuadro 5 y gráfico 7.
Cuadro 5. Resultados según sexo.
SEXO POSITIVAS PORCENTUAL NEGATIVAS PORCENTUAL
Hembras 98 86% 16 14%
Machos 129 83% 27 17%
Elaboración: La Autora
Gráfico 7. Resultados según el sexo de los animales muestreados.
Fuente: Investigación directa
Elaboración: La Autora
98
129
16
27
0
20
40
60
80
100
120
140
HEMBRAS Machos
Nú
me
ro d
e a
ves
Resultado según el sexo
POSITIVAS
NEGATIVAS
31
Como indica el cuadro 6 y gráfico 8 los resultados obtenidos en cuanto a la
ubicación, identificaron que 6 (60%) de los criaderos de aves de combate están
ubicados en el cantón Quito, 1 (10%) en Cayambe, 1 (10%) en Mejía y 2(20%)
en Rumiñahui.
Cuadro 6. Número de criaderos por cantón
UBICACIÓN NUMERO DE
CRIADEROS
PORCENTUAL
QUITO 6 60%
RUMIÑAHUI 2 20%
MEJÍA 1 10%
CAYAMBE 1 10%
Fuente: Investigación directa
Elaboración: La Autora
Gráfico 8.Porcentaje de criaderos por cantón. Fuente: Investigación directa
Elaboración: La Autora
60%
20%
10% 10%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
QUITO RUMIÑAHUI CAYAMBE MEJÍA
Po
rce
nta
je
Cantón
32
La distribución de sueros positivos de acuerdo a la ubicación indica 146 (64%)
fueron identificados en Quito, 27 (12%) en Cayambe, 7(3%) en Mejía y 27(21%)en
Rumiñahui, puede observarse en el cuadro 7 y el gráfico 9.
Cuadro 7. Positividad vs ubicación.
UBICACIÓN POSITIVOS NEGATIVOS
QUITO 146 16
RUMIÑAHUI 47 7
MEJÍA 7 20
CAYAMBE 27 0
Elaboración: La Autora
Gráfico 9. Positividad según ubicación. Fuente: Investigación directa
Elaboración: La Autora
91%
17%
0.2%
1%
0
20
40
60
80
100
120
140
160
Quito Rumiñahui Mejía Cayambe
Nú
me
ro d
e a
ves
Cantón
Aves positivas
33
Los resultados en relación a la ubicación se indican en el gráfico 10, donde se
observa que 9 criaderos se encuentran ubicados en parroquias rurales, en tanto
que 1 criadero está en una parroquia urbana, de ellos la positividad es la siguiente:
En parroquias Rurales tenemos que 201(74%)sueros son positivos, 42 (16%)
negativos; en la parroquia urbana se obtuvo como resultado 26(10%)positivos y 1
negativo.
Gráfico 10. Resultados según ubicación urbana o rural.
Fuente: Investigación directa
Elaboración: La Autora
20,9%
74%
0
50
100
150
200
250
URBANO RURAL
Nú
me
ro d
e a
ves
Parroquia
Aves positivas
34
En la encuesta realizada a los criadores se determinó que 8 (80%) criaderos
tienen la mayoría de aves de procedencia nacional y únicamente 2 (20%) tienen la
mayoría de aves importadas.
Gráfico 11. Resultados según la procedencia de las aves.
Fuente: Investigación directa
Elaboración: La Autora
80%
20%
0
50
100
150
200
250
Mayoría nacional pocosimportados
Mayoría importado pocosnacionales
Nú
me
ro d
e a
ves
Procedencia de las aves
Aves positivas
35
CAPITULO V
DISCUSION DE RESULTADOS
Discusión
Se tomaron 270 muestras de suero sanguíneo para hacer la prueba ELISA, dando
como resultado 227 (84%) sueros positivos con anticuerpos de AIA y 43 (16%)
sueros negativos sin anticuerpos detectables de AIA.
En el presente estudio las aves estudiadas no fueron vacunadas contra AIA y los
resultados no son uniformes concordando con los resultados obtenidos en otros
estudios. Así, en la India, Bhatt et al.2011, explica la positividad serológica a AIA
como respuesta a una exposición al virus de las aves de corral en algún punto del
tiempo, y al ser un virus altamente contagioso que se trasmite con facilidad
determina la positividad en las aves de corral. Similares hallazgos se reportan por
Snoeck et al.2012, en Nigeria, donde se determinó que la presencia del virus de
campo puede provocar que la positividad se presente en aves que no han sido
vacunadas.
