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ManualparaelcontroldeenfermedadesinfecciosasencoloniasderesguardoparaanfibiosyprogramasdereintroducciónVersión2.0:actualizadael2017Basadaen:Actasdeuntallerrealizadoentreel16y18defebrerodel2009SanDiegoZoo
FotografíasdecubiertacortesíadeAllanPessieryRonHolt.UnacontribucióndelIUCN/SSCConservationBreedingSpecialistGroupencolaboraciónconAmphibianArk,SanDiegoZooyZooAtlanta
LaIUCNpromueveencuentros,talleresyotrosforosparaelestudioyanálisisdeasuntosrelacionadosalaconservación,ycreequelosreportesdeestasreunionestienenmayorutilidadcuandosondifundidosampliamente.LasopinionesypuntosdevistaexpresadosporlosautoresnorepresentannecesariamentelaspolíticasformalesdelaIUCN,suscomisiones,susecretariadoosusmiembros.
©CopyrightCBSG2017Ladesignacióndeentidadesgeográficasenestedocumento,ylapresentacióndelmaterialeneste,noimplicalaexpresióndeningunaopiniónporpartedelaIUCNrespectoalacondiciónjurídicadecualquierpaís,territorio,área,odesusautoridades,osobreladelimitacióndesusfronterasolímites.Pessier,A.P.andJ.R.MendelsonIII(Eds.).2017.Manualparaelcontroldeenfermedadesinfecciosasenlascoloniasderesguardoparaanfibiosyprogramasdereintroducciónalanaturaleza,versión2.0.IUCN/SSCConservationBreedingSpecialistGroup:AppleValley,MN.Sepuededescargarunaversióndigitaldeestereporteenwww.cbsg.org<http://www.cbsg.org/>.
EsteproyectofuefinanciadoporlasubvenciónLG-25-08-0066delInstituteofMuseumandLibraryServices.Lospuntosdevista,hallazgos,conclusionesorecomendacionesexpresadosenestapublicaciónnorepresentannecesariamenteaquellosdelInstituteofMuseumandLibraryServices.Traducidoalespañolpor:-GabrielaMoralesyClaudioRivera(enrepresentacióndelaAsociaciónLatinoamericanadeParquesZoológicosyAcuarios-ALPZA)-EstebanO.Lavilla,InstitutodeHerpetología,FundaciónMiguelLillo,SanMigueldeTucumán,Argentina-RobertoElíasPiperis,LaboratoriodeVidaSilvestre,FacultaddeVeterinariayZootecniaUniversidadPeruanaCayetanoHeredia,Perú;ZoológicodeDenverEditadoenespañolpor:-VicenteVergaraWilson,MédicoVeterinario-LuisCarrillo,CoordinadordeEntrenamiento,ArcadelosAnfibios
MANUALPARAELCONTROLDEENFERMEDADESINFECCIOSASENCOLONIASDESUPERVIVENCIADEANFIBIOSYPROGRAMAS
DEREINTRODUCCIÓN
EDITORES:ALLANP.PESSIER&JOSEPHR.MENDELSONIII
ACTASDEUNTALLERREALIZADOENTREEL16Y18DEFEBRERODEL2009
enlaZoologicalSocietydeSanDiego
Organizadopor:AllanP.Pessier,DVM,Dipl.ACVP
SanDiegoZoo&
JosephR.MendelsonIII,PhDZooAtlanta
Facilitadopor:
OnnieByers,PhDIUCNConservationBreedingSpecialistGroup
Actualizadoenmarzodel2017por:
AllanP.Pessier,DVM,Dipl.ACVP
SanDiegoZoo&
JosephR.MendelsonIII,PhDZooAtlanta
BenjaminTapley,MSc
ZSLLondonZoo
MattGoetzDurrellWildlifeConservationTrust
Índice1.INTRODUCCIÓN………………………………………………………….………………………………….………..82.LISTADECONTRIBUIDORES…………………………………………….…………………..……….….………..113.EVALUACIÓNDERIESGOS………………………………………………………….………….……….………….12 3.0INTRODUCCIÓN………………………………………………………….………………….………..12 3.1RECOMENDACIONESGENERALESPARALAREINTRODUCCIÓNY PROGRAMASDETRANSLOCACIÓN………………………….…………………….…………12 3.2MITIGACIÓNDELRIESGODEENFERMEDADESPARACRÍAENCAUTIVERIOYPROGRAMASDEREINTRODUCCIÓN…………………………………………………………………………………………………....14 3.3TRANSLOCACIÓN……………………………………….…………………………….…………….21 3.4LITERATURACITADA………………………..…..…………………………………….……………224.BIOSEGURIDAD……………………………………………………………………………………….…………….23 4.0INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………………….………..23 4.1¿QUÉES"BIOSEGURIDAD"?...........................................................................24 4.2DEFINICIONESDEBIOSEGURIDAD……………………………………….…………….….……25 4.3COLECCIONESCOSMOPOLITASYRIESGOSDEENFERMEDADESPARAANFIBIOSSILVESTRES………………………………………………………………………………………………………….....26 4.4NIVELESDEBIOSEGURIDAD………………………………………………………………..…..…27 4.5RESUMENDEBUENASPRÁCTICASYNIVELESDEAISLAMIENTODESEGURIDAD………..33 4.6PRÁCTICASDEBIOSEGURIDAD………………………………………………………………….…36 4.7CAPACITACIÓNDELPERSONALEIMPLEMENTACIÓNDEPRÁCTICASDEBIOSEGURIDAD38 4.8AISLAMIENTOALARGOPLAZODEANFIBIOSDESTINADOSALAREINTRODUCCIÓN ALANATURALEZA………..……………………………………………………………….……..39 4.9INSTALACIONESPARAELAISLAMIENTOALARGOPLAZO………………………………………40 4.10HIGIENEYROPAPROTECTORADELPERSONALDEMANEJO………..……………….….…..41 4.11RUTINASDEMANEJO…………………………………..……………………………………….....43 4.12HIGIENEDELRECINTO…………………………………………………………………………...….45 4.13EQUIPO,SUSTRATOYDECORACIÓNDELRECINTO…………………………..…….….....…..45 4.14ELIMINACIÓNDEAGUASRESIDUALES……………………………………………………..….…47 4.15ELIMINACIÓNDERESIDUOSSÓLIDOS……………………………………………….……………49 4.16FUENTESDEAGUA……………………………………………….…………….……………….…..50 4.17FUENTESDEALIMENTO………………………………………….……………………………...…50 4.18DISEÑODELAINSTALACIÓNYESPECIFICACIONESDELEDIFICIO………………..………….51 4.19LITERATURACITADA……………………………………..………………..……….……………535.LIMPIEZAYDESINFECCIÓN…………………………………………………………………………………….….55 5.0INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………………….………...55 5.1PRINCIPIOSDELIMPIEZAYDESINFECCIÓN…………………………………..………………..….56 5.2DESINFECTANTESQUÍMICOS.……………………………………………….……..……………..…58 5.3MÉTODOSDEDESINFECCIÓNNOQUÍMICOS…………………….……………………………....62
5.4LIMPIEZAYDESINFECCIÓNDELOSRECINTOSPARAANIMALES……………….……..……….63 5.5DESINFECCIÓNDEEQUIPOYHERRAMIENTAS……………………………………….….………..64 5.6DESINFECCIÓNYESTERILIZACIÓNDESUSTRATOSYAMUEBLADODERECINTOS.……….…....65 5.7DESINFECCIÓNDEPLANTASVIVAS……………………………………………………….…………67 5.8DESINFECCIÓNYESTERILIZACIÓNDELAGUA…………………………………….…….…….....68 5.9DESINFECCIÓNYBIOSEGURIDADENELCAMPO……………………………………...………….68 5.10TABLADEDESINFECTANTES……………………………………………………….……..….…….71 5.11LITERATURACITADA……………………………………..……………….………….……………736.CUARENTENA…………………………………………….……………………………………………..…….…....76 6.0INTRODUCCIÓN………………………………………….………………………………….…………76 6.1OBJETIVOSYDESARROLLODELOSPROGRAMASDECUARENTENA……………...……........76 6.2EVALUACIÓNDERIESGOSENCUARENTENAANFIBIA……………………………..…………....78 6.3CONSIDERACIONESDELAINSTALACIÓNYPERSONALDECUARENTENA………..…….….….80 6.4CONSIDERACIONESZOOTÉCNICASPARAANIMALESENCUARENTENA…..…..……..……...82 6.5DURACIÓNDELPERÍODODECUARENTENA…………………………………….……..….…......86 6.6CONSIDERACIONESMÉDICASENLACUARENTENA………………………………………...……88 6.7PRUEBASDELABORATORIOYTRATAMIENTODEENFERMEDADESENCUARENTENA……..92 6.8NECROPSIA……………………………………………………………………………….……..……...93
6.9PRUEBASYTRATAMIENTOSPARAPARÁSITOSINTERNOS…………………………….…...…..94 6.10PRUEBASYTRATAMIENTOPARAHONGOSQUITRIDIOS……..….….….…………..………..97 6.11PRUEBASPARADETECTARINFECCIONESRANAVIRUS……………………………………….102 6.12PATOLOGÍASCLÍNICAS(HEMATOLOGÍAYBIOQUÍMICACLÍNICA)…………..…………….106
6.13OTRASENFERMEDADESINFECCIOSASQUESEENCUENTRANENCUARENTENA….…….107 6.14LITERATURACITADA……………………………………..…………………………………….….112
7.EXÁMENESDEDIAGNÓSTICO……………………………………………………………………………………115 7.0INTRODUCCIÓN……………………………………….………………………………….…………..115 7.1VIGILANCIADEENFERMEDADES……………………………………………………..…………..103 7.2EVALUACIÓNDELABORATORIOSQUEREALIZANPRUEBASDE DIAGNOSTICOMOLECULAR…………………………………………..…….……..………..121 7.3PRUEBASDEDIAGNÓSTICOPARAELHONGOQUÍTRIDOANFIBIO…………………..….….126 7.4INFECCIÓNRANAVIRUS……………………………………………………..……….…………….145 7.5ENFERMEDADPROTOZOARIASIMILARALPERKINSUSDELOSRÁNIDOS………………….156 7.6DECLARACIÓNDEENFERMEDADESYPARTICIPACIÓNENBASESDEDATOSDEENFERMEDADES………………………………………………………………………………………………….…….159 7.7PRUEBASYVIGILANCIAPARADETECTARPARÁSITOSFECALES…………………………….…160 7.8HEMATOLOGÍAYBIOQUÍMICASÉRICA……………………………….…….…………..……....170 7.9LABORATORIOSQUEACEPTANMUESTRASANFIBIAS………………..….…………………....172 7.10LITERATURACITADA……………………………………..……………………….………………174 8.TRATAMIENTOYCONTROLDEENFERMEDADES……………………………………………….…..……...182
8.0INTRODUCCIÓN………………………………………………………….……………….…………182
8.1MÉTODOSDETRATAMIENTOYCONTROLDELHONGOQUÍTRIDOANFIBIO…..………….183 8.2CONTROLDEINFECCIONESPORRANAVIRUS………………………………………..….........197 8.3CREANDOPOBLACIONESANFIBIASLIBRESDEPATÓGENOSESPECÍFICOS……….…………199 8.4MONITOREOYTRATAMIENTODEPARÁSITOS…………………………….……………...……204 8.5MEZCLASDEELECTROLITOS……………………………………………………..……….…..……208 8.6EUTANASIA…………………………………………………………………………..…………..……209
8.7LITERATURACITADA……………………………………..……………………….…………………2099.NECROPSIA………………………………………………………………………………………..………..……..213 9.0INTRODUCCIÓN……………………………………………………………..…………….………..213 9.1PREPARACIÓNPARALANECROPSIA……………………………………………….…………….214 9.2MATERIALESNECESARIOS…………………………………………..…………..………………..215 9.3REALIZACIÓNDELANECROPSIA…………………………….…………………….……………..216 9.4NOTASANATÓMICASPARANECROPSIASANFIBIAS………….……………….………………220 9.5TOMADEMUESTRASDURANTEEVENTOSDEMORTALIDAD………..……………….……..222 9.6ENVÍODEMUESTRAS………………………………………………………..….……….…………224 9.7LITERATURACITADA……………………………………..………………….……………..………225 APÉNDICE1:MÉTODOSPARAIDENTIFICARINDIVIDUALMENTEALESPÉCIMENANFIBIO………...….226 APÉNDICE2:TRATAMIENTODEAGUASRESIDUALES............................................................247APÉNDICE3:HABITACIONESAISLADASPARAANFIBIOSDELZOOLÓGICOHENRYDOORLYENOMAHA………………………………………………………………………………………………………………….251APÉNDICE4ANÁLISISDERIESGODEENFERMEDADESYVIGILANCIASANITARIAPARAPROGRAMASDERECUPERACIÓNDEESPECIES……………..……………………………………………………………..…………260
CAPÍTULO1
INTRODUCCIÓN
LaUniónInternacionalparalaConservacióndelaNaturaleza(IUCN,porsussiglaseninglés)haestimadoqueel30%detodaslasespeciesdeanfibiosestánenpeligrodeextinción,yquealmenos484especiesestánengravepeligrodeextinción(http://www.iucnredlist.org).Elprincipalfactorcontribuyentedeladrásticadisminucióndelapoblaciónanfibiaeslaenfermedadquitridiomicosiscausadaporelhongoquítridoanfibio,específicamenteBatrachochytriumdendrobatidisyBatrachochytriumsalamandrivorans.Estehongo,diseminadopormediosantropogénicos,puedereducirlabiodiversidadanfibiaennuevoslugaresenperíodosdetiempoalarmantes,porlotanto,entenderycontrolarenfermedadesinfecciosastalescomolaquitridiomicosissehavueltoelenfoqueprincipaldelosesfuerzosconservacionistasdelosanfibiostantoinsitucomoexsituanivelglobal.
Conelobjetivodetenerunarespuestaalacrisisglobaldeextincióndeanfibios,
laComisiónparalaSupervivenciadelasEspecies(SSC,porsussiglaseningles)delaIUCNconvocóaungrupointernacionaldelosprincipalesbiólogosdeanfibiosenlaCumbredeConservaciónAnfibia,locualdiócomoresultadoelPlandeAcciónparalaConservacióndelosAnfibios(ACAP,porsussiglaseninglés;estedocumentoestádisponibleparadescargarenhttp://www.amphibians.org).ElACAPllegóalaconclusióndequelacrisisdeextincióndelosanfibios"requiereunarespuestaglobalsinprecedentesporpartedegobiernos,corporaciones,sociedadcivilycomunidadcientífica".Ésta,además,llamaalacreacióndecoloniasdesupervivenciaquereúnanarepresentantesdeespeciesdeanfibiosengravepeligrodeextinciónparamantenerlasasalvoencautiverio.Apesardequesolucionarlosfactoresquecontribuyenalaextincióndelasespeciesespreferibleamantenerlasencautiverio,esprobablequealavelocidadconlaqueéstasestándisminuyendosepierdaninnumerablesespeciesantesdequesedescubrannuevassoluciones.Porlotanto,estascoloniasdesupervivenciatienenelimportanteroldepreservaralasespeciesparareintroducirlasasuhábitatnaturalenelfuturo.QuiencoordinaesteesfuerzoglobalparadesarrollartalesprogramaseselArcadelosAnfibios(AArk,porsussiglaseninglés),unesfuerzoenconjuntodelaAsociaciónMundialdeZoológicosyAcuarios(WAZA,porsussiglaseningles),laIUCN/SSC,elGrupoEspecialistaenCríaenCautiverio(CBSG,porsussiglaseninglés)yelGrupodeEspecialistasdeAnfibios(www.amphibianark.org).ElAArkestimaque500especiesdeanfibiosrequierenintervencióninmediataexsitumediantelacreacióndecoloniasdesupervivencia.Estoesungranproyectoquenecesitalosrecursosdeunaampliavariedaddeinstituciones,entrelascualesseencuentranzoológicos,acuarios,jardinesbotánicos,museosdehistorianatural,agenciasgubernamentalesyuniversidades.Pero,
aunquelasinstitucionessepreparanparael"llamadoalaacción"delAArkylaIUCN,larealidadesque,engeneral,elcampodelcuidadodeanfibiosaúnestáensuinfanciaylaexperienciaenelcontroldeenfermedadesanfibiasestálimitadaamuypocasinstitucionesglobalmente.
Dadalarápidaexpansióndecoloniasdesupervivenciadeanfibiosalrededordel
mundo,seelaboraronpautasparamejoresprácticasencuarentenaspermanentesybioseguridaddelasinstalacionescomopartedelTallerdePlaneacióndeConservaciónExSitullevadoacaboporWAZAyCBSGenElValle,Panamáenelaño2006(resúmenesdisponiblesenhttp://www.amphibianark.org/downloads.htm).Además,enelinformefinaldeltallerdePanamáseestablecieronMedidasdeAcciónadicionalesparacrearprotocolosparaexámenesmédicos,tratamientoprofilácticodeenfermedadesinfecciosasimportantes,yvigilanciadeenfermedadesencoleccionesdeanfibioscautivos.PartesdeestasMedidasdeAcciónyasehanllevadoacabodesdeel2006enmediodeunaavalanchadenuevainformaciónenlaliteraturadeanfibiosrespectoapruebasdedeteccióndeenfermedades,protocolosdecontroldeenfermedades,yeldesarrollodeenfoquescreativosparacumplirconestrictaspautasdebioseguridadeninstalacionesinstitucionalesexsituycultivo.Estemanualtienecomoobjetivoabordarformalmenteestasmedidasdeacción,recolectandorecomendacionesdeexpertosencuidadoyveterinariosconexperienciaenmedicinadeanfibiosyevaluaciónderiesgodelasenfermedades,conelobjetivodeconsolidarlanuevainformaciónparacrearprotocolosquepuedenserfácilmenteadaptadosporlaampliavariedaddeinstitucionesquemantienenanfibioscautivos.
Estemanualtienecomopropósitoservircomounrecursode"ventanillaúnica"pararecomendacionesconrespectoacuarentena,necropsia,bioseguridaddelasinstalaciones,higieneytratamientodeenfermedadesenlasinstalaciones,yrevisiónyvigilanciadelasenfermedadesdeanfibios.Estasrecomendacionesdebenservistascomopautasaseguirynocomomandatosorequerimientos,estoyaqueningúnmanualpuederecopilartodaslasnecesidadesespecíficasdecadaprograma.Másimportanteaún,estemanualnopretendeserunreemplazodeuntextocompletodemedicinaveterinariadeanfibios(comoporejemplo:AmphibianMedicineandCaptiveHusbandry,byK.M.Wright&B.R.Whitaker,MalabarPubl.,2001).Asimismo,aunquelostemasdenutriciónyelcuidadobásicosediscutenalolargodeestemanual,éstetienecomopropósitosersolouncomplementoatextosexistentesdelcuidadodeanfibios,talescomoAmphibianHusbandryResourceGuide,Edition1.0(AssociationofZoosandAquariumsPubl.,2008)oprotocolosespecíficosparaespeciescomoeldelaRanaDoradaPanameña(http://www.ranadorada.org/species-info.html).Estemanualtienecomopropósitoservircomounrecursotécnicodetalladoparaveterinariosypersonalexperimentadoenexsituoprogramasdeconservación,guiarlosmientrasdesarrollanprogramasanfibiosnuevosoadicionales,diseñarprotocolosderevisiónrutinariosoencontrarproblemasconenfermedadesinfecciosasensuscoleccionesactuales,omoveranimalesentrecoleccionesoreintroducirlosalanaturaleza.Este
manualseráiterativoyseharándisponiblesedicionesposteriorestrasuntalleradicionalplaneadoparael2011,yocasionalmentedespués. Esperamosqueusuariosdetodaslasáreasencuentrenestemanualútilcomounrecursoprimarioy,másimportanteaún,queésteseaconsideradounportalalaliteraturaprimariaacercadelacienciaveterinariadeanfibiosysusenfermedades.Losanfibiosdelmundonecesitanconsiderableayudaparaevitarmásextinciones,yesperamosqueestemanualfacilitealgodeesaayuda. AllanP.Pessier JosephR.MendelsonIII 25deDiciembre,2009
CAPÍTULO2
LISTADECONTRIBUYENTES Lassiguientespersonascontribuyerondirectamentealcontenidofinalqueapareceenestaversióndelmanual.Lamayoríadeellos/asparticiparoneneltallerquesellevóacaboenelZoológicodeSanDiegoenfebrerode2009,yaportaronimportantescomentariosaborradoresdevarioscapítulosqueestabanporterminarse.DianeBarber,FortWorthZooEricBaitchman;ZooNewEnglandDonBoyer,SanDiegoZooOnnieByers,UICNGrupoEspecialistaenCríaenCautiverioLeighAnnClayton,NationalAquariumBaltimoreJoshCook,UniversityofGeorgiaAnnDuncan,DetroitZooRyanDeVoe,NorthCarolinaZooShannonFerrell,FortWorthZooRonGagliardo,AmphibianArk&ZooAtlantaMichaelGarner,NorthwestZooPathRichardGibson,AmphibianArk&ChesterZooAndreaJohnson,SanDiegoZooMeganJones,SanDiegoZooKimLovich,SanDiegoZooBobMailloux,SandfireDragonRanchDeniseMcAloose,WildlifeConservationSociety-BronxZooJosephMendelson,ZooAtlantaPatMorris,SanDiegoZooIsamaraNavarrete,SanDiegoZooR.AndrewOdum,ToledoZooBradLock,ZooAtlantaSamuelRivera,ZooAtlantaAllanPessier,SanDiegoZooJenniferPramuk,WildlifeConservationSociety-BronxZooMichaelReady,SandfireDragonRanchOliverRyder,SanDiegoZooDannaSchock,UniversityofCalgaryMarkSchrenzel,SanDiegoZooLeeSkerratt,JamesCookUniversityEdytheSonntag,MichiganStateUniversitySimoneVitali,PerthZooCarmelWitte,SanDiegoZooKevinWright,ArizonaExoticAnimalHospitalKevinZippel,AmphibianArk
Capítulo3:Evaluaciónderiesgos—12
Capítulo3
EVALUACIÓNDERIESGOSYREVISIÓNDEENFERMEDADESPARAPROGRAMASDEREINTRODUCCIÓNDEANFIBIOSALA
NATURALEZA.3.0INTRODUCCIÓN Elreconocimientodequeladevastadoradisminucióndelapoblaciónanfibiaglobalpodríaestarligadaalmovimientoantropogénicodelhongoquítrido,Batrachochytriumdendrobatidisy Batrachochytriumsalamandrivorans,resaltalanecesidaddeconsideraralasenfermedadesinfecciosasenelfuncionamientodelosprogramasdecríaencautiverioyreintroducciónalanaturaleza.Unaimportantelecciónquepuedeseraprendidadelejemplodelaquitridiomicosisanfibiaesquetodaslasinstalacionesquecontienenanfibios,paracualquierpropósito(comoporejemplo:educación,comercio,investigacionesdelaboratoriooconservación),deberíanresponsabilizarsedeimplementarvigilanciadeenfermedadesinfecciosasymedidasdecontrolqueprevenganlaintroduccióndeagentespatógenosanfibiosanuevasubicacionesopoblaciones(vealasección4.3). Uninformepublicadorecientementedescribelaintroduccióndelhongoquítridoanfibioapoblacionessilvestresdelferreretmallorquíncomoresultadodeunprogramadereintroduccióndeespecies(Walkerycolaboradores,2008).Aúnmás,muchosbiólogosrecuerdananecdóticamenteinstanciasenquepodríanhabersidotrasladadasanuevoslugares,enfermedadesdeanfibioscomoresultadodereintroduccionesotranslocacionesbienintencionadasdeanimalessilvestresdesdeunlugaraotro.Enmuchosdeestoscasos,simplesmétodosdevigilanciaoprevencióndeenfermedadeshubieransidoinvaluablesparaprevenirlaintroduccióndeenfermedades. Estecapítuloentregaunresumendeprácticasdevigilancia,evaluaciónderiesgoycontroldeenfermedadesquepuedenseraplicadasaprogramasdecríaencautiverio,reintroducciónytranslocacióndeanfibiosconelobjetivodereducirelriesgodeenfermedades.Cadaprogramadeconservacióndeanfibiosesúnicoynoexistenrecomendacionesqueseapliquenacadacircunstancia.Enlugardeeso,sedaránejemplosdesituacionescomunesseñaladasporlosparticipantesdelostalleres.Conesto,seesperaproveerunmarcoconceptualcomobaseparaeldesarrollodenuevosprogramasyprácticas.Sibienlosenfoquesdeestecapítulosonlasenfermedadesquitridiomicosisyporranavirus,nuestracomunidaddebepermaneceralertayatentaaagentespatógenosqueaúnnohansidodocumentadosodeloscualesnosesospecha.3.1RECOMENDACIONESGENERALESPARAPROGRAMASDEREINTRODUCCIÓNY
TRANSLOCACIÓN Elmantenimientodeanfibiosenprogramasdecríaencautiverioantesdereintroducirlosasuhábitatnaturalylatranslocacióndeanimalessilvestresdesdeunlugar
Capítulo3:Evaluaciónderiesgos—13
haciaotrotienecomoriesgoinherentelaintroduccióndeenfermedadesinfecciosasanuevoslugaresopoblaciones.
• Esimposiblecrearprogramasqueesténlibresderiesgodeenfermedad.• Cadaparteinteresada,porejemplo,autoridadesdevidasilvestre,biólogos
silvestres,veterinarios,conservadoresdeprogramasdezoológico,entreotros,debedeterminarquénivelderiesgoesaceptableenlosprogramasqueelijan.
• Enalgunassituaciones,elriesgodeenfermedadenunareintroducciónotranslocaciónestanaltoquesedebenreconsideraralgunasdecisionesdelosprogramas,porejemplo,tomarladecisióndenoreintroduciralosanimalesporqueelriesgodeenfermedadesmuyalto.
• Afortunadamente,elriesgodeenfermedadenlasreintroduccionesotranslocacionessepuedereducirconsiderablementesiseplaneacuidadosamenteysesiguenrecomendacionesqueayudenadisminuirriesgos.
Laspreocupacionesrespectoalaintroduccióndeenfermedadesinfecciosasalaspoblacionessilvestrescomoresultadodelosprogramasdereintroducciónytranslocacióndeespeciesnoestánlimitadasalosanfibios.Paracalmarestaspreocupaciones,sehandesarrolladorecomendacionesparaguiaraveterinariosycuidadoresdeanimalesatravésdeunprocesodeevaluaciónderiesgodeenfermedades.
• ElGrupoEspecialistaenCríaenCautiveriodelaUICN/SSCpublicóunmanualtituladoAnimalMovementsandDiseaseRiskdisponibleparadescargardeformagratuitaen:www.cbsg.org/cbsg/content/files/Disease_Risk/disease.risk_manual.pdf
Algunassugerenciasespecíficasparalamitigacióndelriesgodeenfermedadesenprogramasdeanfibiosydiscutidaseneltallerdecontroldeenfermedadesson:
• Cuandoseaposible,losprogramasdetranslocaciónoreintroduccióndeanfibiosdebenoperardentrodelrangonativodelasespecies.Losprogramasquemantenganaespeciesdeanfibiosfueradesurangonativo,porejemplo,anfibiosdePanamáconservadosenEstadosUnidos,tienenmayorriesgodeenfermedadesquelosprogramasoperandodentrodelrangonativodelasespecies.Estosriesgospuedenincluirlaposibilidaddeintroduciragentespatógenosnonativosalambientealrededordelasinstalacionesquecontienenalosanfibiosylaposibilidaddeintroducirnuevosagentespatógenoslocalesalosanfibiosimportados(vealasección4.3).
• Losanfibiosenprogramasdetranslocaciónoreintroducciónalanaturalezadebenmantenerseenaislamientoalargoplazodeotrosanfibiosquenoseanpartedelrangonaturaldelaespeciequeseráreintroducidaalanaturaleza.Esteprocesodeaislamientoesespecialmenteimportanteparaloszoológicosquedeseanformarpartedeprogramasdeconservacióndeanfibiosperoqueposeencoleccionesdeanfibiosmezcladasocosmopolitas,porejemplo,anfibiosdediferentesubicaciones
Capítulo3:Evaluaciónderiesgos—14
geográficasalmacenadosenunasolainstalación.Detallesdelprocesodeaislamientopermanenteseencuentranenlasección4.7.Enelcasodelastranslocaciones,eltiempoquelosanfibiospasanencautiveriodeberíaserreducido.
