11

AplicaciAplicaci óónn de de SustratosSustratosCromogCromog éénicosnicos y y

FluorogenicosFluorogenicos en el en el ananáálisislisisMicrobiolMicrobiol óógicogico de de AlimentosAlimentos

22

� La rLa rLa rLa ráááápidapidapidapida deteccideteccideteccideteccióóóónnnn e e e e identificaciidentificaciidentificaciidentificacióóóónnnn dededede los los los los microorganismos esmicroorganismos esmicroorganismos esmicroorganismos es muy importante enmuy importante enmuy importante enmuy importante endiversos campos dediversos campos dediversos campos dediversos campos de aplicaciones e aplicaciones e aplicaciones e aplicaciones e investigaciinvestigaciinvestigaciinvestigacióóóón.n.n.n.

�� La La La La La La La La incorporaciincorporaciincorporaciincorporaciincorporaciincorporaciincorporaciincorporacióóóóóóóónnnnnnnn de de de de de de de de enzimasenzimasenzimasenzimasenzimasenzimasenzimasenzimas y y y y y y y y substratossubstratossubstratossubstratossubstratossubstratossubstratossubstratosen en en en en en en en mediosmediosmediosmediosmediosmediosmediosmedios de de de de de de de de cultivocultivocultivocultivocultivocultivocultivocultivo selectivosselectivosselectivosselectivosselectivosselectivosselectivosselectivos puedepuedepuedepuedepuedepuedepuedepuedeeliminareliminareliminareliminareliminareliminareliminareliminar la la la la la la la la necesidadnecesidadnecesidadnecesidadnecesidadnecesidadnecesidadnecesidad de de de de de de de de realizarrealizarrealizarrealizarrealizarrealizarrealizarrealizarsubcultivossubcultivossubcultivossubcultivossubcultivossubcultivossubcultivossubcultivos y y y y y y y y pruebaspruebaspruebaspruebaspruebaspruebaspruebaspruebas bioqubioqubioqubioqubioqubioqubioqubioquíííííííímicasmicasmicasmicasmicasmicasmicasmicasadicionalesadicionalesadicionalesadicionalesadicionalesadicionalesadicionalesadicionales paraparaparaparaparaparaparapara establecerestablecerestablecerestablecerestablecerestablecerestablecerestablecer la la la la la la la la identidadidentidadidentidadidentidadidentidadidentidadidentidadidentidadde de de de de de de de ciertosciertosciertosciertosciertosciertosciertosciertos microorganismosmicroorganismosmicroorganismosmicroorganismosmicroorganismosmicroorganismosmicroorganismosmicroorganismos. . . . . . . .

33

1. 1. DetecciDeteccióón directa den directa de microorganismosmicroorganismos enen los los medios de cultivo.medios de cultivo.

2. 2. MMéétodos fluoromtodos fluoroméétricostricos y y fotomfotoméétricos entricos enmicrobiologmicrobiologíía.a.

3. 3. Perfiles enzimPerfiles enzimááticos como ayuda en la ticos como ayuda en la clasificaciclasificacióón taxonn taxonóómica en microbiologmica en microbiologíía,a,

4. 4. TTéécnica de filtracicnica de filtracióón Directan Directa epifluorescente epifluorescente (DEFT), (DEFT),

5. 5. CitometrCitometríía de flujoa de flujo (FCM),(FCM),

6. 6. Inmunoensayo FluorescentesInmunoensayo Fluorescentes (FIA), (FIA),

7. 7. MicroscopMicroscopíía de Epifluorescencia.a de Epifluorescencia.

8. 8. AutomatizaciAutomatizacióón.n.

AplicaciAplicacióónn de sustratos de sustratos cromogcromogéénicos y nicos y fluorogfluorogéénicosnicos

44

Sustratos FluorogSustratos FluorogSustratos FluorogSustratos FluorogSustratos FluorogSustratos FluorogSustratos FluorogSustratos Fluorogéééééééénicosnicosnicosnicosnicosnicosnicosnicos

� Colorantes FluorogColorantes FluorogColorantes FluorogColorantes Fluorogéééénicosnicosnicosnicos(8(8(8(8----anilinoanilinoanilinoanilino----1111----naphthalenenaphthalenenaphthalenenaphthalene----sulphonic sulphonic sulphonic sulphonic acidacidacidacid, ANS), ANS), ANS), ANS)

� pHpHpHpH----indicadores fluorescentesindicadores fluorescentesindicadores fluorescentesindicadores fluorescentes ((((acridineacridineacridineacridine, , , , 7777----hydroxycoumarin)hydroxycoumarin)hydroxycoumarin)hydroxycoumarin)

� Indicadores RedoxIndicadores RedoxIndicadores RedoxIndicadores Redox ((((azul de metileno,azul de metileno,azul de metileno,azul de metileno,verde de Janus, verdeverde de Janus, verdeverde de Janus, verdeverde de Janus, verde B, indigo B, indigo B, indigo B, indigo carmin)carmin)carmin)carmin)

� Sustratos enzimaticosSustratos enzimaticosSustratos enzimaticosSustratos enzimaticos

55

� Los Los Los Los sustratossustratossustratossustratosenzimenzimenzimenzimááááticosticosticosticosfluorogfluorogfluorogfluorogéééénicosnicosnicosnicosgeneralmentegeneralmentegeneralmentegeneralmenteconsistenconsistenconsistenconsisten de un de un de un de un substratosubstratosubstratosubstrato especespecespecespecííííficoficoficoficoparaparaparapara unaunaunauna enzimaenzimaenzimaenzimaespecespecespecespecííííficaficaficafica taltaltaltal comocomocomocomounaunaunauna azazazazúúúúcarcarcarcar o un o un o un o un aminoaminoaminoaminoáááácidocidocidocido y un y un y un y un fluorfluorfluorfluoróóóógenogenogenogeno, , , , siendosiendosiendosiendocapazcapazcapazcapaz de de de de convertirconvertirconvertirconvertirla la la la luzluzluzluz UV a UV a UV a UV a luzluzluzluzvisible .visible .visible .visible .

La mayorLa mayor íía de sustratos a de sustratos enzimenzim ááticos fluorogticos fluorog éénicosnicos sonsonderivados de la Coumarina,derivados de la Coumarina, tal tal como: como:

�� 44--methylumbelliferone (4methylumbelliferone (4 --MU) MU) �� 77--amidoamido --44--methylcoumarin (7methylcoumarin (7 --

AMC)AMC)�� 44--trifluorotrifluoro

methylumbelliferonemethylumbelliferone (4(4--TMU)TMU)

66

Ventajas de los sustratos metilumbelliferyl (MUG)

� Solubles en agua.