La técnica serológica utilizada (ELISA), es la prueba más utilizada para detección
de AIA. Toro (2011) y Biarnés et al.(2009) reportan que la respuesta serológica de
los KITS ELISA, se puede agrupar según los valores S/N sugiriendo que los
valores S/N <0.2 corresponde a altos niveles de anticuerpos, los valores S/N 0.2 -
0.6 corresponde a niveles inferiores de anticuerpos y valores >0.6 son de aves
negativas para anticuerpos contra AIA. Tal descripción permite ordenar los
resultados hallados en este estudio según el valor S/N en una dilución 1:10, en la
siguiente forma: >0.6 44 sueros; < 0.2 155 sueros y entre 0,2 y 0,6 71 sueros.
36
En cuanto a la positividad con respecto al género se reporta que de los 270 sueros
estudiados 114 (42%) son muestras de aves hembras y 156 (58%) son de
muestras de aves machos.
A pesar de que no hay estudios concluyentes que manifiesten la persistencia del
virus en uno de los dos sexos en aves, la presencia del virus en tejido ovárico en
mayor grado que en testículos, puede representar un sitio de reservorio en el
tejido de las aves aparentemente sanas (Cardona et al, 2000).
Este mismo autor reporta una tendencia porcentual de positividad en hembras que
se explica al descubrir que los ovarios y en menor grado el infundíbulo son sitios
para la persistencia de la AIA en las gallinas. Corroborándose esta realidad con
las conclusiones descritas por Cardona en una posterior publicación del mismo
año dice que los testículos de los pollos con AIA detectable en el conductos
deferentes eran frecuentemente negativos (Cardona et al,2000).
De las muestras serológicas en hembras se encuentra 98 que son positivas (86%)
y 16 negativas (14 %) en tanto que en las muestras serológicas de machos 129
fueron positivos (82 %) y 27 negativos (18 %).Esta mayor seroconversión de las
hembras concuerdan con los resultados publicados por McConnell et al. (1993);
Hoop & Reece(1991); Smyth et al., (1993), donde también reportan que las aves
hembras presentan un mayor porcentaje de seropositividad, que puede ser la
explicación de que el virus de AIA se mantenga por largo tiempo y pueda
contaminar a otras aves, ya que estas se contaminaron al menos 12 meses antes
del muestreo del tejido.
El presente estudio permitió identificar en las muestras serológicas una
heterogeneidad en la presentación de resultados, 6 criaderos de aves de combate
(60%) se encuentran en el cantón Quito, 1 criadero de ave de combate (10%) en
Cayambe, en Mejía 1 (10%) y en Rumiñahui2(20%). En más de un caso una
37
carretera pasa muy cerca del criadero (5 metros) por donde circulan aves
transportadas para comercio, desecho, etc.,y eliminan al ambiente heces, plumas,
excreciones.
Según Davidson et al.(2003), esto puede ser fuente para trasmisión de la
enfermedad. Esto fue corroborado por otro estudio donde se demostró que las
plumas llevan infección de AIA ya sea en su superficie o en su pulpa (Davidson et
al., 2008).
Otros criaderos de aves de combate están cerca de fuentes de agua corriente que
facilitan la presencia de aves silvestres y migratorias. Hernández et al. (2006).
Los animales no vacunados y son transportados libremente de un lugar a otro,
además de que estas aves se encuentran libres se desplazan entre 200 o 300
metros para forrajear muchas veces compartiendo con aves silvestres Hernández
et al. (2006).
La positividad de los sueros pertenecientes a áreas rurales (74.4%) que
porcentualmente es mayor que en zonas urbanas (9,6%) puede deberse a un virus
de campo, en Nigeria se determinó positividad entre 66 a 100% en aves que
superaban las 3 semanas y no eran vacunadas, donde los anticuerpos maternos
disminuyen por lo que se considera que la positividad venía de anticuerpos de
campo (Snoeck et al., 2012).
La importación de aves que es un factor común en 8 de los 10 criaderos
muestreados, puede ser un eslabón importante de transmisión de un país a otro.