• Losprogramasdereintroducciónalanaturalezaytranslocacióndeberíanrecolectarinformaciónrelacionadaalasenfermedadesylasaluddelapoblacióncautivaquevaaserreintroduciday,además,delapoblaciónsilvestre(ydelasespeciesdeanfibiossimpátricos)queestéubicadaeneláreaenqueocurrirálareintroducción.Poseerunconocimientodelasenfermedadesylosproblemasqueestascausanenambaspoblacionespermiteunmejoranálisisdelriesgodeenfermedadqueplantealaliberacióndeanimalescautivos.
• Algunosdelosmétodosutilizadosparadesarrollarunabasededatosdepoblacionescautivasysilvestresson:
o Efectuarnecropsias(Incluidalahistopatología)entodoslosanimalesquemueran(verelcapítulo9).Lanecropsiaesútilparadetectarenfermedadesinfecciosas,nuevasoinesperadas,quenohansidoyadetectadasporpruebasespecíficasparaelhongoquítridoanfibiocomo,porejemplo,lareacciónencadenadelapolimerasa,PCRporsussiglaseninglés.
o Lavigilanciaenlanecropsianoestálimitadaaanimalesquemuerannaturalmente,estatambiénpuedeincluirsacrificios(medianteselección)deanfibiosdepoblacionesparaobtenermuestrasparainvestigacionesdelaboratorio.
o Pruebasespecíficasnecesariasparaencontraragentespatógenosanfibios,porejemplo,hongoquítridoanfibioyranavirus,enpoblacionessilvestresycautivas(veaelcapítulo7).
• Sedebehacerunseguimientodelasenfermedadesenlaspoblacionesantesdesuliberaciónydespuésdequeyahansidoreintroducidasalanaturaleza.Todosloseventosdemortalidadenlapoblaciónsilvestredebenserinvestigadosydocumentados.
• Pruebasadicionalesdedeteccióndeenfermedadesespecíficas,comoelhongoquítridoanfibioyelranavirus,puedensernecesariaspreviasalaliberaciónotranslocacióndeanimalescautivos.
3.2MITIGACIÓNDELRIESGODEENFERMEDADESPARACRÍAENCAUTIVERIOY
PROGRAMASDEREINTRODUCCIÓN PROGRAMAS Losprogramasqueponenaanfibiosdepoblacionesamenazadasenpoblacionescautivasdeseguridadparacríaencautiverio,yqueluegoliberanaladescendenciadevueltaasuhábitatnaturalsonconsideradosunabuenaestrategiadeconservacióndeanfibios.Acontinuaciónsediscutenestrategiasparalarevisiónymitigacióndelriesgodeenfermedadesdelaspoblacionesprevioalaliberacióndelosanimalesalanaturalezaparasituacionesdebajo,medianoyaltoriesgo:
Capítulo3:Evaluaciónderiesgos—15
Situacionesdebajoriesgo LasituaciónderiesgomásbajaquesepuededarenlaIntroduccióndeunaenfermedadinfecciosaapoblacionesanfibiascomoresultadodeunprogramadereintroducciónescuandolaspoblacionescautivasdeseguridadestánubicadasdentrodelpaísnativooelconjuntodela(s)especiesylainstalaciónsolomantieneaanfibiospertenecientesalpaíslocal.AlgunosejemplosdepoblacionescautivasdeseguridadparaanfibiossonElCentrodeConservacióndeAnfibiosdeElValle,PanamáyelprogramadeconservacióndeanfibiosBalsadelosSaposdelaUniversidadCatólica(PontificiaUniversidadCatólicadelEcuador)enEcuador.Estrategiasparalamitigaciónderiesgos:
1. Lasinstalacionesestánubicadasenelrangonativodelconjuntodela(s)especie(s)ysoloalbergananfibiosdesurangonativo.
2. Lasinstalacionesmantienenlas"buenasprácticas"debioseguridad.Estasprácticas
sondiscutidasendetalleenlasección4.5).3. Hayunprogramadecuarentenaparanuevosanimalesqueingresanalainstalación
(veaelcapítulo6).4. Losprincipaleseventosdemorbi/mortalidadsoninvestigadosmediantenecropsias
ehistopatologías(veaelcapítulo9).Serecomiendainvestigacionesrutinariasdetodasolamayoríadelasmuertesparaconstruirunabasededatosdesaludyparasercapacesdedetectarproblemasdeenfermedadesinfecciosasinesperados.
5. Sedebeconsiderareldesarrollodepoblacionesespecíficaslibresdeagentes
patógenos,porejemplo,elhongoquítridoanfibiooelranavirus(vealasección8.3).6. Losanimalessonliberadosexclusivamenteenelrangonaturaldelasespecies(de
preferenciasulugardeorigen)Pruebasdedeteccióndeenfermedadesytratamientospreviosalaliberaciónalanaturaleza: Losanimalesquesoncriadossoloensurangonaturalyquenuncahansidoexpuestosaanimalesajenosasurangonaturalporlogeneralnotienennecesidaddepasarporpruebasdedeteccióndeenfermedadesprevioaliberarlosalanaturaleza.Conalgunasexcepciones,sepresumequelosagentespatógenospresentesenestosanimalesyaseencuentranpresentesenlapoblaciónsilvestre.Laspautasaseguirparadiseñarprotocolosdepruebasdedeteccióndeenfermedadesytratamientospreviosasuliberaciónincluyen:
1. Siduranteunanecropsiaehistopatologíarutinariadelapoblacióncautivasedetectaunaenfermedadinfecciosaserecomiendalosiguiente:
Capítulo3:Evaluaciónderiesgos—16
• Siseidentificaunagentepatógenotratable,comoelhongoquítridoanfibio,serecomiendauntratamientosielpatógenopuedesereliminado(veaelcapítulo8).
o Eltratamientoesdeextremaimportanciasielagentepatógenodetectadopuedecausarmorbi/mortalidadsignificativaenlapoblacióncautiva(comoelhongoquítridoanfibio).
o Unmétododepruebaconfiabledebeestardisponibleparaconfirmarquelosanimalesestánlibresdeinfecciónantesdesuliberaciónalonaturaleza.
o Algunosparásitosy/oagentespatógenossondifícilesdeeliminaroespreferiblemantenernivelesbajosdeinfecciónenorganismosquesedennaturalmenteenpoblacionessilvestres(especialmenteparásitos).Vealasección8.4.
• Sedebedefinirelimpactopotencialdelpatógenoenlapoblaciónsilvestre.Estosepuedelograrpormediodelavigilanciadeenfermedadesenlaspoblacionessilvestresyotrasespeciesvulnerables.
o Sielpatógenoestápresentetantoenlapoblaciónsilvestrecomoenlacautiva,entonceslapresenciadeéstepuedenotenerimpactoenladecisióndeliberaranimalesdecautiverioalanaturaleza.Determinarsilospatógenossonidénticosnoessiemprefácil.Porejemplo,existenvariasespeciesderanavirusqueparecenidénticasenmétodosderevisiónPCR.Sonnecesariosmétodosdelaboratorioavanzadosparadeterminarlaespeciedelranavirus(vealasección7.4).
o Algunosagentespatógenosanfibiossonpatógenosoportunistas,porejemplo,micobacteria,yusualmentesonenfermedadesquesedanenelcuidadodeanimalescautivosmásqueenlaspoblacionessilvestres.
2. Sedebenconsiderarpruebaspreviasalaliberacióndelosanimalesparadetectar
agentespatógenosquepuedanserrelevantesparalaspoblacionesdeanfibiossilvestres,porejemplo,elhongoquítridoyelranavirus.
• Laspruebaspuedennosernecesariassiestádisponibleunhistorialmédicocompletodelapoblacióncautivaqueincluyaanálisisdenecropsiasehistopatologíadelamayoríadelosanimalesquemueran(comoyafuemencionado),yquepresenteevidenciadequelacausadelasmuertesnohaocurridoacausadequitridiomicosisoinfeccióndelRanavirus.Sedebehaberllevadoacabounavigilanciaporunperíodoextendidodetiempo(almenos1o2años).Paradetallesdecómocrearpoblacionesdeanfibioslibresdepatógenosespecíficos(LPE)verlasección8.3.
3. Losanimalesqueesténenfermosolosmiembrosdeunapoblacióncautivaqueeste
experimentandouneventodemortalidadnuncadeberíanserliberadoshasta
Capítulo3:Evaluaciónderiesgos—17
despuésdelaidentificaciónyresolucióndelaenfermedad.Estosedebeseguirinclusosielpatógenoesconocidoporaparecerenlaspoblacionessilvestres.
Situacionesderiesgomoderado
Unasituaciónderiesgomoderadoquesepuededarenlaintroduccióndeunaenfermedadinfecciosaapoblacionesdeanfibioscomoresultadodeunprogramadereintroducciónescuandolaspoblacionescautivaspuedenestarexpuestasaanfibiosquenopertenecenalrangonativodelasespecies.Estoocurreenlasinstalacionesqueestándentrodesupaísdeorigen,porejemplo,unainstalaciónquecontieneespeciesalemanasoperandoenAlemaniaperoquetambiéncontieneanfibiosdeAsiaodelosEstadosUnidos,ytambiéncuandolaspoblacionescautivasdeseguridadestánubicadasfueradelpaísdeorigen,porejemplo,anfibiosalemanesenlosEstadosUnidos.Estrategiasparalamitigaciónderiesgos:
1. Lasinstalacionesmantienenalasespeciesdeanfibiosqueseránreintroducidosalanaturalezaenaislamientoalargoplazo(vealasección4.7).
2. Senecesitaunprogramadecuarentenaparanuevosanimalesqueingresanala
instalación(veaelcapítulo6).3. Losprincipaleseventosdemorbi/mortalidadsoninvestigadosmediantenecropsias
ehistopatologías(veaelcapítulo9).Serecomiendainvestigacionesrutinariasdetodasolamayoríadelasmuertesparaconstruirunabasededatosdesalud(vealasección6.2)yparasercapacesdedetectarproblemasdeenfermedadesinfecciosasinesperados.
4. Sedebeconsiderareldesarrollodepoblacionesespecíficaslibresdeagentes
patógenos,porejemplo,elhongoquítridoanfibiooelranavirus(versección8.3).Pruebasdedeteccióndeenfermedadesytratamientospreviosalaliberaciónalanaturaleza: Ensituacionesderiesgomoderado,algunasdelaspautasaseguirparadiseñarpruebasdedeteccióndeenfermedadespreviasalaliberaciónyprotocolosdetratamientosparalaspoblacionesson:
1. Siduranteunanecropsiaehistopatologíarutinariadelapoblacióncautivasedetectaunaenfermedadinfecciosaserecomiendalosiguiente:
• Siseidentificaunagentepatógenotratable,comoelhongoquítridoanfibio,serecomiendauntratamientosielpatógenopuedesereliminado(veaelcapítulo8).
o Eltratamientoesdeextremaimportanciasielagentepatógenodetectadopuedecausarmorbi/mortalidadsignificativaenlapoblacióncautiva(comoelhongoquítridoanfibio).
Capítulo3:Evaluaciónderiesgos—18
o Debeestardisponibleunmétododepruebaconfiableparaconfirmarquelosanimalesestánlibresdeinfecciónantesdesuliberaciónalanaturaleza.
o Algunosparásitosy/oagentespatógenossondifícilesdeeliminaroespreferiblemantenernivelesbajosdeinfecciónenorganismosquesedennaturalmenteenpoblacionessilvestres(especialmenteparásitos).Vealasección8.4.
• Sedebedefinirelimpactopotencialdelpatógenoenlapoblaciónsilvestre.Estosepuedelograrpormediodelavigilanciadeenfermedadesenlaspoblacionessilvestresyotrasespeciesvulnerables.
o Sielpatógenoestápresentetantoenlapoblaciónsilvestrecomoenlacautiva,entonceslapresenciadeéstepuedenotenerimpactoenladecisióndeliberaranimalescautivosalanaturaleza.Determinarsilosagentespatógenossonidénticosnoessiemprefácil.Porejemplo,existenvariasespeciesderanavirusqueparecenidénticasenmétodosderevisiónPCR.Sonnecesariosmétodosdelaboratorioavanzadosparadeterminarlaespeciedelranavirus.Vealasección7.4.
o Algunosagentespatógenosanfibiossonoportunistas,porejemplo,micobacteria,yusualmentesonenfermedadesquesedanenelcuidadodeanimalescautivosmásqueenlaspoblacionessilvestres.
2. Sedebenllevaracabopruebaspreviasalaliberacióndelosanimalesparadetectar
agentespatógenosquepuedanserrelevantesparalaspoblacionesdeanfibiossilvestres,porejemplo,elhongoquítridoyelranavirus.Sacrificaraunsubconjuntodeanimalesparallevaracabopruebasparadetectarpatógenosespecíficospuedeserútil.Laspruebasespecíficaspuedennosernecesariassiestádisponibleunhistorialmédicocompletodelapoblacióncautivaqueincluyaanálisisdenecropsiasehistopatologíadelamayoríadelosanimalesquemueran(comoyafuemencionado),yquepresenteevidenciadequelacausadelasmuertesnofuequitridiomicosisoinfeccióndelRanavirus.Idealmente,sedebehaberllevadoacabounavigilanciaporunperíodoextendidodetiempo(almenos1o2años),aestaspoblacionesdeanfibiosselesconsideraríalibredepatógenosespecíficos(vealasección8.3).
3. Losanimalesqueesténenfermosolosmiembrosdeunapoblacióncautivaqueesté
experimentandouneventodemortalidadnuncadeberíanserliberadoshastadespuésdelaidentificaciónyresolucióndelaenfermedad.Estosedebeseguirinclusosielpatógenoesconocidoporaparecerenlaspoblacionessilvestres.
Situacionesdealtoriesgo
Unasituaciónderiesgoaltaquesepuededarenlaintroduccióndeunaenfermedadinfecciosaapoblacionesdeanfibiossilvestrescomoresultadodeunprogramade
Capítulo3:Evaluaciónderiesgos—19
reintroducciónescuandolapoblacióncautivadeseguridadestáexpuestaaanfibiosdefueradelrangonativodelaespecieosiestáexpuestaaanimalesconenfermedadesinfecciosasquenoestánpresentesenlapoblacióncautiva.Sedansituacionesderiesgoaltocuandolapoblacióncautivaseencuentraafueradeunabioseguridadapropiadaporcualquierperíododetiempo(veaelcapítulo4).Porlogeneral,losanfibiosquehansidoexpuestosasituacionessinprácticasdebioseguridadapropiadasnosonaptosparausarenprogramasdereintroducción.Sepuedenhacerexcepcionessilaespecieestaextintaensuestadosilvestreynoexistenpoblacionescautivascuidadasbajomedidasapropiadasdebioseguridadenningúnotrolugar.Enestassituaciones,esnecesariounprocesomuyexhaustivo,caroylargo(desdemesesaaños)derevisiónyevaluaciónderiesgosdeenfermedadesantesdeconsiderarreintroduciranimalesalanaturaleza.Estrategiasparalamitigaciónderiesgos:
1. Poneralosanimalesenaislamientoalargoplazo(sección4.7).Laliberacióndelosanimalessolopuedeserconsideradadespuésdequemúltiplesgeneracioneshansidocriadasbajocondicionesdeaislamiento.
2. Senecesitaunprogramadecuarentenaparanuevosanimalesqueingresanala
instalación(veaelcapítulo6).3. Losprincipaleseventosdemorbi/mortalidadsoninvestigadosmediantenecropsias
ehistopatologías(veaelcapítulo9).Serecomiendainvestigacionesrutinariasdetodasolamayoríadelasmuertesparasercapacesdedetectarproblemasinesperadosdeenfermedadesinfecciosasyparaeldesarrollodeunhistorialmédicogrupalcompleto.Elhistorialmédicogrupaldeberíaserrecolectadoporunperíodoextendidodetiempodealmenos1o2añosderecoleccióndedatos.
4. Desarrollarpoblacionescautivaslibresdepatógenosespecíficoscomoelhongo
quítridoanfibioyranavirus(vealasección8.3).5. Considerarcrearunanuevapoblacióndeanimalesprocedentesdehuevosolarvas
productodelacríadepoblacionesoriginalesdecautiverio.Estamedidaesimportanteparareducirelriesgodeagentespatógenosnuevosquenosondetectadosfácilmenteenpruebasrutinarias.
6. Sedebereconocerquesilasestrategiasparamitigarlasenfermedadesnoson
efectivas,losanimalesnodebenserreintroducidosalanaturalezabajoningunacircunstancia.
Capítulo3:Evaluaciónderiesgos—20
Pruebasdedeteccióndeenfermedadesytratamientospreviosalaliberaciónalanaturaleza: Elnivelderevisióndeenfermedadesnecesarioparaliberaranimalesdesituacionesdealtoriesgodevueltaasuestadosilvestrepuedeserextensivo.
1. Siduranteunanecropsiaehistopatologíarutinariadelapoblacióncautivasedetectaunaenfermedadinfecciosa,serecomiendalosiguiente:
• Siseidentificaunagentepatógenotratable,comoelhongoquítridoanfibio,serecomiendatratamientosielpatógenopuedesereliminado(veaelcapítulo8).
o Eltratamientoesdeextremaimportanciasielagentepatógenodetectadopuedecausarmorbi/mortalidadsignificativaenlapoblacióncautiva(comoelhongoquítridoanfibio).
o Unmétododepruebaconfiabledebeestardisponibleparaconfirmarquelosanimalesestánlibresdeinfecciónantesdesuliberaciónalanaturaleza.
• Sedebedefinirelimpactopotencialdelpatógenoenlapoblaciónsilvestre.Estosepuedelograrpormediodelavigilanciadeenfermedadesenlaspoblacionessilvestresyotrasespeciesvulnerables.
o Sielpatógenoestápresentetantoenlapoblaciónsilvestrecomoenlacautiva,entonceslapresenciadeestepuedenotenerimpactoenladecisióndeliberaranimalescautivosalanaturaleza.Determinarsilosagentespatógenossonidénticosnoessiemprefácil.Porejemplo,existenvariasespeciesderanavirusqueparecenidénticasenmétodosderevisiónPCR.Sonnecesariosmétodosdelaboratorioavanzadosparadeterminarlaespeciedelranavirus(vealasección7.4).
o Algunosagentespatógenosanfibiossonoportunistas,porejemplo,micobacteria,yusualmentesonenfermedadesquesedanenelcuidadodeanimalescautivosmásqueunriesgoaltoparalaspoblacionesanfibiassilvestres.
2. Siseidentificanenfermedadesinfecciosasquenopuedensertratadasoeliminadas
fácilmente,sedebecrearunanuevapoblacióndeanimales(rederivación)delasiguienteforma:
• Removerloshuevosdelapoblaciónoriginalydejarquelosrenacuajoseclosionenenaislamientopermanente,separadosdelapoblacióndeorigen.Paralasespeciesquesonvivíparas(comoelSapodeAerosoldeKihansi)sedebeinvestigarlaviabilidadderealizarcesáreasylaposteriorcrianzaderenacuajosenaislamientopermanente.
• Puedesernecesarialarederivacióndemúltiplesgeneracionesconpaseseriadoylacrianzadeéstasenentornosdeaislamientopermanente.
Capítulo3:Evaluaciónderiesgos—21
• Sepuedeconsiderarladesinfeccióndehuevosomasasdehuevecillosantesdelacrianzaenaislamientopermanentesisepuedeidentificarunmétodoquenointerfieraconeldesarrolloolaviabilidaddelosrenacuajos.
3. Sedebenllevaracaboexperimentosendondeanimalesdecautiverioquevanaser
liberadossonalojadosconespeciesdeanfibiossimpátricosqueestánpresentesenlaubicaciónoregióndondeseránliberadoslosanimales.
• Losanimalessimpátricosseránmonitoreadosparadetectarsihaydesarrollodeenfermedadesysellevaranacabonecropsiasconhistopatologíaentodoslosquemueran.
• Losquesobrevivanhastaelfinaldelexperimentoseránsacrificadosyluegosellevaranacabonecropsiasehistopatologíasenestos.
• Cuandoselleveacabolanecropsiasedeberecolectartejidodetodoslosanimalesparaelusodeésteenpruebasdediagnósticoparadetectaragentespatógenosdeinterés(sedebenmantenercongeladasmuestrasdelhígadoyelriñónparahacerpruebasPCRdelRanavirus).
• Losexperimentosdebenserllevadosacaboporlomenosunos60o90díasparapermitirlamanifestacióndeenfermedadesinfecciosassignificativas.
4. Esnecesarioelsacrificioylaeutanasiadeunsubconjuntodelaspoblacionesen
cautiverioparallevaracabonecropsiaehistopatologíaytambiénparahacerpruebasdedeteccióndeagentespatógenosespecíficosdeinterés(comoelPCRparaelranavirus)antesdeliberarlasalanaturaleza.
5. Sedeberevisarunhistorialmédicode1o2añosdeduracióndelapoblaciónque
seráliberadaalanaturaleza,elcualdebeincluirreportesdenecropsiasehistopatologíasdetodosolamayoríadelosanimalesquemueran.Losanimalesquepresentenevidenciadetenerunaenfermedadinfecciosanodebenserliberadosalanaturaleza.
3.3TRANSLOCACIÓN Lastranslocacionesocurrencuandoanimalessilvestressontrasladadosentrediferenteslugaresconpocaoningunaintervenciónencautiverio(porejemplo,moverlosentrecharcasocañones;animalesquesonpartedelamismametapoblación).Algunosriesgosdeenfermedadesenlastranslocacionesson:
• Elmovimientodeunagentepatógenoanfibiosignificativo(comoelhongoquítridoanfibio)desdeunlugaraotro.
• Quelosanfibiosencautiverioadquieranpatógenos(siesquelosanimalesestánencautiverioduranteelprocesodetranslocación)
Capítulo3:Evaluaciónderiesgos—22
Estrategiasparalamitigaciónderiesgos:
1. Silosanimalesseencuentranencautiverioantesdelatranslocación,estosdeberíanmantenerseenaislamientoalargoplazodeotrosanfibiossilvestres(vealasección4.7).Lasprácticasdebioseguridaddeaislamientodebenestarpresentesdurantetodaladuracióndeltransporteycautiverio.
2. Lasmuertesdurantelastranslocacionesdebenserinvestigadaspormediode
necropsiaehistopatología(veaelcapítulo9)paraidentificarproblemasinesperadosdeenfermedades.
3. Antesdelatranslocación,siesposible,lleveacaboestudiosdevigilanciadesalud
delaspoblacionessilvestresdeorigenydestino.Estosestudiospuedenincluir:necropsiayvigilanciadehistopatología,ytambiénpruebasespecíficasparadetectaragentespatógenosimportantescomoelhongoquítridoanfibioyranavirus.Éstosestudiosdefiniríanlosriesgosdeenfermedadesdelatranslocación.
4. Sisedeidentificanagentesinfecciosos,sedebedefinirelimpactopotencialdeéstos
enlapoblaciónsilvestre.• Sisedetectaelmismoagenteinfecciosotantoenlaspoblacionesde
origenydedestino,lapresenciadelagentepatógenonodeberíaimpactarelprocesodetranslocación.Determinarsilosagentespatógenossonidénticosnoessiemprefácil.Porejemplo,existenvariasespeciesderanavirusqueparecenidénticasenmétodosdedeteccióndePCR.Sonnecesariosmétodosdelaboratorioavanzadosparadeterminarlaespeciedelranavirus(vealasección7.4).
• Sielagenteinfecciosoestápresentesoloenlapoblacióndeorigen,seránecesariomásplaneaciónyevaluaciónderiesgosantesdelatranslocación.
• Sepuedeconsideraruncortoperíododecautiverioparaeltratamientodeenfermedadesinfecciosascurables(comolaquitridiomicosis)enlapoblacióndeorigen.Eltratamientopodríanosernecesarioodeseadosielmismoagentepatógenoestápresentetantoenlapoblacióndeorigencomoenladedestino.
3.4LITERATURACITADAWalker,S.F.,J.Bosch,T.Y.James,A.P.Litvintseva,J.A.Oliver-Valls,S.Piña,G.García,G.A.
Rosa,A.A.Cunningham,S.Hole,R.Griffiths,andM.C.Fisher.2008.Invasivepathogensthreatenspeciesrecoveryprograms.CurrentBiology18:R853–R854.
Cap.4:Bioseguridad—23
CAPÍTULO4
BIOSEGURIDADYAISLAMIENTOPERMANENTEDEPOBLACIONESDECONSERVACIÓNEXSITU
4.0INTRODUCCIÓN Lanecesidaddemejorbioseguridadenlasinstalacionesquealbergananfibioscautivoshasidoresaltadaporejemploscomoeldelaquitridiomicosis,unaenfermedadinfecciosaintroducidaglobalmentepormediosantropógenosquediocomoresultadodevastadorasdisminucionesdelaspoblacionesanfibias.Losanfibiosson,rutinariamente,trasladadosglobalmenteparasuusocomosujetosdeestudiodelaboratorio,mascotas,animalesdeusoeducacionalodemuestraycomopartedeprogramasdeconservaciónycrianzadeanimales.Estostrasladospuedenaumentarelriesgodequeagentespatógenosanfibiosseanesparcidosanuevoslugares,comoyahasidodemostradoenestudiosrecientesquetratandeimportacionesytrasladosdeanfibios(FisherandGarner,2007;Schloegelycolaboradores,2009;Schloegelycolaboradores,2010;Martelycolaboradores,2014)yenlaintroduccióndelhongoquítridoanfibio(Batrachochytriumdendrobatidis)apoblacionessilvestresdelferreretmallorquínacausadelasactividadesdeunprogramadecríaencautiverio(Walkerycolaboradores,2008). LaimplementacióndeprácticasdebioseguridadquereduzcanlapotencialIntroduccióndeenfermedadesinfecciosasanfibiasanuevoslugaressonresponsabilidaddetodaslasinstitucionesquealberguenomuevanaanfibioscautivos.Además,lasbuenasprácticasdebioseguridadayudanareducirelriesgoqueplanteanlasenfermedadesinfecciosaseneléxitoylasostenibilidaddelosprogramasdeanfibioscautivos.Losconceptosmásimportantesdelabioseguridadanfibiason:
• Existenriesgosdeenfermedadesinfecciosasasociadosaprogramasquealbergananfibiosencautiveriofueradelrangogeográficonativodeoelconjuntodelasespecies,porejemplo,saposdePanamállevadosalosEstadosUnidos).Riesgossimilaresocurrencadavezqueanimalesdemúltiplesregionesgeográficassonmezcladosenlamismainstalacióndeanfibioscautivos(unacolecciónmezcladaocosmopolita).
• Laformamássimpleybaratadereducirestosriesgosesmanteneraanfibioscautivosdentrodelrangonativodelaespecieyevitarlacreacióndecoleccionescosmopolitas.
• Lasprácticasdebioseguridadquereduzcanelriesgodetransmisióndeenfermedadessonnecesariassilosanfibioscautivosdebenestarfueradesudistribuciónnativaodentrodeunacoleccióncosmopolita.
• Losprogramasdecríaencautiverioolascoloniasderesguardoquepretendanreintroduciranfibiosasuhábitatnaturaldeberíanmanteneraesosanimalesenaislamientopermanente(enedificiosohabitacionesdedicados)lejosdelosanfibios
Cap.4:Bioseguridad—24
cuyoorigennoestédentrodeladistribuciónnativadelasespecies.Prácticaszootécnicascomoelusodecalzadodedicado,ropaprotectora,equipoyherramientasdedicadas,yelseguimientodepautasdetrabajoespecíficasreducenelriesgodeintroduciragentespatógenosnonativosacoleccionesdeanfibios.Lasinstalacionesubicadasdentrodeladistribuciónnaturaldelasespeciesyquenoalbergananfibiosajenosaladistribuciónnaturalsonelmejorejemplodeaislamientopermanenteyrequierenlamenorcantidaddegastosyesfuerzo.
• Elusodeprácticasyrutinaszootécnicasrelativamentesimplesreducenelriesgodeintroduciryesparcirenfermedadesinfecciosasdentrodelasinstalacionesdeanfibios.Estosinimportarelpropósitodelasespecies,porejemplo,paraeducar,comomascotaoparapoblaciónderesguardo).
