Universidad de Panamá Facultad de Medicina Escuela de Medicina Seminario de Hematología

Universidad de PanamáFacultad de Medicina Escuela de Medicina

Seminario de Hematología

Presentado por:Héctor LezcanoIsamar ChávezEvelyn MonterreyAmaris RamosDavid WengJuan Alain

ANALIZADORES HEMATOLÓGICOS

INTRODUCCIÓN El desarrollo de los Autoanalizadores hematológicos comenzó en la década de los 50 con los hermanos Wallace y Joseph Coulter, quienes inventaron en 1956 el primer contador automático de células sanguíneas.

En 1980 se introduce el diferencial 3 Diff, además del estudio de la serie roja con los cómputos de eritrocitos, la determinación de la hemoglobina y el cálculo de los índices eritrocitarios.

Todo equipo automatizado, suministra dos tipos de resultados: un informe numérico y un informe grafico (histogramas), y ambos poseen un software que contiene toda la información utilizando abreviaturas en ingles de utilidad en el informe numérico.

COMPONENTES DEL ANALIZADOR

•DILUIDOR Disminuye la concentración de la sangre hasta el nivel adecuado para el funcionamiento del contador. Como líquido diluyente utiliza una solución isotónica con capacidad conductora.

•COMPRESOR- ASPIRADOR Aporta la presión y el vacío necesarios para transportar la sangre, convenientemente diluida, al dispositivo de medida.

•DISPOSITIVO DE MEDIDA Es la cámara donde se cuentan realmente las células sanguíneas (cámara de medida o de lectura).

•TRANSDUCTOR Transforma las señales, procedentes del dispositivo de medida, en impulsos eléctricos. Suele ser un fotomultiplicador

•DISCRIMINADOR Diferencia los impulsos eléctricos generados por cada uno de los tipos de células sanguíneas.

•PROCESADOR Recoge los datos obtenidos, los procesa y los proyecta en una pantalla.

•REGISTRADOR Imprime en papel los resultados conseguidos.

PRINCIPIO DE LOS ANALIZADORES HEMATOLÓGICOS

IMPEDANCIA

DISPERSIÓN ÓPTICA

FLUORESCENCIACITOMETRIA DE FLUJO

RADIOFRECUENCIA

PRINCIPIO DE IMPEDANCIA.El principio de impedancia en el conteo de células sanguíneas se basa en el aumento de la resistencia producida cuando una célula sanguínea con baja conductividad pasa a través de un campo eléctrico.

El número de intermitencias indica la cifra de células sanguíneas y la amplitud de cada intermitencia es proporcional al volumen de la célula

Ejemplos de instrumentos con este principio son el Contador Coulter, los instrumentos TOA Sysmex y los instrumentos Abbot Cell-Dyn.

•Mientras que las células sanguíneas conducen mal la electricidad, el líquido diluyente es un buen conductor de la electricidad (posee una gran conductividad eléctrica).

De este modo es posible la identificación de las células y por tanto el recuento

•El dispositivo de medida consiste en un pequeño orificio, a través del cual se hace pasar la sangre diluida. Tiene colocados un electrodo a su entrada y otro a su salida.•También se hace pasar una corriente eléctrica constante a través de ese mismo orificio.

•Si el orificio es atravesado solamente por líquido diluyente, la resistencia eléctrica medida por los electrodos es mínima y constante, pero cuando el orificio es atravesado por una célula sanguínea, se produce un aumento de la resistencia eléctrica y un cambio de potencial entre los electrodos.

El número de señales eléctricas generadas indica el número de células presentes en la sangre y la amplitud de estas señales es directamente proporcional al volumen celular.

IMPEDANCIA

DISPERSIÓN ÓPTICA

basa en las mediciones de la dispersión de la luz obtenidas de una sola célula sanguínea que pasa ata través de un haz de luz (óptico o láser

Estas células crean una dispersión hacia delante y lateral las cuales se detectan mediante fotodetectores .