� Estables al calor

� Alta sensibilidad.

� No riesgosos para la salud.

� Precio rasonable .

� Amplio rango de substratos

� Métodos con aprobaciones (ISO, IDF, EPA)

77

• Requieren luz UVRequieren luz UVRequieren luz UVRequieren luz UV� pH dependientespH dependientespH dependientespH dependientes� Fuerte difusiFuerte difusiFuerte difusiFuerte difusióóóón n n n

Limitaciones de los sustratosLimitaciones de los sustratosLimitaciones de los sustratosLimitaciones de los sustratos Methylumbelliferyl Methylumbelliferyl Methylumbelliferyl Methylumbelliferyl

88

Sustratos CromogSustratos CromogSustratos CromogSustratos CromogSustratos CromogSustratos CromogSustratos CromogSustratos Cromogéééééééénicosnicosnicosnicosnicosnicosnicosnicos

EEEEEEEEnnnnnnnn general pueden distinguirse tres grupos de general pueden distinguirse tres grupos de general pueden distinguirse tres grupos de general pueden distinguirse tres grupos de general pueden distinguirse tres grupos de general pueden distinguirse tres grupos de general pueden distinguirse tres grupos de general pueden distinguirse tres grupos de compuestos cromogcompuestos cromogcompuestos cromogcompuestos cromogcompuestos cromogcompuestos cromogcompuestos cromogcompuestos cromogéééééééénicos con diferentes modos nicos con diferentes modos nicos con diferentes modos nicos con diferentes modos nicos con diferentes modos nicos con diferentes modos nicos con diferentes modos nicos con diferentes modos de accide accide accide accide accide accide accide accióóóóóóóón:n:n:n:n:n:n:n:

Sustrato coloreados propiamente dichos.Sustrato coloreados propiamente dichos.Sustrato coloreados propiamente dichos.Sustrato coloreados propiamente dichos.Sustrato coloreados propiamente dichos.Sustrato coloreados propiamente dichos.Sustrato coloreados propiamente dichos.Sustrato coloreados propiamente dichos.

Captura simultCaptura simultCaptura simultCaptura simultCaptura simultCaptura simultCaptura simultCaptura simultáááááááánea denea denea denea denea denea denea denea de substratossubstratossubstratossubstratossubstratossubstratossubstratossubstratos

Acoplamiento de sustratos PostAcoplamiento de sustratos PostAcoplamiento de sustratos PostAcoplamiento de sustratos PostAcoplamiento de sustratos PostAcoplamiento de sustratos PostAcoplamiento de sustratos PostAcoplamiento de sustratos Post--------incubaciincubaciincubaciincubaciincubaciincubaciincubaciincubacióóóóóóóónnnnnnnn

99

Demanda de ODemanda de ODemanda de ODemanda de O2222

O2

�� oo--, & , & pp--nitrofenol,nitrofenol,

�� pp--nitroanilinanitroanilina (PNA),(PNA),

�� 55--bromobromo --44--chlorochloro --33--indolylindolyl (X),(X),

�� 55--bromobromo --66--chlorochloro --33--indolylindolyl (magenta(magenta ), ),

�� 66--chlorochloro --33--indolylindolyl ((salmonsalmon ), ),

1010

1111

MEDIOS QUE MEDIOS QUE MEDIOS QUE MEDIOS QUE MEDIOS QUE MEDIOS QUE MEDIOS QUE MEDIOS QUE CONTIENEN SUSTRATOSCONTIENEN SUSTRATOSCONTIENEN SUSTRATOSCONTIENEN SUSTRATOSCONTIENEN SUSTRATOSCONTIENEN SUSTRATOSCONTIENEN SUSTRATOSCONTIENEN SUSTRATOSFLUOROGENICOS YFLUOROGENICOS YFLUOROGENICOS YFLUOROGENICOS YFLUOROGENICOS YFLUOROGENICOS YFLUOROGENICOS YFLUOROGENICOS Y CROMOGENICOSCROMOGENICOSCROMOGENICOSCROMOGENICOSCROMOGENICOSCROMOGENICOSCROMOGENICOSCROMOGENICOS

Alimentos Alimentos Alimentos Alimentos Alimentos Alimentos Alimentos Alimentos �� E. coli & E. coli & E. coli & E. coli & E. coli & E. coli & E. coli & E. coli & coliformescoliformescoliformescoliformescoliformescoliformescoliformescoliformes�� E. coli O157:H7 E. coli O157:H7 E. coli O157:H7 E. coli O157:H7 E. coli O157:H7 E. coli O157:H7 E. coli O157:H7 E. coli O157:H7 �� EnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceae�� SalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonella spp.spp.spp.spp.spp.spp.spp.spp.�� CCCCCCCC. . . . . . . . perfringensperfringensperfringensperfringensperfringensperfringensperfringensperfringens�� L. L. L. L. L. L. L. L. monocytogenesmonocytogenesmonocytogenesmonocytogenesmonocytogenesmonocytogenesmonocytogenesmonocytogenes�� EnterococcosEnterococcosEnterococcosEnterococcosEnterococcosEnterococcosEnterococcosEnterococcos

1212

Medios Cromogénicos de Merck

EU EU DirectiveDirective on on DrinkingDrinking WaterWater

ApprovedApproved

Alternative Alternative MethodMethod

ChromocultChromocult®® EnterococciEnterococci AgarAgar

AOAC AOAC pendientependienteApprovedApproved

Alternative Alternative MethodMethod

ChromocultChromocult®® ColiformColiform Agar ESAgar ES

EU EU DirectivaDirectiva on on DrinkingDrinking WaterWater

USUS--EPAEPA

AOAC AOAC pendientependiente

ApprovedApproved

Alternative Alternative MethodMethod

ChromocultChromocult®® ColiformColiform AgarAgar

ISO TS 22964ISO TS 22964

E. E. SakazakiiSakazakii

Standard Standard MethodMethod

ChromocultChromocult®®

EnterobacterEnterobacter SakazakiiSakazakii AgarAgar

ISO 11290 and ISO 11290 and FDA/BAMFDA/BAM

L.MonoL.Mono

Standard Standard MethodMethod

ChromocultChromocult®®

ListeriaListeria SelectivSelectiv AgarAgar

ISO 16649ISO 16649

E.coliE.coli

Standard Standard MethodMethod

ChromocultChromocult®® TBX AgarTBX Agar

ISO 6579ISO 6579

SalmonellaSalmonella

Standard Standard MethodMethod

RambachRambach®® AgarAgar

1313

ColiformesColiformesColiformesColiformesColiformesColiformesColiformesColiformes

Enterobacteriaceae

Escherichia Klebsiella Enterobacter Citrobacter

Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Enterobacter amnigenus Citrobacter freundii

