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ENSAYOS MICROBIOLOGICOS 1º CFGS

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U.T. 4

TÉCNICAS DE ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN (4h)

1. INTRODUCCION

Vocabulario

2. METODOS DE DESCONTAMINACION. CLASIFICACION

2.1. METODOS FISICOS Térmicos Calor directo Calor seco Calor húmedo No térmicos Filtración Radiación Sedimentación 2.2. MÉTODOS QUÍMICOS Características de los desinfectantes Tipos de desinfectantes

Principales grupos de agentes químicos utilizados como antimicrobianos Otros agentes microbiostáticos Antibiograma

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1. INTRODUCCION En el Laboratorio de Microbiología es imprescindible trabajar en ausencia total de microorganismos contaminantes, por ello, se recurre a la esterilización y desinfección, que son técnicas destinadas a tal fin. Las técnicas anteriormente citadas se utilizan para tratar el material de trabajo y, a través de ellas, se puede conseguir el ambiente libre de microorganismos necesario para la realización de cualquier determinación microbiológica Vocabulario:

DESINFECCIÓN: Eliminación de agentes infecciosos que están fuera del organismo por medio de la exposición directa a agentes químicos o físicos.

DESINFECTANTE: Sustancia que destruye los gérmenes o microorganismos presentes, a excepción de las esporas bacterianas. Se utiliza este término en sustancias aplicadas sobre objetos inanimados.

ESTERILIDAD: Ausencia absoluta de microorganismos. Este estado debe ser mantenido hasta que el producto, el local o el fluido sean utilizados. La esterilidad es una noción relativa. Se debe considerar siempre en referencia con los métodos utilizados para controlarla: tipo de muestra, naturaleza del medio de cultivo, condiciones de estos cultivos, tales como temperatura y duración de la incubación, pH, potencial de oxidación/reducción, etc. ESTERILIZACIÓN: Destrucción de todas las formas de vida por calor, radiación, gas o tratamiento químico. GERMICIDA: Agente que destruye microorganismos en especial patógenos, en tejidos vivos y objetos inanimados. Según germen sobre el que actúa, se lo denominará fungicida, virucida, bactericida, etc... BACTERICIDA: Se denomina así a un producto que tiene la propiedad de matar las bacterias en unas condiciones de empleo definidas. BACTERIOSTÁTICO: Es un producto que posee la propiedad de inhibir momentáneamente la multiplicación de las bacterias en unas condiciones de empleo definidas. ANTISÉPTICO: Sustancia aplicada en la piel u otro tejido vivo que previene o detiene el crecimiento o la acción de microorganismos por inhibición de su actividad o por su destrucción.

LIMPIEZA: Eliminación, mediante fregado y lavado con agua caliente, jabón o un detergente adecuado, o por el empleo de una aspiradora, de agentes infecciosos y substancias orgánicas de superficies en las cuales éstos pueden encontrar condiciones adecuadas para sobrevivir o multiplicarse.


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DESCONTAMINACIÓN: Es una acción que tiene por fin eliminar, matar o inhibir los microorganismos indeseables en función de los objetivos fijados. Sólo son destruidos los microorganismos presentes durante esta operación. 2. METODOS DE DESCONTAMINACION. CLASIFICACION Se pueden clasificar en dos grupos:

a) Métodos físicos: son aquellas técnicas que, aplicando la acción de determinados fenómenos físicos que influyen en el desarrollo de los microorganismos, modifican su actividad fisiológica. Son técnicas esterilizantes y microbiostáticas. b) Métodos químicos: se basan en la acción que sobre los microorganismos poseen determinados productos químicos. Son técnicas desinfectantes y esterilizantes. 2.1. METODOS FISICOS Clasificación Atendiendo a la naturaleza del fenómeno físico aplicado se pueden clasificar en térmicos y no térmicos (esquema) Flameado Calor directo Incineración Calor seco Térmicos Ebullición Tindalización Vapor saturado Métodos que utilizan vapor

de agua a presión (autoclave) Calor húmedo Vapor fluente Pasteurización Uperización Filtración No térmicos No ionizantes: rayos UV, etc Radiaciones Ionizantes: rayos X, rayos γ, etc.