• Sedebentenerencuentaprocedimientosparalaeliminaciónderesiduossólidosyaguasresidualesenlasinstalacionesdeanfibios,cuandolosanfibioscautivosseencuentranfueradeladistribuciónnativadelasespeciesocuandoestosseencuentranalojadosenunacoleccióncosmopolitaquealbergaanfibiosdediferentesregionesgeográficas(dentroofueradesudistribuciónnativa).
• Lasfuentesdeaguayalimentodelasinstalacionesdebenserescudriñadasporsupotencialparaintroduciragentespatógenosanfibios.
• Idealmente,lasinstalacionesson:apruebadepestes;apruebadeanfibios(paraevitarelescapedeestosoparaevitarlaentraday/ocontactoconanfibiosnativosenlibertad);diseñadasparateneralimentación,irrigaciónylimpiezaautomáticayfácilesdelimpiarymantener.
• Idealmente,lasinstalacionesproveenlasnecesidadesambientalesúnicasdelosanfibiosenloquerespectaatemperatura,humedad,iluminaciónycalidaddelaguadelmedioambiente.Estasnormassonesencialesparalasaluddelosanfibiosysonmateriadevariasrevisionesdeexpertos(Browneycolaboradores,2007;PramukyGagliardo,2008),
4.1¿QUEESLA"BIOSEGURIDAD"? Labioseguridadpuedeserdefinidacomo"Laproteccióndelmedioambienteysusespeciesnativasdeagentespatógenos".Sinembargo,elcuidadodepoblacionesdeanfibiosexsituconpropósitosdeconservaciónrequiereconsideracionesadicionales.Porlotanto,enestedocumentolabioseguridadserefierealasmedidasque:
• Protejanalasespeciesnativasensuhábitatnaturaldeanfibioscautivosqueportenagentespatógenos,sobretodosilasespeciescautivasseencuentranfueradesurangodedistribuciónoriginalosiestánexpuestasaotrosanfibiosajenosasurangodedistribución.
• Protejanalosespecímenescautivosdeagentespatógenosqueesténpresentesenlosanfibiosnativos,yaseasilainstalaciónestádentrodelrangodedistribuciónoriginalofueradeeste.
• Protejanalosespecímenescautivosdeagentespatógenospresentesenotrosanfibioscautivosdentrodelacolección.
Cap.4:Bioseguridad—25
Nuncaselograráun100%debioseguridadenningunapoblaciónanfibiaexsitu.
• Lasoportunidadesparaquelosagentespatógenossemuevanpuedenreducirsesignificativamenteidentificandoaportadoresyprácticaszootécnicasquepresentenriesgospotencialesydiseñandoprotocolospararemoveroreducirestosriesgos.
• Laimplementaciónymantencióndelabioseguridadesunprocesosinfindeevaluaciónderiesgos(unejemplodeestoeslaprobabilidaddequeunagentepatógenoseatransferidoporunportadoroprácticayaidentificadoscontralaseveridaddelasconsecuenciasquelatransferenciacausaría)yposteriorreducciónderiesgos.
Unnivelrealistadebioseguridadpuedeseralcanzadoponiendoenprácticaprotocolosquesonsimplesybaratos.Lasinversionesgrandesencuantoainstalacionesyequipamientosonsolonecesariassisequierealcanzarelnivelmásaltodebioseguridad,porejemplo,cuandoéstasoperanfueradelrangodedistribuciónoriginaldelasespeciesquevanaserreintroducidasalanaturaleza.4.2DEFINICIONESDEBIOSEGURIDADProgramasubicadosdentrodelrangodedistribuciónoriginaldelasespecies:Laolas
instalacionesquealberganespeciesdeanfibiosoconjuntosdeespeciestienensuubicaciónfísicadentrodeladistribucióngeográficadelasespecies.Ejemplos:1)UnedificioocontenedordetransportemodificadoconsaposaerosoldeKihansi(Nectophrynoidesasperginis)ubicadoenelbordedelaGargantadeKihansienTanzania;2)Unacoleccióndemúltiplesespeciesdeanfibioscapturadoslocalmentealojadosenuncentroeducacionalparavisitantesdentrodeunparquenacionaloreservanatural.
Programasubicadosfueradelrangodedistribuciónoriginaldelasespecies:Laolas
instalacionesquealberganespeciesdeanfibiosoconjuntosdeespeciestienensuubicaciónfísicafueradeladistribucióngeográficadelasespecies.Ejemplos:1)SaposaerosoldeKihansi(Nectophrynoidesasperginis)ubicadosenunzoológicoenUSA;2)SalamandrascapturadasenlibertaddelsurdeMéxico(porejemplo,elEstadodeChiapas)siendomantenidasenunainstalacióndeMéxicocentral(porejemplo,elEstadodeMichoacán).
Instalacionesoinstitucionescosmopolitas:Cualquierinstalación,yaseahabitacióno
edificio,oinstitución,comouniversidadesozoológicos,quealberguenespeciesdeanfibiosdediferentesregionesgeográficas,porejemplo,especiesquenocoexistenenlanaturaleza.Larealidadesquelamayoríadelosprogramasdeanfibiosenelmundocalificancomo"cosmopolitas",peroestonoquieredecirquenopuedendesarrollarprogramaslosuficientementesegurosparalaconservaciónyreintroduccióndeanfibios.
Cap.4:Bioseguridad—26
Instalaciónoinstituciónaislada:Cualquierinstalación,yaseahabitaciónoedificio,o
institución,comouniversidadesyzoológicos,queestédedicadaasolounaespecieogrupodeespeciesdeanfibiosquecoexistenenlanaturaleza.Estetipodeprogramasusualmenteestánenfocadosenunasolaespecie,porejemplo,lainstalaciónparaelsapodeWyoming(Anaxyrusbacteri)delServiciodePescayVidaSilvestredelosEstadosUnidosenelCriaderoNacionaldePecesenSaratoga.Enalgunoscasosespecíficos,esteconceptopuedeseraplicadoapoblacionesdiferentesenvezdeaespeciespropiamentedichas.
4.3COLECCIONESCOSMOPOLITASYRIESGOSDEENFERMEDADESPARA
ANFIBIOSSILVESTRES Losagentespatógenosquesonnativos,oendémicos,deunapoblacióndeanfibiosconregularidadcausanenfermedadeslevesoinclusoindetectablesenesosanimales.Estoesporquelapoblaciónhasidoexpuestaalagentepatógenoalolargodeltiempoyhadesarrolladoadaptacionesparalimitarlosefectosdañinosdelpatógeno.Sinembargo,cuandoestospatógenosnonativossonintroducidosapoblacionesanfibiasnuevas,tienenelpotencialdecausarenfermedadesmásserias. Lascoleccionestradicionalesdeanfibiosenzoológicossontípicamentecosmopolitas,yaquealbergananimalesdediferentesubicacionesgeográficasydediferentesfuentes,porejemplo,capturadasenelmediosilvestre,nacidasencautiveriouobtenidasdecomercializadoresdeanimales,dentrodelamismainstalación.Estascoleccionesincrementanelriesgodeintroduciragentespatógenosanfibiosnonativosaespeciesyubicacionesgeográficasajenasaestospatógenosporlassiguientesrazones:
• Elcontactodirectooindirectoentreanimalesdecoleccionescosmopolitaspuedefacilitarlatransmisióndeagentespatógenosentreanimalesdediferentesubicaciones,porejemplo,ranasdeAméricaCentralquesonexpuestasaranasdeAustraliaysoninfectadasporunpatógenoexclusivodelasranasaustralianas.
• Silosanimalesinfectadosconunagentepatógenononativosonreintroducidosalanaturaleza,estosintroduciránelpatógenononativoasunuevaubicación,porejemplo,ranasdeAméricaCentralinfectadasconunpatógenoaustralianoquesonreintroducidasalanaturalezaenAméricaCentral.
• Losanfibiostraídosaunanuevaubicacióngeográficapuedenintroduciragentespatógenosanfibiosnonativosalosanfibiosdelanuevaubicación,porejemplo,ranasdeAméricaCentralinfectadasconunpatógenonativodeAméricaCentralquesonllevadasalosEstadosUnidos.
Porestasrazones,debeprocurarseasegurarquelosprogramasquealbergananfibiosencautiverionoesténcontribuyendoalmovimientodeagentespatógenosdeanfibios.
Lasformasmássimplesybaratasdereducirelriesgodeenfermedadesydemoveragentespatógenosanfibiosnonativosanuevoslugaresson:
Cap.4:Bioseguridad—27
• Establecerymantenerpoblacionesanfibiascautivas(exsitu)dentro,olomáscerca
posible,deladistribuciónnativayhábitatdelaespeciequeespartedeunprogramadeconservación,porejemplo,manteneralasespecieshondureñasenHondurasyalasespeciesaustralianasenAustralia).
• Evitarestablecerprogramasdecríaencautiveriodeanfibiosqueseránreintroducidosalanaturalezadentrodeunacoleccióncosmopolitadeanfibios(yaseadentroofueradelrangodedistribuciónoriginaldelaespecie).
Yaqueestonoessiempreposible,sonnecesariasmedidasparaincrementarlabioseguridadenmuchosprogramasdecautiverioanfibio.4.4NIVELESDEBIOSEGURIDAD Lasmedidasdeseguridadsonprocedimientosespecíficoszootécnicos,depersonal,flujodetrabajoyveterinarios,quereducen,peronoeliminancompletamente,losriesgosdeenfermedadesinfecciosasdentrodeunainstalaciónanfibia.Lasrazonesporlascualesseimplementanprácticasdebioseguridadeninstalacionesdeanfibiosencautiverioson:
• Prevenirqueagentespatógenosanfibiosnonativossalgandeunainstalacióndecautiverioyevitarsuintroducciónanuevoslugares.Estopuedeocurrircuandolosanfibioshansidoremovidosdesudistribuciónnativaporcualquiermotivo.
• Prevenirqueagentespatógenosanfibiosentrenaunapoblacióndecautiveriooqueseantransmitidosentreanimalesdentrodeunainstalación.Porejemplo,noesdeseableintroducirelhongoquítridoanfibioaunacolecciónanfibiasaludableopropagarlainfeccióndelhongoalolargodeunacolecciónanfibia.
Lostiposdeprácticasdebioseguridadnecesariosparaalcanzarestasmetassondeterminadosindividualmenteparacadainstalaciónanfibiayparacadaprogramadeconservacióndeanfibios.Enlascoleccionescosmopolitasdeanfibios,lasprácticasdebioseguridadsondeterminadasparacadaespeciealojadaenlainstalación. Enestemanual,sedefinenpautasparadosnivelesdebioseguridadbasadasenelgradoyeltipoderiesgosdeenfermedadesinfecciosasqueseidentifiquendentrodeunprogramadecautiveriodeanfibios.
• Elprotocolobásicoes"LasBuenasPrácticas",lascualesnorequierenequipamientooinstalacionesespeciales,sinoquedescribesimplesprácticasdesentidocomúnparalahigieneyprevencióndelapropagacióndeenfermedadesparatodoslosanfibioscautivos.
• Paralaspoblacionesexsituqueeventualmenteseránusadasenprogramasdereintroducciónalanaturaleza,serequierenunaspocasmedidasextradebioseguridadparareducirelriesgodeintroduciragentespatógenosalanaturaleza.Esteprotocoloesdenominadosimplemente"Aislamiento",yaqueelsimpleactode
Cap.4:Bioseguridad—28
separarfísicamenteaunapoblacióndeanimalesreduceengranmedidalamayoríadelosriesgosdepropagacióndeenfermedadesentrelosanimalescautivos.
Ladecisióndeusarlosprotocolosde"LasBuenasPrácticas"o"Aislamiento"esfacilitadaporunasimpleevaluaciónderiesgosyunárboldedecisiones(vermásabajo).
ÁrboldedecisionesdeevaluaciónderiesgosparalabioseguridadInformaciónRequerida
Elárboldedecisionesparalaevaluaciónderiesgosdebioseguridad(imagen4.1)requiere3tiposdeinformación:
1. Elroldeunaespecieogrupodeespeciesdentrodeunprogramadeconservación
2. Laubicacióndelainstalaciónenrelaciónalorigengeográficodelaespecieogrupodeespecies
3. Lainstalacióndecautiverioescosmopolitaoaislada(vealasección4.2)Estoscriteriossonexplicadosendetalleabajo(despuésdelárboldedecisiones).
Cap.4:Bioseguridad—30
1.El"rol"delaespecieogrupodeespecies Losrolesmáscomunesdelasespeciesdeanfibiosencautiverio,comofuerondefinidosporelTallerdePlaneacióndeConservaciónExSitudeAnfibiosdelCBSGylaWAZA(Zippel,LacyyByers2006)yelArcadelosAnfibios,sonlistadosacontinuación,conunacategoríaparaoperacionescomercialesalargaescala.Rolesparaanfibioscautivos:
• Arca,rescateosuplementación• Investigaciónsobrelaconservación• Educaciónsobrelaconservación• Cultivoyproducciónenmasadeanfibios
Arca,rescate,osuplementación: Todasestascategoríastienenlaintencióndereintroduciralosanimalesosudescendenciaalanaturaleza. Arca—Unaespeciedeanfibioqueseencuentraextintaenlanaturaleza(localmenteoglobalmente)yquesehabríaextinguidoporcompletosinelmanejoexsitudeesta. Rescate—Unaespeciedeanfibioqueseencuentraenpeligroinminentedeextinción(localmenteoglobalmente)yquerequieremanejoexsitucomopartesdelasaccionesdeconservaciónrecomendadas. Suplementación—Unaespeciedeanfibiocuyapoblaciónsilvestresevebeneficiadadelmanejoexsituatravésdelacrianzaparalaliberaciónalanaturalezacomopartedeunplandeconservaciónrecomendado.
Investigaciónsobrelaconservación: Estosanimalesnotienenposibilidadesdereintroducciónalanaturaleza,perosonusadosparaproyectosdeinvestigaciónquecontribuyenalaconservacióndesuespecieounaespecierelacionada(sustituta)enlanaturaleza.
Algunosejemplosdeestetipodeinvestigaciónson:
• Eldesarrollodetécnicasparalacríaencautiverio.• Investigacionessobreenfermedades,porejemplo,elcontrolotratamientodela
quitridiomicosis.• Nutriciónydesarrollodedietasparaanfibiosencautiverio.
Educaciónsobrelaconservación: Estosanimalesnotienenposibilidadesdevolveralanaturaleza.Estassonespeciesanfibiasusadassoloconpropósitoseducacionales(principalmenteenzoológicosyacuarios)parainspiraryeducaralosvisitantesyparapromoveruncambiodeactitudpositivo.Estosanimalessonaquellosquenormalmenteseencuentranenunacoleccióncosmopolitadel
Cap.4:Bioseguridad—31
zoológico,perotambiénpuedenincluiraanfibiosquesonespecies"emblemas"o"embajadoras"usadasparacrearconcienciarespectoalascuestionesdeconservacióndeanfibios,porejemplo,removeralsapodeWyomingdelapoblacióndecríaencautiverioparausarlocomoanimaldeexhibición.Ocasionalmente,losanfibiosutilizadosconpropósitoseducacionalessonliberadosadevueltaalanaturaleza.Enestecaso,losanimalesdeberíanserconsideradoscomoArca,RescateoSuplementaciónparapropósitosdelaevaluaciónderiesgos.
Cultivoyproducciónenmasadeanfibios: Estosanimalessoncriadosintensamenteyengrandesnúmerosparaserutilizadoscomocomida,animalesdelaboratorioyparaelcomerciodeanimales.Estegrupodeanimalestieneriesgosdeenfermedadesúnicosporelgrannúmerodeanimalesalojadosenunmismolugar,elusoderecintosexteriores(locualpermitequelosanimalesescapenyquehayacontactoentrelosanfibiosnativosyloscriados)yelpotencialdetransmisióndeagentespatógenoscuandohaysituacionesendondelasespeciessoncosmopolitas,porejemplo,unatiendadeanfibiosoreptilesquevendeanimalesdediferentesregionesgeográficas.2.Laubicacióndelainstalaciónparaanfibios Laubicacióndelainstalaciónquealbergaaanfibioscautivosesunimportantecomponentedelaevaluaciónderiesgosdebioseguridad.Lasconsideracionesmásimportantessonlassiguientesdicotomías:
• Lainstalaciónestádentrodelrangogeográficodelaespecieosugrupo,ocercadel
sitioderecolecciónoriginal.O
• Lainstalaciónestáfueradelrangodedistribuciónoriginaldelaespecieogrupodeespecies,olejosdelsitioderecolecciónoriginal.
3.¿Lainstalaciónescosmopolitaoaislada?
• Lainstalaciónselimitaaalbergarespeciesogruposdeespeciesdelrangogeográficonatural(aisladas).
O• Lainstalaciónalbergaespeciesogruposdeespeciesdefueradelrangode
distribuciónoriginaldeestas,porejemplo,unacoleccióncosmopolitadezoológico.
Ejemplosusandoelárboldedecisionesdeevaluaciónderiesgos Lassiguientessituacionessonparaguiaraloslectoresenelusodelárboldedecisionesdeevaluaciónderiesgoparalabioseguridad(imagen4.1).Ejemplo1:Lasranastoroamericanas(Lithobatescatesbeianus)alojadasenunaexhibicióndezoológicoenlosEstadosUnidosqueeducaalpúblicoacercadelosecosistemasdehumedales.No
Cap.4:Bioseguridad—32
existenplanesparacriaraestaespecieencautiveriooparaliberarasuscríasalanaturaleza.¿Cómousarestainformaciónenelárboldedecisiones?:
• Estasranastoronosonpartedeunprogramadecríaencautiveriooinvestigaciónsobrelaconservaciónyestasranas,osuscrías,nuncaseránliberadasalanaturaleza.Porlotanto,tienenunrolEDUCACIONAL.
• LosanimalescuyaespecietieneunrolEDUCACIONALsonmanejadosencautiveriousandoelnivelde“BUENASPRÁCTICAS”debioseguridad.
• Laspautasdebioseguridad"BUENASPRÁCTICAS"(vealasección4.4)incluyeninformacióndecómoprevenirlaIntroduccióndeenfermedadesinfecciosasqueportanlasranastoroapoblacioneslocalesdeanfibiossilvestresoaotrosanfibiosqueseanpartedelacoleccióndelzoológico.EstotambiénvaldríasilaexhibiciónmencionadaenesteejemploestuvieraubicadafueradelosEstadosUnidos,porejemplo,EuropaoAustralia,sinembargo,dadoslosriesgossignificativosasociadosalaintroduccióndeagentespatógenosanfibios"nonativos"anuevoslugares(vervealasección4.3),serequiereunestudiodetalladoacercadelasprácticasdebioseguridadparalaeliminaciónderesiduosyaguasresiduales(versecciones4.14–4.15)ydelosaspectosrelacionadosaldiseñodeinstalacionesparaprevenirelescapedeanimalescautivosolaentradadeanfibiossilvestresaestas(vealasección4.18).
Ejemplo2: LossaposdeWyoming(Anaxyrusbaxteri)sonunaespecieenpeligrodeextincióndeloestedelosEstadosUnidosqueformanpartedeunprogramadecríaencautiverioqueproducerenacuajosparasuposteriorreintroducciónalanaturaleza.Unadelasinstalacionesdelprogramadecríaencautiverioesunzoológicoubicadoa20millas(32km)deunlagoenelcualelsapoestápresentenaturalmente.Elzoológicoesunainstitucióncosmopolitaquetambiénalbergaunpequeñonúmerodeotrasespeciesdeanfibiosdealrededordelmundoconpropósitoseducacionales.¿Cómousarestainformaciónenelárboldedecisiones:?
• LossaposdeWyomingsonpartedeunprogramadecríaencautiveriocuyoobjetivoesreintroduciralosanimalesdevueltaalanaturaleza.Porlotanto,estossapostienenunroldeArca,RescateodeSuplementación.
• ElzoológicodeesteejemploestádentrodeladistribuciónnativadelsapodeWyoming.
• Elzoológicoesunainstalación"mezclada",óseaquealbergaespeciesdeanfibiosajenasalrangodedistribuciónoriginaldelsapodeWyoming.
• LosanimalesconunroldeArca,RescateodeSuplementaciónqueesténalojadosenunainstalaciónoinstituciónmezcladasonmantenidosenunniveldebioseguridad
Cap.4:Bioseguridad—33
deAISLAMIENTO.Enestasituaciónestoescierto,aunquelosanimalesesténalojadosenunainstalaciónqueestádentrodeladistribuciónnativadelsapo.Esdegranayudatomarprecaucionesadicionalesenelniveldebioseguridadde“AISLAMIENTO”(vealasección4.4),paraasegurarsequelossaposqueseránliberadosalanaturalezanohansidoexpuestosaagentespatógenos"nonativos"quecirculenenotrosanfibiosalojadosenlainstalaciónmezclada.
UnasegundainstalacióndelprogramadecríaencautiveriodelsapodeWyomingestáubicadaa15millas(24km)deunlagoenelcualelsapoestápresentenaturalmente.EstainstalaciónestádedicadasoloalacrianzadesaposdeWyomingyalbergaaotrosanfibios.
• DadoquelainstalaciónenesteejemploestádentrodeladistribuciónnativadelsapodeWyomingyyaqueestádedicada(oaislada)alsapodeWyoming,losanimalespuedenestarbajoelniveldebioseguridadde“BUENASPRÁCTICAS”(vealasección4.4).Aunasí,elniveldebioseguridadde“BUENASPRÁCTICAS”incluyerecomendacionesde"sentidocomún"parareducirelriesgodequeagentespatógenosanfibiosimportante,comoelhongoquítridoanfibio,noseanintroducidosopropagadosalaspoblacionescautivas.
Ejemplo3:LossaposaerosoldeKihansi(Nectophrynoidesasperginus)seencuentranextintosenlanaturaleza,másespecíficamentesudistribuciónnativaalsurdelasMontañasUdzungwadeTanzania.HansidoestablecidasenunzoológicodelosEstadosUnidospoblacionesderesguardoencautiveriodelsapoaerosol.ExistenplanesafuturoparausaralascríasdelapoblacióncautivaparalareintroduccióndelsapoaerosolaTanzaniadespuésdelamitigacióndefactoresambientalesenladistribuciónnativadelsapo.¿Cómousarestainformaciónenelárboldedecisiones?:
• Lossaposaerosolsonpartedeunprogramadecríaencautiveriocuyoobjetivoesreintroduciralosanimalesdevueltaalanaturaleza.Porlotanto,estossapostienenunroldeArca,RescateodeSuplementación.
• Lainstalacióndecrianzaparaelsapoaerosolseencuentraconsiderablementeafueradeladistribuciónnativadelaespecie.Enestasituación,elniveldebioseguridadde“AISLAMIENTO”esnecesarioparaprevenirlaintroduccióndeagentespatógenos"nonativos"alaspoblacionesdesaposaerosol.Siseintroducenagentespatógenosnonativosalossaposaerosol,hayunaposibilidaddeque,comoresultadodelesfuerzoparalareintroducciónalanaturalezadelsapoaerosol,estospatógenostambiénseanintroducidosdevueltaalaspoblacionesdeanfibiossilvestresenTanzania.
Cap.4:Bioseguridad—34
4.5RESUMENDEBUENASPRÁCTICASYNIVELESDE“AISLAMIENTO”DESEGURIDAD
BuenasPrácticas Las“BUENASPRÁCTICAS”sonrecomendadasparatodoslosanfibiosencautiverio,sobretodoparaaquellosque:
• SeencuentrenenaislamientoalargoplazoporquetienenunroldeArca,RescateodeSuplementación,perosonmantenidosenunainstalaciónqueestádentrodeladistribuciónnativadelaespecieogrupodeespeciesyquenomantieneotienecontactoconanfibiosajenosasudistribuciónnativa.
O• TienenunroldeINVESTIGACIÓNSOBRELACONSERVACIÓNodeCONSERVACIÓNY
EDUCACIÓNsinintencionesdedevolveralosanimalesosudescendenciaalanaturaleza.Estosanimalespuedenestardentroofueradeladistribuciónnativa.SiestosanimalesserándevueltosalanaturalezadeberíantenerunroldeArca,RescateodeSuplementación.
Las“BUENASPRÁCTICAS”reduciránlossiguientesriesgosdeenfermedadesinfecciosasdeunacolección:
• Adquisicióndeenfermedadesinfecciosasque:o Tienenunimpactonegativoenlasaluddeanimalesindividuales.o Interfierenconeléxitodeunprogramadecríaencautiverioola
sostenibilidaddeunprogramadeanfibiosencautiverio.o Tienenunimpactonegativoenlavalidezdecualquierinvestigaciónque
selleveacaborespectoaunaespecie.• Laintroduccióninvoluntariadeunagentepatógenoanfibiononativoaunanueva
ubicación,porejemplo,ranasdelosEstadosUnidosllevadasaunainstalaciónenAustraliaintroducenunranavirusnonativoaAustralia.
Aislamiento
Lasnormasde“AISLAMIENTO”sonrecomendadasaaquellosanimalesque:TienenrolesdeArca,RescateodeSuplementaciónyquetienenposibilidades,olascríasdeestos,deserdevueltosalanaturaleza
Y
• Hansidoremovidosdesudistribuciónnativaparaesfuerzosconservacionistasexsitu,porejemplo,quesonnativosdeIndiaeincorporadosaprogramasdeconservaciónexsituenAustralia.
O
Cap.4:Bioseguridad—35
• Estánenprogramasdeconservaciónexsitudentrodesudistribuciónnativa,peropuedenserexpuestosaanfibiosdefueradesudistribuciónnativa,porejemplo,unzoológicoenAlemaniaquetieneunprogramadeconservaciónexsituparaespeciesnativasalemanas,peroquetambiénalbergaanfibiosdeotrasregionescomoKeniaolosEstadosUnidos.
Lamezcladeindividuosquevienendediferentespoblacionesalopátricasdelamismaespecietambiénpuederequerir“AISLAMIENTO”bajociertascircunstancias.Porejemplo,tengaencuentalosmapasdedistribución(abajo)delaranahylidaeAnothecaspinosaylasalamandradelafamiliapletodóntidosAneideslugubris.Estossonejemplosdeespeciesquenaturalmenteaparecenenpoblacionesdispersas.Entalescasos,unodebeconsiderarconespecialcuidadoelconceptode"dentro"y"fuera"cuandosehabladelrangodelasespecies,tomandoencuentaalaspoblacionesseparadasquepuedenposeerperfilesdeenfermedadesdiferentesenlanaturaleza.Asimismo,enaquelloscasos,esaconsejablemantenerenaislamientoalascoloniasquederivendeporcionesdiferentesoseparadasdelrangodedistribucióngeneraldelaespecie.
Cap.4:Bioseguridad—37
El“AISLAMIENTO”reducirálossiguientesriesgosdeenfermedadesinfecciosasdeunacolección:
• Todoslosriesgosquecubrenlas“BUENASPRÁCTICAS”• GarantíasadicionalesparaasegurarquelosanimalesinvolucradosenrolesdeArca,
RescateodeSuplementaciónnoseinfectenconagentespatógenosnonativos.Losgrandesriesgospresentadosporlosagentespatógenosanfibiosnonativossondiscutidosenlasección4.3.
Cambioenelniveldebioseguridad
Losanimalesdebensermantenidosenelniveldebioseguridadapropiadoparasurol.Esaconsejablemanteneralosanimalesenelnivelmásaltodebioseguridad(“BUENASPRÁCTICAS”O“AISLAMIENTO”)necesarioparaelolosrolesactualesyfuturosdelapoblacióncautiva.
• Estoesmásimportanteparalosanimalesquesonconservadosen“AISLAMIENTO”porqueellososudescendenciaserándevueltosalanaturaleza.Siestosanimales,osudescendencia,sonmantenidosbajolas“BUENASPRÁCTICAS”,tendránunriesgomásaltodeadquirirunagentepatógenoanfibiononativoydeintroducirestepatógenoapoblacionesanfibiassilvestres.
• Sielroldelaespeciecambia(porejemplo,deArca,RescateodeSuplementaciónaConservación,InvestigaciónoEducación),sepuededisminuirniveldebioseguridad(porejemplo,de“AISLAMIENTO”a“BUENASPRÁCTICAS”),peronoseríaapropiadocambiarelroldeestosanimalesdevueltaaArca,RescateodeSuplementaciónenelfuturo.