1414

E.coli/ColiformsE.coli/Coliforms

CCA- ESAgar Chromocult Coliformes ES

Caldo LMX

1515

Normas : ensayos Normas : ensayos fluorogfluorogéénicosnicos

�� Para leches y productos lPara leches y productos láácteos, helados de crema, alimentos cteos, helados de crema, alimentos para bebes y nipara bebes y niñños a base de leches se basan en DIN 10 os a base de leches se basan en DIN 10 183 parte 3183 parte 3

•• " El m" El méétodo de La Fluorescenciatodo de La Fluorescencia--opticaoptica para la para la determinacideterminacióón de E. n de E. colicoli es la determinacies la determinacióón paralela de n paralela de bacterias bacterias coliformescoliformes””

•• FluorocultFluorocult®® LaurylLauryl SulphateSulphate brothbroth ((CatCat. No. . No. 1.12588)1.12588)

�� Para el examen de carnes y productos Para el examen de carnes y productos carnicoscarnicos DIN 10 110DIN 10 110" "

•• La FluorescenciaLa Fluorescencia--opticaloptical es el mes el méétodo de recuento de todo de recuento de colonias para la determinacicolonias para la determinacióón de E. n de E. colicoli””

•• FluorocultFluorocult®® ECD ECD agaragar ((CatCat. No. 1.04038). No. 1.04038)

1616

ProducciProducciProducciProducciProducciProducciProducciProduccióóóóóóóón de Gasn de Gasn de Gasn de Gasn de Gasn de Gasn de Gasn de Gas y y y y y y y y áááááááácidocidocidocidocidocidocidocido a partir de a partir de a partir de a partir de a partir de a partir de a partir de a partir de lactosalactosalactosalactosalactosalactosalactosalactosa

�� Escherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coli�� KlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiella�� EnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacter�� CitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacter

�� Gas + Gas + Gas + Gas + Gas + Gas + Gas + Gas + Acid a partir de Acid a partir de Acid a partir de Acid a partir de Acid a partir de Acid a partir de Acid a partir de Acid a partir de Lactosa:Lactosa:Lactosa:Lactosa:Lactosa:Lactosa:Lactosa:Lactosa: 95 % of 95 % of 95 % of 95 % of 95 % of 95 % of 95 % of 95 % of ColiformesColiformesColiformesColiformesColiformesColiformesColiformesColiformes (37(37(37(37(37(37(37(37°°°°°°°°C) C) C) C) C) C) C) C)

�� Gas + Gas + Gas + Gas + Gas + Gas + Gas + Gas + Acid a partir deAcid a partir deAcid a partir deAcid a partir deAcid a partir deAcid a partir deAcid a partir deAcid a partir deLactosa:Lactosa:Lactosa:Lactosa:Lactosa:Lactosa:Lactosa:Lactosa: at 44at 44at 44at 44at 44at 44at 44at 44°°°°°°°°C C C C C C C C SOLO SOLO SOLO SOLO SOLO SOLO SOLO SOLO elelelelelelelel 90 % of E.90 % of E.90 % of E.90 % of E.90 % of E.90 % of E.90 % of E.90 % of E.coli coli coli coli coli coli coli coli

�� Tryptophanasa:Tryptophanasa:Tryptophanasa:Tryptophanasa:Tryptophanasa:Tryptophanasa:Tryptophanasa:Tryptophanasa: 99 % of 99 % of 99 % of 99 % of 99 % of 99 % of 99 % of 99 % of E.E.E.E.E.E.E.E.coli soncoli soncoli soncoli soncoli soncoli soncoli soncoli son Indole Indole Indole Indole Indole Indole Indole Indole positivaspositivaspositivaspositivaspositivaspositivaspositivaspositivas

1717

ProducciProducciProducciProducciProducciProducciProducciProduccióóóóóóóón de n de n de n de n de n de n de n de áááááááácido a partir decido a partir decido a partir decido a partir decido a partir decido a partir decido a partir decido a partir deLactosa Lactosa Lactosa Lactosa Lactosa Lactosa Lactosa Lactosa

�� Escherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coli�� KlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiella�� EnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacter�� CitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacter

�� YersiniaYersiniaYersiniaYersiniaYersiniaYersiniaYersiniaYersinia�� SerratiaSerratiaSerratiaSerratiaSerratiaSerratiaSerratiaSerratia�� HafniaHafniaHafniaHafniaHafniaHafniaHafniaHafnia�� PantoeaPantoeaPantoeaPantoeaPantoeaPantoeaPantoeaPantoea�� KluyveraKluyveraKluyveraKluyveraKluyveraKluyveraKluyveraKluyvera

1818

MMMMMMMMéééééééétodos basados en todos basados en todos basados en todos basados en todos basados en todos basados en todos basados en todos basados en detecciones Enzimdetecciones Enzimdetecciones Enzimdetecciones Enzimdetecciones Enzimdetecciones Enzimdetecciones Enzimdetecciones Enzimááááááááticasticasticasticasticasticasticasticas

Escherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coli�� KlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiella�� EnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacter�� CitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacter�� YersiniaYersiniaYersiniaYersiniaYersiniaYersiniaYersiniaYersinia�� SerratiaSerratiaSerratiaSerratiaSerratiaSerratiaSerratiaSerratia�� HafniaHafniaHafniaHafniaHafniaHafniaHafniaHafnia

�� PantoeaPantoeaPantoeaPantoeaPantoeaPantoeaPantoeaPantoea�� KluyveraKluyveraKluyveraKluyveraKluyveraKluyveraKluyveraKluyvera�� CedeceaCedeceaCedeceaCedeceaCedeceaCedeceaCedeceaCedecea�� EwingellaEwingellaEwingellaEwingellaEwingellaEwingellaEwingellaEwingella�� MoellerellaMoellerellaMoellerellaMoellerellaMoellerellaMoellerellaMoellerellaMoellerella�� LeclerciaLeclerciaLeclerciaLeclerciaLeclerciaLeclerciaLeclerciaLeclercia�� CanellaCanellaCanellaCanellaCanellaCanellaCanellaCanella�� YokenellaYokenellaYokenellaYokenellaYokenellaYokenellaYokenellaYokenella