Sedimentación


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Métodos térmicos: El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor húmedo, el cual destruye a los microorganismos por desnaturalización de las proteínas y e calor seco que destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El calor es considerado como el método de esterilización por excelencia, siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas, sin sufrir ningún tipo de daño. -Factores que influyen en la muerte del microorganismo por calor La utilización de este método y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposición y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acción del calor. El calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos Siempre que se aplique calor como agente de esterilización se deben tener en cuenta:

1. Número de microorganismos: a mayor número de microorganismos, se necesitará una mayor intensidad de tratamiento. 2. Naturaleza del microorganismo: las formas vegetativas son más sensibles que las esporas, y en estado de crecimiento exponencial, son más que en el de fase estacionaria. 3. Temperatura: a mayor temperatura, hasta cierto límite, mayor efectividad y rapidez. 4. Tiempo de actuación: hay que tener en cuenta que el tiempo de duración del proceso es el resultado de sumar (Fig.):

-Tiempo de penetración: es el tiempo necesario para que el material a esterilizar adquiera la temperatura de esterilización, después de que la cámara lo ha alcanzado. -Tiempo de calefacción: es el requerido para que dicha temperatura destruya la población microbiana. -Tiempo de seguridad: asignado de forma arbitraria.

Figura 2.1. Gráfica de la evolución de la temperatura en el interior de la cámara de esterilización (autoclave) y del producto a esterilizar. Se observa que al principio del proceso, es mayor la temperatura de la cámara que la del producto


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5. Método empleado: definimos el tiempo de muerte térmica(TMT), como el tiempo necesario para destruir un determinado microorganismo a una temperatura dada. Se observa en la gráfica siguiente que el calor húmedo es más penetrante y eficaz que el calor seco. Asimismo, en el esquema se detallan los tiempos de calefacción recomendados para esterilizar por ambos métodos.

Esquema. Tabla comparativa de los tiempos de calefacción recomendados para esterilizar por calor. Calor seco: Calor húmedo:

Temperatura Tiempos Temperatura Tiempos 180º 30´ 132 º 2´ 170º 60´ 121º 12´ 160º 120´ 116º 30´ 150º 2h. 30´ 110º 60´ 140º 3h. 100º 500´ 120º Más de 6 horas.

-Descripción 1. Calor directo

• FLAMEADO: consiste en someter directamente a la llama de un mechero el material que se vaya a esterilizar. Se emplea para agujas, asas, espátulas, pinzas, bocas de tubos de ensayo, cuellos de matraces, extremos de pipetas, etc. El material citado debe flamearse antes y después de su empleo. Los objetos metálicos se someten a la llama hasta que adquieren color rojo intenso, tomando la precaución de dejarlos enfriar antes de su uso.


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• INCINERACIÓN: se utiliza para quemar el material de desecho en hornos crematorios. Se usa fundamentalmente en hospitales.

2. Calor seco Para su aplicación se emplea el horno Pasteur. Su funcionamiento es el siguiente:

1. Introducir el material debidamente protegido y sin tocar las paredes de la estufa. 2. Conectarlo y ajustar la temperatura, controlar el termómetro indicador 3. Una vez alcanzada la temperatura de esterilización, mantener el tiempo necesario (ver esquema). 4. Desconectar y esperar a que la temperatura baje a 70º C. 5. Abrir la puerta y recoger el material con guantes aislantes. Actúa carbonizando la materia orgánica. Por tener poca conductividad requiere tiempos prolongados y temperaturas elevadas. Se utiliza para esterilizar material de vidrio, algodones, material metálico…, y, en general, material que no es afectado por altas temperaturas.

Ventajas del calor seco:

• No es corrosivo para metales e instrumentos. • Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no volátiles.

Desventajas:

• Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido a la baja penetración del calor.

3. Calor húmedo

• EBULLICIÓN: consiste en hacer actuar sobre el material agua hirviendo (100°C). De esta forma se matan las formas vegetativas, pero no las esporas. Se utiliza el baño María, se aconseja repetir la operación para mayor seguridad.