Sianimalesquepreviamenteeranmantenidoscon“BUENASPRÁCTICAS”vanaserconsideradosparaunroldeArca,RescateodeSuplementación,elprocesodeevaluaciónderiesgodeenfermedadesserácomplicado,caroytomarámuchotiempo,también,podríanoresultarenanimalesqueseanaptosparaliberaralanaturaleza(veaelcapítulo3).4.6PRÁCTICASDEBIOSEGURIDAD Másabajo,enlatabla4.1,seentregaunresumendeprácticasespecíficasparalas“BUENASPRÁCTICAS”y“AISLAMIENTO”ydetallesdeestasprácticaspuedenserencontradosenlasseccionessubsiguientes.Ladiferenciamásgrandeentrelas“BUENASPRÁCTICAS”y“AISLAMIENTO”eselsimpleactodeaislaralosanimales.Elprocesodeaislamientoalargoplazosedescribeendetalleenlasección4.8.Lasprácticaszootécnicasespecíficasdescritasenseccionessubsiguienteslogranunoomásdelossiguientesobjetivos:
• Prevenirqueagentespatógenosanfibiosnonativosseanintroducidosanuevasubicacionesgeográficasypoblacionesanfibias("nadadebesalir").Estoprotegeapoblacionesdeanfibiossilvestresdenuevosriesgosdeenfermedadesinfecciosas.
Cap.4:Bioseguridad—38
• Prevenirqueagentespatógenosanfibiosseanintroducidosapoblacionessaludablesdeanfibioscautivos("nadadebeentrar").Estoesimportanteparalasostenibilidaddelaspoblacionescautivas,eléxitodeprogramasdecríaencautiverioyderescateyparamantenerlosnivelesdebienestar.
• Prevenirqueagentespatógenosanfibiosseantransmitidosentrediferentesanimalesdentrodeunainstalacióndeanfibiosencautiverio("Nadasemueveenelinterior").Estasprácticaszootécnicaspuedenminimizarelnúmerodeanimalesqueseveránafectadosencasodequeocurraunbrotedeenfermedadesinfecciosasdentrodeunainstalación.
Tabla4.1—Resumendeprácticaszootécnicasparalas“BUENASPRÁCTICAS”y“AISLAMIENTO”.
Práctica BuenasPrácticas
Aislamiento
Aislamientoalargoplazodelaespecieogrupodeespecies(vealasección4.8)
+
Calzadoespecializadoparacadahabitacióndeaislamientoalargoplazo(sección4.10)
+
Ropaespecializadaparacadahabitacióndeaislamientoalargoplazo(sección4.10)
+
Losanimalesenaislamientoalargoplazodebenseratendidosalcomienzodeldía(sección4.11)
+
Herramientasespecializadasparacadahabitacióndeaislamientoalargoplazo(sección4.13)
+
Calzadoyropaespecializadosparacadaedificio(sección4.10)
+ +
Sedebenlavarlasmanosousarguantesentrecadarecinto(sección4.10)
+ +
Seguirunarutinazootécnicaquereduzcaelpotencialdetransmisióndeenfermedades(sección4.11)
+ +
Limpiarydesinfectarherramientasentrerecintos
+ +
Cap.4:Bioseguridad—39
diferentes(sección4.13)Determinarnecesidadesparaeltratoespecialdeaguasresiduales(sección4.14)
+ +
Determinarlanecesidaddeeliminaciónderesiduossólidos(sección4.15)
+ +
Fuentesdeaguayalimentoslibresdeenfermedades(secciones4.16y4.17)
+ +
Automatizacióndeprácticaszootécnicassiexistelaposibilidad(sección4.18)
+ +
Períododecuarentenaparanuevosanimalesentrandoaunacolección(capítulo6)
+ +
Vigilanciadeenfermedadesynecropsiasdelosanimalesquemueranenlacolección(capítulo9)
+ +
4.7CAPACITACIÓNDELPERSONALEIMPLEMENTACIÓNDEPRÁCTICASDEBIOSEGURIDAD Unodelosmedios(portadores)másimportantesporloscualeslasenfermedadesinfecciosaspuedensertransmitidasenunainstalaciónparaanfibiossonelpersonalzootécnico,porlotanto,losmejoresmétodosparaelcontrolylaprevencióndelosproblemasdeenfermedadesinfecciosasenlosprogramasdeconservacióndeanfibiosencautiveriosonelentrenamientoadecuadodelpersonalybuenosprocedimientosoperacionalesestandarizados. Algunasdelassugerenciasquepuedenayudaralpersonalzootécnicoallevaracabolasprácticasdebioseguridadyqueminimizanlaposibilidaddeerroresson:
• EldesarrolloylaadhesiónaProcedimientosdeOperaciónEstándar(SOP,porsussiglaseninglés)escritosyfácilesdeusarqueproveanunadescripcióndelasprácticasdebioseguridad.Estosprocedimientosdeberíanhacerseamedidaparacadainstalaciónanfibia.LosSOPdeberíanseraccesiblesatodoslosmiembrosdelpersonal.LosSOPdeberíanserprácticosydesarrolladostomandoencuentalasnecesidadeszootécnicasdecadainstalaciónydelaespecieanfibiasiendoalojada.
• Sedebenrevisarlasprácticasdebioseguridadconlosnuevosmiembrosdelpersonalantesdequeempiecenatrabajarconanimales.Tambiénserecomiendaunarevisiónanualdelasprácticasdebioseguridadcontodoelpersonaldecuidadodeanimales.
Cap.4:Bioseguridad—40
• Realizarprogramasdeentrenamientoconespecialistasparacuidadoresdeanfibiospuedepromoverunentrenamientoavanzadoenmedidasdebioseguridadybuenasprácticaszootécnicasparaanfibios.Porejemplo,laAsociaciónAmericanadeZoológicossyAcuariostieneuncursomodelodeManejoyBiologíadeAnfibios,suobjetivoes"proveerunabasesólidaparalabiologíadeanfibiosyaqueéstaserelacionaalosprogramaszootécnicos,decrianza,deconservaciónydecooperación."(http://www.aza.org/prodev/Amphibians/).
• Proveaalpersonalzootécnicoconlasherramientasyelequiponecesarioparaelmanejodepoblacionesdeanfibioscautivaoennivelesdebioseguridadapropiadosparaelroldelaespeciequeestáncuidando.
• Esprobablequeseproduzcanerroresenlasprácticasdebioseguridad.Usteddebefomentarunambientelaboralenelcuallosmiembrosdelpersonalsesientancómodosreportandoestoserrorestanprontoocurran.Mientrasmástempranoseidentifiquenloserroresmássepuedehacerparaminimizarsuimpacto.
• CuandoesteformulandolosSOP,diseñeprocedimientosquereduzcanelcontactoquetieneelpersonalconlosanfibios(atravésdelaautomatización).Almismotiempo,estosprocedimientosdebenpermitiralpersonalobservarregularmenteparadetectarseñalessutilesdeenfermedadesocomportamientoanormal.Elpersonaldebeasumirquetodoslosrecintospuedenconteneranimalesconenfermedadesinfecciosasydebeseguirrutinasqueminimicenlaposibilidaddetransmisióndeenfermedades(vealasección4.11).
4.8AISLAMIENTOALARGOPLAZODEANFIBIOSDESTINADOSALA
REINTRODUCCIÓNALANATURALEZA Losanfibiosenprogramasdeconservación,cuyoobjetivoesreintroduciralosanimalescautivosoaladescendenciadeestosalanaturaleza,debenestarpermanentementeseparadosyprotegidosdeotrosanfibiosenunzoológicocosmopolitaodecoleccionesdeanfibiosenaislamientoalargoplazo.Losmejoresejemplosdeaislamientoalargoplazosonlosprogramasquehansidoestablecidosdentrodelrangodelpaísdelaespecieogrupodelaespeciequehasidomantenidadentrodelainstalaciónyquenoalbergaotrosanfibiosdefueradelrangodelpaís.
• Elaislamientoalargoplazotambiénhasidollamado"cuarentenapermanente"porelTallerdePlaneacióndeConservaciónExSitudeAnfibiosllevadoacaboporWAZAyCBSGdelaño2006(Zippelycolaboradores,2006)o"Cuarentena1"y"Cuarentena2"porlaGuíadeRecursosZootécnicosdelaAsociacióndeZoológicosyAcuariosdel2008(KastyHanna,2008).
• Enestemanual,eltérmino"aislamientoalargoplazo"esusadoparadistinguirla"cuarentenapermanente"delacuarentenausadaalmomentodeagregarnuevosanimalesaunacolección(veaelcapítulo6).
Elaislamientoalargoplazopuedeserlogradodelasiguienteforma:
Cap.4:Bioseguridad—41
• Albergandosoloaunaespecieogrupodeespecies(ungrupofaunísticoanfibioque
sedanaturalmentejuntoenelpaísdeorigen)enunedificioindependienteodentrodeunahabitaciónohabitacionesaisladasdentrodeledificio.Losdetallesparacrearinstalacionesdeaislamientoalargoplazosondiscutidosabajo.
• Mientrasmásaisladaseencuentreunaespecieogrupodeespeciesdeunacoleccióncosmopolitaanfibia,mássimpleesestablecerymantenerelaislamientoalargoplazoylasprácticasdebioseguridadefectivas(porejemplo,unedificioseparadoparaelaislamientoalargoplazoesmejorquetenerhabitacionesseparadasdentrodeledificio).
↑Separacióndepoblacionesaisladas=↓dificultadparamantenerlabioseguridad• Losanimalesenaislamientoalargoplazonuncasonalojadosenlamismahabitación
conanfibiosajenosasurangodedistribuciónnativa,porejemplo,unaranagopherdeMississippidelosEstadosUnidosnodeberíaestarenlamismahabitaciónqueunsapoaerosoldeKihansideTanzania.
• Sedebeprevenirelcontactoindirectodeanfibiosdefueradeladistribuciónnativapormediodeportadorespotencialescomoelpersonaldecuidadoanimal,recintos,sustrato,sistemasdeagua,oherramientas.Enotraspalabras,todoloquehayatenidocontactoconanfibiosajenosaladistribuciónnativanodebetenercontactoconlosanimalesenaislamientoalargoplazo.Paralograresto,esnecesarioimplementarprácticasdebioseguridadespecíficas,lascualessondiscutidasendetallealassecciones4.10,4.11y4.13másabajo.
4.9INSTALACIONESPARAELAISLAMIENTOALARGOPLAZO
Habitacionesaisladasdentrodeledificio Unmétodorentableparalograrelestándarde“AISLAMIENTO”parapoblacionescautivasanfibiasesdesarrollarhabitacionesdedicadasparaelaislamientoalargoplazodentrodeunainstalacióncosmopolitadeanfibios.Esteenfoqueesrentable,peronoesideal,estoporqueexistenmásposibilidadesdequeexistancasosdecontaminacióncruzadacuandoocurranfugasdeagua,inundaciones,osimplesviolacionesinvoluntariasdelacuarentena.
• Usarhabitacionesdedicadasincrementalaposibilidaddeerroresenlabioseguridaddelasinstalaciones.Elpersonalzootécnicodebeestarcomprometidoalconceptoyalaprácticadelaspautasde“AISLAMIENTO”paraelflujodetrabajo,ropaycalzadoyelusodeherramientasdelpersonal.
Lashabitacionesusadasparaelaislamientoalargoplazopuedenserconstruidasapartirdehabitacionesyaexistentesdentrodelainstalaciónparaanfibiosopuedenconstruirseespecialmente.ApartirdelaexperienciadelZoológicoHenryDorlyde
Cap.4:Bioseguridad—42
Omaha(Krebs,2008;verapéndice3)sehandescritodetalladamentemétodosparalaconstrucciónespecialyrelativamenteeconómica(Aproximadamente$7000USD)dehabitacionesmodularesdeaislamientoalargoplazoenespaciosdesocupadosdentrodeunzoológico.Lashabitacionesdeaislamientoalargoplazodebenserconsideradasunidadesindividualesconmodificacionesqueprevenganlaentradaosalidadeagentespatógenosanfibios.Algunasespecificacionesparareducirelriesgodetransmisióndeenfermedadesdelashabitacionesson:
• Lashabitacionesdebenserselladasparaprevenirelescapedeaguaoresiduosde
anfibiosalashabitacionesadyacentes(vealasección4.18).• Lashabitacionesdeberíanserapruebadeescapesyapruebadepestes(veala
sección4.18).• Lashabitacionesylospasilloscircundantesdeberíanserdiseñadasparacumplirlos
requisitosde“AISLAMIENTO”conrespectoaelflujodetrabajo,ropaycalzadodelostrabajadores(sección4.18).
• Siseconstruyenhabitacionesmodulares,deberíanhacerseplanesparaelmantenimientoregulardeestasparaprevenireldeteriorodelosmaterialesdeconstrucción,porejemplo,sedebenusarsellantescomobarreraparaelaguaentrelasparedesyelpiso.
• Sedebetenerenconsideraciónelcontrolyelmovimientodelairedentrodelainstalación(sección4.18).
Edificiosdeaislamientoalargoplazoseparados
Comoyafuemencionado,eldesarrolloylaconstruccióndeedificiosdeaislamientoalargoplazoseparadosreducenmáselriesgodeenfermedades.UnenfoqueexitosodesarrolladoporelCentrodeInvestigacionesdeAnfibiosdeAustraliaparacrearedificioseconómicosdeaislamientoalargoplazoinvolucraelusodecontenedoresdeembarquemodificados.Losdetallesparalaconstruccióndeestoscontenedorespuedenserencontradosenlínea(http://frogs.org.au/arc/container.php).Loscontenedoresdecargavandesdelos6alos12metrosdelongitudyestánequipadosconcalefacciónyenfriamientodeaireindependiente,sistemaseléctricosydeagua,yestándiseñadosparautilizarelespaciodecuidadoanimaldemaneraeficiente.Esposiblemodernizarloscontenedoresantesdesuinstalaciónenelsitioy,porlotanto,estospuedenserinstaladosconmenosapoyoalaconstruccióncomparadosconlaconstruccióndenuevosedificios.Estascaracterísticashacenqueloscontenedoresdecargaseanunaopcióneconómicayflexibleparamuchosprogramasanfibios.Lasunidadestambiénpuedenserconstruidasconventanasparapropósitosdeexposiciónencasodequereraumentarelapoyodelpúblico,lasoportunidadesdefinanciaciónylasoportunidadeseducacionalesparaelpúblicogeneral.
Cap.4:Bioseguridad—43
4.10HIGIENEYROPAPROTECTORADELPERSONALDEMANEJO Losprocedimientosparalahigieneylaropaprotectoradelpersonalzootécnicodelainstalaciónparaanfibiossonimportantesparaeléxitodelosprotocolosdebioseguridad.Estasecciónformularecomendacionesparalosanfibiosmantenidosbajolosestándaresde“BUENASPRÁCTICAS”oparalosanimalesen“AISLAMIENTO”.Generalmente,nosedebenfomentarlasvisitasaáreasbioseguras.Cuandoéstasseannecesarias,losvisitantesdebenseguirlasmismaspautasquelosmiembrosregularesdelpersonal.
Calzadoybañosdesinfectantesparapies
• Las“BUENASPRÁCTICAS”indicanqueelcalzadodedicadoesunrequisitoparacadaedificioquealbergueanfibioscautivos.Esimportantequeelpersonalzootécnicoolosvisitantesnoentrenalasáreasdecuidadoanimalusandocalzadoquehasidousadofueradelainstalacióndecautiverio,porejemplo,ensuscasasoalairelibre.
• En“AISLAMIENTO”,esnecesarioelcalzadodedicadoparacadahabitacióndeaislamientoalargoplazo.Lasbotasozapatosdedicadospuedenseralmacenadosdentrodelahabitaciónaislada.Elobjetivoesevitarelseguimientodematerialorgánicooagentespatógenosanfibiosdesdeunahabitacióndeaislamientoalargoplazo(quealbergueaunaespecieogrupodeespeciesdiferentes)aotra,odesdeáreasde“BUENASPRÁCTICAS”aáreasde“AISLAMIENTO”.Unaalternativaalcalzadodedicadoeselusodecubiertasplásticasdesechablesparalospies,porejemplo,lascubiertasdelamarcaShubeesTM.
• Losbañosdesinfectantesparapiessonusadosenalgunasinstalacionesparaanimalesparalimpiarelcalzadoentrelashabitacionesdelosanimales.Losbañossolosonefectivossielcalzadoestáhechodematerialfácildedesinfectar(comolasbotasdecaucho),sinoestámuycontaminadocontierrauotrosmaterialesorgánicos,ysielcalzadoestáexpuestoaldesinfectanteporeltiempodecontactorequerido.Haydisponiblesanálisisdelusodebañosdesinfectantesparapies(Morleyycolaboradores,2005;Dunowskaycolaboradores,2006)
o Losbañosparapiesrequierenunaltoniveldemantenciónparaevitarlaacumulacióndematerialesorgánicosquepuedandesactivaralosdesinfectantesyparaevitarlaevaporacióndelasolucióndesinfectante.
o Losbañosdepiessonútilescuandoestánubicadosenlaentradaysalidadelasáreasbioseguraspararemovermateriaprimaypararecordarlealpersonaldequeestánentrandoaunáreabiosegurayquedebenestarpendientesdelosprotocolosdebioseguridad.
o Algunosdelosdesinfectantesqueseutilizanenlosbañosparapiessonelhipocloritosódico(cloro),VirkonyF10.ElVirkontieneventajascuandoseutilizaenbañosparapiesporquemantienemásactividadcuandohacecontactoconmaterialesorgánicos.(veaelcapítulo5).
o Enlamayoríadelassituaciones,elusodecalzadodedicadoenlugardelosbañosparapiesespreferible,estoyaquelosdesinfectantessolopuedeneliminarciertosagentespatógenos(estodependedelagenteusadoydesu
Cap.4:Bioseguridad—44
concentración).Además,losbañosparapiespuedenpresentarunriesgoparalosanimalesenlainstalaciónyaqueexisteunaposibilidaddequelosanimales(porejemplo,prófugos)puedanentrarencontactoconmaterialresidualdesinfectanteenelpiso.Tambiénnoexistenefectosperjudicialesparaelambienteporladescargadedesinfectantessiseusacalzadodedicado.
Ropadedicada
• Paralograrelestándarde“BUENASPRÁCTICAS”serequiereropadedicadapara
cadaedificioquealbergueanfibioscautivos.Esimportantequeelpersonalzootécnicoolosvisitantesnoentrenalasáreasdecuidadoanimalusandoropaquehasidousadofueradelainstalacióndecautiverio,porejemplo,ensuscasasoalairelibre.Essuficienteelusodeuniformesespecialesparalasinstalacionesqueseanlavadosregularmente.Silosuniformessemojanosecontaminandemasiadoconmaterialorgánicodebensercambiados.
• En“AISLAMIENTO”,laropadedicadaesnecesariaparacadahabitacióndeaislamientoalargoplazo.Enlamayoríadeloscasosserásuficientetenerunabatadelaboratorioaparteoalgunaprendadeprotecciónparausarsobrelaropahabitualdelosmiembrosdelpersonal.Silaropahabitualestáhúmeda,suciaosecontaminódealgunaformaconmaterialdefueradelahabitacióndeaislamientoalargoplazo,sedebehaceruncambioderopacompletoantesdeentraralahabitación.Laalternativaeselusoderopaprotectoradesechableparacadahabitacióndeaislamientoalargoplazo,porejemplo,ropaquirúrgicaomonosparavestirdelamarcaTyvek®.
Lavadodemanosyusodeguantesprotectores
• Selesrecomiendaalosmiembrosdelpersonalzootécnicoellavadofrecuentede
manosybrazos(hastalaalturadeloscodos)conjabóndesinfectante.Lavarselasmanosylosbrazosesespecialmenteimportanteenlassiguientessituaciones:
o Antesdeentraracadahabitaciónoinstalaciónde“AISLAMIENTO”.o Cuandoestétrabajandoentrerecintosdiferentescomounprocedimiento
estándardelosprotocolos“BUENASPRÁCTICAS”y“AISLAMIENTO”.• Sedebenusarguantesdesechablescuandoseestémanipulandoanfibioso
limpiandoalgúnrecinto.o Sedebeusarunpardeguantesnuevosparacadarecinto.o Antesdemanipularalosanimalessedebenusarguantessintalcooguantes
enjuagadosminuciosamente.o Unestudioreciente(Cashinsycolaboradores,2008)sugierequelosguantes
delátexydenitrilopuedensertóxicosparaalgunosrenacuajos.Tambiénseobservóquelosguantesdevinilopuedensertóxicossinosonenjuagadosconaguaantesdeexponerlosalosanimales.Enlasobservacionesdela
Cap.4:Bioseguridad—45
toxicidadrelacionadaconelusodeguantesnosehavistounaconsistenciaysehanpublicadorecomendacionesparareferirseaesteproblema(Greerycolaboradores,2009).
o Latoxicidadrelacionadaalusodeguantesnohasidoobservadaenanimalespostmetamórficos.
o Unestudioexperimentalmuestraqueelhongoquítridodeanfibios(Batrachochytriumdendrobatidis)sobrevivepormástiempoenmanosdesnudasquehansidolavadasconetanolyagua(Mendezycolaboradores,2008).Lasimplicacionesparalatransmisióndeenfermedadesenunescenarionaturalnosonclarasyseobservóqueellavadodemanoserapreferiblealareutilizacióndeguantesdesechables.
4.11RUTINASDEMANEJO Lasrutinasymodelosdeflujosdetrabajozootécnicosusadasporelpersonalzootécnicosonimportantesparaminimizarlasposibilidadesdetransmisióndeagentespatógenosdentrodeunainstalacióndeanfibioscautivos,algunasdeestasposibilidadesson:
• Latransmisióndeagentespatógenosentreanimalesalojadosendiferentesnivelesdebioseguridad.
• Latransmisióndeagentespatógenosentrerecintosparaanfibios.• Latransmisióndeagentespatógenosentreanimalesencuarentena(veaelcapítulo
6)ylosanimalesenunacoleccióndeanfibiosestablecidaoalojadosenelniveldebioseguridadde“AISLAMIENTO”.
Losanimalesqueseencuentranbajo“AISLAMIENTO”deberíanseratendidosalprincipiodeldíaantesdecuidaralosanimalesqueseencuentranbajolas“BUENASPRÁCTICAS”.Estotambiénaplicacuandolosanimalesdestinadosa“AISLAMIENTO”sonllevadosacuarentena(veaelcapítulo6).Losanimalesbajo“AISLAMIENTO”nuncadebenseralojadosenlamismahabitacióndecuarentenaquelosanimalesajenosaladistribuciónnativadelaespecieencuestión. Laautomatizacióndealgunastareaszootécnicastalescomoalimentaciónylimpiezapuedereducireltiempocontactodirectoconlosanfibios,locualminimizaríalasposibilidadesdetransmisióndeenfermedades.Sugerenciasparalaautomatizaciónsonproporcionadasenlasección4.18. Esaltamenterecomendadaunarutinasistemáticayorganizadaparaelcuidadodiariodeunacolección.Larutinadebeserespecíficaalpuntodeque,siocurreunproblema,cadapasopuedaserreproducidoparaasíeliminarlasáreasderiesgo,ydeterminarexactamentedondeocurrióelerrorodondefueintroducidoelagentepatógeno.Porejemplo,cuandoseestéhaciendoelmantenimientodeunahabitaciónsiempresedebeempezardesdeelfondodeestaytrabajarcaminohacialapuerta,osiempretrabajarenelsentidodelasagujasdelrelojalrededordelahabitación.Depreferencia,debehaberunalistaconcisaqueindiqueladirecciónenlacualsedebe
Cap.4:Bioseguridad—46
procederconlasprácticaszootécnicasderutina,estalistadebetenerindicacionesclarasyestardisponibleparaquetodoslosmiembrosquemanejenanimalespuedanverlayentenderla.Porejemplo,laspeceraspodríanseretiquetadassecuencialmente,ylosprocedimientospodríandictarquesedebetrabajarenesteorden:
RecintoA→RecintoB→RecintoC
• Losrecintosquealberguenaanfibiosconpocasprobabilidadesdeserinfectadosconagentespatógenosdepreocupación,porejemplo,losanimalesquehanestadoencautiverioporunlargotiempoolosanimalesquehandadoresultadosnegativosparaBd(Batrachochytriumdendrobatidis)uotrasenfermedadesimportantes,deberíanestarorganizadosdeformaqueseanatendidosprimerosenunasecuenciadireccional(porejemplo,losTanquesAyD,deuntotalde15tanques).
• Losrecintosyelequipodeestos(comolailuminaciónylasunidadesdefiltración)debenestaretiquetadosparaidentificarclaramentecadaunidadenlasecuenciaderecintos.
• Sidurantelarutinadecuidadozootécnicoseencuentrananimalesmuertosoenfermos,estosdebenserremovidosinmediatamentedelrecinto.Losanimalesmuertosdebenserpresentadosparanecropsia(veaelcapítulo9).Losanimalesenfermosdebenserretiradosparaatenciónveterinaria.Comomínimo,losmiembrosdelpersonaldeberíanlavarselasmanosantesdecompletarelmantenimientodireccionalenesahabitaciónoinstalación.
• DebeincorporarestosprocedimientosalosProcedimientosOperacionalesEstandarizados(vealasección4.7)delainstalaciónyproveerentrenamientoestandarizadoparalaimplementacióndeestosporpartedelpersonalzootécnico.
4.12HIGIENEDELRECINTO Lalimpiezaregulardelosrecintosparaanfibiosesesencialentodoslosnivelesdebioseguridadparareducirlaacumulacióndematerialesorgánicosquepuedanincrementarelriesgodeenfermedadesparasitariaseinfecciosasenlaspoblacionescautivas.Algunosconceptosgeneralesdehigieneenlosrecintosquesonimportantesdesdeelpuntodevistadelabioseguridadson:
• Lafrecuenciaconlaquelosrecintosparaanfibiosdebenserlimpiadosincrementasi
labiomasa(cantidaddeanimales)ylaalimentacióndeanfibiosaumentan.• Lafrecuenciadeloscambiosdeaguadependedemuchosfactores,comola
disponibilidadyelusodesistemasdefiltración.• Laspecerasdebenestarhechasdematerialesquepermitansufácillimpiezay
desinfección.Serecomiendanlosmaterialesnoporososcomoelvidrio,lafibradevidriooelplástico.Antesdealbergaracualquieranfibio,laspecerasdebenserlimpiadas,desinfectadas,enjuagadasysecadasminuciosamente.Sedebeseguirelmismoprocedimientoalmomentodevaciaryalmacenarunapecera.Enelcapítulo
Cap.4:Bioseguridad—47
5seentreganrecomendacionesacercadequédesinfectantesusarenlaspecerasyelequipamiento.
• Elequipocomolosestantes,repisas,mostradores,einclusopisos,deberíanserconstruidosapartirdematerialesqueseanfácilesdedesinfectar,enjuagar,lavaryfregar.Esnecesariounhorarioregulardelimpiezaydesinfeccióndetodaslassuperficiesexpuestas.
• Paralosanimalesqueseencuentranen"AISLAMIENTO",esimportantequeelequipoylosrecintossoloseanlavadosenfregaderosoáreasquehayansidodesinfectadasyqueesténlibresdematerialescontaminadosdeotrosanimalesdelacolecciónanfibia.Estoincluyematerialesdeotrosanimalesalojadosenbioseguridadde"AISLAMIENTO"quesonnativosdeunaregióngeográficadiferente,porejemplo,laspecerasusadasporanimalesdePanamáen"AISLAMIENTO"nodeberíanlimpiarseenelmismofregaderoenelqueselimpianlaspecerasdeanimalesen"AISLAMIENTO"nativosdelosEstadosUnidossinanteshacerunadesinfeccióncompleta.Comoalternativa,lashabitacionesbajo"AISLAMIENTO"puedenconstruirseconfregaderosdedicadosparacadauna.
4.13EQUIPO,SUSTRATOYDECORACIÓNDELRECINTO Lasherramientas,elequipoylossustratosdelrecintousadosenunainstalaciónparaanfibiospuedenserportadoresimportantesenlaintroduccióndenuevosagentespatógenosapoblacionescautivasoenlatransmisióndeagentespatógenosentrerecintosydiferentesgruposdeanimales.Algunasdelasrecomendacionesparareducirestosriesgosson:
• Lashabitacionesen"AISLAMIENTO"debentenerunconjuntodedicadodeequipo,porejemplo,redes,fórceps,tubosdesucción,cepillosparafregar,esponjas,etc.Elequiponuncadebesersacadodelahabitaciónindividualdeaislamientoynuncadebeserusadoenungrupodiferentedeanimales.