Snoeck et al. (2012). afirma que se puede detectar en muestras de cloaca del 76%
de pollos seropositivos al virus de AIA, lo que indica que estos animales pueden
trasmitir la enfermedad a pesar de estar vacunados.
38
CAPITULO VI
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Conclusiones
El alto porcentaje de positividad 84% de las 270 muestras tomadas
nos puede indicar que las aves en la Provincia de Pichincha podrían
enfrentar desafío de campo del virus AIA, lo que provoca una
respuesta inmune detectable por ELISA
Las aves de traspatio y de vida libre pueden ser reservorios de
enfermedades como la AIA.
Las aves positivas que son potenciales vectores de difusión del virus
de AIA no tienen en su totalidad anticuerpos protectivos.
Los criaderos en su mayoría (80%) ubicados en zonas rurales
pueden ser focos de contaminación para todo tipo de aves
susceptibles al virus de AIA, ya sea a través de fuentes de agua o
por desplazamiento habitual o accidental.
39
Recomendaciones
Realizar estudios de censos, caracterización e identificación de criaderos y
explotaciones de todo tipo de gallináceas para poder identificar los actores
de la realidad sanitaria y de producción de las aves que se crían y explotan
en la provincia de Pichincha y Ecuador
Es importante realizar más estudios de la problemática que puede
ocasionar el virus de AIA en grupos específicos de edad y sexo de las aves
de pelea.
Realizar estudios epidemiológicos adicionales con técnicas e aislamiento
viral y técnicas moleculares como la Reacción en Cadena de Polimerasa
(PCR), polimorfismo en la Longitud de los fragmentos de Restricción
(RFLP) que permitan confirmar la presencia del virus de AIA a nivel
provincial y nacional.
40
BIBLIOGRAFÍA
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Characterization of Chicken Anemia Virus Circulating in Chicken Flocks in
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46
ANEXOS
47
ANEXO A
Resultados de ELISA en las muestras analizadas
Laboratorios LAFAVET Cia. Ltda Av. Shyris 45-95 y 6 de Diciembre Esquina.
Telf: 022462460 Fax: 022259027 Analyze Case Report 23/10/2014
Count: 270
Mean: 0,284
GMean: 0,192
SD: 0,262
%CV: 92,3
Min: 0,046
Max: 1,054
Tech: MR
Date: 23/10/1
Dil: 4 1:10
BJAJ000024MPOTMS - CAV[BERNARDA JARA ( TESIS)]
Co
un
t
S/N Groups
0
20
40
60
80
100
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6+
0,1 0,3 0,5 0,7 0,9 1,1 1,3 1,5
48