• TINDALIZACION: se emplea para esterilizar soluciones o emulsiones termolábiles. Se basa en calentar discontinuamente el material, tres días consecutivos, desde 55º a 95° C, durante media hora. El objeto de cada calentamiento es el siguiente:

1º. Mata las formas vegetativas y hace germinar las esporas. 2º. Elimina las esporas germinadas. 3º. Como norma de seguridad.

• VAPOR SATURADO A PRESION: se realiza en el autoclave. En este método, el vapor de agua difunde por ósmosis a través de la membrana celular y de las esporas, coagulándose su protoplasma, fenómeno que se acentúa por tratarse de vapor saturado y a presión. El funcionamiento del autoclavees el siguiente: 1. Comprobar el nivel de agua destilada de la caldera, ésta debe llegar a 1 cm de la rejilla que se encuentra en su interior, la cual evita que los objetos a esterilizar contacten con el agua


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2. Introducir el material a esterilizar colocado previamente en cestillos. No se debe apilar, su disposición debe facilitar la eliminación del aire (purga) y la penetración del vapor. 3. Cerrar la tapa ajustándola a presión. 4. Poner la llave de purga en posición vapor. 5. Accionar el interruptor de puesta en marcha y ajustar el temporizador. 6. Cuando empiece a salir vapor continuo por el tubo de desagüe, esperar tres minutos y pasar la llave de la posición de vapor a la de cerrado. 7. Ajustar la válvula de seguridad y la presión deseada. Vigilar el manómetro. 8. Cuando el manómetro indique la presión programada se comprueba el ajuste del temporizador seleccionando el tiempo de esterilización. 9. Tras la esterilización cerrar el interruptor y dejar que baje la presión a 0. 10. Lentamente pasar la llave a la posición de vapor. La descompresión no debe ser brusca, ya que se produciría la apertura de los recipientes tapados. 11. Abrir el autoclave y sacar el material con guantes adecuados.

Elementos de un autoclave 1 -Tapa: mediante un sistema de giro, acopla perfectamente y provee un cierre hermético. 2- Válvula de seguridad: a partir de una determinada presión (regulable), se abre, dejando escapar vapor de agua para evitar una sobrepresión interna. 3- Llave de purga: se mantendrá abierta hasta que salga vapor por el tubo de purga-desagüe, en ese momento se cerrará para evitar la salida de vapor. 4- Selector de presión: para elegir la presión de esterilización 5 -Manómetro: indicador de la presión interior 6- Temporizador: reloj avisador 7- Tubo de purga-desagüe. Algunos autoclaves pueden incorporar un lector de temperatura y un termómetro exterior. El expuesto en la figura está estandarizado de forma que a cada presión elegida le corresponde una temperatura de esterilización.

Atmósferas Grados Centígrados

0 100

1/2 112

1 120

1 1/2 128

2 135


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• VAPOR FLUENTE: se utiliza el autoclave, pero con la llave de purga abierta (posición vapor). Se emplea para medios de cultivo que no puedan someterse a temperaturas superiores a 100º C.

• PASTEURIZACIÓN: la leche, nata y ciertas bebidas alcohólicas (cerveza y vino) se someten a tratamientos de calor controlado que sólo matan a ciertos tipos de microorganismos pero no a todos. La leche pasteurizada no es estéril. La temperatura seleccionada para la pasteurización se basa en el tiempo térmico mortal de microorganismos patógenos (es el tiempo más corto necesario para matar una suspensión de bacterias a una temperatura determinada). Mycobacterium tuberculosis es de los microorganismos patógenos más resistentes al calor que puede transmitirse por la leche cruda y se destruye en 15 minutos a 60° C. Posteriormente se descubrió que Coxiella burnetti, agentecausal de la fiebre Q, se encuentra a veces en la leche y es más resistente al calor que Mycobacterium tuberculosis por lo que la pasteurización de la leche se realiza a 62,8° C durante 30 minutos o a una temperatura ligeramente superior, 71,7° C durante 15 segundos (Flash-Pasteurización).

El calentamiento a 62'8° C durante 30 minutos sólo destruye las formas vegetativas.

• UPERIZACIÓN: consiste en aplicar temperaturas de hasta 150° C durante 1-20 segundos. Mata todas las formas de microorganismos y no altera el medio.