• Tantoenelprotocolode"BUENASPRÁCTICAS"comoenelde"AISLAMIENTO",elpersonalzootécnicodebeasumirquetodoslosanfibiosylosrecintosparaanfibiossonunafuentepotencialdeagentespatógenosquepuedensertransmitidosaotrosrecintos.Estosinimportarlasaludquesepresumadelosanimales.Porejemplo,unanfibiopuedeversemuysaludable,peroaunasípuedeactuarcomoportadordelhongoquítridoanfibio.
o Lasherramientasyelequiposonlimpiadosydesinfectadosdespuésdesuusoentrediferentesrecintos(porejemplo,unaredutilizadaenelRecintoAdebeserdesinfectadaantesdeusarlaenelRecientoB),ocomoalternativa,lasredesuotrasherramientasmenorespuedenserexclusivasdecadarecinto.
o Sonnecesariosmúltiplesconjuntosdeequipo,deformaqueunconjuntopuedaserdesinfectadomientraselotroestáenuso.Lasherramientas
Cap.4:Bioseguridad—48
estánetiquetadassegúnsuspecerasohabitacionescorrespondientesparareconocerlasfácilmente.
o Pautasparaladesinfeccióndeherramientasyequiposeentreganenlasección5.5.Sedebetenercuidadodenolimpiarodesinfectarrecintosoequipodeungrupodeanimalesenelmismofregaderouáreaenelqueselimpiaelequipodeungrupodiferentedeanimalessinanteslimpiarydesinfectarelfregaderouáreadelimpieza.
• Lossustratosdelosrecintosylasdecoracionesyamuebladodelosalbergues(porejemplo,plantasyrocas)decualquiertiponodebensermovidosdesdeunrecintoaotrosinsupreviadesinfección.Algunossustratosdelosrecintoscomoelmusgosphagnumolatierradebenconsiderarsedesechablesynosertrasladadosentrerecintos.Losmaterialesporososcomolamaderaoelcorchosondifícilesdedesinfectar.Enlasección5.6y5.7seentreganpautasparaladesinfeccióndelossustratos.
• Cuandoseaposible,lasherramientas,equipoyamuebladodelosalberguesdebenestarhechosdematerialesquesepuedandesinfectarylimpiarfácilmente,porejemplo,plástico,metalovidrio.
• Elusodematerialesnaturales(porejemplo,tierra,grava,rocasyplantas)enrecintosparaanfibiospuedeserimportanteparafomentarelcomportamientonormal(inclusoelapareamiento),reducirelestrésyparaladecoraciónderecintosdeexposiciónenloszoológicos.
o Losmaterialesnaturalestienenelpotencialdesercontaminadosconagentespatógenosdeanfibios,porlotanto,lafuentedeestosmaterialesysudesinfeccióndebenserconsideradoscuidadosamenteantesdeusarlosenunrecinto.
o Cuandoseesténeligiendomaterialesnaturalesparasuusoenrecintos,debeconsiderarselaposibilidaddequehayanestadoexpuestosafaunaanfibianativaononativa,porloquesedebeconsiderarelusodedesinfectantes.
o Sedebenevitarlosmaterialesprovenientesdeáreasconproblemasdeenfermedadesanfibiasconocidas,porejemplo,plantasdeunsitiodondehayahabidounaepidemiadequitridiomicosis.Lasplantascultivadaspormedioshidropónicos(enagua)oenuninvernadero(quenotengaunacolonizaciónanfibianativa)puedenreducirelriesgodeenfermedades.Tambiénsepuedeconsiderarelusodeplantasplásticasodeseda,sobretodoparalosanimalesbajo"AISLAMIENTO".
o Sugerenciasparaladesinfecciónoesterilizacióndematerialesnaturalesseencuentranenlasección5.6
4.14ELIMINACIÓNDEAGUASRESIDUALES Laeliminacióndeaguasresidualesesunelementoimportantedelabioseguridadeneldesarrolloylagestióndeinstalacionesdecautiverio.s.Las"BUENASPRÁCTICAS"requierenqueagentespatógenosnoseanliberadosalmedioambiente.Elproblemade
Cap.4:Bioseguridad—49
bioseguridadmásimportanteenlaeliminacióndeaguasresidualeseslaposibilidaddeintroduciragentespatógenosanfibiosnonativosanuevasubicacionesgeográficasatravésdelaliberacióndeaguasresidualessintrataralmedioambiente.
• Enlasinstalacionesquealbergananfibiosajenosasudistribuciónnativa(porejemplo,anfibiosdePanamáalojadosenlosEstadosUnidos)oquellevanacaboinvestigacionesconagentespatógenosanfibios,sonnecesariasmedidasdebioseguridadparalasaguasresiduales(detallesabajo).Estoaplicaaanimalesyaseabajo"BUENASPRÁCTICAS"o"AISLAMIENTO".Noesaceptablelaliberacióndeaguasresidualesalmedioambientelocal.
• Unainstalaciónquesoloalbergaaanfibiosdesupropiadistribuciónnativa(porejemplo,anfibiosdelsurdeJapónalojadosenelsurdeJapón)usualmentenonecesitaráconsiderarmedidasdebioseguridadparaaguasresiduales.
Implementarmedidasdebioseguridadparaelaguapuedesercomplicadoycostoso,porloqueespreferiblemanteneralosanfibioscautivosdentrodelrangodedistribuciónoriginaldelaespecie.Desafortunadamente,eltemadelabioseguridaddeaguasresidualesescontroversialporquelamayoríadelainformaciónyevidencianecesariaparahacerdecisionesnoestádisponible.Essumamentenecesarioorganizarungrupodetrabajoparallevaracabounaevaluaciónderiesgosdelagestióndeaguasresiduales.Elgrupodetrabajodeberíaincluiraexpertosentratamientodeaguasresiduales(específicamenteexpertosenacuicultura),alcantarilladossanitarios,microbiologíaambiental,enfermedadesdeanfibiosydiseñoycuidadozootécnicodeinstalacionesparaanfibios.Algunosdelosfactoresquesedebentenerencuentarespectoalabioseguridaddelasaguasresidualesson:
• Lacantidaddeaguaquedebesertratada(porejemplo,unainstalaciónparalacríaencautiveriopuedealbergardiferentesmétodosdetratamientodelaguacomparadaconunainstalacióncomercialgrandequecríaaranascomoalimento).
• Lainfraestructuraparaeltratamientodeaguasresiduales(alcantarillado)paraunaregióngeográficaounpaís.
• Losrecursosdisponibles,yaseanfinancierosuotros.
Hayunagranvariedaddeopcionesparaladesinfecciónyeltratamientodeaguasresidualesdisponiblesparainstalarenunainstalaciónparaanfibiosencautiverio.Cadaopcióntienesuspropiasventajas,desventajasyrequisitos.Ningunadelasopcionesestotalmenteapruebadefallasalmomentoderemoveragentespatógenosanfibiospotenciales,ylasopcionessonespecialmentelimitadascuandosedebentratargrandescantidadesdeaguasservidas.Algunasopcionesparaeltratamientodeaguasresidualesson:
Cap.4:Bioseguridad—50
• Modernossistemasdeaguasresiduales(alcantarilladosanitario)municipales.Lossistemasmodernosdetratamientodealcantarilladosanitariosonadecuadosparalaeliminacióndeaguasresidualesdemuchaspequeñasymedianasinstalacionesparaanfibiossindesinfeccionesadicionalesyconbajoriesgoparalaspoblacionesanfibiassilvestres.Porejemplo,enmuchasáreasesaceptableliberardirectamentedesechosinfecciososlíquidosdehumanosyanimalesdomésticosalalcantarilladosanitario.Sinembargo,laopcióndelalcantarilladosanitariotienelimitacionesquedebenserconsideradas:
o Noesaceptableladescargadegrandescantidadesdedesechosoagentesinfecciososalalcantarilladosanitariosinantesserdesinfectados.Lasinstalacionesquedeberíantomarmedidasadicionalesparadesinfectarelaguaantesdesudescargaalalcantarilladosanitariosonlasinstalacionesanfibiasmuygrandes(porejemplo,granjasparasapos),instalacionesqueesténpasandoporbrotesdeenfermedadesinfecciosas,instalacionesqueimportangrandescantidadesderanasdeafueradelpaísylasinstalacionesquellevenacaboinvestigacionesrespectoalasenfermedadesinfecciosas.
o Nodebeasumirautomáticamentequelossistemasdealcantarilladossanitariossonadecuadosparalabioseguridad.Lossistemaslocalesdeberíanserevaluadosdeformaindividualparaprobarsuefectividadyfiabilidad.Porejemplo,puedequelainstalaciónseaadecuada,peroquelastuberías(alcantarillas)queconectanalsistemaseanpropensasafallasyliberenmaterialinfecciosoalmedioambientelocal.Enotroscasos,losdesagüespluvialeslocalesestánconectadosalosdesagüesdeaguasservidasy,cuandollueve,lasinstalacionesdetratamientocolapsanacausadelaguadelatormentaydebendescargarlasaguasresidualesnotratadasalmedioambiente.
• ProcesosparaladesinfecciónoesterilizacióndelasaguasresidualesExisteunaampliavariedaddeopcionesparaeltratamientodeaguasresidualesconpropósitodedesactivaragentesinfecciososantesdesuliberaciónaunalcantarilladosanitariooalmedioambiente,algunasdeestasopcionessonelusodequímicos(hipocloritosódico"cloro"),agentesfísicos(calorypresión),ozonificaciónyradiaciónultravioleta.Losdetallesylimitacionesdealgunosdeestosmétodosseentreganenlasección5.8yenelapéndice2.
o Sesugierelaautomatizacióndelosmétodosdedesinfeccióndelaguaenlasinstalaciones.Laautomatizaciónminimizaelerrorhumano,aseguraquelasconcentracionesdedesinfectantesseanlasapropiadas,queeltiempodecontactoconeldesinfectanteseaeladecuado,yhacequeeltratamientodeaguasresidualesseafácildeimplementarparaelpersonalzootécnico.Unsistemaautomatizadoparaladesinfeccióndeaguasresiduales(AWWDS,porsussiglaseningles)eninstalacionesdecríaencautiveriodeanfibios(usandohipocloritosódico)hasidodescritoenestemanual(Robertsonycolaboradores,2008).Tambiénsehandescrito(Krebs,2008)métodosmanualesparaladesinfeccióndelaguausandohipocloritosódico.
Cap.4:Bioseguridad—51
o Lossistemasyprotocolosdedesinfeccióndelaguaparasuusoenlaacuiculturacomercialagranescalasonunafuentevaliosadeinformaciónparaeldiseñoeimplementacióndesistemas.Muchosdeestossistemassebasanenlaozonificacióndelasaguasresiduales(Schuur,2003).LasinstalacionesagranescaladereproducciónparaanfibiosogranjasdeberíanseguirlaspautasdelaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE,porsussiglaseningles),paraladesinfeccióndeaguasresidualesefluenteseninstalacionesacuíferas(www.oie.int/eng/normes/fmanual/1.1.3_DISINFECTION.pdf).
o LossistemasdedesinfeccióndeaguadeberíanserdiseñadosdeformaqueminimicenlaIntroduccióndecontaminantesquímicostóxicos(comoelcloroolascloraminas)encasodequelasaguasresidualesseandescargadasdirectamentealosambienteslocales.Porejemplo,elcloropuedeneutralizarsesiestratadocontiosulfatodesodio(Browneycolaboradores,2007)osiesexpuestoalaradiaciónUV(Robertsonycolaboradores,2008).
4.15ELIMINACIÓNDERESIDUOSSÓLIDOS Elobjetivodebioseguridadmásimportantedelasinstalacionesdecautiverioanfibiorespectoalosprocedimientosparalaeliminaciónderesiduossólidoseselmismoqueparalaeliminacióndelasaguasresiduales:prevenirlaIntroduccióndeagentespatógenosanfibiosnonativosanuevasubicacionesgeográficas.Porlotanto,lasconsideracionesparalaeliminaciónderesiduossólidossonmásimportanteseninstalacionesquealberganaanfibiosajenosaelrangodelasinstalacionesoquellevanacaboinvestigacionesconagentespatógenosanfibios.Losdesechossólidosdeestasinstalacionesnodebenservertidosalmedioambientelocalsinantessertratados.Algunasopcionesparaladesinfecciónoesterilizacióndedesechossólidosantesdesueliminaciónson:
• Autoclave.• Incineración(noesamistosaconelmedioambiente).• Hidrólisisalcalina(Tejidosocadáveresanfibios).
Otrasopcionesviablesparalaeliminacióndedesechossindesinfecciónesenterrarlosprofundamenteotransferirlosaunvertederomoderno.Laclaveeslacontencióndelmaterialinfecciosoyprevenirquelosanfibiosnativosseveanexpuestosaeste.4.16FUENTESDEAGUA Lafuenteylacomposicióndelaguaenunainstalaciónparaanfibiossonfundamentalparaeléxitodecualquierprogramadeconservacióndeanfibioscautivos.Detallesdefuentes,calidadytratamientodelaguaparalasinstalacionesanfibiashansidorevisadosenunapublicaciónreciente(Browneycolaboradores,2007).AlgunosdelospuntosquedebensertratadosincluyenelpH,durezadelagua,oligoelementos,lapresencia
Cap.4:Bioseguridad—52
demetalespotencialmentetóxicos(porejemplo,elcobre)ylapresenciaaditivospotencialmentetóxicos(porejemplo,cloroocloraminasensuministrosdeaguamunicipalesocontaminantesambientalescomopesticidas).
• Esimportantequeelaguautilizadaenunainstalaciónparaanfibioscautivosseencuentrelibredeagentespatógenosanfibiosimportantes.Esteeselcasotantoparalosprogramasde"BUENASPRÁCTICAS"y"AISLAMIENTO".Siseusansuministrosmunicipalesdeaguamodernoscomofuenteinicialparaelaguadelainstalación,elriesgodeintroducirenfermedadesesmuybajo.Sisevanausarfuentesnaturalesdeagua,debeconsiderarseladesinfeccióndelaguaantesdesuusoenrecintosparaanfibios.Algunosmétodosdedesinfecciónpotencialespuedenserlaaplicacióndemétodosfísicos(porejemplo,calorypresión)ylafiltración(vealasección5.8).
4.17FUENTESDEALIMENTO Losproductosalimenticiosqueseledanalosanfibioseninstalacionesdecautiveriosonunapotencialfuenteparalaintroduccióndeagentespatógenosaunapoblación.Estoesunproblemaparalosanimalesqueseencuentranbajolas"BUENASPRÁCTICAS"oen"AISLAMIENTO"".Esdesconocidohastaquépuntolosproductosalimenticiospuedenserunafuentedeagentespatógenosanfibios.Lomásprobableesquelosproductosalimenticiosactúensolocomovectoresmecánicosparalatransmisióndeenfermedades(porejemplo,losinsectosoinvertebradosacuáticosatrapadosenlanaturalezausadoscomoalimentoestánmojadosyllevanconsigoaguaconzoosporasinfecciosasdelhongoquítridoalainstalacióncautiva)envezserinfectadosporestospatógenosyservircomofuentesdeinfecciónalargoplazoparalaspoblacionesanfibias(Rowleyycolaboradores,2007).Unafuentelimpia,confiableydeconfianzadeproductosalimenticiosesidealparatodaslasinstalacionesquealberganaanfibioscautivos.
• Cuandoseaposible,losproductosalimenticiosinvertebradosdebensercultivadosinsituenlainstalaciónparaanfibios.Losproductosalimenticiosacuáticos(porejemplo,dafniaoartemia)deberíansercriadosdesdeelhuevosiesposible.
• Silosproductosalimenticiossoncompradosaunproveedorcomercial,lainstalaciónparaanfibiosdebeasegurarsedequeseusenlasprácticasparareducirlosriesgosdeenfermedades.Idealmente,losproductosalimenticiosdeberíansercriadospuertasadentro,sinestarexpuestosaloselementos,aanfibiosdecualquiertipo(silvestresocautivos)oainsectossilvestres.Lainstalacióndelproveedordebeestarlimpiayestadebeusarmaterialesdealtacalidad.
• Existenposiblesbeneficiosalalimentaralosanfibioscautivosconproductosalimenticiosatrapadosenlanaturaleza,porejemplo,estosproductosposeenmásnutrientesosatisfacenlosrequerimientosypreferenciasdeladietadelaespecieanfibia.Estosbeneficiosdebenserconsideradosjuntoalosriesgosdeenfermedadescuandosetomendecisionesrespectoaunapoblacióncautiva.Losanimalesbajo"AISLAMIENTO"nodebenseralimentadosconproductosalimenticios
Cap.4:Bioseguridad—53
capturadosnaturalmentefueradesudistribuciónnativa(porejemplo,ranasdePanamáenunapoblaciónderesguardoenlosEstadosUnidosnodebenseralimentadasconinsectossilvestresdelosEstadosUnidos).
• Sisevaaalimentaralosanfibioscautivosconproductosalimenticioscapturadosenlanaturaleza,losproductossolodebenserrecolectadosdeáreasqueesténlibresdepesticidasuotrosquímicos.Algunospesticidaspuedencontinuarenelmedioambienteporvariosaños,porloqueesrecomendadocomoreglageneralquelosinsectosparaalimentoseanrecolectadosaporlomenos0.5kmdedistanciadecualquieráreaenlaquesehayanusadopesticidasenlosúltimos3años.
• Losproductosalimenticioscapturadosenlanaturalezanodebenserrecolectadosdeubicacionesenlasquesesabequehayunbrotedeenfermedadesinfecciosasanfibias,porejemplo,nodeberecolectarinvertebradosacuáticosdearroyosenloscualeslosanfibiosesténmuriendodequitridiomicosis.
4.18DISEÑODELAINSTALACIÓNYESPECIFICACIONESDELEDIFICIO Losanfibiostienenrequerimientosespecialesrespectoalossistemasdeaguayfiltración,controlclimáticoeiluminaciónquesonesencialesparalasaludgeneraldelosanimalesylasposibilidadesdeéxitoenelapareamientodecoloniasencautiverio.Recientementehansidopublicadosresúmenescompletosacercadeldiseñoylosestándareszootécnicosdelasinstalacionesparaanfibios;serecomiendaconsultarestosrecursosalmomentodediseñarorenovarunainstalación(Browneycolaboradores,2007;PramukyGagliardo,2008). Loselementosimportantesparalabioseguridadeneldiseñodelasinstalacionesseresaltanabajo:
• Lasinstalacionesdebenserapruebadeplagas.Lasplagassilvestresenlibertad(porejemplo,cucarachas,hormigasoroedores)puedenaparecerencualquierinstalaciónparaanfibioscautivos.Algunosdelospeligrosquecausanestasplagasson:dañodirectoomuertedelosanfibios;ladestrucciónderecintos,loquepermiteelescapedelosanfibios;ylatransmisióndeagentespatógenosdeanfibios(yaseaentreanfibiosdentrodelainstalaciónohaciaanfibiossilvestresfueradelainstalación).Algunasdelasfuncioneseneldiseñodeinstalacionesparaminimizarriesgosson:apretarysellarjuntasdepuertasyventanas,puertasquesecierrenautomáticamenteenlashabitacionesparaanfibios;pantallasenlosdrenajesdelossuelos;yagregardeflectoresalasunidadesdeaireacondicionado.Elusodemétodosfísicosparaelcontroldeplagasdentrodelasinstalaciones,porejemplo,trampasparainsectosyadhesivoparamoscas.Sedebenevitarlosmétodosquímicosparaelcontroldeplagasporelriesgodeenvenenaralosanfibiosdelainstalación.
• Lasinstalacionesdebenserapruebadeanfibios.Lasinstalacionesyrecintosdebenserdiseñadosparaprevenirelescapedeanfibioscautivosyprevenirlaentradadeanfibiossilvestresajenosalainstalación.Estoesimportantesobretodopara
Cap.4:Bioseguridad—54
anfibiosbajonormasde"AISLAMIENTO".Elriesgoquepuedecausarestasituaciónesquelosanfibiosnonativospuedenescapardelasinstalacioneseintroduciragentespatógenosanfibiosnonativosaanfibiossilvestresnativos,oquelosanfibiosnativospuedanintroducirnuevosagentespatógenosalosanfibiosnonativosdentrodelainstalación.Lasnormasde"BUENASPRÁCTICAS"dictanquelosanfibiosnativosaunasípodríanintroducirunagentepatógenoquehasidopreviamentecontroladooeliminadoenlapoblacióncautiva(porejemplo,lapoblacióncautivahasidotratadaysehaeliminadolainfeccióndelhongoquítrido,perolosanfibioslocalespodríanactuarcomounafuentedereinfecciónparalosanimalescautivos).Unejemplodehaceralainstalación"apruebadeanfibios"esagregarpantallasquecubranlosdrenajesenlashabitacionesdelosanfibios.
• Lasrutinasdecuidadozootécnicodeberíanserautomatizadas.Paraminimizarelcontactoentrecuidadoresyanimales,yreducirlaposibilidaddeerroreshumanos,serecomiendalaautomatizacióndelossistemasparadrenarrecintos,agregaraguaaestos,filtraciónyalimentaralosanimales.Laautomatizaciónesunamedidaimportantequepuedereducirelpotencialdetransmisióndeenfermedadesentrerecintos.Paralaalimentación,sepuedecolocarunembudoatravésdelacubiertadecadarecintoparapermitirelpasodelaspresasalrecintosinlanecesidaddequeloscuidadoresabranohagancontactoconlosrecintos.Elcuellodelembudodebeserlosuficientementepequeñoyestarcolocadodeformaquepermitaelescapedelosanfibios;elembudopuedetenerunatapaparaquelaspresasquevanaserdadascomoalimentonopuedanescapar.MásdetallesacercadelaautomatizacióndelasinstalacionespuedenserencontradosenelsitiowebdelCentrodeInvestigacionesdeAnfibios((/frogs.org.au/arc/features.php).
• Sistemasdedistribucióndeaire.Latransmisiónaéreadeagentespatógenosimportantesnohasidoregistradahastalafecha.AunqueelenfoquedelosesfuerzosparalabioseguridaddelasinstalacionesestáenelmovimientoylaIntroduccióndeagentespatógenosatravésdelcontactoconelpersonalzootécnico,otrosanfibios,sustratosyherramientas,elpotencialdetransmisiónaéreadepatógenosnodebesercompletamenteignorado.Eneldiseñodeinstalaciones,sonpreferibleslossistemasdedistribucióndeairequeprevenganqueelaireseaforzadoentrehabitaciones.Sedebeevitarquelashabitacionesquealberganaanimalesbajonormasde"AISLAMIENTO"compartanconductosdeaire.
• ImpermeabilidadehigieneLasinstalacionesparaanfibiossonambienteshúmedos,porlotanto,lasparedes,techosypisosdebenserimpermeables,deformaquepuedanmantenerlaintegridaddelahabitaciónoedificioyparafacilitarladesinfecciónylimpiezaregulardeaquellassuperficies.Además,lossellosayudanaprevenirlafugadedesechosanfibiosdesdelasáreasquealbergancoleccionescosmopolitasdeanimalesuotrosanfibiosdediferentesregionesgeográficashacialashabitacionesusadasparalosanimalesbajonivelesdebioseguridad"AVANZADOS".Noserecomiendaelusodetechosdecartón,yesoocelulosayaqueestosmaterialessondifícilesdedesinfectar.
• Diseñodeinstalacionesqueacomodenlosestándaresde"AISLAMIENTO".Lashabitacionesquealberganaanimalesbajolasnormasde"AISLAMIENTO"son
Cap.4:Bioseguridad—55
mejoradasdegranmaneraporcaracterísticasdediseñotalescomoantecámarasquepermitanelcambioderopaycalzadoantesdelaentradaaestas,ylainstalacióndefregaderosenlashabitacionesindividualesparaeliminarlosriesgosquesurgenconelusodefregaderoscomunales,loscualessonusadosparalimpiarherramientasymaterialesdecoleccionescosmopolitasdeanimalesodediferentesgruposdeanimalesbajonormasde"AISLAMIENTO".
4.19LITERATURACITADA
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Cap.4:Bioseguridad—56
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Capítulo5:LimpiezayDesinfección—57
Capítulo5
LIMPIEZAYDESINFECCIÓN
5.0INTRODUCCIÓN Lacapacidaddelimpiarydesinfectarminuciosamenteunagranvariedaddeequipo,recintosanimales,decoracionesyamuebladodealbergues,einclusoelagua,esesencialparalograrunbuenniveldebioseguridadycontroldeenfermedadesinfecciosasenlaspoblacionesdeanfibioscautivosysilvestres.Estecapítulotratadelimpiezaydesinfección,conunénfasisenelhongoquítridoanfibioylosranavirus,sinembargo,estosconceptospuedenaplicarseaunaampliavariedaddeagentespatógenosanfibios.Algunosdelosconceptosresaltadoseneltallerson:
• Losdesinfectantessondesactivadosporlapresenciademugreomaterialesorgánicos.Porlotanto,esesenciallalimpiezaminuciosadetodoslosobjetosantesdeladesinfección
• Elmismométododedesinfecciónodesinfectantenofuncionaraparatodoslosagentespatógenosanfibios.Esnecesariaunaseleccióncuidadosadedesinfectanteparadiferentessituaciones.
• Lasconcentracionesdedesinfectantesyeltiempodecontactoconestossonimportantesparaunadesinfecciónefectiva.
• Almomentodeelegirundesinfectantesedebenconsiderarelimpactoambientalqueestetendrá(siesposible).Loscompuestosdeamoniocuaternarioymonopersulfatodepotasio(Virkon®)sonmejoresqueelhipocloritosódico(lejía).
• Lassuperficiesymaterialesdevidrioometalsonfácilesdedesinfectarcondesinfectantesquímicos.
• Losplásticosdediferentestipos(incluyendoelsilicio)sonfácilesdedesinfectar,peropuedequeabsorbanalgunosquímicosdeldesinfectante(porejemplo,químicosaromáticos,solventes)ydeestemodologranqueelrecintoensísevuelvatóxico.Esteproblemaescasisiempresubestimado.
• Losmaterialesnaturalescomorocas,maderaoplantasdeshidratadassondifícilesdedesinfectar.Laaplicacióndecalorpuedeserlomásefectivo.
• Lasplantasvivastambiénsondifícilesdedesinfectar.Laseleccióncuidadosadelasplantas,removerlatierrayladesinfecciónquímicaofísicasuavepuedereducirlosriesgos.
• Algunosmétodosparaladesinfeccióndeaguaincluyencalor,filtración,desinfecciónquímicauozonificación.
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—58
Delosdesinfectantesdisponibles:
• Elhipocloritosódico(lejía,cloro),compuestosdeamoniocuaternarioymonopersulfatodepotasio(Virkon®)hansidoefectivosenexperimentoscontraelhongoquítridodeanfibios(Batrachochytriumdendrobatidis).Sinembargo,elhipocloritosódicodebeusarseenconcentracioneselevadas.Loscompuestosdeamoniocuaternariosonventajososporquesonefectivosenconcentracionesbajas.ElhongoquítridoesvulnerableanivelesrelativamentebajosdecaloryelBatrachochytriumdendrobatidisesvulnerablealsecadocompleto(desecación).
• Elmonopersulfatodepotasio(Virkon®),elhipocloritosódicoylaclorhexidinahansidoefectivosenexperimentoscontralosranavirus.Sinembargo,losexperimentossolohansidoexitososenmaterialeshúmedosoencultivoscelulares.Puedequeestosvirusseanalgoresistentesaladesinfecciónensuperficiessecas(losestudiossonlimitados).
• NohayestudiospublicadosacercadelaeficaciadediferentesdesinfectantesparamataralBatrachochytriumsalamandrivorans(Bsalporsussiglaseninglés).
5.1PRINCIPIOSDELIMPIEZAYDESINFECCIÓN Tenerestándaresaltosenlosprincipiosdelimpiezaydesinfecciónesvitalparaelcontroldeenfermedadesinfecciosasenlaspoblacionescautivasanfibiasyparaimplementardemaneraexitosaprácticasdebioseguridad.Eldiseñodeunprotocolodedesinfecciónapropiadorequiereelentendimientodelaspropiedadesdelosdesinfectantesylosagentespatógenosatratar,yconsideracionesprácticasdelosequipos,instalacionesoprocesosquerequierandesinfección.Asícomoesimportantecomprenderlaeficaciadelosvariadosprocesosdedesinfección,tambiénesimportanteconsiderarlaseguridaddelosprotocolosdedesinfecciónhaciaelmedioambienteylosanfibios.