1919

EnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceaeEnterobacteriaceae y y y y y y y y grupogrupogrupogrupogrupogrupogrupogrupo ''''''''coliformescoliformescoliformescoliformescoliformescoliformescoliformescoliformes' ' ' ' ' ' ' ' ((((((((cepascepascepascepascepascepascepascepas lactosalactosalactosalactosalactosalactosalactosalactosa--------positivaspositivaspositivaspositivaspositivaspositivaspositivaspositivas) ) ) ) ) ) ) )

� GGGGééééneroneroneronero DetectadoDetectadoDetectadoDetectado porporporpor OrigenOrigenOrigenOrigenEnteropatogEnteropatogEnteropatogEnteropatogéééénicanicanicanica

� ''''coliformcoliformcoliformcoliform test'test'test'test' fecalfecalfecalfecal paraparaparapara el hombreel hombreel hombreel hombre

� CitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacter sisisisiaaaa nonononobbbb nononono� EdwardsiellaEdwardsiellaEdwardsiellaEdwardsiella nononono sisisisi algunasalgunasalgunasalgunaseeee

� EnterobacterEnterobacterEnterobacterEnterobacter sisisisi nonononoaaaa nononono� ErwiniaErwiniaErwiniaErwinia nonononocccc nonononodddd nononono� EscherichiaEscherichiaEscherichiaEscherichia sisisisi sisisisi algunasalgunasalgunasalgunaseeee

� HafniaHafniaHafniaHafnia nonononocccc nonononoaaaa nononono� KlebsiellaKlebsiellaKlebsiellaKlebsiella sisisisi nonononoaaaa algunasalgunasalgunasalgunaseeee

� ProteusProteusProteusProteus nonononoaaaa algunasalgunasalgunasalgunaseeee

� SalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonella nononono sisisisi sisisisi� SerratiaSerratiaSerratiaSerratia nononono nononono� ShigellaShigellaShigellaShigella sisisisi sisisisi� YersiniaYersiniaYersiniaYersinia sisisisi algunasalgunasalgunasalgunaseeee

�A A A A ExceptoExceptoExceptoExcepto cepascepascepascepas lactosalactosalactosalactosa----positivaspositivaspositivaspositivas lentaslentaslentaslentas

�b b b b AlgunasAlgunasAlgunasAlgunas cepascepascepascepas de de de de origenorigenorigenorigen fecalfecalfecalfecal peroperoperopero quequequeque crecencrecencrecencrecen en en en en otrosotrosotrosotros ambientesambientesambientesambientes....

�C C C C ExceptoExceptoExceptoExcepto cepascepascepascepas cosaionalescosaionalescosaionalescosaionales....

�D D D D ExceptoExceptoExceptoExcepto cepascepascepascepas adaptadasadaptadasadaptadasadaptadas a a a a crecimientocrecimientocrecimientocrecimiento rrrráááápidopidopidopido cercacercacercacerca a 37oC.a 37oC.a 37oC.a 37oC.

�E E E E AlgunosoAlgunosoAlgunosoAlgunoso serotiposserotiposserotiposserotipos incluyenincluyenincluyenincluyen cepascepascepascepas enteropatogenteropatogenteropatogenteropatogéééénicasnicasnicasnicas . ICMSF, 1978. ICMSF, 1978. ICMSF, 1978. ICMSF, 1978

2020

Agar cromogénico para la detección simultánea y recuent oTotal de coliformes y E. coli en muestras de alimentos.

Agar Chromocult ® Coliform ES # 1.00850

Coliforms

E.coli

Agar ChromocultAgar Chromocult ®® Coliform ESColiform ES

2121

ChromocultChromocult ®® ColiformColiform AgarAgar ESES

Food Testing (se Food Testing (se esperaesperaaprobaciaprobacióónn parapara 11.2009)11.2009)

2009:2009: AOACAOAC™™ en procesoen procesomméétodo para latodo para la deteccideteccióónn dedecoliformescoliformes yy E. E. colicoli in in

Alimentos frescosAlimentos frescos

pollo,y leche cruda)pollo,y leche cruda)

ChromocultChromocult®® ColiformColiform agar ESagar ES

AOAC AOAC pendientependiente

ChromocultChromocult®® ColiformColiform Agar ES Agar ES 1.008501.00850

ChromogenicChromogenic Agar Agar parapara la la deteccideteccióónn simultsimultááneanea

E coli y E coli y coliformescoliformes

E. coliE. coli en en muestrasmuestras de de alimentosalimentos..

ES = Enhanced selectivityES = Enhanced selectivity

CCA ES CCA ES contiencontien inhibidores inhibidores

adicionalesadicionales

parapara suprimir a lossuprimir a los nono--ColiformesColiformes

2222

E. coliE. coliE. coliE. coliE. coliE. coliE. coliE. coli

�� ßßßßßßßß--------DDDDDDDD--------glucuronidasaglucuronidasaglucuronidasaglucuronidasaglucuronidasaglucuronidasaglucuronidasaglucuronidasaPresentePresentePresentePresentePresentePresentePresentePresente en el en el en el en el en el en el en el en el 9494949494949494--------97% 97% 97% 97% 97% 97% 97% 97% de cepas de de cepas de de cepas de de cepas de de cepas de de cepas de de cepas de de cepas de E. coliE. coliE. coliE. coliE. coliE. coliE. coliE. coli

�� SSSSSSSSóóóóóóóólo pocas cepas de lo pocas cepas de lo pocas cepas de lo pocas cepas de lo pocas cepas de lo pocas cepas de lo pocas cepas de lo pocas cepas de SalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonella, Shigella, Shigella, Shigella, Shigella, Shigella, Shigella, Shigella, Shigellaand and and and and and and and YersiniaYersiniaYersiniaYersiniaYersiniaYersiniaYersiniaYersinia producen la enzima tambiproducen la enzima tambiproducen la enzima tambiproducen la enzima tambiproducen la enzima tambiproducen la enzima tambiproducen la enzima tambiproducen la enzima tambiéééééééén.n.n.n.n.n.n.n.