Case: BJAJ000024MPOTMS - 23/10/2014-001 [BERNARDA JARA (TESIS)] CAV - 23/10/14 - MR - 1:10 Comment for BJAJ000024MPOTMS: 27 Muestras de cada Criadero, Número de criaderos mustreados: 10. Sueros Totales: 270. Identificación de los Criaderos: A-B-C-D-E-F-G-H-I-J Well O.D. Mean S/N Result Neg A01 1,405 1,405 Neg A02 1,421 1,421 Pos A03 0,314 0,314 Pos A04 0,200 0,200 1 A05 0,097 0,097 0,069 Pos! 2 A06 0,102 0,102 0,072 Pos! 3 A07 0,103 0,103 0,073 Pos! 4 A08 0,221 0,221 0,156 Pos! 5 A09 0,099 0,099 0,070 Pos! 6 A10 0,079 0,079 0,056 Pos! 7 A11 0,088 0,088 0,062 Pos! 8 A12 0,077 0,077 0,054 Pos! 9 B01 0,293 0,293 0,207 Pos! 10 B02 1,023 1,023 0,724 Neg 11 B03 0,098 0,098 0,069 Pos! 12 B04 0,125 0,125 0,088 Pos! 13 B05 0,106 0,106 0,075 Pos! 14 B06 0,090 0,090 0,064 Pos! 15 B07 0,104 0,104 0,074 Pos! 16 B08 0,186 0,186 0,132 Pos! 17 B09 0,126 0,126 0,089 Pos! 18 B10 0,092 0,092 0,065 Pos! 19 B11 0,079 0,079 0,056 Pos! 20 B12 0,096 0,096 0,068 Pos! 21 C01 0,114 0,114 0,081 Pos! 22 C02 0,108 0,108 0,076 Pos! 23 C03 0,677 0,677 0,479 Pos! 24 C04 0,137 0,137 0,097 Pos! 25 C05 0,074 0,074 0,052 Pos! 26 C06 0,098 0,098 0,069 Pos! 27 C07 0,095 0,095 0,067 Pos! 28 C08 0,129 0,129 0,091 Pos! 29 C09 0,078 0,078 0,055 Pos! 30 C10 0,523 0,523 0,370 Pos! 31 C11 0,305 0,305 0,216 Pos! 32 C12 0,137 0,137 0,097 Pos! 33 D01 0,109 0,109 0,077 Pos! 34 D02 0,366 0,366 0,259 Pos! 35 D03 0,847 0,847 0,599 Pos! 36 D04 0,119 0,119 0,084 Pos! 37 D05 0,088 0,088 0,062 Pos! 38 D06 0,095 0,095 0,067 Pos! 39 D07 0,258 0,258 0,183 Pos! 40 D08 0,719 0,719 0,509 Pos! 41 D09 0,235 0,235 0,166 Pos! 42 D10 0,079 0,079 0,056 Pos! 43 D11 0,233 0,233 0,165 Pos! 44 D12 0,107 0,107 0,076 Pos! Page 1
49
Laboratorios LAFAVET Cia. Ltda Av. Shyris 45-95 y 6 de Diciembre Esquina.
Telf: 022462460 Fax: 022259027 Analyze Case Report 23/10/2014 Case: BJAJ000024MPOTMS - 23/10/2014-001 [BERNARDA JARA ( TESIS)] CAV - 23/10/14 - MR - 1:10 Comment for BJAJ000024MPOTMS: 27 Muestras de cada Criadero, Número de criaderos mustreados: 10. Sueros Totales: 270. Identificación de los Criaderos: A-B-C-D-E-F-G-H-I-J Well O.D. Mean S/N Result 45 E01 0,159 0,159 0,113 Pos! 46 E02 0,187 0,187 0,132 Pos! 47 E03 0,439 0,439 0,311 Pos! 48 E04 0,681 0,681 0,482 Pos! 49 E05 0,078 0,078 0,055 Pos! 50 E06 0,115 0,115 0,081 Pos! 51 E07 0,099 0,099 0,070 Pos! 52 E08 0,773 0,773 0,547 Pos! 53 E09 0,490 0,490 0,347 Pos! 54 E10 0,088 0,088 0,062 Pos! 55 E11 0,349 0,349 0,247 Pos! 56 E12 0,244 0,244 0,173 Pos! 57 F01 0,359 0,359 0,254 Pos! 58 F02 0,162 0,162 0,115 Pos! 59 F03 0,346 0,346 0,245 Pos! 60 F04 0,121 0,121 0,086 Pos! 61 F05 0,101 0,101 0,071 Pos! 62 F06 0,098 0,098 0,069 Pos!