El grado de dispersión hacia delante es una mediación del tamaño de la celular

el lateral es una medición de la granularidad de la célula.

Ejemplos de instrumentos que atizan este principio son los Technicon H System.

FLUORESCENCIA Un fluorocromo es una molécula química que absorbe la luz a una determinada longitud de onda (ENERGIA ) energía de excitación y emite a una longitud superior (MENOR ENERGIA)

Interacciona con la luz de excitación procedente de el láser.

¿CÓMO ES OBTIENE?Fluorocromo

Unión de sitios

específicos

absorbe energía del láser

•libera energía absorbida por :•Vibración y disipación del calor.

Emisión de fotones a una mayor longitud de onda llamada fluorescencia

VARIEDAD DE MODELOS

.

•Contador Coulter serie S-Plus: Introducido al mercado en 1983, es un analizador automático multiparámetros, opera por el principio de impedancia.

•Contador Coulter STKS: Es una combinación de tecnologías para enumerar eritrocitos, plaquetas y leucocitos; y para determinar un conteo diferencial de cinco partes. Emplea el principio de impedancia.

•Sysmex NE-800: Realiza conteos de células sanguíneas , determinaciones de hemoglobina y diferenciales de cinco partes

Sysmex NE-800: Realiza conteos de células sanguíneas , determinaciones de hemoglobina y diferenciales de cinco partes

CITOMETRIA DE FLUJO Técnica de análisis celular

multiparamétrico cuyo fundamento se basa en hacer pasar una suspensión de partículas (generalmente células) alineadas y de una en una por delante de un haz de láser focalizado.

Es una tecnología (proceso) que permite la medida simultánea de múltiples características físicas de una sola célula.

Estas medidas son realizadas mientras las células (partículas) pasan en fila, a una velocidad de 500 a 4000 células por segundo, a través del aparato de medida en una corriente de fluido.

Sistema Hidráulico• Controles neumático y fluidos para establecer un flujo laminar que permita a

la suspensión celular atravesar la cámara de

flujo.

Sistema Óptico• Láser (Argón con luz

monocromática de 488nm , filtros , lentes y detectores.

Sistema Electroinformativo

• Convierte la luz dispersa en señales eléctricas y las procesa para su análisis.

Parámetros

Características morfológicas de

las células

Tamaño Relativo (forward

scatter-FSC)

Propiedad de Dispersión

Granularidad relativa o

complejidad interna

( side scatter SSC)

Características antigénicas de

las células (Inmunifenotípic

as)

Fluorescencia relativa

(FL1, FL2, FL3)

Determinación cuantitativa de características

antigénicas, bioquímicas y

biofísicas de células individuales

SEÑALES DE DISPERSIÓN

La luz dispersada frontalmente en ángulo cónico pequeño (0-10 grados ) coincidente con luz incidente y es proporcional a

tamaño de la partícula que produce la dispersión.

SEÑALES DE DISPERSIÓN

La luz dispersada lateralmente es proporcional al la complejidad de la estructura celular.

RADIOFRECUENCIA

EritrogramaSe trata del análisis de la serie roja e incluye los siguientes parámetros:

• Recuento de glóbulos rojos: se trata de la cantidad de eritrocitos en un mm3. A partir del número de células contadas por unidad de volumen, se genera el histograma de distribución de eritrocitos.

• Concentración de Hemoglobina: Valores Normales: Hombres: 16 ± 2 gr%

Mujeres: 14 ± 2 gr%

• Hematocrito: es el porcentaje de sangre que es ocupado por eritrocitos.

Valores Normales: Hombres: 47 ± 5 gr%

Mujeres: 42 ± 5 gr%

Índices Hematológicos

Concentración de hemoglobina media corpuscular (C.H.MC): Se refiere a la concentración promedio de hemoglobina por mililitro de eritrocitos. Puede ser calculada utilizando los valores de hemoglobina y de hematócrito o medida directamente mediante luz láser y su grado dispersión.