�� Otras especies de Otras especies de Otras especies de Otras especies de Otras especies de Otras especies de Otras especies de Otras especies de EscherichiaEscherichiaEscherichiaEscherichiaEscherichiaEscherichiaEscherichiaEscherichia spp. spp. spp. spp. spp. spp. spp. spp. no no no no no no no no producen esta enzimaproducen esta enzimaproducen esta enzimaproducen esta enzimaproducen esta enzimaproducen esta enzimaproducen esta enzimaproducen esta enzima

2323

� pppp----nitrophenolnitrophenolnitrophenolnitrophenol----ßßßß----DDDD----glucuronideglucuronideglucuronideglucuronide (PNPG) (PNPG) (PNPG) (PNPG) � 5555----bromobromobromobromo----4444----chlorochlorochlorochloro----3333----indolylindolylindolylindolyl----ßßßß----DDDD----glucuronide glucuronide glucuronide glucuronide (BCIG)(BCIG)(BCIG)(BCIG)� phenolphtaleinphenolphtaleinphenolphtaleinphenolphtalein----monomonomonomono----ββββ----DDDD----glucuronideglucuronideglucuronideglucuronide� 4444----methylumbelliferylmethylumbelliferylmethylumbelliferylmethylumbelliferyl----ßßßß----DDDD----glucuronide glucuronide glucuronide glucuronide (MUG)(MUG)(MUG)(MUG)� 8888----hydroxyquinolinehydroxyquinolinehydroxyquinolinehydroxyquinoline----ßßßß----DDDD----glucuronide (HQG)glucuronide (HQG)glucuronide (HQG)glucuronide (HQG)� 6666----ChloroChloroChloroChloro----3333----indoxylindoxylindoxylindoxyl---- ßßßß----DDDD----glucuronideglucuronideglucuronideglucuronide ((((SalmonSalmonSalmonSalmon----gluglugluglu),),),),� 5555----bromobromobromobromo----6666----chlorochlorochlorochloro----3333----indoxylindoxylindoxylindoxyl---- ßßßß----DDDD----glucuronideglucuronideglucuronideglucuronide

(magenta(magenta(magenta(magenta----gluglugluglu))))

La actividad La actividad La actividad La actividad ßßßß----DDDD----glucuronidasaglucuronidasaglucuronidasaglucuronidasa (E. (E. (E. (E. colicolicolicoli)))) esesesesmedida usando diferentes sustratos medida usando diferentes sustratos medida usando diferentes sustratos medida usando diferentes sustratos

cromogcromogcromogcromogéééénicosnicosnicosnicos y y y y fluorogfluorogfluorogfluorogéééénicosnicosnicosnicos tales comotales comotales comotales como

2424

Medios cromogMedios cromogMedios cromogMedios cromogéééénicos nicos nicos nicos ssssóóóólo para Elo para Elo para Elo para E. coli. coli. coli. coli

� Agar TBXAgar TBXAgar TBXAgar TBXTBX TBX TBX TBX eseseses unaunaunauna modificacimodificacimodificacimodificacióóóónnnn de Agar de Agar de Agar de Agar TryptoneTryptoneTryptoneTryptone BilisBilisBilisBilis al al al al cualcualcualcual se le se le se le se le adicionadoadicionadoadicionadoadicionado el el el el substratosubstratosubstratosubstrato 5555----bromobromobromobromo----4444----chlorochlorochlorochloro----3333----indolylindolylindolylindolyl----ßßßß----DDDD----glucuronido (Xglucuronido (Xglucuronido (Xglucuronido (X----GLUC or BCIG) GLUC or BCIG) GLUC or BCIG) GLUC or BCIG) GUD GUD GUD GUD ligaligaligaliga el el el el sustratosustratosustratosustrato cromogcromogcromogcromogééééniconiconiconico BCIG y BCIG y BCIG y BCIG y liberaliberaliberaliberacolorcolorcolorcolor originandooriginandooriginandooriginando coloniascoloniascoloniascolonias azulazulazulazul----verdosasverdosasverdosasverdosas ffffááááilmenteilmenteilmenteilmentedistinguiblesdistinguiblesdistinguiblesdistinguibles y y y y ffffáááácilcilcilcil de leer de de leer de de leer de de leer de E.coliE.coliE.coliE.coli....

� Medio FluorocultMedio FluorocultMedio FluorocultMedio Fluorocult

2525

AgarAgar ChromocultChromocult TBX TBX E.ColiE.Coli

accacc. ISO 16649. ISO 16649

2626

• La rápida detección e identificación de los microorganismos es muy importante en diversos campos de aplicaciones e investigación.

La La incorporaciincorporacióónn de de enzimasenzimas y y substratossubstratos en en mediosmedios de de cultivocultivo selectivosselectivos puedepuede eliminareliminar la la necesidadnecesidad de de realizarrealizar subcultivossubcultivos y y pruebaspruebasbioqubioquíímicasmicas adicionalesadicionales parapara establecerestablecer la la identidadidentidad de de ciertosciertos microorganismosmicroorganismos

Antecedentes

2727

NormasNormas

�� La EnumeraciLa Enumeracióón de n de EscherichiaEscherichia colicoli en alimentos y alimentos en alimentos y alimentos para animales y aguas acorde a para animales y aguas acorde a ISO 16649.ISO 16649.

•• ISO 16649 Parte 1:ISO 16649 Parte 1: TTéécnica de recuento de colonias a 44 cnica de recuento de colonias a 44 ±±11ººCC usando membranas y 5usando membranas y 5--bromobromo-- 44--chlorochloro--33--indolylindolyl--ßß--DD--glucuronicglucuronic acidacid (X(X--GLUC) GLUC) (T(Téécnica de Filtracicnica de Filtracióón de n de MembraneMembrane).).

•• ISO 16649 ISO 16649 PartPart 22: : TecnicaTecnica de recuento de colonias en de recuento de colonias en placa a 44 placa a 44 ±±11ººCC usando 5usando 5--bromobromo--44--chlorochloro--33--indolylindolylßß--DD--glucuronicglucuronic acidacid (X(X--GLUC) GLUC) (t(téécnica de Recuento en Placa). cnica de Recuento en Placa). Este mEste méétodo puede se usado para alimentos frescos que todo puede se usado para alimentos frescos que rara vez rara vez cotienencotienen microorganismos estresados. microorganismos estresados.