63 F07 0,097 0,097 0,069 Pos!
64 F08 0,404 0,404 0,286 Pos!
65 F09 0,296 0,296 0,209 Pos!
66 F10 0,168 0,168 0,119 Pos!
67 F11 0,190 0,190 0,134 Pos!
68 F12 0,173 0,173 0,122 Pos!
69 G01 0,288 0,288 0,204 Pos!
70 G02 0,158 0,158 0,112 Pos!
71 G03 0,116 0,116 0,082 Pos!
72 G04 0,107 0,107 0,076 Pos!
73 G05 0,120 0,120 0,085 Pos!
74 G06 0,145 0,145 0,103 Pos!
75 G07 0,497 0,497 0,352 Pos!
76 G08 0,263 0,263 0,186 Pos!
77 G09 0,260 0,260 0,184 Pos!
78 G10 0,106 0,106 0,075 Pos!
79 G11 0,105 0,105 0,074 Pos!
80 G12 0,264 0,264 0,187 Pos!
81 H01 0,089 0,089 0,063 Pos!
82 H02 0,369 0,369 0,261 Pos!
83 H03 0,312 0,312 0,221 Pos!
84 H04 0,147 0,147 0,104 Pos!
85 H05 0,684 0,684 0,484 Pos!
86 H06 0,149 0,149 0,105 Pos!
87 H07 0,320 0,320 0,226 Pos!
88 H08 0,690 0,690 0,488 Pos!
89 H09 0,423 0,423 0,299 Pos!
90 H10 0,639 0,639 0,452 Pos!
91 H11 0,065 0,065 0,046 Pos!
92 H12 0,092 0,092 0,065 Pos!
Neg A01 1,289 1,289
50
Neg A02 1,308 1,308
Pos A03 0,333 0,333
Pos A04 0,332 0,332
93 A05 0,892 0,892 0,687 Neg
94 A06 0,537 0,537 0,413 Pos!
95 A07 0,709 0,709 0,546 Pos!
96 A08 0,771 0,771 0,594 Pos!
97 A09 1,369 1,369 1,054 Neg
98 A10 0,293 0,293 0,226 Pos!
99 A11 0,288 0,288 0,222 Pos!
100 A12 0,256 0,256 0,197 Pos!
101 B01 0,463 0,463 0,356 Pos!
102 B02 0,204 0,204 0,157 Pos!
103 B03 0,204 0,204 0,157 Pos!
104 B04 0,211 0,211 0,162 Pos!
51
Laboratorios LAFAVET Cia. Ltda Av. Shyris 45-95 y 6 de Diciembre Esquina.
Telf: 022462460 Fax: 022259027 Analyze Case Report 23/10/2014 Case: BJAJ000024MPOTMS - 23/10/2014-001 [BERNARDA JARA ( TESIS)] CAV - 23/10/14 - MR - 1:10 Comment for BJAJ000024MPOTMS: 27 Muestras de cada Criadero, Número de criaderos mustreados: 10. Sueros Totales: 270. Identificación de los Criaderos: A-B-C-D-E-F-G-H-I-J Well O.D. Mean S/N Result 105 B05 0,204 0,204 0,157 Pos! 106 B06 0,230 0,230 0,177 Pos! 107 B07 0,243 0,243 0,187 Pos! 108 B08 0,583 0,583 0,449 Pos! 109 B09 0,182 0,182 0,140 Pos! 110 B10 0,228 0,228 0,176 Pos! 111 B11 0,306 0,306 0,236 Pos! 112 B12 0,214 0,214 0,165 Pos! 113 C01 0,246 0,246 0,189 Pos! 114 C02 0,274 0,274 0,211 Pos! 115 C03 0,202 0,202 0,156 Pos! 116 C04 0,183 0,183 0,141 Pos! 117 C05 0,387 0,387 0,298 Pos! 118 C06 0,952 0,952 0,733 Neg 119 C07 0,192 0,192 0,148 Pos! 120 C08 0,084 0,084 0,065 Pos! 121 C09 0,622 0,622 0,479 Pos! 122 C10 0,146 0,146 0,112 Pos!