Estassonalgunasdefinicionesútilesparalostérminosutilizadosenestecapítulo:
• Limpieza:Laremociónfísicadetodoslosdesechosorgánicosoinorgánicosvisiblesdeobjetos,talescomotierraomateriasfecales(KastyHanna,2008).
• Desinfección:Unprocesofísico(porejemplo,luzUV)oquímico(porejemplo,blanqueadorconcloro)parareducirelnúmeroylaviabilidaddelosmicroorganismos(porejemplo,bacterias,hongosovirus)deunobjeto,superficieomaterial.
• Esterilización:Unprocesofísicooquímicoqueremuevetodoslosmicroorganismosdelosobjetos,superficiesomateriales.
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—59
Unalimpiezaydesinfecciónexhaustivasreducenlamayoríadelosriesgosdetransferiragentespatógenosanfibios.Laesterilizacióndelosobjetosesunalaborintensivaypocoprácticaalmomentodellevaracaborutinas.Laspautasdisponiblesparalalimpiezaydesinfeccióndeinstalacionescomercialesdeacuiculturatambiénpuedenseraplicadasalasinstalacionesparaanfibios,especialmenteenlasinstalacionesdeproducciónenmasaycultivodeanfibios.ElManualdePruebasdeDiagnósticoparaAnimalesAcuáticosdelaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE)tieneunabrevedescripcióndelosmétodosdedesinfecciónenlaacuicultura:www.oie.int/eng/normes/fmanual/1.1.3_DISINFECTION.pdf
Limpieza
Elactodelimpiarensínosignificaqueunobjetoquedelibredepatógenosquepuedancausarenfermedadesanfibias,sinembargo,esextremadamenteimportantelimpiarminuciosamentelosobjetosantesdesudesinfecciónoesterilización.
• Unalimpiezacompletaremuevefísicamentemuchosolamayoríadelosagentespatógenosatrapadosenlosdesechosorgánicos.Alreducirelnúmerodepatógenosenunobjetoelprocesodedesinfeccióntienemásposibilidadesdeserexitoso.Lalimpiezatambiénpermitequelosdesinfectanteshagancontactodirectoconlassuperficiesdeunobjeto.
• Muchosdesinfectantessondesactivadosporlapresenciadematerialesorgánicos.Porlotanto,paraqueelprocesodedesinfecciónseaexitoso,losobjetosprimerodebenserlimpiadosminuciosamente.
• Elcaloroelaguacalientefacilitanlahabilidadderemovermaterialesorgánicosdelosobjetos.
• Sedeberíallevaracabounalimpiezageneraldetodoslosobjetosutilizadosenelcuidadozootécnicodelosanfibiosdeformaregular.Lalimpiezasecomplementaconelusodedetergentesqueaflojenelmaterialorgánicodelasuperficiedelosobjetosyqueayudenaromperlasbiopelículasdemicroorganismosqueseresistanaladesinfección.Elenjuagueminuciosodelosobjetospararemovereldetergenteesesencialdespuésdelalimpiezadeestos.
Desinfección
Lalimpiezaydesinfecciónposteriordeunobjetopormediodelaaplicacióndeunagentequímicoreduceelnúmeroylaviabilidaddelosagentespatógenoshastaelpuntoenqueestosyanopodríanactuarcomofuentedeinfección.Eldesinfectanteaelegirparasuusoenunainstalaciónparaanfibiosdependede:
• Laeficaciadeldesinfectanteyeltipodeagentespatógenosquedebensereliminados.Porejemplo,algunosmicroorganismostalescomoelMycobacteriumspp.oelCryptosporidiumspp.sonmuyresistentesalamayoríadelosdesinfectantescomunes.
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—60
• Elpotencialdetoxicidadhacialosanfibiosqueseencuentranexpuestosaldesinfectante.Losanfibiossonmuysensiblesalosresiduosquedejanlosdesinfectantes,porloqueserequiereunenjuagueminuciosodetodoslosdesinfectantesdespuésdesuuso.
• Laspreocupacionesacercadelaexposiciónhumanaalosdesinfectantesyladescargadeestosalmedioambiente.
• Laseguridadparausoendiferentesmateriales.Algunosdesinfectantespuedensercorrosivosparalasherramientasomaterialesusadosenlasinstalacionesparaanfibios.
• Facilidaddeusoyeliminación.• Costo.
5.2DESINFECTANTESQUÍMICOS Hayunagranvariedaddedesinfectantesquímicosdisponiblesparausoenlasinstalacionesdecautiverioanfibioyenelcampo.Cadadesinfectantetienesuspropiasventajasydesventajas.Muchosdesinfectantessondesactivadosporlapresenciadematerialesorgánicos,porloqueunalimpiezaminuciosadelassuperficiesesnecesariaantesdesuuso.Hasidosugeridoelusodeconcentracionesmáselevadasdedesinfectantesqueaquellasdeterminadascomoefectivascontraagentespatógenosanfibiosespecíficosenloslaboratorios,estoesenparteparasuperarlosproblemasasociadosalosresiduosdematerialorgánico(sobretodoensituacionesrealesdeterreno)(Webbycolaboradores,2007). Eltiempodecontactoylaconcentracióndelosdesinfectantessoncríticosparalaeficaciadeunrégimendedesinfecciónquímica.Lostiemposdecontactorecomendadosparavariosdesinfectantesvaríandependiendodelaconcentraciónusadaydelosagentespatógenosespecíficosquenecesitaneliminarse.Porejemplo,unasolucióndeun1%dehipocloritosódicoeliminaraalhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisennomásde1minutodecontacto,mientrasqueunasoluciónde0,4%dehipocloritosódicorequierealmenos10minutosdetiempodecontacto(Johnsonycolaboradores,2003).Recomendacionesyefectividadinvitrodevariosdesinfectantessonresumidasenunatablaalfinaldeestecapítulo.
Lejía(Cloro) Elcloro,máscomúnensuformahipoclorada,eselingredienteactivodelalejíausadaenelhogar.Elcloroesundesinfectantemuyefectivoparalasbacterias,hongos(incluyendoelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidis)ymuchosvirus(incluyendolosranavirus).Laspropiedadesdeldesinfectantesevenpotenciadassiseaplicaensuperficieslimpiadasminuciosamenteyconaguatibia.Lasventajasdelalejíacomodesinfectanteson:
• Estaseencuentraampliamentedisponible.• Tieneunbajocosto.
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—61
• EsefectivaenconcentracionesrelativamenteelevadascontraelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisylosranavirus(Langdon,1989;Johnsonycolaboradores,2003;Bryanycolaboradores,2009).
Lasdesventajasdelalejíacomodesinfectanteson:
• Losmaterialesorgánicosladesactivanfácilmente,porejemplo,latierra.• Escorrosivaparametales,telasysellantesdesilicona,sobretodoen
concentracioneselevadas.• Puedequelalejíaseadañinaparalosambientesacuáticos(Webby
colaboradores,2007;Schmidtycolaboradores,2009).• Elcloroesmuyirritanteparalosanfibiosyotrosorganismosacuáticos,yen
niveleselevadospuedecausartoxicosisomuerte(WrightyWhitaker,2001).Esnecesarioenjuagarminuciosamentelosobjetosdespuésdeladesinfección.Sedebeevitarexponeralosanimalesalosgasesdecloroduranteladesinfección.
• Puedenoserefectivacontralosranavirusensuperficiessecas(Langdon,1989).Notaimportante:Laconcentracióndehipocloritosódicoenlalejíadeusohogareñovaríaentrelosproductosdisponiblesenelcomercio(Entre4%y6%dehipocloritosódicoenlamayoríadelosproductos).Además,losproductosdehipocloritodecalcioydesodioconcentrados(Contienenhastaun12%dehipoclorito)estándisponiblesparasuusoenpiscinasuotroslugaresconvolúmenesaltosdeagua.Paradeterminarlacantidaddelejíaquesedebeusarparalograrlosnivelesapropiadosdedesinfección,esimportantedeterminarsilaconcentraciónrecomendadaenunapublicaciónserefierealproductodelejía,alcontenidodehipocloritosódicodelproductooelingredienteactivosdeeste(cloro).
• Lamayoríadelaspublicacionesquedescribenrecomendacionesparadesinfectaragentespatógenosanfibiosserefierenalaconcentracióndehipocloritosódico.
• Porejemplo,unaconcentracióndeun1%dehipocloritosódicohademostradoeliminaralhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisconuncontactomínimode1minuto(Johnsonycolaboradores,2003).Paracrearunasolucióndeun1%dehipocloritosódico,solosenecesitalejíadeusohogareñoconuncontenidode4%dehipocloritosódico,entoncessepuedecrearunadiluciónde1partedelejíay3partesdeagua.
• Encontraste,unasolucióndeun1%delamismalejíadeusohogareñosepuedeobtenerhaciendounadiluciónde1partedelejíay99partesdeagua,locualdacomoresultadounaconcentraciónde0.04%dehipocloritosódico,lacualesinefectivaencontradelhongoquítridoBatrachochytriumdendrobatidis.
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—62
Compuestosdeamoniocuaternario(QAC,porsussiglaseninglés) LosQACsonungrupograndededesinfectantesconpropiedadesantibacteriales,antimicóticasyantiviralescomúnmenteusadosenelmanejodeanimales.Algunosejemplosdeestossonelclorurodebenzalconioyelclorurodedidecildimetilamonio(DDAC,porsussiglaseningles).LasventajasdelosQACson:
• Sonmenosirritantesyrelativamentenotóxicosencomparaciónconelcloro.• Sonbiodegradablesynocausantantodañoalmedioambienteenbajas
concentraciones.• Nosoncorrosivosparametales,telasyotrosmaterialesutilizadosenlosrecintos
paraanfibios.• Sonefectivos,enbajasconcentraciones,contraelhongoquítridoanfibio
Batrachochytriumdendrobatidis.Estoesútilparaeltrabajodecampo,yaquepermitequepequeñosvolúmenesdereservasdesolucionesseantransportadosaubicacionesremotas(Johnsonycolaboradores,2003;Webbycolaboradores,2007).
• Sonbaratosybuenosparalalimpiezageneraldesuperficieseinstalaciones.LasdesventajasdelosQACson:
• Puedenserdesactivadosporresiduosdejabónymaterialesorgánicos,porejemplo,tierra.
• LaeficaciadelosQACcontralosranavirusnosehadeterminado(aunqueestossisonefectivoscontraotrosvirusADN,talescomolosherpervirus).
AlgunosejemplosdeproductosQACson:
• Path-X®• QAC128®• F10SúperConcentradoDesinfectante®• TriGene®• Roccal®
MonopersulfatodePotasio(Virkon®)
VirkonS®yVirkonacuático®(AntecInternational/DuPont)sondesinfectantesdeespectroamplioeficacescontramuchasbacterias,virusyhongos.LasventajasdelVirkon®son:
• EsefectivocontraelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisylosranavirus(Johnsonycolaboradores,2003;Bryanycolaboradores,2009).
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—63
• Presentamenosproblemasdetoxicidadambientaloaanfibios(Schmidtycolaboradores,2009).Aunquelaseguridaddelosanfibiosrequiereinvestigacionesadicionales(Bryanycolaboradores,2009).
• Noescorrosivoparamaterialesoirritanteparalapielhumanasiseusalaconcentraciónrecomendadadeun1%.
• Esmásefectivoquelalejíaenlapresenciadematerialesorgánicos.
Clorhexidina(Nolvasan®) Nolvasan®(FortDodgeAnimalHealth)esundesinfectantecomúnutilizadoenhospitalesveterinariosquetieneactividadantibacterial,antimicóticayantiviral.LaventajadeNolvasan®es:
• Actividadcontralosranavirus(Bryanycolaboradores,2009).LadesventajadeNolvasan®es:
• Eficaciacontraelhongoquítridoanfibiodesconocida.Senecesitanestudiosexperimentales.
Etanol
Eletanol(70%)esútilparaladesinfeccióndeequipoeinstrumentosusadosenlagestióndeanfibios.Noserecomiendasuusoenrecintosparaanimalesoenequiposgrandes.
• EsefectivocontraelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisylosranavirus(Johnsonycolaboradores,2003;Langdon,1989).Lainformaciónexperimentalrelacionadaalosranavirusestábasadaenuncontactode2horas.
Ozono
Elozonoesunfuerteoxidanteconconocidaspropiedadesantibacterialesyantivirales.Tieneunhistorialdeusoparaladesinfeccióndeaguasresidualesenlaacuiculturacomercial(Schuur,2003;yelManualdePruebasdeDiagnósticoparalosAnimalesAcuáticosdelaOIEwww.oie.int/eng/normes/fmanual/1.1.3_DISINFECTION.pdf)yprobablementetendráaplicacionesenlasinstalacionesquedebantrataraguasresidualesdeanfibios(vealasección4.13).Nohasidoprobadoespecíficamenteparamedirsuactividadcontraelhongoquítridoanfibioolosranavirus.
Otrosdesinfectantes Otrosdesinfectantesquímicoshansidodescritosparasuusocontraagentespatógenosanfibiosespecíficososonusadoscomúnmenteenlaacuiculturacomercialuotrosparámetroszootécnicos.
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—64
• Povidonayodada:Unantisépticotópicoutilizadocomúnmente-Betadine®
Contieneun10%depovidonayodada,loqueesequivalenteaun1%delyododisponible(Webbycolaboradores2007).Esteproductoespotencialmentetóxicoparaanfibiosynoserecomiendasuusogeneralizadoenelcuidadozootécnicodeanfibios.
• Elpermanganatopotásico,elclorurosódicoyelformaldehído,sonproductoscomúnmenteusadosenlaacuiculturaporsuspropiedadesantimicrobianas.Aunqueestosestánampliamentedisponiblesysonbaratos,sonpotencialmentetóxicosycorrosivos,ynoserecomiendasuusogeneralenelmanejodeanfibios.
• Desinfectantesfenólicos:Conservanmásactividadenambientescontaminadosconmaterialesorgánicos,porloquepuedenserútilesparadiferentesaplicaciones,comoparabañosdesinfectantesparapies.Puedesermuyirritanteparalapielperotieneimplicacionesambientalessignificativas.
5.3MÉTODOSDEDESINFECCIÓNNOQUÍMICOS
Calor Laaplicacióndecaloresútilparaladesinfeccióndeobjetos,materialesdelsubstratoorgánicosyagua(aguasentrantesyresiduales)eninstalacionesparaanfibios.Lascombinacionesdecalorypresión(porejemplo,desinfecciónenautoclaveuollaapresión)sonbuenasparalaesterilizacióndematerialesantesdesuusoenunainstalaciónoantesdelaeliminaciónderesiduossólidoscontaminados. Loshongosquítridosanfibiossonaltamentevulnerablesatemperaturasmoderadamenteelevadas.Porejemplo,laexposicióndecultivospurosdeBatrachochytriumdendrobatidisaunatemperaturade32oC(89.6oF)resultóenlamuertedelhongoalas96horasdeexposición.Laexposicióna47oC(116oF)resultóenlamuertedelhongoen30minutosdeexposición(Johnsonycolaboradores,2003).ElBatrachochytriumsalamandrivoranstieneunapreferenciatérmicamásbajaqueBatrachochytriumdendrobatidis.Enunentornodelaboratorio,elBatrachochytriumsalamandrivoransmuerecontemperaturasmayoresa25°C(77.0oF)(Martelycolaboradores,2013).Elevarlastemperaturasambientalesaestosnivelespuedeserútilparaeliminarestehongodematerialestalescomoplantasuotrosobjetosdifícilesdedesinfectar.Laelevacióndelatemperaturaambientaltambiénhasidosugeridacomounmétododetratamientoparaanfibiosquepuedentolerartemperaturasambientalesmáselevadas.UnestudioúnicoexaminóelefectodelcalorencultivoscelularesqueconteníanelranavirusEHNVenpeces(Langdon,1989).Laexposicióna40oC(104oF)matóalvirusalas24horas.Laexposicióna60oC(140oF)matóalvirusen15minutos.
Desecación ElhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisesvulnerablealsecadocompleto(desecación).Lamuertedelhongoocurriódespuésde3horas(Johnsonycolaboradores,2003).Sesabequeelhongopuedemantenerseviableen
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—65
aguaesterilizadadelallaveodesionizadaalomenospor3o4semanasy7semanasenaguadelago(JohnsonySpeare,2003). Brunnerycolaboradores(2007)señalaronqueladesecacióna20oCpor4díasdesactivaalranavirusATVensustratosdeestanquenaturales,perosielbarropermanecehúmedoelvirussigueactivo.Sisellevanestoshallazgosalarealidaddeanimalesencautiverio,sepuedeapreciarlaimportanciadeladesecaciónabsolutadelossustratos,mobiliarioorecintos,talvez,porperíodosde2semanasomás. NoexistenestudiopublicadosacercadelefectodeladesecaciónenelBatrachochytriumsalamandrivorans.
Luzultravioleta Laexposiciónaluzultravioletahasidoutilizadaparadesinfectarelaguadesistemasacuáticosysesabequeestaposeeactividadcontrabacteriaymuchosvirus.
• Laluzultravioletaa1000mW/m2yunalongituddeondade254nmnofueefectivacontracultivosvivosdelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisenlaboratorio(Johnsonycolaboradores,2003).Suefectoenzoosporasdenadolibreenelaguaesdesconocido.NosedebedependerdelaluzUVparaladesinfeccióndelaguacontrazoosporasBdhastaquesehayanllevadoacabolosexperimentosapropiados.
• Laluzultravioletaa2,6x104μW.sec/cm2conunafluidezde5000L/hfueefectivacontraeliridovirusBohle(Ranavirus)delasranas(Miocevicycolaboradores,1993).
5.4LIMPIEZAYDESINFECCIÓNDELOSRECINTOSPARAANIMALES Loshorariosdelimpiezadelosrecintosparaanfibiosvariarandependiendodelaespecie,elnúmerodeanimalesalojadosenelrecinto,eltipoderecinto,lostiposdesustratosutilizados,yelusodesistemasdefiltración.
• Sedebenllevaracabolimpiezaslocalizadasdiarias,removiendolashecesyalimentossinconsumiralavista,estoesefectivoparareducirlanecesidaddelimpiezascompletasfrecuentesoeldeteriorodelosrecintos.
• Unenjuagueconaguadiariodelsustrato(dondeseaaplicable)debellevarseacaboentodaslasorecintos.
• Lossustratosdesechablescomolastoallasdepapelopulpadepapeldebensercambiadosfrecuentemente(todoslosdíasoregularmente)parareducirlaacumulaciónpotencialdelosdesechosorgánicosydeciertosagentespatógenoscomolosnemátodosrabditiformes.
• Lossustratosreutilizablesquepuedanserdesinfectadosfácilmente,comolagomaespumanaturaloelAstroturf®tambiéndeberíanserlimpiadosdiariamente.Tenerconjuntosigualesdeestosobjetossimplificaraestatarea.Elconjuntosuciopuedeserdesinfectadoquímicamente,enjuagado,secadoyestarlistoparasuusoeldíasiguiente.
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—66
• Lossustratosorgánicoscomoelmusgosphangnum,laturba,lacáscaradecococomprimidaylossustratoshechosdetierradeberíaneliminarsedespuésdeusoynoserreutilizadosenotrorecinto.
• Lafrecuenciadeloscambiosdeaguadependedelahistorianaturaldelaespecieenparticularydeltipodesistemautilizado.SedebenllevaracabopruebasdeaguaparadetectarlosvaloresdepH,amoniacoynitrato,yaqueestossonparámetrosimportantesquesedebenmonitorearparamuchasespeciesacuáticas,ypuedenayudaradeterminarlanecesidaddehacercambiosparcialescompletosenelagua(Browneycolaboradores,2007;PramukyGagliardo,2008).
• Otrofactoratomarencuentaparadeterminarunhorariodelimpiezaessihainiciadolareproducción.Elacondicionamientodealgunasespeciespuederequerirunprocesodeestivación.Algunasespeciessonmenosaptasparaelapareamientosisesienteninquietas.Estosyotrosrequerimientosespecíficosdelasespeciesdebenserconsideradoseneltipoyfrecuenciadelmantenimientodeunacolecciónanfibia.
Ladesinfeccióndelosrecintosparaanimalessellevaacabo:
• Cuandosellevenacaboloscambiosperiódicosdesustratos.• Comopartedeunenfoqueparacontrolarelbrotedeunaenfermedadinfecciosa
enunapoblacióncautiva.Porejemplo,sihayunbrotedequitridiomicosis,esimportanteeliminaralhongoquítridodelosrecintosytambiéntrataralosanimalesenfermos.
• Antesdequerecintospreviamenteutilizadosseanreutilizadosporanimalesdiferentes.
Consultelatabladelasección5.10paramásdetallesacercadelusodedesinfectantesespecíficos,concentracionesrecomendadasytiemposdecontacto.Lassuperficiesdelosrecintossonminuciosamenteenjuagadasparaeliminarlosrestosdedesinfectantesynoexponeralosanfibiosalosquímicosdelosdesinfectantes.5.5DESINFECCIÓNDEEQUIPOYHERRAMIENTASLasherramientasyelequiposonlimpiadosydesinfectadosdespuésdesuusoentrediferentesrecintos(porejemplo,unaredutilizadaenelRecintoAdebeserdesinfectadaantesdeusarlaenelRecientoB).Consultelatabladelasección5.10paramásdetallesacercadelusodedesinfectantesespecíficos,concentracionesrecomendadasytiemposdecontacto.
• Tenervariosjuegosdeequipoesútilparalaeficaciadelflujodetrabajo(porejemplo,puedeusarunjuegomientraselotroestáenuso).
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—67
• Paralascoleccionesquellevanbastantetiempoestablecidasyquenotienenproblemasdeenfermedadesinfecciosasencurso,puedebastarconlavarminuciosamentelosinstrumentosoherramientasentrerecintosdiferentes.Sinembargo,existeelriesgodetransmitiragentespatógenosdesconocidosentrediferentesrecintos.
• Lashabitacionesdeaislamientoalargoplazoparalosanimalesbajoelniveldebioseguridadde"AISLAMIENTO"debentenerconjuntosdedicadosdeequipo(porejemplo,redes,fórceps,tubosdesucción,cepillosparafregar,esponjas,etc.).Elequiponuncadebesersacadodelahabitaciónindividualdeaislamientoynuncadebeserusadoenungrupodiferentedeanimales.Sielequipoorecintosdelashabitacionesdebioseguridadde"AISLAMIENTO"debenserlimpiadosydesinfectadosenunlugarofregaderoquetambiénesusadoconelmismopropósitoparaanimalesenunniveldebioseguridaddiferente(porejemplo,bioseguridadde"BUENASPRÁCTICAS"),ellugarofregaderoprimerodebeserminuciosamentedesinfectado(veaelcapítulo4).
Antesdeladesinfecciónesesencialunalimpiezacompletapararemoverlamateriaorgánicadelequipoylasherramientas.Lassuperficiesdelosrecintosdebenserminuciosamenteenjuagadasparaeliminarlosrestosdedesinfectantesynoexponeralosanfibiosalosquímicosdelosdesinfectantes.5.6DESINFECCIÓNYESTERILIZACIÓNDESUSTRATOSYAMUEBLADODERECINTOS
Existeunagranvariedaddesustratosyamuebladopararecintosqueseutilizanenlosrecintosparaanfibioscautivos,ycadaunorequierediferentesmétodosparadesinfectarse.Comoseseñalóanteriormente,unalimpiezacompletayremoverelmaterialorgánicoesnecesarioparaunadesinfecciónefectiva.
Sustratosyamuebladosderecintoshechosdeplástico,vidrioometal: Estosmaterialessonfácilesdelimpiarydesinfectarsiseusanmétodosquímicos.Consultelatabladelasección5.10paramásdetallesacercadelusodedesinfectantesespecíficos,concentracionesrecomendadasytiemposdecontacto.Sustratoshechosdematerialesorgánicosonaturales: Losmaterialesorgánicosonaturalestalescomorocas,madera,omaterialesdeplantasdeshidratadasomuertas(porejemplo,musgosphangnumocortezadecoco)odeplantasvivas,frecuentementesoncomponentesesencialesdelosrecintosparaanfibios,perosondifícilesdedesinfectaradecuadamente.Pautasparaladesinfeccióndeplantasvivassoncubiertosenlasección5.7.
• Lossustratosorgánicoscomoelmusgosphangnum,turba,cáscaradecococomprimida,tierra,ylossustratosdecerámicaypiedracomolagravilla,piedrasderiachuelo,arenayagregadosligerosdearcillaexpandida(LECA,porsussiglas
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—68
eninglés)puedenserdesinfectadosoesterilizadosusandountratamientodecalorantesdesuusoenunrecinto.Puedeencontrarunarevisióndeestetemaenelsiguientedocumentoweb:http://www.colostate.edu/Dept/CoopExt/4dmg/Soil/sterile.htm
Delmismodocumentosehanreimpreso2métodosefectivosparalaesterilizaciónporcalorusandohornosmicroondas:
1.Llenecontenedoresdeplásticolimpiosde1litroaproximadamentecontierramuyhúmeda,perlitaouncaldodecultivodeesquejes.Reviselosbordesdeloscontenedoresparaverificarquenohayaaluminiodeningúntipo,yaquealgunoscontenedores,comoporejemplolosdedeyogurt,vienenconunsellodealuminio.Paraesterilizartierrausecontenedoresdeplásticolimpiosconlastapaspuestas.Debeusarunasondadetemperaturadentrodeunhornomicroondasdetipo"carrusel",debeponerlatemperaturadelhornoa200°Fymantenerlaconelprogramadigitaldelhornopor20minutos.Hagaunagujeroatravésdelastapasdeplásticoconunclavoparaqueseventileelvapor.Lasondadetemperaturavametidaamediasenlatierraporelagujeroenunodeloscontenedores.Enunmicroondasgrandesepuedenesterilizarhasta7contenedoresalmismotiempo,locualhacequeestemétodoseamuyeficienteparaesterilizarlatierraporcalor.Dejequeelcontenedorseenfríeytapeelagujeroparamantenerloestérilhastasuuso.
2.Pongaaproximadamente2libras(1kgaprox.)detierrahúmedaenunabolsadepolipropileno.Dejelapartesuperiorabiertaycolóquelaenelcentrodeunhornomicroondas.Dejepor2minutosymedioatodapotenciade650wattsaproximadamente.Después,cierrelabolsaypermitaquelatierraseenfriéantesderemoverla.
• Lasramas,lamaderayloscorchosdeárbolesdemaderadurasonmaterialesporososdifícilesdedesinfectar.Paraminimizarelriesgodeenfermedadesdeestosmaterialesdebe:
o Considerarlafuentedelosmaterialesantesdeincorporarlosalosrecintosparaanfibios.Evitarrecolectarmaterialesdeáreasqueseencuentranexpuestasaanfibiosnativosoáreasdelasquesesabequeestánpasandoporunbrotedeenfermedadesanfibias.
o Laaplicaciónlevedecaloresútilparaeliminaralhongoquítridodeanfibios(vealasección5.3).Paraobjetosmáspequeños,puedenserútileselautoclaveolaesterilizaciónporcalorenmicroondasparasustratosquesedescribieronmásarriba.
o Laveenaguatibiaocalientepararemovercuantatierraseaposible.Eviteusardetergentesojabonesenmaterialesporosos.
o Puedeconsiderarusarunasolucióndelejíadiluida(de0.4%dehipocloritosódico)paradesinfectardespuésdellavado.Losobjetosdebenserenjuagadosminuciosamentedespuésdeladesinfeccióny
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—69
debensecarseporvariosdíasantesdesuusoparaasegurarsedequelosanfibiosnoesténexpuestosaresiduosdecloro.
• Enalgunoscasos,noesterilizarlossustratospuedepresentarventajas.Porejemplo,lahojarascapuedeserunafuentedepresasmicroscópicasesencialesparaeléxitodelmanejodeunaespecieencautiverio.Elriesgodeenfermedadesdebeserconsideradocasoporcaso.