2828

Composición típica (g/l)Peptonas 20.0

Sales biliares No.3 1.5

Cromógeno X-GLUC 0.075

Agar-Agar 15.0

pH: 7.2 ± 0.2 at 25 °C.Medio: 36.5 gr/ Lt.

La peptonas, garantiza el crecimientodelas colonias. Las sales biliares y la incubación a altas temperaturas 44°Cinhiben el crecmiento de bacterias Gram-positivas y no afecta el crecimiento de E.Coli.

Un Choque termico a 30 o 37°C por 4 horas permite revivir las bacterias subletalmente injuredas de E.coli.

El substrato cromogénicos diferencian y detectan la bacteria E.coli.

La cepas de E coli Glucuronidase-negativa i (3-4 %) da colonias incoloras ej. E. coli 0157, o no pueden crecer a elevadas temperaturas de 44 °C, ej. E. coli 0157:H7 .

Agar Chromocult ® TBX E.Coli .

2929

SUSTRATOSUSTRATOEnzima

ß-D-GlucoronidasaENZIMAENZIMA

Sustrato

X-Gluc

IdentificaciIdentificacióón n EnzimEnzimááticaticaE. E. colicoli ((ßß--DD--glucoronidasaglucoronidasa))

Agar Chromocult ® TBX E.Coli.Metódos de sustrato definido

FLUOROGENO oCROMOGENO

FLUOROGENO oCROMOGENOCromógeno Azul-verdoso

5-bromo-4-chloro-3-indolyl-ß-D-glucoronic Acid ( X-GLUC)

3030

1 Día

Procedimiento Chromocult TBX E.coli Recuento en placa .

1 ml Muestra + 15 ml Cromocult TBX 45-50°C - Placa

Incoloras: Otras

Negativo

Pesar 36.6 gr/L de A Cromocult TBX.

Azul-verdosas: E.Coli

Cambio de Color

Positivo

Incubar 44°C por 18-24 horas

Incubar 37 0 30°C por 4 horas

luego 44°C x 18-20 horas

E.Coli subletalmenteinjuriada.

Alimentos frescos o materias primas

3131

1 Día

Procedimiento Chromocult TBX E.coli Filtración Membrana .

Filtrar Muestra por un flitro 0.45 Um

Incoloras: Otras

Negativo

Pesar 36.6 gr/L de A Cromocult TBX.

Azul-verdosas: E.Coli

Cambio de Color

Positivo

Incubar 44°C por 18-24 horas

en Cromocult TBX

Pasar a Agar Glutamato (Caldo glutaminato DEV

+ 15Gr Aga-agar) - Incubar 30 o 37°C x 4 horas luego 18-24 horas

a 44°C en CromocultTBX

E.Coli subletalmenteinjuriada.

Alimentos frescos o materias primas

3232

Literature•Draft International Standard ISO/DIS 16649-2: Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of presumptive Escherichiacoli; Part 2: Colony-count technique at 44 °C using 5-bro mo-4-chloro-3-indolyl-ß-D-glucoronic acid (1999).

Cepas InóculoUFC/ml

Color Colonia Rate derecuperación

Escherichia coli DSM 502 103-105 Azul Verdoso = 70 %

Citrobacter freundii ATCC8090

= 105 - = 0.01 %

Enterococcus faecalis ATCC19433

= 105 - = 0.01 %

Agar Chromocult ® TBX E.Coli.Metódos de sustrato definido

3333

Item Descripción Envase

1.16122.0500 Agar Chromocult® TBXE.Coli

500 Gr

1.10687.0500 Caldo glutaminato DEV 500 Gr

1.01614.1000 Agar-Agar 1 Kgr

Agar Chromocult ® TBX E.Coli.Metódos de sustrato definido .

•Simple detección por cambio de color Fácil lecturaFácil lectura

•Reacción sustrato Enzima muy específicaSelectivoSelectivo

RápidoRápido•Detección E.colien 24 horas para bacterias enjuriadas o no..

EconómicoEconómico•Reducción de tiempo y material.

3434

Agar Chromocult ® TBX E.Coli.Costo Prueba 2008-2009

1.86 Nuevos SolesCOSTO PRUEBA TOTAL EN SOLES INCLUIDO 02 diluciones (1/10, 1/100 ó 1/100 , 1/1000)

2.80 Nuevos SolesCOSTO PRUEBA TOTAL EN SOLES INCLUIDO 03 diluciones (1/10, 1/100 y 1/1000)

Rinde 910 placas : Si se trabaja por el Método de Incorporación o Pour Plate con 03 diluciones el costo Prueba sería de S/ 0.93 x 3 = S/ 2.79 soles

Rinde 13.66 Litros (36.6 gr de agar / Litro) : Aprox. 910 placas con de 15 ml. de agar)

S/ 0.93S/ 847.00Agar ChromoCULT Coliformes x 500 gr (13.66 Lts)

1161220500

Costo x Placa en S/ (SOLES)

sin IGV

Costo por presentación

sin IGVDescripción y Rendimiento por ProductoCódigo

RENDIMIENTO Y COSTO PRUEBA : EVALUACIÓN DE E.COLI en ALIMENTOS CON el MEDIO CROMOGÉNICO TBX

3535

E.E.E.E. colicolicolicoli////coliformscoliformscoliformscoliforms media media media media

3636

ReferenciasComposiciónMedio

Reinders et al., 20008-hydroxyquinoline-ß-D-glucuronide

HQG-SMAC

Zadik et al. , 1993SMAC +Cefixime + Tellurite

CT-SMAC (FDA)

Chapman et al. , 1991SMAC + Cefixime + Rhamnose

CR-SMAC

Okrend et al. , 1990SMAC + BCIGBCIG MSA- (USDA)

Szabo ,1986SMAC + MUGMSA-MUG

March and Ratnam, 1986MacConkey’s with 1% sorbitol replacing lactose

MacConkey-SorbitolAgar (MSA) or “SMAC”

E.E. colicoli O157:H7O157:H7

3737Comparative evaluation of different chromogenic/fluor ogenic media for detecting Escherichia coli O157:H7 in f ood.Int J Food Microbiol 2001 Dec 30;71(2-3):257-62.

Fluorocult E.coli O157:H7 (Merck)

3838

Composición típica (g/L)Triptosa 5.0

Sorbitol 1.0

Potasio dihidrogeno fosfato 2.0

Di-potasio hidrogeno fosfato 2.7

Lauril sulfato Sodio 0.1

Triptofano 1.0

X-GAL 0.08

MUG 0.05

IPTG 0.1.

pH: 6.8 ± 0.2 at 25 °C.