Ventajas del calor húmedo:

• Compatible con la mayoría del material • Rápido calentamiento y eficaz por el gran poder de penetración del vapor. • Destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo • No deja residuos tóxicos. Respeta el medio ambiente • Económico • Controlable • Fácil monitorización

Desventajas:

• No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua .No penetra en aceite, polvo. • Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos. • No útil para material termosensible. • Deteriora filos cortantes

Métodos no térmicos 1. Filtración Este procedimiento es aplicable a la esterilización de algunos medios de cultivo, soluciones de antibióticos, enzimas, vacunas, etc, o también para gases. Cuando el líquido a filtrar no puede resistir, sin descomponerse, la acción del calor, se aplica la técnica de filtración, la que puede efectuarse mediante presión o aspiración. Se basa en hacer pasar los líquidos a través de sustancias porosas que detienen a los microbios.


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En la esterilización por calor se destruyen los microorganismos del medio, mientras que la filtración los retira de una forma mecánica, en lugar de destruirlos. Los filtros que se utilizan en la actualidad son, generalmente, los denominados filtros de membrana y están integrados por pequeñas piezas de material sintético, generalmente acetato de celulosa o policarbonato, que pueden tener poros con tamaños de 0,22 y 0,45 μm, diseñados para retener bacterias. La acción combinada de los poros, la trama del filtro y la naturaleza química del material utilizado retiene los microorganismos, pero no el fluido. La filtración se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolábiles. Se usa para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftálmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnósticas, radiofármacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibióticos y vitaminas. Tanto los filtros de membrana como los equipos de filtración con los que éstos se usan deben ser esterilizados por otros métodos, generalmente el autoclave La efectividad del filtro depende del tamaño del poro y de la carga, ya que las bacterias, a pH neutro, presentan en su mayoría carga negativa, por lo que es aconsejable que el filtro tenga carga positiva. Los virus y algunas bacterias de tamaño muy pequeño como, por ejemplo, los micoplasmas, no son retenidos por los filtros habituales. 2. Radiaciones Se puede definir la radiación como la propagación de la energía. Las radiaciones de mayor longitud de onda propagan una energía menor. Cuando una molécula absorbe la energía procedente de la radiación electromagnética, se pueden producir cambios en los niveles energéticos de algunos de sus átomos. Estos cambios en las configuraciones pueden producir incluso la muerte. Los principales tipos de radiaciones que pueden tener efectos sobre los seres vivos son:

Radiación λ (nm) IR 800-106 VISIBLE 380-800 UV 13,6-380 RX 0,14-13,6 Rγ 0,001-0,14

Estas radiaciones dependiendo de los efectos que producen se dividen en dos grupos: radiaciones ionizantes y no ionizantes.

Constituyen un importante agente esterilizante, pero debido al alto coste y complejidad de instalaciones necesarias, se reserva para la esterilización industrial, sobre todo para el material de un solo uso.

Sistema de esterilización para productos o materiales termolábiles

a)-Radiaciones ionizantes Se define una radiación como ionizante cuando al interaccionar con la materia produce la ionización de la misma, es decir, origina partículas con carga eléctrica (iones). El origen de estas radiaciones es siempre atómico, pudiéndose producir tanto en el núcleo