Valor normal: 32% a 36%

Volumen corpuscular medio (V.C.M): Expresa en micras cúbicas (u3) el volumen que ocupa un hematíe de tamaño medio. El valor de este parámetro puede ser obtenido a partir del histograma de distribución de volumen de los eritrocitos o medido directamente mediante la técnica de dispersión de la luz láser.

Valor normal: 87 ± 5 u3 ó um3

Hemoglobina corpuscular media (H.C.M.): Es el valor promedio de la hemoglobina contenida en cada eritrocito. Puede ser calculada utilizando los valores de hemoglobina y de hematocrito o medida directamente mediante luz láser y su grado dispersión.

Valor normal: 27 – 32 pg

Contenido de hemoglobina presente en los reticulocitos (CHr): Constituye un indicador precoz de eritropoyesis deficiente en hierro que es mucho más sensible a la suplementación con hierro que otros parámetros, tales como hematócrito, hemoglobina, VCM, RDW, HCM y ferritina. Es de reciente incorporación gracias a los analizadores hematológicos.

La Amplitud de Distribución Eritrocitaria (ADE o RDW): se utiliza como indicativo de anisocitosis. Este índice es facilitado por los contadores automatizados.

Valor normal: 11,5 – 14,5%

LEUCOGRAMA Es la fracción del hemograma que se refiere al conteo total de los leucocitos

(glóbulos blancos) y de las diferentes clases de leucocitos. En sí está compuesto por dos análisis:

Conteo total de leucocitos: Los leucocitos son las células encargadas de proteger al organismo contra las infecciones. La presencia de una infección normalmente altera el número total de leucocitos. Valor normal: 4,500 a 10,000 glóbulos blancos por microlitro (mcL)

Conteo de leucocitos diferencial: apodado simplemente "diferencial", determina la proporción o porcentaje de las principales clases de leucocitos dentro del conteo total de leucocitos. (neutrófilos, eosinófilos, basófilos, linfocitos y monocitos). Cada clase tiene un papel diferente en la defensa del organismo. La cantidad de cada clase de leucocito da información muy valiosa acerca del estado del sistema inmune.

LEUCOCITOS EN FROTIS

SERIE BLANCA

PLAQUETOGRAMA Plaquetas (PLT): se refiere al recuento global de plaquetas realizado de

forma automatizada. Valor normal: 150 a 400 × 109/L.4

Volumen medio plaquetario (VPM): es un indicador del tamaño de las plaquetas y muestra una relación inversa no lineal con el número de estas.

Plaquetocrito (PCT): se calcula relacionando el recuento de células con el volumen medio plaquetario. Ofrece un estimado sobre la fracción del volumen sanguíneo total ocupada por las plaquetas. Su valor aumenta en situaciones que cursen con trombocitosis. Valor normal: 0,1 a 0,4 %.

Componente medio plaquetario o concentración media de plaquetas (CPM): es un indicador del grado de activación plaquetaria y una variable clínica útil en el estudio y seguimiento de pacientes con riesgo de trombosis como en el caso de dializados, diabéticos, fumadores, angina inestable, mujeres embarazadas.

Plaquetas reticuladas (PR): las PR son las más jóvenes de la sangre periférica con un contenido de ARN superior a las demás. Son detectadas mediante la aplicación del método inmunológico. El porcentaje normal de PR es de 0,98 ± 0,41 %.

INFORMACIÓN GRÁFICA

RBC

REL NIo

DISTRIBUCIÓN NORMALRBC 6.09 HGB 17.5 HCT 50.6 MCV 83.1 MCH 28.7 MCHC 34.6 RDW 13.0

10050 200 300130

DEDO

CUERPO

Artefactos glóbulos rojos aglutinados

VCM x ADE

fL

HISTOGRAMA DE ERITROCITOS

Recuento total de Leucocitos

90 160

Linfocitos

MO – MID = Eosinófilo, Basófilo, Monocito

MO o MID

Granulocitos

NeutrófilosEJEMPLO DE ANALISISDISTRIBUCIÓN NORMAL

WBC 8.3 LY # 2.5 MO # .8 GR # 5.1

50 100 300200 400WBC

RELNIo.