La interacción de triptosa, sorbitoly bufer fosfatos garantiza el rápido crecimientode las colonias, evenfor sublethally injured coliforms. El Lauril sulfato inhibe el crecmientode bacterias Gram-positivas y algunas Gram-negativas y no afecta el crecimiento de bacterias coliformes.

La combinación de de 2 sustratos cromogenicos los cuales diferencian y detectan los coliformes totales y E.coli. El IPTG aumenta la actividad de la enzima B-D-galactosidasa.

Fluorocult® Caldo LMX Coliformesmodificado por MANAFI and OSSMER .

3939

SUSTRATOSUSTRATO

Enzima

ß-D-Galactosidasa

ENZIMAENZIMASustrato

X-Gal

IdentificaciIdentificacióón Enzimn EnzimááticaticaColiformes Totales (Coliformes Totales (ßß--DD--galactosidasagalactosidasa))

5-bromo-4-chloro-3-indolyl-ß-D-galactopyranoside (X-GAL)

Fluorocult® Caldo LMX Coliformesmodificado por MANAFI and OSSMER .

FLUOROGENO oCROMOGENO

FLUOROGENO oCROMOGENO

Cromógeno VerdeColiformes (Positivo ß-D-galactosidasa)

4040

SUSTRATOSUSTRATOEnzima

ß-D-GlucoronidasaENZIMAENZIMA

Substrato

MUG

IdentificaciIdentificacióón Enzimn EnzimááticaticaE. ColiE. Coli ((ßß--DD--glucoronidasaglucoronidasa))

Fluorocult® Caldo LMX Coliformesmodificado por MANAFI and OSSMER .

FLUOROGENO o CROMOGENO

FLUOROGENO o CROMOGENOFluorógeno : Fluorescencia

a UV: 365 nm

5-bromo-4-chloro-3-indolyl-ß-D-glucopyranoside (MUG)

4141

1 Día

Fluorocult® Caldo LMX Coliformesmodificado por MANAFI and OSSMER .

NMPTubos multiples con 10 ml Fluorocult

caldo LMX a simple concentración1, 0.1, 0.01 ml muestra 35°C

Verdes: Coliformes TIncoloras: Otras Gram

-

Negativo

Pesar 17 gr/L de Fluorocult Caldo LMX a simple concentración.

Fluorescencia: E.Coli

Cambio de Color

PositivoPrueba de indol con Kovac’s

Alto Gram + : 30 mgNovobiocina en 1 Litro de medio antes de autoclavar)

Sin Cambio color

PH medio para ver Fluorescencia: 9-10.

4242

Cepas Cambio Color

B-D-Gal

B-D-Gluc

Indol

Escherichia coli ATCC 25922 + + + + Citrobacter freundii ATCC 8090 + + - - Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 + + - - Enterobacter cloacae ATCC 13047 + + - - Citrobacter freundii ATCC 6750 + - - - Shigella flexneri ATCC 12022 - - - - Salmonella typhimurium ATCC 14028 - - - -

Fluorocult® Caldo LMX Coliformesmodificado por MANAFI and OSSMER .

Literature• HAHN, G., a. WITTROCK, E.: Comparison of chromogenic and fluorogenic substances for differentiation of Coliforms and Escherichia coli in soft

cheeses. - Acta Microbiologic Hungarica 38 (3-4); 265-271 (1991).

• MANAFI, M., a. KNEIFEL, W.: Ein kombiniertes Chromogen-Fluorogen-Medium zurm simultanen Nachweis der Coliformengruppe und von E. coli in Wasser. - Zbl. Hygiene und Umweltmedizin 189; 225-234 (1989). MANAFI, M.: Schnellnachweis von Bakterien mittels fluorogener undchromogener Substrate. - Forum Städte-Hygiene 41; 181-184 (1990).

• MANAFI, M.: Diagnostik von Mikroorganismen mittels fluorogener und chromogener Substrate. - Ernährung/Nutrition 15, Nr. 10 (1991) MANAFI, M., a. KNEIFEL, W.: Fluorogenic and chromogenic substrates. - A promising tool in Microbiology. - Acta Microbiologica Hungarica 38 (3-4); 293-304 (1991).

• MANAFI, M., KNEIFEL, F., a. BASCON, S.: Fluorogenic and chromogenic substrates used in bacterial diagnosis. - Microbiol. Rev. 55; 335-348 (1991).

• OSSMER, R.: Simultaneous Detection of Total Coliforms and E. coli-Fluorocult LMX-Broth. - 15th international Symposium/FOOD MICRO 1993.

4343

Item Descripción Envase

1.110620.0500 Fluorocult Caldo LMXColiformes

500 Gr

1.09293.0100 Reactivo de Kovac’s 100 ml

B491207 Novobiocina 1 gr,10 gr

1.13203.0001 Lampara UV 365 nm 1 UN

Fluorocult® Caldo LMX Coliformesmodificado por MANAFI and OSSMER .

•Simple detección por cambio de color diferencia los Coliformes y E.Coli

Fácil lecturaFácil lectura

•Reacción sustrato Enzima muy específicaSelectivoSelectivo

RápidoRápido•Detección simultanea de Coliformes y E.coli en 24h.

EconómicoEconómico•Requiere solo un medio.

•Reducción de tiempo y material -No usa tubos Durhan.

4444

Los medios cLos medios cLos medios cLos medios convencionalesonvencionalesonvencionalesonvencionales paraparaparapara la la la la dteccidteccidteccidteccióóóónnnn de de de de SalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonella hanhanhanhan tenidotenidotenidotenido pobrepobrepobrepobreespecificidadespecificidadespecificidadespecificidad ocasionandoocasionandoocasionandoocasionando unaunaunauna altaaltaaltaalta tasatasatasatasade de de de falsosfalsosfalsosfalsos positivospositivospositivospositivos ((((asasasasíííí comocomocomocomo con con con con CitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacter, Proteus, Proteus, Proteus, Proteus) . ) . ) . ) .

El El El El trabajotrabajotrabajotrabajo adicionaladicionaladicionaladicional del del del del examenexamenexamenexameninnecesarioinnecesarioinnecesarioinnecesario de la de la de la de la confirmaciconfirmaciconfirmaciconfirmacióóóónnnn de de de de coloniascoloniascoloniascoloniassospechosassospechosassospechosassospechosas eseseses demasiadodemasiadodemasiadodemasiado alto en el alto en el alto en el alto en el trabajotrabajotrabajotrabajo de de de de rutinarutinarutinarutina. . . .