123 C11 1,103 1,103 0,849 Neg
124 C12 0,089 0,089 0,069 Pos!
125 D01 1,108 1,108 0,853 Neg
126 D02 1,229 1,229 0,946 Neg
127 D03 0,190 0,190 0,146 Pos!
128 D04 0,775 0,775 0,597 Pos!
129 D05 0,137 0,137 0,105 Pos!
130 D06 0,263 0,263 0,202 Pos!
131 D07 0,126 0,126 0,097 Pos!
132 D08 0,206 0,206 0,159 Pos!
133 D09 0,181 0,181 0,139 Pos!
134 D10 0,625 0,625 0,481 Pos!
135 D11 0,180 0,180 0,139 Pos!
136 D12 0,196 0,196 0,151 Pos!
137 E01 1,318 1,318 1,015 Neg
138 E02 0,191 0,191 0,147 Pos!
139 E03 0,504 0,504 0,388 Pos!
140 E04 0,170 0,170 0,131 Pos!
141 E05 0,347 0,347 0,267 Pos!
142 E06 0,403 0,403 0,310 Pos!
143 E07 0,460 0,460 0,354 Pos!
144 E08 0,144 0,144 0,111 Pos!
145 E09 0,141 0,141 0,109 Pos!
146 E10 0,387 0,387 0,298 Pos!
147 E11 0,216 0,216 0,166 Pos!
148 E12 0,162 0,162 0,125 Pos!
149 F01 0,360 0,360 0,277 Pos!
150 F02 0,303 0,303 0,233 Pos!
52
151 F03 0,208 0,208 0,160 Pos!
152 F04 1,274 1,274 0,981 Neg
153 F05 0,447 0,447 0,344 Pos!
154 F06 0,470 0,470 0,362 Pos!
155 F07 0,120 0,120 0,092 Pos!
156 F08 0,174 0,174 0,134 Pos!
157 F09 0,437 0,437 0,336 Pos!
158 F10 0,894 0,894 0,688 Neg
159 F11 0,161 0,161 0,124 Pos!
160 F12 0,140 0,140 0,108 Pos!
161 G01 0,208 0,208 0,160 Pos!
162 G02 0,218 0,218 0,168 Pos!
163 G03 0,177 0,177 0,136 Pos!
164 G04 0,246 0,246 0,189 Pos!
165 G05 0,349 0,349 0,269 Pos!
166 G06 0,701 0,701 0,540 Pos!
167 G07 0,600 0,600 0,462 Pos!
168 G08 0,317 0,317 0,244 Pos!
53
Laboratorios LAFAVET Cia. Ltda Av. Shyris 45-95 y 6 de Diciembre Esquina.
Telf: 022462460 Fax: 022259027 Analyze Case Report 23/10/2014 Case: BJAJ000024MPOTMS - 23/10/2014-001 [BERNARDA JARA ( TESIS)] CAV - 23/10/14 - MR - 1:10 Comment for BJAJ000024MPOTMS: 27 Muestras de cada Criadero, Número de criaderos mustreados: 10. Sueros Totales: 270. Identificación de los Criaderos: A-B-C-D-E-F-G-H-I-J Well O.D. Mean S/N Result 169 G09 0,105 0,105 0,081 Pos! 170 G10 0,167 0,167 0,129 Pos! 171 G11 0,391 0,391 0,301 Pos! 172 G12 0,124 0,124 0,095 Pos! 173 H01 0,281 0,281 0,216 Pos! 174 H02 0,262 0,262 0,202 Pos! 175 H03 0,115 0,115 0,089 Pos! 176 H04 0,141 0,141 0,109 Pos! 177 H05 0,182 0,182 0,140 Pos! 178 H06 0,147 0,147 0,113 Pos! 179 H07 0,534 0,534 0,411 Pos! 180 H08 0,141 0,141 0,109 Pos! 181 H09 0,260 0,260 0,200 Pos! 182 H10 0,176 0,176 0,135 Pos! 183 H11 0,231 0,231 0,178 Pos! 184 H12 0,119 0,119 0,092 Pos! Neg A01 1,507 1,507 Neg A02 1,570 1,570