HISTOGRAMA DE LEUCOCITOS

DISTRIBUCIÓN NORMALNOMOGRAMA NORMAL

PLT 319 PCT .239 MPV 7.5 PDW 16.3

RELNIo:

PLT FEMTOLITROS2 10 20

HISTOGRAMA DE PLAQUETAS

Cuadrante 1 Blastos

Cuadrante 2 Linfocitos

Cuadrante 3 Monocitos


Cuadrante 4 Neutrofilos

Cuadrante 6 Eosinófilos

Cuadrante 5 Cel. Dañadas

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS DE CINCO PARTES

4

1. Blastos

2. Granulocitos inmaduros

3. Neutrófilos envejecidos y lesionados

4. Plaquetas gigantes

5. Eritrocitos nucleados

6. Linfocitos Variantes

7. Blastos

8. Linfocitos Variantes

9. Blastos5

9

2

78

3

6

1

RECUENTO DIFERENCIA DE LEUCOCITOS ANORMAL

NEUTROPENIA Y LINFOCITOSIS

VOLUMEN

DF1

WBCCuadrante 3 Monocitos




Cuadrante1 Blastos


LINFOCITOS ATÍPICOS

VOLUMEN

DF1

WBC Cuadrante 3 Monocitos




Cuadrante1 Blastos


EOSINOFILIA

VOLUMEN

DF1





Cuadrante1 Blastos


GRANULOCITOS INMADUROS

VOLUMEN

DF1





Cuadrante1 Blastos


DISPERSOGRAMA

Ejemplos de Histogramas

HISTOGRAMA NORMAL

ANEMIA POR DEFICIENCIA DE VITAMINA B12

La curva se desplaza a la

derecha

ANEMIA POR DEFICIENCIA DE HIERRO


izquierda

HISTOGRAMA TALASEMIA BETA


izquierda

HISTOGRAMA DE LA SERIE ROJA Línea Verde: Microcitosis sin anisocitosis. Línea Roja: Macrocitosis sin anisocitosis. Línea Amarilla: Anisocitosis, y/o

Poiquilocitosis. Línea Azul: Doble población

HISTOGRAMA DE LA SERIE PLAQUETARIA

Distribución de plaquetas e interferencias

Posible agregación plaquetaria.

Interferencia producida por microcitosis marcada.

ALARMAS EN LOS ANALIZADORES HEMATOLÓGICOS:

Cualitativas Cuantitativas Identifican blastos, células anormales, granulocitos

inmaduros, etc.

Identifican anemia/policitemia,

leucopenia/leucocitosis, trombocitopenia/trombocit

osisÚtiles Deseables

Identifican anisocitosis, tamaño de plaquetas,

aglutinación de eritrocitos, plaquetas y hemoglobinas

anormales

Identifican eosinofilia, eritrocitos nucleados,

células drepanociticas, esferocitosis, fragmentos de eritrocitos y células de

frotis.

UTILIDAD CLÍNICA

UTILIDAD CLÍNICA Contribuye con la

valoración del resultado de una citometría hemática.

Valoración de la función medular ósea. VPM bajo: hipoproducción medular. VPM alto: trastorno mieloproliferativo

A partir de los resultados obtenidos se puede proceder a hacer pruebas más profundas

UTILIDAD CLÍNICA Ventaja: Buena apreciacion la distribución

volumétrica real entre todos los tipos celulares presentes en la muestra incluyendo en algunas patologías la visualización aun de linfocitos.

Diferenciación entre ferropenia y talasemia menor. Un VCM bajo y RDW: diagnóstico de ferropenia. Un VCM bajo y RDW normal: diagnóstico de talasemia menor

Gracias

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