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del átomo como en los orbitales y pudiendo ser de naturaleza corpuscular (partículas subatómicas) o electromagnética (rayos X, rayos gamma (γ)). Rayos gamma: Las radiaciones gamma tienen mucha energía y son emitidas por ciertos isótopos radiactivos como es el Co 60.Tiene su indicación cuando se trata de material que puede estropearse por el calor, siendo el prototipo las jeringas de uso único, de plástico o de caucho desechables, o los catéteres para uso intravenoso, cada vez más utilizado por su bajo precio, por la comodidad de su uso, ya que las agujas que portan no sufren daño alguno a su filo y bisel (siendo prácticamente indoloras) y porque evitan toda posibilidad de infección hospitalaria. Por su poder de penetrante esterilizan todo el material envuelto en envases de plástico e introducido en cajones de cartón o madera Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los ácidos nucleicos, estructuras proteicas y lipídicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos. Rayos X: También son de naturaleza electromagnética pero se originan en los orbitales de los átomos como consecuencia de la acción de los electrones rápidos sobre la corteza del átomo. Son de menor energía pero presentan una gran capacidad de penetración. Rayos catódicos (Radiación con haz de electrones): Se usan para esterilizar material quirúrgico, medicamentos y otros materiales. El material se puede esterilizar después de empacado (ya que éstas radiaciones penetran las envolturas) y a la temperatura ambiente. Ventajas: -muy penetrantes. -podemos esterilizar elementos que no soportan el calor y la humedad. -proceso que se realiza a temperatura ambiente. Desventajas: -medidas de seguridad y costo -instalaciones complejas. b)- Radiaciones no ionizantes Luz ultravioleta: Las longitudes de onda alrededor de 265 nm son las que tienen mayor eficacia como bactericidas (200-295 nm). Se usan para reducir la población microbiana en quirófanos, cuartos de llenado asépticos en la industria farmacéutica y para tratar superficies contaminadas en la industria de alimentos y leche. La luz UV tiene poca capacidad para penetrar la materia por lo que sólo los microorganismos que se encuentran en la superficie de los objetos que se exponen directamente a la acción de la luz UV son susceptibles de ser destruidos. Actúan a nivel del material genético, en concreto sobre unidades de timina juntas, lo que impide la duplicación del DNA. Su acción es superficial (ya que tienen poca penetración) y microbiostática. Se utiliza, sobre todo, en la reducción del nivel de microorganismos en zonas estériles (quirófanos) y para algunos envases clínicos.


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Ventajas: -podemos esterilizar elementos que no soportan el calor y la humedad. -proceso que se realiza a temperatura ambiente. Desventajas: -medidas de seguridad y costo. -poco penetrantes 3. Sedimentación

Se basa en que los microorganismos son más pesados que el agua, por lo que al dejar una suspensión de los mismos en reposo, con el tiempo van sedimentando, quedando el sobrenadante estéril. Es un método muy lento y poco práctico, sólo se utiliza en plantas potabilizadoras de agua. Se fundamenta en el hecho de que la densidad de muchas bacterias es algo mayor de 1.0; en consecuencia, se depositan en el fondo del recipiente que las contiene quedando el líquido sobrenadamente no estéril del todo, pero su población microbiana disminuye notablemente. En el laboratorio la sedimentación se acelera por centrifugación. Es utilizado este método para identificar microorganismos en muestras de agua potable y otras sustancias. CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN Para saber si se ha realizado correctamente un proceso de esterilización, se utilizan los indicadores o controles de esterilización. Detallaremos los empleados en los procesos térmicos y filtración, por ser las técnicas esterilizantes utilizadas en el Laboratorio de Microbiología. 1. Controles de métodos térmicos

La garantía de esterilidad ha de buscarse tanto en la causa como en el efecto, por lo que se debe controlar:

a) El proceso de esterilización. Los indicadores del proceso de esterilización pueden ser de dos tipos:

-Indicadores físicos: Son elementos incorporados al esterilizador como:

• termómetros, • manómetros de presión, • sensores de carga, • válvulas y sistemas de registro.

Estos monitores físicos son de gran utilidad, pero no son suficientes como indicadores de esterilización. Deben ser calibrados periódicamente.


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‐ Indicadores químicos: Son productos comerciales consistentes en sustancias químicas que cambian de color si se cumple un elemento clave del proceso de esterilización como por ejemplo la temperatura necesaria. Algunos indicadores requieren más de un parámetro como cierto tiempo de exposición y humedad para cambiar de color. Pueden ser fabricados de papel especial, cintas autoadhesivas o consistir en tubos de vidrio con líquidos especiales.

Revela la palabra “autoclaved” tras 15 minutos de exposición a 121º C. Se retira de forma limpia del objeto autoclavado. U otro tipo de etiquetas indicadores para procesos químicos, no tóxicas y autoadhesivos que cambian del azul a rosa tras la exposición durante 10 minutos a vapor saturado a 121 °C o 2 minutos a 134 °C. Una exposición más larga genera un tono rosa más brillante.