5.7DESINFECCIÓNDEPLANTASVIVAS Lasplantasvivaspuedenseruncomponentemuyimportantedelosrecintosparaanfibioscautivos.Comosedescribióarribaparaotrossustratosymobiliariopararecintos,sedebetenerconsideracióncuidadosadelorigendelasplantasvivasparareducirlosriesgosdeenfermedades.Laseleccióndeplantasdesdeelpuntodevistadelabioseguridaddelasinstalacionesparaanfibios(sobretodoparaanfibiosbajoelniveldebioseguridad"AISLAMIENTO")esdiscutidaenlasección4.13.Algunasdelasestrategiasparaladesinfecciónylareducciónderiesgodeenfermedadesson:
• Lasplantasdebenserremovidasdesusmacetas.Enjuaguelasraícesconaguafrescalimpiapararemoverlatierra.Enjuaguelasplantaspararemoversuciedadocontaminantesdelasuperficiedelostallosylashojas.Lasplantaspuedensertransferidasanuevoscontenedorescontierraestéril.Muchasplantaspuedenserarraigadasycultivadaspormedioshidropónicos(enagua),locualesunmétodopreferiblesisepuedeaplicar.
• Silapreocupaciónprincipaleselhongoquítridoanfibio,laaplicacióndeunacantidaddecalorquenosealetalparalasplantaspuedeserutilizadaparaunadesinfecciónselectiva(vervealasección5.3arriba).
• Enjuaguelasplantasenunasolucióndelejíadiluida(0,4%dehipocloritosódico),mojándolaspornomásde10a15minutos.Diferentesplantasreaccionarándediferentesformasyalgunasnosobreviviráneltratamiento.Porejemplo,lasaráceasrobustascomoelpothos(Epipremnumspp.)yPhilodendroncordatumtendránmejoresresultadosquelasbegonias,helechosyotrasplantascontallosuhojasdelicados.
• Cuandoseaposible,consigasusplantasconcultivadoreslocalesparaminimizarelriesgodeintroduciragentespatógenosnonativos(porejemplo,unainstalaciónenCostaRicadeberíausarplantasdeCostaRica,ynoplantasimportadasdelosEstadosUnidos).Uninvernaderodedicadoounainstalaciónacuáticaohidropónicaparacultivarplantasquenocontengaanfibioscriadosenlibertadesunabuenaformadereducirlosriesgosinvolucradosalusodeplantasvivas.
• Serecomiendaelusodeplantasplásticasodesedacuandoseaposible,sobretodoparalassituacionesdebioseguridadde"AISLAMIENTO".Estaspuedenserfácilmentelimpiadasydesinfectadascontratamientosquímicosodecalor.
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—70
5.8DESINFECCIÓNYESTERILIZACIÓNDELAGUA Ladesinfecciónyesterilizacióndelaguapuedesernecesariaparaasegurarsedequeelaguaentrantedeunainstalaciónestélibredeagentespatógenosanfibios,oparaasegurarsedequelasaguasresidualesquesalendeunainstalaciónnocontenganpatógenosquepuedanpresentarunriesgoparalosanfibiosnativos.Estostemassediscutenenlassecciones4.14y4.16.
• Sifueranecesario,eltratamientodeaguasresidualesdeunainstalaciónpara
anfibiospuedeserlogradopormediodelaaplicacióndecalor,ozonoocloro(Schuur;2003;Robertsonycolaboradores,2008;Krebs,2008).PautasparalasinstalacionesacuícolassonproporcionadasporlaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE)(www.oie.int/eng/normes/fmanual/1.1.3_DISINFECTION.pdf).
• Paraladesinfeccióndelaguapormediodecalor,(yaseaparaaguasresidualesquesalendelainstalaciónoparaaguasentrantes)lastemperaturasrelativamentebajasde71°C(160°F)por15o20minutossonefectivascontraelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisyelranavirusEHNVenentornosdelaboratorio.EstastemperaturastambiénpuedenserefectivasparalosBatrachochytriumsalamandrivorans,dadasubajatoleranciatérmica,sinembargo,estonohasidoprobado.Estastemperaturaspuedennoserefectivasparalasesporasbacterianasoparatodoslosvirus.Sisedeseaesterilizaragua,senecesitantemperaturasmásaltasquesobrepasenelpuntodeebulliciónde100°C(212°F)..Calentarelaguabajopresión(desinfecciónenautoclaveousodeollaapresión)incrementalaefectividaddeladesinfección.
• Filtrarelaguaconcartuchosdefiltraciónde1micrón(1μm),loscualessonrelativamentebaratosyestándisponiblesenferreterías,esunodelosmétodosquepuedenservirpararemoverlaszoosporasdelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidis.LaszoosporasmóvilesdeBatrachochytriumsalamandrivoransvaríande4a5.5μm(Martelycolaboradores,2013),porlotanto,filtrarelaguaatravésdecartuchosdefiltraciónde1micrón(1μm)eseficientepararemoverlaszoosporasdeBatrachochytriumsalamandrivorans,esto,sinembargo,nohasidoprobado.Lafiltracióndeaguanoesefectivapararemovervirus.
• Laluzultravioletapuedeserefectivapararemoverlosranavirusdelagua,perosueficaciacontraelhongoquítridodeanfibiosBatrachochytriumdendrobatidisescuestionable(vealasección5.3).
5.9DESINFECCIÓNYBIOSEGURIDADENELCAMPO Lapreocupaciónencuantoalaposibilidaddemoveragentespatógenosanfibiosanuevoslugares,comoresultadodeinvestigacionesdecampollevadasacaboenanfibiossilvestres,hallevadoalacreacióndeunacantidaddeprotocolosparareduciresteriesgo:
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—71
• Páginawebdeenfermedadesdeanfibios:www.jcu.edu.au/school/phtm/PHTM/frogs/field-hygiene.pdf
• AgenciadeproteccióndelmedioambientedelGobiernodeQueensland:www.epa.qld.gov.au/register/p02905aa.pdf
• ElCentroparaControldeEnfermedadesdeCalifornia:www.ccadc.us/docs/DeconForProfessionals.pdf
• GuíadeRecursosparaelManejodeAnfibiosdelaAsociacióndeZoológicosyAcuarios(capítulo2,porKastyHanna):www.aza.org/uploadedFiles/Conservation/Commitments_and_Impacts/Amphibian_Conservation/Amphibian_Resources/AmphibianHusbandryResourceGuide.pdf
• http://www.arguk.org/info-advice/advice-notes/324-advice-note-4-amphibian-disease-precautions-a-guide-for-uk-fieldworkers-pdf-2/file
Existenvariacionesyalgunasvecescontradiccionesentrediferentesprotocolos,sinembargo,losprincipiosbásicosdebioseguridadparabiólogostrabajandoenpoblacionesdeanfibiossilvestressonsimilaresentodoslosprotocolosquehansidorevisados.Recientementesehanvueltodisponiblespublicacionesrevisadasporexpertosqueincluyencalculadorasderiesgoparaayudaralosbiólogosenlatomadedecisionesdebioseguridad(St.Hilaireycolaboradores,2009;Phillottycolaboradores,2010).Unadeestascalculadorasderiesgoseencuentradisponibleenlínea:www.cefas.co.uk/4449.aspxUnresumendeprácticasdecamporecomendadasincluye:Definicióndelsitiodecampo: Laprimeraprecauciónparalapropagacióndeenfermedadesentrepoblacionesanfibiasesdefinircuidadosamenteelolossitiosdecampo.Losinvestigadoresdebenestablecerlímiteshechosporellosonaturalesparadefinirlossitios.Cuandoseaposible,sedebenhacerplanesconanticipaciónparatrabajaren1solositioporsalida,otenerdiferentesgrupostrabajandoencadasitioparaevitarlacontaminacióncruzada(ylatransmisióndeenfermedades)entresitios.Higieneybioseguridaddelequipoinsitu: Elusodeequipodesechablequepuedaserdescartadodespuésdesuusoenunsitiooconunsoloanfibioreduceelriesgodepropagarenfermedades.Todoelequiporeutilizable,incluyendoelcalzado,debeserdesinfectadoentresitiosoestardedicadoaunsolositio(porejemplo,comprarunpardebotasdehuleparasitioyusarlassoloensusrespectivossitios).Consultelatabladelasección5.10paramásdetallesacercadelusodedesinfectantesespecíficos,concentracionesrecomendadasytiemposdecontacto.
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—72
• Elcalzadoyotroequipamientoreutilizabledeberíaestarhechodematerialesqueseanfácilesdedesinfectar(porejemplo,lasbotasdehulesonmejoresquelasbotasparacaminardecuero).
• Unalimpiezacompletadelequipoesesencialpararemoverlatierrayelmaterialorgánicoantesdeladesinfecciónenelcampo.Comoseseñalóenotrassecciones,elmaterialorgánicodesactivaelefectodemuchosdesinfectantes.Loscepillosparafregaryotrosimplementospararemovertierraysuciedaddebenserpartedelequipodecampo.Silassolucionesdedesinfectantessoncontaminadasconmaterialorgánicootierraestasdeberíansercambiadas.
• Loscompuestosdeamoniocuaternario(vealasección5.2)hansidorecomendadosparasituacionesrealesdeterrenoporquesonconcentradasy,porlotanto,fácilesdetransportaraterreno(Johnsonycolaboradores,2003;Webbycolaboradores,2007).
• Siladesinfecciónsellevaacaboenelsitio,sedebetenerencuentalatoxicidaddelosquímicoshaciaelmedioambiente.LoscompuestosdeamoniocuaternarioyVirkon®(vealasección5.2)sonopcionesmásamistosasconelmedioambientecomparadasconelcloro(Johnsonycolaboradores,2003;Webbycolaboradores,2007;Schmidtycolaboradores,2009).Silapreocupaciónprincipalsonlosranavirus,elVirkon®puedepresentarmásventajasqueloscompuestosdeamoniocuaternario(Bryanycolaboradores,2009).Lalejíaenpolvoesotraopciónqueesfácildetransportar.
• Losvehículostienenmenosposibilidadesdeserportadoresenlatransmisióndeenfermedadesqueelcalzadoyelequipodecampo,peroaunasídeberíanserdesinfectados,sobretodosiestosentraronocruzaronaunsitioquesesabeestácontaminado.Lasruedasyneumáticosdebenlimpiarsepararemovertodalatierraymaterialorgánicoydebenserdesinfectadasantesdedejarelsitio,usandoelmismodesinfectantequeseusóparadesinfectarelcalzado.Siempredeberecordardesinfectarelcalzadoantesdeentraraunvehículoparaprevenirqueagentespatógenosseantransferidosalpisoolospedales.
Manipulaciónyrecoleccióndelasmuestrasdeanfibios: Cuandoseestétratandoconanfibiosenelcampo,inclusodentrodelmismositio,sedebentomarprecaucionesparaminimizarelriesgodetransmitiragentespatógenosentreanimalesindividuales.
• Losguantesdesechablessintalcosonlamejoropciónalmomentodemanejaranfibios.Losguantescontalcodebenserenjuagadospararemovereltalco.Sedebeusarunpardeguantesnuevoparacadaanimal.Sinohayguantesdisponibles,espreferibleusarsusmanosdesnudasylavarlasdespuésdemanejaranimalesdiferentes(Mendezycolaboradores,2008).
• Elriesgodepropagacióndeenfermedadesmásgrandequepuedeocurriralmanejaranfibiosocurrecuandolosanimalessoncolocadosenunmismo
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—73
contenedorocuandoloscontenedoressonreutilizadossinantesserdesinfectados.Noreutilicelasbolsasderecolecciónyutiliceunanuevaparacadaanimal.
• Siempretratedemanejarlomenosposiblealosanimales.Losprocedimientosrápidos,inclusosisonpotencialmentepeligrosos,puedencausarmenosestrésquelosprocedimientosmáslargos.
• Losanimalessolodebenserliberadosenelsitiodecapturaycualquieranfibioqueseencuentreenfermoomuertodebeserpreservadoenunasoluciónde10%deformalinatamponadaydebenserpresentadosparaundiagnósticodeenfermedades(veaelcapítulo9).
• Losinstrumentosutilizadosparalarecoleccióndemuestrasdebenserdesinfectadosentrecadausoencadaanimal.Paralosinstrumentosquirúrgicos(porejemplo,tijeras)yelequipodepesaje,unasoluciónde70%deetanolactúadeformarápidaencontradelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidis(Johnsonycolaboradores,2003).Nosesabesiel70%deetanolactúadeformarápidaenBatrachochytriumsalamandrivorans.
• Aunqueesmencionadoenalgunosprotocolosdemanejoanfibio,noserecomiendaelusodeloscompuestosabasedeyodoparaladesinfeccióndelapielantesdeprocedimientostalescomoelcortedededosolaimplantacióndemicrochips,estoporlaspreocupacionesrespectoasutoxicidad.Algunossubstitutospotencialesson0.75%declorhexidinao2mg/Ldeclorurodebenzalconio(Wright,2001).
5.10TABLADEDESINFECTANTES Esimportanterecordarquelasconcentracionesdedesinfectantesylostiemposdecontactoestablecidosenlaspruebasllevadasacaboinvitropuedennoserefectivasensituacionesprácticas,dadoquelamateriaorgánicaesperjudicialparalaeficaciadeunavariedaddedesinfectantes(Johnson,2003;Webbycolaboradores,2007).Lasrecomendacionesparaladesinfecciónencampogeneralmentesonadaptadasdelosestudiosinvitro,incrementandoarbitrariamentelasconcentracionesdelosdesinfectantesoeltiempodecontactomásalládelosnivelesinvitro.Porejemplo,Webbycolaboradores(2007)recomiendanusar2veceselmínimodelasconcentracionesinvitroparaladesinfeccióndecampo.
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—74
EstrategiasdedesinfecciónapropiadasparaeliminaralhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidisylosranavirus:Todaslasconcentracionesytiemposdecontactosoninvitro.Informaciónderivadade(Johnsonycolaboradores,(2003),Webbycolaboradores(2007),Langdon(1989),Milosevicycolaboradores,(1993),Bryanycolaboradores,(2009)yPhillottycolaboradores,(2010).TablaadaptadadeKastyHanna(2008).
Aplicación Desinfectante Concentración Tiempodecontacto
Agentepatógenoobjetivo
Desinfeccióndeequipoquirúrgicoyotrosinstrumentos(porejemplo,básculas,pinzas)
Clorurodebenzalconio 1mg/mL 1min. Batrachochytriumdendrobatidis
Etanol 70% 1min. Batrachochytriumdendrobatidis
Etanol 70% 2hrs. Ranavirus Virkon® ® 1min. Batrachochytrium
dendrobatidisRanavirus
Clorhexidina 0.75–2% 1min. RanavirusDesinfeccióndeequipos,recintos,calzadoyvehículos
Hipocloritosódico(lejía)
1%dehipocloritosódico
1min. Batrachochytriumdendrobatidis
Hipocloritosódico(lejía)
0.4%dehipocloritosódico
10min.(mínimo)
Batrachochytriumdendrobatidis
Hipocloritosódico(lejía)
3%dehipocloritosódico
1min.(superficieshúmedas)
Ranavirus
Soluciónconcentradade8–12%declorurodedidecildimetilamonio(DDAC)
Diluciónde1en1000
0.5min. Batrachochytriumdendrobatidis
Trigene® Diluciónde1en5000
1min. Batrachochytriumdendrobatidis
F10® Diluciónde1en1500
1min. Batrachochytriumdendrobatidis
Virkon® 1%(10mg/mL) 1min. Ranavirus Clorhexidina 0.75–2% 1min. Ranavirus Secadocompleto
(desecación) >3hrs. Batrachochytrium
dendrobatidis Calor 60oC 15min. Batrachochytrium
dendrobatidis Calor 37oC(sección5.3) 4hrs. Batrachochytrium
dendrobatidis EsterilizacióndeluzUV (Vealasección5.3) Desinfectartelas(porejemplo,bolsas,ropas)
Lavadoencaliente 60oComásalto 30min. BatrachochytriumdendrobatidisRanavirus
Capítulo5:LimpiezayDesinfección—75
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Cap.6:Cuarentena—78
CAPÍTULO6
CUARENTENA6.0INTRODUCCIÓN Lacuarentenadenuevos(entrantes)animalesantesdesuantesdesuintroducciónaunacoleccióndeanfibiosestablecida(porejemplo,animalesenzoológicosocoloniasderesguardoparaanfibios)esunaprácticaestándarenlasinstalacionesparaanimalesbienadministradas.Elpropósitobásicodeunprogramadecuarentenaesprevenirlatransmisióndeagentespatógenosimportantespresentesenlosanimalesentranteshacialosanimalesdelacolecciónestablecida,loscualesseencuentranlibresdepatógenos.Elprocesodecuarentenainvolucra:
• Manteneralosanimalesnuevosaisladosdelacolecciónanimalestablecida.• Adaptaralosnuevosanimalesasunuevasituaciónyprácticasdemanejo.• Evaluaramenazassanitariaspresentestantoenlosnuevosanimalescomoenlos
animalesdelacolecciónestablecida.• Mitigaroresolverlasamenazassanitariasidentificadasenlosnuevosanimales.
Estecapítuloseenfocaenlacuarentenaparalosnuevosanimalesqueentrena
coleccionesanfibiasestablecidas.Existeunconsiderablesolapamientoentrelosprocedimientosylafilosofíadelprocesodeaislamientoalargoplazoutilizadoparaanimalescautivososudescendenciaquevayanaserliberadosalanaturaleza(veaelcapítulo4).Algunasreferenciasgeneralesparaeldesarrollodeprogramasdecuarentenaanfibiason:WrightandWhitaker,2001;Lynch,2001;Ferrell,2008.6.1OBJETIVOSYDESARROLLODELOSPROGRAMASDECUARENTENA Cadainstituciónoinstalaciónqueadministreaanfibiosencautiveriodeberíacrearyseguirprotocolosdecuarentenaparaanfibios.Losprotocolosdecuarentenadebensercreadosypersonalizadosparacadainstituciónsegúnlostiposdeespeciesalojadasenlainstalación;losrecursosdisponiblesparalainstitución;lasnecesidadesyrequerimientosúnicosdelosprogramasderecuperaciónparaespeciesindividualesogruposdeespecies;oenrespuestaacambiosenlasevaluacionesderiesgodeenfermedades.
Cuandoseestéelaborandounprotocolodecuarentena,losobjetivosmásimportantesson:
• Reducirelriesgodequelosanfibiosnuevosdelacoleccióndeanimales
introduzcanenfermedadesinfecciosas,paraasíprotegerlasaluddelacolecciónestablecidadeanimales.
Cap.6:Cuarentena—79
• Seguirpautasparaelaislamientoalargoplazodelosanimalesqueseránreintroducidosalanaturaleza(vealoscapítulos4).
• Aclimataradecuadamentealosanimalescapturadosenlibertadqueseencuentranencuarentenaalasprácticaszootécnicasparaanimalescautivos(porejemplo,dieta,propiedadesdelagualocal,entornosocial,diseñodelrecinto,rutinasconductualesdemanejoyenriquecimiento).
Algunosobjetivosadicionalesquepuedenserlogradosporunprogramadecuarentenabiendiseñadoson:
• Documentacióndelestatusdesaludgeneral,enfermedadesinfecciosasy
parásitos(incluyendoorganismoscomensales)delosnuevosanimalescuandoentrenacuarentena.Estadocumentaciónentregainformaciónimportanteparalagestióndelaspoblacionesdeanfibiossilvestresocautivos.
• Llevaracabounaevaluacióndelosriesgosdeenfermedadesparadeterminarsilosnuevosanimalessonaptosparasurolfinal(porejemplo,paraexhibición,investigación,crianzaenunacoloniaderesguardooreintroducciónalanaturaleza).
• Daoportunidadparalaidentificaciónúnicadeanimalesindividualmente.Silaidentificacióndeanimalesindividualmentenoespráctica,debedesarrollarparagestionaraunacoloniadeformaqueestamantengalosobjetivosdelprograma(porejemplo,unacoloniaderesguardonecesitasergestionadaparaconservarymantenerladiversidadgenética).LosmétodosparamarcarindividualmentealosanimalessonrevisadosenelApéndice1.
• Recolectarvaloresdereferencianormalesdepatologíasclínicas(porejemplo,hematologíaybioquímicaclínica)quepuedanserútilesparaelmanejomédico.Estainformaciónesinexistenteparalamayoríadelasespeciesanfibias.
Algunosrecursoseinformaciónimportantequepuedenserrequeridosparadesarrollarunprotocolodecuarentenason:
• Definirelroldelosnuevosanfibiosqueentranalacolección(porejemplo,exposición,investigación,ocoloniaderesguardo).
• Conocerlasprácticasinstitucionalesexistentesparadetectarycontrolarenfermedadesinfecciosasenlacolecciónanfibiaestablecida.Estainformacióndebeestardisponibleparatodaslasinstitucionesqueformenpartedeproyectosmulti-institucionalesderecuperaciónanfibia.
• ¿Estádisponibleunveterinarioqueseapartedelpersonalodeconsultoríaparaguiarlaevaluaciónmédicadelosanimalesentrantesylosanimalesdelacolecciónestablecida?
• ¿Seencuentradisponibleelapoyodeunlaboratoriodediagnósticoparaexámenesmédicos?Dadoquelanecropsiaehistopatologíadelosanimalesque
Cap.6:Cuarentena—80
mueransonparteimportantedelaevaluaciónderiesgosdeenfermedades,debeconsiderarladisponibilidaddeunpatólogoveterinariodeconsultoría.
• Conocimientodelasleyesypolíticasnacionaleseinternacionalespertenecientesalasespeciesalojadasenlainstalación(porejemplo,CITES)oqueregulenenfermedadesinfecciosasenelcontextodeimportación,exportaciónyotrosmovimientosdeanfibioscautivos(porejemplo,laOIE).Todoslospermisosyreportesnecesariosdebenserrevisadosparaasegurarsedequeesténenorden.LaspautasdelaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE,porsussiglaseninglés)paramitigarlosriesgosdeimportaryexportaralhongoquítridodeanfibiosolosranavirusdeberíanserrevisadas:http://www.oie.int/eng/normes/fcode/fcode2008/en_chapitre_2.4.1.htm
• ¿Quérecursosfinancierosseencuentrandisponiblesparafinanciarlasactividadesdecuarentena?Loscostosdecuarentenaincrementanjuntoalnivelderiesgodeenfermedades.Loscostosdecuarentenapuedenincluir,peronoestánlimitadosa:entrenamientodelpersonal,fuerzalaboral,pruebasdelaboratorio(incluyendonecropsiaehistopatología),transportedeanimalesymuestrasparapruebasdelaboratorio,alimentacióndelosanimales,medicamentosycostosmédicos,serviciospúblicos,materialesparaladesinfecciónycostosdemanteneraislamientoalargoplazo.
6.2EVALUACIÓNDERIESGOSENCUARENTENADEANFIBIOS
Determinarloselementosesencialesdelprocesodecuarentena,talescomolaextensióndelperíododecuarentena,lostiposyelgradodepruebasdelaboratorionecesariosparalaevaluacióndesaludylamagnituddetratamientoveterinarionecesarioparalosnuevosanimalesquedependendeunaevaluaciónderiesgoscualitativa.Estaevaluacióndebeserllevadaacaboencadagrupodenuevosanimalesqueentrenacuarentena.Generalmente,losnuevosanimalesquepresentenunriesgoBAJOrequierenperíodosdecuarentenaypruebasdediagnósticomáscortos,mientrasquelosanimalesconunriesgomásALTOnecesitanperíodosdecuarentenamáslargosypruebasdediagnósticomásextensivasyreiteradas.Algunoscomponentesdelaevaluaciónderiesgosdecuarentenason:
• Lafuentedelosanimalesentrantes.Lapotencialexposicióndelosnuevosanimalesaagentespatógenosanfibiosimportantespuedevariarsignificativamente.Porejemplo,losanimalesquehanestadoenunainstalaciónquemezcleaanfibiosdediferentesespecies,ubicacionesgeográficasyorígenesenlamismahabitaciónoreddeaguapotable(tambiénconocidacomocolección"mezclada"o"cosmopolita")puedentenerunmayorriesgodeportaragentespatógenosinfecciososimportantes.Porelotrolado,losanimalesqueprovengandeunainstalacióndedicadaaunasolaespecieolosanimalesalojadosenaislamientoalargoplazodentrodeunainstalacióncosmopolita(veaelcapítulo4)puedentenermenorriesgodeportaragentespatógenosinfecciosos
Cap.6:Cuarentena—81
importantes.Paraambassituaciones,elnivelderiesgoesmenorsilosnuevosanimalesvienendeunafuentedeconfianza;deunainstalacióndelaquesesabequetienebuenahigieneyprácticasdebioseguridad;ypuedeproveerunhistorialmédicodelosanimales(vermásabajo)
• Elhistorialmédicodelosanimalesentrantes.Losanimalesnuevosquevienendepoblacionescautivasbienmanejadasdezoológicosoacuarios(yalgunaspoblacionesdeanfibiossilvestres),porlogeneraltienenunhistorialmédicodesarrolladoporunlargocuidadoveterinarioyvigilanciadeenfermedades.Estesistemadevigilanciadebeincluirnecropsiasehistopatologíasrutinariasdelosanimalesquemueran(veaelcapítulo9).Puederevisarelhistorialmédico,siseencuentradisponible,paraestaraltantodelapresenciaoausenciadeproblemasdesaludespecíficosenlapoblacióndeorigen,loquepuedeayudardegranmaneraeneldesarrollodeplanesdecuarentena.Losanimalesquenotenganunhistorialmédico(porejemplo,algunasconcesionariasdeanimalesopoblacionesdeanfibiossilvestres)sonconsideradosunriesgodeenfermedadesalto.
Siseidentificanenfermedadesdurantelarevisióndelhistorialmédico,sedebedeterminarunnivelderiesgo(ALTO,MODERADOOBAJO).AquellasenfermedadesderiesgoALTOoMODERADOsonlasquerequierenlaspruebasdelaboratorioytratamientosmásextensosdurantesucuarentenaparareducirelriesgodeenfermedadeshacialacolecciónestablecidadeanimales.Algunosproblemasespecíficosqueseidentificandurantelarevisióndeunhistorialmédico,queseñalanunriesgodeenfermedadesALTOson:
o Enfermedadesomuertessignificativassinexplicaciónenlapoblacióndeorigen(porejemplo,másdel10%delapoblaciónadultamuereopresentaseñalesdeenfermedadesdentrode30días).Elproblemadeestasituacióneslaintroduccióndeagentesdeenfermedadesinfecciosasnuevosysindescribirodifícilesdediagnosticaraunacolecciónanfibiaestablecida.
o Laidentificaciónreciente(dentrode6mesesa1año)enlapoblacióndeorigendeagentespatógenosconocidosporserlimitantesparalaspoblacionesdeanfibiossilvestresocautivos(porejemplo,elhongoquítridoanfibioolainfecciónRanavirus).
UnproblemaespecíficoidentificabledurantelarevisióndeunhistorialmédicoqueindicaunriesgodeenfermedadesMODERADOeslaidentificaciónreciente(dentrode6mesesa1año)enlapoblacióndeorigendeenfermedadesinfecciosasconocidasporcausarenfermedadesclínicassignificativas,perononecesariamenteconocidasporserlimitantesparalaspoblaciones(porejemplo,micobacteriosisoinfeccióndenemátodosrabditiformes). AlgunosproblemasespecíficosidentificablesdurantelarevisióndeunhistorialmédicoquetienenunnivelderiesgoBAJOsonlosagentesinfecciososconsideradoscomoinfeccionesoportunistas(porejemplo,AeromonashydrophilaoSaprolegnia).
Cap.6:Cuarentena—82
• Roldelosnuevosanimales.Elrolfinaltantodelosnuevosanimalesqueentrenaunacoleccióncomoeldelosanimalesdeunacolecciónestablecidaqueseránexpuestosalosnuevosanimalestieneunimpactoenlaevaluaciónderiesgosdeenfermedades.Enelcasodelaspoblacionesderesguardodeanfibiosdegranimportancia(porejemplo,quecontienenaunaespecieengravepeligrodeextinciónoaunaespeciaparalacualexistenpocaspoblacionesderesguardo),seríaprudentetrataratodoslosnuevosanimalescomoriesgosMODERADOSoALTOSporlasconsecuenciasquepuedencausarintroducirinadvertidamenteunaenfermedadinfecciosasignificativa.EsteniveldeprecauciónpuedenosernecesariosilapoblacióndeorigendelosanimalestieneunhistorialmédicoextensivoenelquesonconsideradosdeBAJOriesgo(vermásarriba).