Pos A03 0,238 0,238
Pos A04 0,210 0,210
185 A05 0,233 0,233 0,151 Pos!
186 A06 0,128 0,128 0,083 Pos!
187 A07 0,247 0,247 0,160 Pos!
188 A08 0,125 0,125 0,081 Pos!
189 A09 0,640 0,640 0,416 Pos!
190 A10 0,286 0,286 0,186 Pos!
191 A11 0,697 0,697 0,453 Pos!
192 A12 0,159 0,159 0,103 Pos!
193 B01 0,115 0,115 0,075 Pos!
194 B02 0,147 0,147 0,096 Pos!
195 B03 0,133 0,133 0,086 Pos!
196 B04 1,592 1,592 1,034 Neg
197 B05 0,168 0,168 0,109 Pos!
198 B06 0,096 0,096 0,062 Pos!
199 B07 0,175 0,175 0,114 Pos!
200 B08 0,106 0,106 0,069 Pos!
201 B09 0,115 0,115 0,075 Pos!
202 B10 1,029 1,029 0,669 Neg
203 B11 1,107 1,107 0,719 Neg
204 B12 0,426 0,426 0,277 Pos!
205 C01 0,878 0,878 0,571 Pos!
206 C02 0,387 0,387 0,251 Pos!
207 C03 0,135 0,135 0,088 Pos!
208 C04 0,237 0,237 0,154 Pos!
209 C05 0,527 0,527 0,342 Pos!
210 C06 0,918 0,918 0,596 Pos!
54
211 C07 0,116 0,116 0,075 Pos!
212 C08 0,108 0,108 0,070 Pos!
213 C09 0,174 0,174 0,113 Pos!
214 C10 0,285 0,285 0,185 Pos!
215 C11 0,189 0,189 0,123 Pos!
216 C12 0,244 0,244 0,159 Pos!
217 D01 0,990 0,990 0,643 Neg
218 D02 1,214 1,214 0,789 Neg
219 D03 1,032 1,032 0,671 Neg
220 D04 1,296 1,296 0,842 Neg
221 D05 0,142 0,142 0,092 Pos!
222 D06 0,115 0,115 0,075 Pos!
223 D07 0,108 0,108 0,070 Pos!
224 D08 0,102 0,102 0,066 Pos!
225 D09 0,731 0,731 0,475 Pos!
226 D10 0,474 0,474 0,308 Pos!
227 D11 0,154 0,154 0,100 Pos!
228 D12 0,098 0,098 0,064 Pos!
55
Laboratorios LAFAVET Cia. Ltda Av. Shyris 45-95 y 6 de Diciembre Esquina.
Telf: 022462460 Fax: 022259027 Analyze Case Report 23/10/2014 Case: BJAJ000024MPOTMS - 23/10/2014-001 [BERNARDA JARA ( TESIS)] CAV - 23/10/14 - MR - 1:10 Comment for BJAJ000024MPOTMS: 27 Muestras de cada Criadero, Número de criaderos mustreados: 10. Sueros Totales: 270. Identificación de los Criaderos: A-B-C-D-E-F-G-H-I-J Well O.D. Mean S/N Result 229 E01 1,301 1,301 0,845 Neg 230 E02 0,122 0,122 0,079 Pos! 231 E03 0,147 0,147 0,096 Pos! 232 E04 0,176 0,176 0,114 Pos! 233 E05 0,133 0,133 0,086 Pos! 234 E06 0,111 0,111 0,072 Pos! 235 E07 1,329 1,329 0,864 Neg 236 E08 1,180 1,180 0,767 Neg 237 E09 1,330 1,330 0,864 Neg 238 E10 1,314 1,314 0,854 Neg 239 E11 1,437 1,437 0,934 Neg 240 E12 0,730 0,730 0,474 Pos! 241 F01 0,901 0,901 0,585 Pos! 242 F02 0,141 0,141 0,092 Pos! 243 F03 0,352 0,352 0,229 Pos! 244 F04 1,353 1,353 0,879 Neg 245 F05 1,199 1,199 0,779 Neg 246 F06 0,913 0,913 0,593 Pos! 247 F07 1,123 1,123 0,730 Neg
248 F08 1,275 1,275 0,828 Neg
249 F09 1,370 1,370 0,890 Neg
250 F10 1,430 1,430 0,929 Neg
251 F11 1,182 1,182 0,768 Neg
252 F12 1,268 1,268 0,824 Neg
253 G01 0,927 0,927 0,602 Neg
254 G02 1,312 1,312 0,853 Neg
255 G03 0,076 0,076 0,049 Pos!
256 G04 1,123 1,123 0,730 Neg
257 G05 1,236 1,236 0,803 Neg
258 G06 0,955 0,955 0,621 Neg
259 G07 1,068 1,068 0,694 Neg
260 G08 0,107 0,107 0,070 Pos!
261 G09 0,158 0,158 0,103 Pos!
262 G10 0,144 0,144 0,094 Pos!
263 G11 0,122 0,122 0,079 Pos!
264 G12 1,264 1,264 0,821 Neg
265 H01 1,106 1,106 0,719 Neg
266 H02 1,007 1,007 0,654 Neg
267 H03 1,166 1,166 0,758 Neg
268 H04 1,160 1,160 0,754 Neg
269 H05 0,285 0,285 0,185 Pos!
270 H06 0,928 0,928 0,603 Neg
56
ANEXO C
ENCUESTA A LOS CRIADORES DE AVES DE COMBATE
1- Usted posee programas de vacunación?
2- Usted posee programas de bioseguridad?
3- Su criadero se encuentra en área rural o urbana?
4- Las aves de su criadero que procedencia tienen?
57