Son sustancias cuyo punto de fusión es igual a la temperatura alcanzada en el proceso. Los más utilizados son el anhídrido succínico (P.F. 119'6° C) y la acetanilida (P F. 113-114° C). Tienen la desventaja de que no controlan el tiempo de esterilización, sólo reflejan la temperatura alcanzada. Todos estos indicadores tienen la desventaja que pueden reaccionar cambiando de color aún cuando no se han dado los parámetros necesarios para obtener la esterilización, es decir, garantizan que se ha alcanzado la temperatura, pero no garantizan el tiempo de actuación. Los indicadores químicos son diferentes de acuerdo al proceso utilizado (calor seco, húmedo o gas).

- Indicadores biológicos: Es el mejor método para determinar la eficiencia de un proceso de esterilización. Están diseñados para confirmar la presencia o ausencia de microorganismos viables después de la esterilización. Consisten en esporas de microorganismos de prueba que posee la mayor resistencia comprobada frente al método de esterilización utilizado. Es importante destacar que aún cuando se demuestre la muerte de microorganismos, esto no necesariamente significará estabilidad de los artículos en esa carga debido a las otras variables del proceso que deben cumplirse, especialmente la presencia de materia grasa. Por ese motivo el solo uso de indicadores biológicos es insuficiente para la monitorización de los procesos de esterilización.

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Desventajas:

-precisa de un tiempode aireación antes de ser utilizado , lo que enlentece el proceso.

-elevado coste.

La efectividad de la esterilización se monitoriza con esporas de B. subtilis.

En el medio hospitalario se usa fundamentalmente para la esterilización a baja

temperatura (37ºC – 55ºC).

– El mecanismo de acción como esterilizante se basa en la capacidad de alterar la

estructura de proteínas y ácidos nucléicos de los microorganismos por alquilación, es

decir, sustituye un átomo de hidrógeno por un grupo alquilo, que es altamente tóxico

para ellos.

Considerando que el óxido de etileno en estado gaseoso y en el aire es explosivo e

inflamable en pequeñas cantidades incluso desde un 3%, es preciso adoptar

precauciones especiales con las mezclas:

Ventajas:

• Material termosensible • No requiere envases especiales • Permite la esterilización de endoscopios. • Eficaz • No deteriora material con filo • Compatible con la mayoría de material • Monitorización adecuada

Desventajas:

• Ciclos muy largos. • Altamente tóxico para humanos. • Necesario eliminar residuos (airear material). • Precisa instalaciones exclusivas. • Inflamable, explosivo • Cancerígeno y mutagénico. • Necesario monitorización de residuos.

2 Gas plasma (peróxido de hidrógeno ionizado) Es un proceso de esterilización química a baja temperatura.

Condiciones que deben concurrir: Tiempo, Presión y temperatura.

La esterilización se lleva a cabo en cámaras específicas.


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El agente esterilizante es el peróxido de hidrógeno y actúa mediante el mecanismo de

oxidación de las proteínas celulares produciendo la muerte de los organismos.

El fundamento es la difusión de peróxido de hidrógeno en fase plasma (estadoentre

líquido y gas).

Se utiliza para material termosensible.

El proceso se produce en cámaras a una temperatura máxima de 45 ºC durante un

tiempo máximo de 75 min.

Ventajas: • Es una opción válida para materiales termosensibles.

• Esterilizante eficaz como gas o combinado con plasma.

• No deja residuos tóxicos - Se convierteH20 y 02.

• El material no precisa aireación.

• El ciclo es corto 54’ ó 72’

• Monitorización adecuada.

• No corroe los metales

Desventajas: • La capacidad de difusión es muy baja.

• Se inactiva en presencia de humedad; el material tiene que estar perfectamente

seco.

• No puede esterilizarse material que contenga celulosa, algodón, madera.

• Uso limitado en instrumental con lúmenes largos (> 1 m.) y estrechos (< 3mm.),

ya que requiere acelerador de peróxido de hidrógeno.