4545

Salmonella

El uso de nuevos medios cromogénicos y fluorogénicos facilitan una diagnóstico de Salmonella mas fácil y más rápido.

RAMBACH

4646

Agar RambachAgar Rambach ®®

VentajaVentaja::

OtrasOtras enterobacteriasenterobacterias y Gramy Gram--negativasnegativas crecencrecen ccóómomo bacteriasbacterias

incolorasincoloras

Agar Agar RambachRambach se se basabasa en en la la formaciformacióónn de de áácidocido a a partirpartir de de propilenpropilen glicolglicol

(+ pH indicator)(+ pH indicator)

DesventajaDesventaja::

CitrobacterCitrobacter y Proteus: y Proteus: parecidosparecidosa Salmonellaa SalmonellaAltoAlto nnúúmeromero de de falsosfalsos -- positivospositivos

MMéétodostodos TradicionalesTradicionalesparapara Salmonella se Salmonella se basanbasanen la en la reaccireaccióónn del H2S :del H2S :

Identificación clara, fácil y confiable deSalmonella enmuestras de alimentos

Agar Rambach®Código 1.07500

Salmonellared

Coliformsblue-green

Proteusyellowish/ colourless

4747

Agar Rambach para Salmonella

Existen medios para

Salmonella que producengran número de falsos

positivos, como

Citrobacter y Proteus.CRECIMIENTO TIPICO :

COLONIAS NEGRAS .

DISTINTOS COLORES DISTINTOS COLORES DISTINTOS COLORES DISTINTOS COLORES

FACILITAN LA LECTURA:FACILITAN LA LECTURA:FACILITAN LA LECTURA:FACILITAN LA LECTURA:

SalmonellaSalmonellaSalmonellaSalmonella sonsonsonson ROJASROJASROJASROJAS

CitrobacterCitrobacterCitrobacterCitrobacter sonsonsonson AZULESAZULESAZULESAZULES

Proteus Proteus Proteus Proteus sonsonsonson BLANCASBLANCASBLANCASBLANCAS

o son inhibidoso son inhibidoso son inhibidoso son inhibidos

AISLAMIENTO DE Salmonella en ALIMENTOS

4848

XLD HEKTOENBISMUTHSULFITE RAMBACH

AISLAMIENTO DE Salmonella EN ALIMENTOS

4949

ComposiciComposicióón de los Medios de Cultivon de los Medios de Cultivo

XLD BISMUTO SULFITO XLT 4 Hektoen Rambach

Inhibidor Desoxicolato Verde Brillante Tergitol 4Bilis,Fucsina, Novobiocina

Eosina Azul de Metileno

Indicador Rojo Fenol Bismuto Sulfito Rojo Fenol Azul br omotimol

Mezcla Cromogénica, Propilenglicol

SustratoXilosa, Sacarosa, Lactosa Glucosa

Xilosa, Sacarosa, Lactosa Lactosa, Salicina

Mezcla Cromogénica, Propilenglicol

Factores Crecimiento Extracto Levadura,

Peptona, Extrato Carne

Peptona, extracto levadura

Peptona, Extracto levad. Peptona

OtrosSodio tiosulfato, Amonio Fe III Sulfato Ferroso

Sodio tiosulfato, Amonio Fe III

Sodio tiosulfato, Amonio Fe III

5050

DETECCION DE Salmonella

METODO CALDO SALMOSYST® /AGAR RAMBACH®

25 g/ml de muestra

en caldo SALMOSYST® por 6 h a 35 - 37°C

Adicionar 1 tableta

de SALMOSYST® Selectivo a 10 ml de caldo SALMOSYST®

y continue incubando por 18 h a 35 - 37°C

Agar RAMBACH®

por 24 h a 35 - 37°C

BIOQUIMICA / SEROLOGIA

PRUEBAS CONFIRMATIVAS

Día1

Día2

Día3

MERCK KGaA Darmstadt, Germany

5151

En n n n conclusiconclusiconclusiconclusióóóónnnn, los , los , los , los mmmméééétodostodostodostodos de de de de deteccideteccideteccideteccióóóónenenene enzimenzimenzimenzimááááticaticaticaticaconstituyenconstituyenconstituyenconstituyen herramientasherramientasherramientasherramientas poderosaspoderosaspoderosaspoderosas paraparaparapara la la la la deteccideteccideteccideteccióóóónnnn de de de de determinadasdeterminadasdeterminadasdeterminadas actividadesactividadesactividadesactividades enzimenzimenzimenzimááááticasticasticasticasde de de de ciertosciertosciertosciertos microorganismosmicroorganismosmicroorganismosmicroorganismos. . . .

La La La La incorporaciincorporaciincorporaciincorporacióóóónnnn de de de de sustratossustratossustratossustratos cromogcromogcromogcromogéééénicosnicosnicosnicos o o o o fluorogfluorogfluorogfluorogéééénicosnicosnicosnicos a a a a mediosmediosmediosmedios selectivosselectivosselectivosselectivos puedepuedepuedepuede eliminareliminareliminareliminar la la la la necesidadnecesidadnecesidadnecesidad de de de de subcultivossubcultivossubcultivossubcultivos y y y y pruebaspruebaspruebaspruebas biqubiqubiqubiquíííímicasmicasmicasmicasadicionalesadicionalesadicionalesadicionales paraparaparapara establecerestablecerestablecerestablecer la la la la identidadidentidadidentidadidentidad de los de los de los de los microorganismosmicroorganismosmicroorganismosmicroorganismos en en en en estudioestudioestudioestudio EstosEstosEstosEstos ensayosensayosensayosensayosenzimenzimenzimenzimááááticosticosticosticos puedenpuedenpuedenpueden conmstituirconmstituirconmstituirconmstituir un un un un metodometodometodometodoalternativoalternativoalternativoalternativo paraparaparapara cuantificarcuantificarcuantificarcuantificar miroorganismosmiroorganismosmiroorganismosmiroorganismos en en en en aguaaguaaguaaguay y y y alimentosalimentosalimentosalimentos los los los los cualescualescualescuales son son son son sensiblessensiblessensiblessensibles y y y y especificosespecificosespecificosespecificos. . . .

5252

Gracias por su atención, alguna pregunta??