• Requiere envases especiales(polipropileno)

• Caro 3 Acido peracético Sistema de esterilización húmedo a baja temperatura por inmersión, para material termosensible y procesado en su punto de uso (debido a que el material no puede ser empaquetado). Condiciones que deben concurrir: Temperatura, tiempo y concentración constante del agente esterilizante. Se lleva a cabo en cámaras específicas. El agente esterilizante a base de ácido peracético actúa por oxidación. Temperatura de proceso: 50-55ºC. El proceso es automático y estandarizado. Es un sistema de utilización inmediata para endoscopios rígidos.


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Ventajas:

• No se inactiva en presencia de materia orgánica

• Ciclo a baja temperatura

• Ciclo rápido: 30’

• Opción válida para utilización inmediata y procesado in situ: Endoscopios,

instrumental dental

• No tóxico para medio ambiente

• No deja residuos

Desventajas:

• Permite esterilizar únicamente material sumergible

• Imposibilidad de mantener la condición de estéril en el tiempo

• No se puede empaquetar el material

• Corrosivo

• Caro

DESINFECTANTES 1. Características de los desinfectantes La mayoría de los desinfectantes utilizados son productos de síntesis y deben poseer las siguientes características:

1. Amplio espectro. 2. Rápida acción. 3. No ser afectado por factores del medio ambiente. 4. No tóxico. 5. Compatible con las superficies. 6. Sin olor. 7. Económico. 8. Estable. 9. Buenas propiedades de limpieza. 10. Fácil de usar. 11. Efecto residual no tóxico sobre las superficies. 12. Soluble en agua.

Las técnicas empleadas para su aplicación pueden ser:

• inmersión, • loción,


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• nebulización y • pulverización.

2. Tipos de desinfectantes

Se suelen clasificar de acuerdo con su mecanismo de acción

A) AGENTES QUE DAÑAN LA MEMBRANA

1)Detergentes

a) catiónicos b) aniónicos c) no iónicos 2) Compuestos fenólicos

a) fenol b) cresoles c) difenilos halogenados d) alquilesteres del para-hidroxibenzoico e) aceites esenciales de plantas

3) Alcoholes

a) etanol b) isopropanol

B) AGENTES DESNATURALIZANTES DE PROTEINAS

1) Ácidos y bases fuertes

2) Ácidos orgánicos no disociables

C) AGENTES MODIFICADORES DE GRUPOS FUNCIONALES 1) Metales pesados

a) mercuriales

b) compuestos de plata

c) compuestos de cobre

2) Agentes oxidantes a) halógenos


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b) agua oxigenada

c) permanganato potásico

d) Yodo peracético 3) Colorantes

a) derivados de la anilina

b) derivados de la acridina (flavinas)

4) Agentes alquilantes a) formaldehído

b) glutaraldehído

c) Oxido de etileno

d) Beta-propionil-lactona

3. PRINCIPALES GRUPOS DE AGENTES QUÍMICOS UTILIZADOS COMO ANTIMICROBIANOS.

GRUPO MODO DE ACCIÓN

APLICACIÓN

Fenoles

Fenol, cresol Hexaclorofeno

Desnaturalizan proteínas Dañan la membrana

Desinfección en hospitales y laboratorios (instrumentos y superficies) Antiséptico en jabones y lociones

Alcoholes

Etanol Isopropanol

Desnaturalizan proteínas Dañan la membrana Disuelven lípidos

Etanol es el más usado. Antiseptico de la piel. Desinfectante de termómetros y superficies en clínica

Halógenos Yodo Cloro

Oxidante, yoda proteínas Oxidante

Antiséptico de la piel en forma de tintura o yodóforos Desinfectante. Sistemas de distribución de agua potable, piscinas. Industria lechera


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Peróxido de hidrógeno

H2O2 Oxidante

Antiséptico en pequeñas heridas

Metales pesados

Hg, Ag Inactivan proteínas Desinfectantes en el laboratorio. Antisépticos en la piel y ojos

Detergentes catiónicos

Cloruro de benzalconio

Alteran membranas Desnaturalizan proteínas

Desinfectantes de utensilios y pequeños instrumentos Antisépticos cutáneos

Aldehídos Formaldehído Glutaraldehído

Agentes alquilantes Desinfección de material de laboratorio y quirúrgico. Son esporicidas y se pueden usar como esterilizantes

Antisépticos

Sustancia aplicada en la piel u otro tejido vivo que previene o detiene el crecimiento o la acción

de microorganismos por inhibición de su actividad o por su destrucción

Alcoholes

Iodo

Agentes catiónicos, aniónicos y anfóteros

Organo Mercuriales

Colorantes

Desinfectantes y/o Esterilizantes:

Desinfectantes Sustancia que destruye los gérmenes o microorganismos presentes, a excepción de las esporas bacterianas. Se utiliza este término en sustancias aplicadas sobre objetos inanimados.

ESTERILIDAD: Ausencia absoluta de microorganismos

Cloro y Compuestos clorados

Aldehídos

Oxido de Etileno

Compuestos Fenólicos

Acidos y Alcalis


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4. OTROS AGENTES MICROBIOSTÁTICOS 1. PRESION OSMÓTICA Los microorganismos son muy sensibles a las variaciones de presión osmótica del medio. Los medios hipertónicos suelen inhibir su crecimiento. 2. FRIO La disminución de la temperatura inhibe la actividad metabólica de los microorganismos. Temperaturas comprendidas entre –1 y –10 º C son mucho más letales que temperaturas más bajas, pues el agua cristaliza de forma irregular formando estructuras que lesionan la célula. 3. ONDAS SONORAS Actúan rompiendo la pared celular del microorganismo, 4. HUMEDAD Ya que requieren un mínimo de humedad para su desarrollo. 5. pH: Cada microorganismo tiene un pH óptimo de crecimiento, fuera del cual tendrá dificultades para su crecimiento. Por lo general las bacterias suelen crecer en un intervalo de pH entre 5-9. 5. ANTIBIÓTICOS. Los antibióticos (AB) son compuestos relativamente sencillos, producidos por bacterias u hongos queatacan específicamente a las bacterias. Interfieren en algún paso del metabolismo donde encuentranun blanco adecuado. Desde el descubrimiento de la penicilina, se han descubierto una docena denuevos tipos de AB y optimizado o sintetizado cerca de una centena. Fueron descubiertos en 1928 por Alexander Fleming. Estaba sembrando un cultivo de Staphylococcus aureus en una placa de Petri, pero se fue de vacaciones y se las olvidó. A su regreso dos semanas más tarde la placa mostraba, además de las coloniasesperables, la presencia de un hongo invasor. Se había contaminado el experimento. En lugar de tirar su placa a la basura, se puso a observarla. Alrededor del hongo nohabían colonias y sólo en los lugares más remotos al hongo estaban las colonias. Sospechó que del hongo debía difundir una sustancia inhibitoria. Así fue como se descubrió el primer antibiótico, y se lo nombró Penicilina por el hongo Penicillium, productor de dicho compuesto. Pero son los trabajos posteriores realizados porHoward Florey y Ernst Chain los que permitirán purificar lapenicilina. En 1945, la Academia Sueca galardonó con el PremioNobel de Medicina a sus tres importantes descubridores (Fleming, Chain y Florey). Entre los años 1940 -1970 ha sido el periodo de oro del descubrimiento de nuevos antibióticos, ya sean naturales o sintéticos.


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Antibiograma El antibiograma es un test de resistencia o sensibilidad de las bacterias bajo la acción de diversos antibióticos. El antibiograma por el método de difusión en agar (ver libro de prácticas) es una prueba en la que se enfrenta la bacteria inoculada sobre la superficie de un medio de agar con una solución antibiótica absorbida en discos de papel de filtro.Esta zona circundante al antibiótico, llamada halo de inhibición, es de gran valor clínico para iniciar, continuar o modificar una terapia. Si un microorganismo está en contactado con la droga y aún así persiste su capacidad vital, se deduce la inoperancia farmacológica del producto para tal germen. Hay resistencia al antibiótico. Inversamente si la zona que rodea al antibiótico está totalmente libre, o sea, que no hay desarrollo de la bacteria: esta es sensible a la droga.

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UT-4-ESTERILIZACION DESINFECCION FINAL · Principales grupos de agentes químicos ... fenómenos físicos que influyen en el desarrollo de los ... se basan en la acción que sobre