6.3CONSIDERACIONESDELAINSTALACIÓNYPERSONALDECUARENTENA
Ubicaciónyaccesoalahabitacióndecuarentenaoalainstalación Losanimalesencuarentenadebenseralojadosenunedificioohabitaciónseparadosdelacolecciónestablecidaocoloniaderesguardo.LashabitacionesdecuarentenaolasinstalacionesdebenserdesignadasusandolaspautasparalasinstalacionesdeAislamientoaLargoPlazodescritasenelcapítulo4. Elespaciodecuarentenadesignadodebeseraseguradoparaprevenirelaccesonoautorizado,yaseaaccidentaloconunpropósito,yaqueestopodríaresultarenelmovimientodematerialescontaminadosconagentesinfecciososdelosanimalesencuarentenahacialosanimalesdeunacolecciónestablecida.
OrdendelarutinademanejoencuarentenaBajolascondicionesideales,losnuevosanimalesbajocuarentenasoloson
cuidadospormiembrosdelpersonaldedicadossoloaanimalesencuarentenayquenoseencargandelosanfibiospertenecientesalascoleccionesestablecidas.Sinembargo,alamayoríadelasinstitucionesnolesesposibletenermiembrosdelpersonalquesoloseencargandeanimalesencuarentena.Larecomendaciónnormalparaestassituacionesesquelosmiembrosdelpersonalfijosseencarguendelosnuevosanimalesencuarentenaalfinaldecadadíadetrabajoysolodespuésdelcuidadodelosanimalesdelacolecciónestablecida.
• Duranteeldía,losmiembrosdelpersonalnodebenmoverseentreáreasque
contengananimalesencuarentenayáreasdecoleccionesdeanimalesestablecidas.Deestaforma,sedisminuyenlasposibilidadesdemoveraccidentalmentepatógenosanfibiosdesdelosanimalesencuarentenahacialascoleccionesestablecidasdelzoológicoohacialosanimalesdeunapoblaciónderesguardo.
• Siduranteeldíadetrabajolosmiembrosdelpersonaldebencambiarentreelcuidadodelosanimalesencuarentenayeldelosanimalesdecolecciones
Cap.6:Cuarentena—83
establecidas,esdegranimportanciaquesesiganlaspautasrespectoalavestimentayelcalzadodelpersonal(vermásabajo).
• Sedebehacerunaexcepciónalaregladelcuidadodelosnuevosanimalesencuarentenaalfinaldeldíasilosnuevosanimalesdebensermantenidosenaislamientopermanente(capítulo4,BioseguridadyAislamientoPermanente).LosanimalesmantenidosenAislamientoPermanentealalargaproduciránanimalesparasureintroducciónalanaturaleza.Otromotivodepreocupaciónparaestosanimalesesquepresentanlapotencialintroduccióndenuevosagentesinfecciososdesdeunacolecciónanfibiamixtadezoológicohaciapoblacionesvulnerablesdeanfibiossilvestrescomoresultadodeunprogramadereintroducción.Porlotanto,losnuevosanimalesencuarentenaquerequieranaislamientopermanentedebensercuidadosANTESdelcuidadodelosanimalesdelacolecciónanfibiageneral.
Vestuariodelpersonaldecuarentena Parareducirelriesgodepropagaragentespatógenosdesdelosnuevosanimalesencuarentenahacialosanimalesfueradecuarentena(estoincluyetantoalosanimalesdecolecciónestablecidacomoalosanfibiosnativos)yparareducirelriesgodeintroducirpatógenosexternosalosnuevosanimalesencuarentena,existenrecomendacionesespecíficasparaelvestuariodelpersonaldecuarentena,algunasdeestasson:
• Tenercalzadodedicadoparacadahabitacióndecuarentena.Loszapatoso
botasutilizadoseneláreadecuarentenanodebenserutilizadosenáreasquealberguenanimalesdecoleccionesestablecidas.Asimismo,loszapatosutilizadosenáreasdeanimalespertenecientesacoleccionesestablecidasnodebenentraraningunahabitacióndecuarentena.Elusodecubiertasquirúrgicasdesechablesparazapatosocubiertasdeplástico(porejemplo,delamarcaShuBee)paracadahabitaciónesunaalternativamenosdeseablequeelusodecalzadoespecializado.Losbañosparapiesdesinfectantesnosonunbuenreemplazoparaelcalzadoespecializado(vealasección4.10).
• Eluniformeoropaprotectoradebeserdedicadoacadahabitacióndecuarentena.Ununiformeutilizadoeneláreadecuarentenanodebeserutilizadoenlasáreasquealberguenanimalesdecoleccionesestablecidassinserlavadoantes.Asimismo,ununiformeutilizadoenelcuidadodeanimalesdecoleccionesestablecidasnodebeserutilizadoenelcuidadodeanimalesencuarentena.Algunasalternativasparalosuniformessonunabatablancadelaboratorio,batasquirúrgicas,monosdetrabajooropadesechable(porejemplo,delamarcaTyvek).
• Sedebenusarguantesdesechablesdedicadoscuandosetrabajedirectamenteconanfibiosoenrecintosparaanfibios.Elusodeguantesdedicadospuedesernecesarioparacadarecintoanimalindividualyparacadaespecieogrupodeespeciesdependiendodelriesgodeenfermedades.Estoesespecialmente
Cap.6:Cuarentena—84
ciertosianimalesdediferentesfuentessonalojadosenlamismahabitacióndecuarentena.Hanhabidopreocupacionesdetoxicidadcausadaporguantesdelátex,viniloynitriloparalosrenacuajos(Greerycolaboradores,2009).Losmiembrosdelpersonaldebenlavarsusmanosybrazosfrecuentementeysobretodocuandosemuevanentrehabitacionesdiferentes.
6.4CONSIDERACIONESDEMANEJOPARAANIMALESENCUARENTENA
Todosdentro/Todosfuera Todoslosanimalesenunahabitacióndecuarentenadebenentraralperíododecuarentenaalmismotiempoysalirdelacuarentenaalmismotiempo("Todosdentro/Todosfuera").Permitirqueanimalesdiferentesentrenosalgandelamismahabitacióndecuarentenaenmomentosdiferentes("escalonar"lacuarentena)incrementaelriesgodequeunagentepatógenoimportanteseaintroducidoatodoslosanimalesenlahabitacióndecuarentenaypasesinserdetectadoantesdelaliberacióndelosanimalesqueentraronencuarentenaenprimerlugar.Esto,asuvez,incrementaelriesgodeintroducirunaenfermedadinfecciosaimportanteenlacolecciónestablecida.
• Sinuevosanimalesdebenentraraunahabitacióndecuarentenaantesdelfindeunperíododecuarentenaencurso,laduracióndelperíododecuarentenadebeserextendidoparalosanimalesqueestabanencuarentenaantes.
• Ningúnanimaldebeserliberadodesucuarentenahastaquelosanimalesqueentrarondespuésaestahayanterminadosuperíododecuarentena.
• Liberaratodoslosanimalesdelahabitacióndecuarentenaalmismotiempopresentalaventajadepermitirlimpiarydesinfectarcompletamenteelespacioylosrecintosdecuarentenaantesdequeentrennuevosgruposdecuarentena.
Bioseguridadenlacuarentena
Todoslosanimalesenunamismahabitacióndecuarentenadebenposeerelmismorolfinal(Arca,RescateodeSuplementación;investigaciónsobrelaconservaciónoeducación)ydebenposeerunhistorialenelquehayansidomantenidosbajounodelosnivelesdebioseguridad("AISLAMIENTO"o"BUENASPRÁCTICAS")apropiadoparaeserol(vealasección4.4paraunaexplicacióndelosnivelesdebioseguridad).
• Losanimalesdestinadosaentraraunacoloniaderesguardoconelpropósitodedevolverlosaellosoasudescendenciaalanaturaleza(porejemplo,losanimalesquetienenunroldearca,rescateodesuplementaciónyquesonmantenidosenaislamiento),nodeberíannuncaseralojadosenlamismahabitacióndecuarentenaconanimalesquenohayansidoalojadosantesenaislamientoalargoplazo.Estosanimalestambiéndeberíansermantenidosconsumismaespecieogrupodeespecie(ungrupofaunísticoanfibioqueesdelamismapoblacióndeorigen)porcadahabitacióndecuarentena.
Cap.6:Cuarentena—85
• Comounejemplo,noseríarecomendablealojaraunsapodeWyoming(delosEstadosUnidos)queespartedeunapoblaciónderesguardoqueproduceanimalesparasureintroducciónalanaturalezaenlamismahabitacióndecuarentenaenlaqueseencuentraunaranaarborícolaverde(deAustralia)destinadaasuusocomoanimaleducativoodeexhibición.
Durantelacuarentena,sedebenseguirlasrutinasdireccionalesdeprácticaszootécnicasqueminimicenlacontaminacióncruzadaentrediferentesrecintosanimales.Estasprácticassondiscutidasendetalleenlasección4.11.
Recintosylimpieza Paralasinstalacionesdecuarentenaserecomiendatenerrecintosqueseanfácilesdelimpiarydesinfectar.Losrecintosdebensertansimplescomolopermitanlosrequisitoszootécnicosylahistorianaturaldelaespecie,pero,almismotiempo,debenfomentarelcomportamientonaturaldeestamientrasseadaptaalcautiverio(porejemplo,debenincluirrefugios,sustratosuotroamuebladoqueestimulesucomportamientonatural).Laadaptabilidadyapreciaciónporlahistorianaturaldelaespeciesonelementosclavesparaunprotocolodemanejoexitosoenlacuarentena.Porejemplo,notodaslasespeciespuedentolerarunrecintoescuetoconamuebladomínimo(elcualseríaidealparasulimpiezaydesinfección)yestosanimalespodríannecesitarrecintoscomplejosdeapariencianaturaldurantesuperíododecuarentena.Algunasdelasespeciesterritoriales(porejemplo,lasranasvenenosasdelafamiliaDendrobatidae)podríannecesitarbarrerasvisualesentrerecintos.
• Losrecintosdebenserdefácilaccesoydeberíanestarhechosdevidrionoporoso,fibradevidrioomaterialesplásticosqueseanfácilesdelimpiarydesinfectar.
• Despuésdequeungrupodeanimaleshayaterminadosuperíododecuarentena,losrecintosdebensercompletamentedesmontadosydesinfectadosantesdesureutilización.Estoincluyelossistemasdefiltraciónutilizadosparalosanfibiosacuáticos.Guíasparaladesinfeccióndelosrecintossonentregadasenlasección5.4.Lossustratosyelamuebladoodecoracionesdelasrecintosparalosrecintosde
cuarentenadeberíanserdesechablesoestarhechosdematerialesquepuedanseresterilizadosdespuésdesuuso.Algunassugerenciasdesustratosson:
• Musgosphangnum.Estematerialesrelativamentebarato,tieneunaalta
retencióndeaguayposeepropiedadesantibacterianas.• Gravilla.Colocarunacapadelgadadegravillaalfondodelrecintoounfondo
falsoconunacapadesphangnumtambiénsirveparaeldrenajedeesteypermitequeelrecintoseaenjuagadominuciosamenteyfrecuentemente.
Cap.6:Cuarentena—86
• Pisosdeplástico.Sepuedenusarvariostiposdepisosdeplástico(porejemplo,forrosnoresbaladizosparacajasdeherramientas)ochapasperforadasdePVCcomosustratos.Sinembargo,estosdebenserlavadosydesinfectadosminuciosamenteentreusos,yaquesepuedenacumularbiopelículasfácilmenteenlassuperficiestexturadas.
• Toallasdepapel.Estassonconvenientesehigiénicas,perosesecanrápidamenteypuedenrequeriratenciónextraporpartedelosmiembrosdelpersonal.Lastoallasdepapeldebensernoblanqueadasynoimpresasparaevitarexponeralosanfibiosacloroocolorantestóxicos.
• Plantas.Lasplantaspuedensermuyimportantesparaalgunosanfibiosyaquesirvencomorefugioocomosustratoparadescansarodormir.Lasplantasplásticasoartificialessonútilesporquesonbaratasysepuedendesinfectarodescartarfácilmentedespuésdelaliberacióndeungrupodeanimalesdecuarentena.Sisevanausarplantasvivasenlacuarentena,espreferibleutilizarplantasquerequieransustrato(porejemplo,pothos,epífitas)oquepuedanestarenelsustratoalejadasdelosanimales.Lasplantasnodebenserreutilizadasdespuésdequetermineelperíododecuarentena.
Dadaslaspreocupacionesencuantoalaintroduccióndeagentesde
enfermedadesinfecciosas,serecomiendaquelossustratosyelamuebladonuncaseanrecolectadosdeexteriores,sobretododeáreasenlasquehayanpodidoestarencontactoconotrosanfibios.Pautasparalasprácticasdebioseguridadquereduzcanlaposibilidaddeintroducirenfermedadesinfecciosasanfibiasimportantespormediodesustratosyplantaspararecintosseentreganenlasección4.13. Sedebellevaracabodiariamenteunalimpiezageneral(removerlashecesylosproductosalimenticiossinconsumirjuntoconenjuagarlossustratosconaguacuandoseaposible)detodaslasrecintos.Siesposiblesedebellevaracabounreemplazototaldelossustratossemanalmente.Estaspautassonimportantesyaquealgunosparásitos(porejemplo,nemátodosrabditiformes)puedencompletarunciclodevidaenteroensolo48horas.Paralasespeciesqueseestresanfácilmenteenunentornodecautiverio,lalimpiezaoreemplazofrecuentedelossustratospuedesermuyperturbadora.Enestoscasossedebenconsiderarlimpiezasmenosfrecuentesdependiendodelostiposdeparásitospresentesylacargaparasitariaestimadadelaespecie.
Recintosacuáticos
Losanfibiostotalmenteacuáticosqueseencuentrenencuarentenarequeriránatenciónespecialalacalidaddelagua.Estosignificaquesedebetenerunsistemadefiltracióndeaguaocambiarlafrecuentemente(porejemplo,"vaciadoyllenado").También,resultaríaútilvigilarlosparámetrosdelacalidaddelagua,talescomoelniveldeamoniaco,nitratoyelpH.
• Siutilizaunsistemadefiltración,esnecesariotenerun"filtrobiológico"establecidodebacteriasespecializadasparalaeliminacióndelossubproductos
Cap.6:Cuarentena—87
deamoniacodelosresiduosnitrogenadoscreadosporlasexcrecionesdelosanimales,productosalimenticiossincomeruotrosmaterialesorgánicos.Estousualmenterequierequeunsistemalleveenfuncionamiento2o3semanasantesdequenuevosanimalesentrenencuarentena(necesitaplanearconanticipación).
• Pormotivosdebioseguridad,siseusancoloniasbacterialesdepecerasdelasinstalacionesparainiciarunfiltrobiológico,estascoloniasnodebenserprovenirdesistemasopecerasdeaguaquehayanalbergadoanfibiosenalgúnmomento.
• Lossistemasconfiltrosbiológicosrecientementeestablecidospuedenrequerircambiosdeaguafrecuentesparamantenerlacalidaddeesta,yaquelascoloniasdebacteriaspuedenserineficientes.Estoesparticularmenteciertosiseusanantibióticosenelaguaduranteelprocesodecuarentena.
• Cuandolacuarentenaestécompleta,lossistemasdefiltraciónylosrecintosdebenserdesinfectadosparaprevenirlapropagacióndeorganismosquepuedenestarescondidosdentrodelamatrizdelfiltro.Enotraspalabras,nosedeberíausarelmismosistemadefiltraciónparamásdeungrupodeanimalesencuarentena.
• Unenfoquealternativoesevitarlossistemasdefiltraciónporcompletoysimplementeadoptarelmétodode"vaciadoyllenado"entodoslosrecintosacuáticosduranteelcursodelperíododecuarentena.
Manejodedesechosyaguasresiduales
Existelapreocupacióndequeresiduos(porejemplo,sustratossucios)oaguasresidualesdelasinstalacionesdeanfibiosencautiveriopuedanactuarcomofuentedeintroduccióndeagentesdeenfermedadesinfecciosasimportantesparalaspoblacionessilvestresdeanfibios.Asímismo,losdesechosdelosanimalesencuarentenapodríanactuarcomofuentedeagentesinfecciososparalosanimalesdecoleccionesestablecidas.Porlotanto,sedebenestablecerprotocolosparagarantizarquelosresiduosnoentrenencontactoconlosecosistemaslocalesoconotrosanimalesqueseencuentrenafueradelainstalacióndecuarentena.EltratamientodedesechosyaguasresidualespuedeserrequeridobajolaspautasdelaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE)paralaimportacióndeanfibiosdepaísesquenohayansidodeclaradoslibresdelhongoquítridoanfibiooranavirus:www.oie.int/eng/normes/fcode/fcode2008/en_chapitre_2.4.1.htmPautasgeneralesparalaeliminaciónderesiduossólidosyaguasresidualesseencuentrandisponiblesenlassecciones4.13y4.14.
DietayalimentacióndelosanimalesencuarentenaLosinsectoscapturadosenlanaturalezasirvencomounaexcelentefuentede
nutrición,sobretodoparalosanimalesqueaúnnoseadaptanalasdietasdelcautiverio,peroestosconllevanelriesgodeintroducirunagentedeenfermedadinfecciosaouncontaminantequímico.Tambiénpuedeexistirunleveriesgodeintroduccióndeenfermedadescuandoseusanpresassuministradasporproveedores
Cap.6:Cuarentena—88
comerciales.Recomendacionesgeneralesdeprácticasdebioseguridadquereduzcanlaposibilidaddeintroduciragentesdeenfermedadesinfecciosasimportantesdefuentesalimenticiasseentreganenlasección4.17.
Reduccióndelestrés
Aveces,losprogramasdecuarentenadebentenerenconsideraciónelbalanceentrelosobjetivosdelacuarentenaylasnecesidadesdelanimal(porejemplo,evitarelestrésenespeciessensibles).Algunasespeciessonmuysensibles,ypodríannosobreviviralprocesodecuarentenaamenosquesellevenacaboesfuerzosparaadaptarseasusnecesidades.Enesteaspecto,laflexibilidadylaevaluaciónindividualderiesgodeenfermedadesparacadagrupodeanimalesqueentrealacuarentenapuedenserútiles.Elestrésenlosanimalespuedeserreducidomediante:
• Lareducciónalmínimodelafrecuenciaconlaquelosanimalessonmanejadosoperturbados.Todoslosexámenesfísicos,recoleccióndemuestrasparapruebasdedeteccióndeenfermedadesyotrasactividades,deberíansercombinadasenunasolaactividad.Laautomatizaciónenlasrutinasdecuidadozootécnico(porejemplo,atomizadorespreviamenteinstaladosconuntemporizadorparamantenerlahumedadenelrecinto)puedeserútil.
• Ofrecerelrefugioapropiadoparaquelosanimalesseescondanyasífomentarelcomportamientonaturaldeestos.Usarmaterialesquesepuedanlimpiarfácilmenteoqueseandesechables(porejemplo,plantasdeplásticoypiezascortadasdetubosdePVC)permitequelosanimalesseestresenmenosy,almismotiempo,unafácildesinfección.
• Proveerdietas,iluminación,composicióndelagua,temperatura,espacionecesario(tantoverticalcomohorizontal),sustratosydensidadanimaldeformaqueelambientedelanfibioseaconsistenteconlahistorianaturaldelaespecie,puedereducirdemanerasignificativaelestréscrónicodebajaintensidad.Estoesparticularmenteciertoparalasespeciessensiblesoenlasespeciesparalascualesexistepocaexperienciadecuidadozootécnicoencautiverio.Estoúltimosehavueltounasituaciónmáscomúnamedidaqueseestablecenmáspoblacionesderesguardoparaanfibios.Enmuchoscasos,esdeseableestablecerprotocolosdecuidadozootécnicoenunaespecie"sustituta"estrechamenterelacionadaalaquesevaaadquirir,sobretodoantesdelaadquisicióndeunaespeciemuysensibleovaliosa.
6.5DURACIÓNDELPERÍODODECUARENTENA
Elperíodoenquelosnuevosanimalesdebenpasarencuarentenaesdeterminadoporvariosfactores.Estosfactoresincluyen:
• Losresultadosdeunaevaluaciónderiesgosdecuarentena(vealasección6.2).
LosanimalescuyonivelderiesgodeenfermedadesseaBAJOrequierenmenos
Cap.6:Cuarentena—89
pruebasdediagnósticoyobservaciónveterinariay,porlotanto,tendránperíodosdecuarentenamáscortos.
• Lasaludgeneraldelosanimalesencuarentena.Esodebeserdeterminadoporunaevaluaciónveterinaria,pruebasdelaboratoriodediagnósticoyporlaaparicióndeenfermedadesomuertessignificativasenelgrupodeanimales.Siseidentificanproblemasdeenfermedadesosinosecumplenlasnormasparalaliberacióndelosanimalesencuarentena(vermásabajo),elperíododecuarentenadeberásermáslargo.
Laduraciónmínimarecomendadaparaunperíododecuarentenadeanfibioses
de30días.EstebreveperíododecuarentenaesapropiadoparasituacionesdecuarentenaderiesgoBAJOaMODERADO,quenorequieranpruebasdediagnósticoenlaboratorioextensasycuandolosanimalescumplencontodoslosotrosrequisitosparasuliberacióndelacuarentena.ParalamayoríadelassituacionesdecuarentenaderiesgoMODERADOaALTOsesugiereunperíodomínimode60a90díasdeduracióndecuarentena.Esteperíododecuarentenamásextensopermitiráunaobservaciónmeticulosadelosanimalesencuarentenaparabuscarevidenciadeenfermedadesy,también,darátiempopararecibirlosresultadosdelaspruebasdelaboratorionecesarias.Lasnormasparalaliberacióndelosanimalesencuarentenadespuésdelperíodomínimodecuarentenason:
• Unaevaluaciónfísicaexitosaporpartedeunveterinariouotropersonalentrenado.Deserposible,sedebellevarcabounexamenfísicodetalladodecadaanimalenelgrupo.Verlasección6.6paramásdetallesacercadellevaracaboexámenesfísicos.Siungrupograndedeanimalesseencuentraencuarentenaynopuedenserexaminadosunoporuno,hacerexámenesvisualestambiénesaceptable.Sedebehacerunesfuerzopararealizarmásexámenesfísicoscompletosyrevisionesdelaboratorioenalmenosde10%a30%delosanimales.
• Sianimalesindividualeshanmantenidounacondicióncorporal(BCS)mínimade"3"porunmínimode14díasseguidosantesdelafechadeliberacióndecuarentenaestablecida.Verlasección6.6paramásdetallesdecondicionescorporales.
• Sielgrupodeanimalesencuarentenanohasufridoeventosdemortalidadsinexplicaciónporunmínimode14díasseguidosantesdelafechadeliberacióndecuarentenaestablecida.
o Sihayserviciosdepatologíadisponibles,sedebenanalizarlosresultadosfinalesdehistopatologíapormediodenecropsiasdeanimalesquehayanmuertoduranteelprocesodecuarentenaoquehayansidosacrificados(eutanasia)conpropósitosdevigilanciadeenfermedadesdurantelacuarentena.Siseidentificóunaenfermedadinfecciosaenproceso,el
Cap.6:Cuarentena—90
períododecuarentenadebeserextendidohastaquesehayasolucionadoelproblema.
• Silosresultadosfinalesdecualquierpruebadelaboratorio(porejemplo,PCRparadetectarhongoquítridodeanfibios)sonnegativosparaagentespatógenosanfibiosimportantes.Enalgunoscasos,losresultadosdelaspruebaspuedennoestardisponiblesdemaneraoportuna(porejemplo,silasmuestrasparaunPCRdebenserexportadasaotropaísparasuanálisis);entalescasos,sedebenconsiderarconprecauciónotrasalternativascomotratamientosprofilácticos(verlasección8.1).Siseidentificóunaenfermedadinfecciosaenproceso,elperíododecuarentenadeberíaextendersehastaquesehayasolucionadoelproblema.
• Lostratamientosparalasinfeccionesparasitariasconfrecuenciainfluencianlaextensióndeunperíododecuarentena.Sisetomaladecisióndetrataralosparásitosdetectados(verlasección8.4),despuésdecompletareltratamientosedebellevaracabounarevisiónparadetectarparásitosysedebenalcanzarlasreduccionesparasitariasesperadasantesdelaliberacióndecuarentena.Esteprocesopodríaprolongarlacuarentenaporvariassemanasoinclusomásysepodríanecesitarmásde1rondadetratamientos.
• Siseidentificananimalesenfermosenelgrupodecuarentena,sedebenhaberresueltotodoslosproblemasdesalud(yaseaporlamuerteynecropsiadelosanimalesoporqueestosvolvieronaunestadosaludable)poralmenos14díasantesdelafechadeliberacióndecuarentenaestablecida.Enciertomodoestenúmeroesarbitrarioypodríaserajustadodeacuerdoaljuiciodelveterinarioconsultanteuotropersonalentrenado.
o Debeintentarsedeterminarsilosanimalesenfermosseencuentranafectadosporunainfecciónenprocesoosielestadodeestossedebeasumalaadaptaciónalacuarentenaoelcautiverio.Siseeliminalaposibilidaddeseaunaenfermedadinfecciosa,sedebeconsiderarliberaralanimaldecuarentenaytrasladarloaunrecintopermanentequeseajustemásasusnecesidades.
6.6CONSIDERACIONESMÉDICASENLACUARENTENA
Elnúcleoconceptualdelprogramaensíesmantenerunaobservacióncuidadosayunregistrodelasaluddecadaanimalencuarentena.Alobservaralosanimalesindividualmentesepodríandetectarenfermedadesantesdequeaestosselespermitasalirdelainstalacióndecuarentenaysereducenlasprobabilidadesdeintroducirnuevasenfermedadesinfecciosasalascoleccionesestablecidas.
RegistrosmédicosUnregistromédicoesladocumentaciónsistemáticadelahistoriaycuidado
médicoqueselehadadoaélolosanimales.Lamantenciónderegistrosmédicosdetalladossirvecomobaseparaevaluarlaeficaciadelosprotocolosdecuarentena,descubrirmétodosdecuidadozootécnicoapropiadosypermiteelanálisisdelascausasdemorbimortalidadencuarentena.
Cap.6:Cuarentena—91
Elregistromédicodeberíaincluirlossiguienteselementos:
• Informedeidentificación/inventarioCuandoseaposible,laseccióndeidentificación/inventariodelregistromédicodebeseguirelformatodelSistemaInternacionaldeInventariodeEspecies(ISIS,porsussiglaseninglés–ahoraZIMS)ydebecontenerlossiguientecuandoseaposible:nombrecomúndelanimal,nombretaxonómico(géneroyespecie),sexo,tipodenacimiento,lugardenacimiento,fechadenacimiento,fechadeadquisiciónenlacuarentena,origen/identificacióndelpadreylamadre,númerodeingresoalainstitucióndecadaanimalyotrosidentificadoresposiblestalescomodatosdelibrogenealógico,microchipsymarcas.Alosgruposdeanimalesselesdaunnúmerodeingresogrupalconlainformaciónpreviamentemencionadaloantesposible.Lasnotasdecuarentenadebenproporcionarinformaciónparaidentificarindividualmentealosanimales(siesposible),sobretodosisetratademarcasfísicasopeso(verlasecciónmásabajodepesajeparaindividuosygrupos).
• Notasdecuarentena.Todoslosanimales,yaseanindividualesogrupos,debentenerunaanotacióndiariaenlapartedecuarentenadelregistroenlacualseanotelapresencieoausenciadeporlomenos5factores:heces,orina,ingestaalimentaria,comportamientonormalyactitud.Nohaymuchadiferenciaentremantenerunformatoindividualogrupalderegistromédicomientrasloscambiosespecíficosdelapoblaciónseanbiendocumentados(porejemplo,decirque"3de5animalesparecendeshidratadososeencuentranletárgicos"contradecir"algunosanimalessevenenfermos").
• Notasclínicasdelpersonalveterinario.Estasecciónincluyenotasyobservacionesdelosdiagnósticosclínicos,anestesiayprescripcionesmédicas.
• Resultadosdellaboratorio.Resultadosdelaboratoriodeparasitología,diagnósticosmoleculares/serológicos,microbiologíaynecropsia/histopatología.
Examenfísico.Bajolascondicionesideales,losanimalesdeberíanrecibirunexamenfísicoal
menos3vecesdurantelacuarentena.Losexámenesdebenserllevadosacaboporunveterinariouotropersonalquehayarecibidoentrenamientoenevaluacionesmédicas.
• Losexámenesdebenllevarseacabocuandolosanimalesentrenacuarentena,enelpuntomediodelacuarentenayantesdesalirdeesta.Elmanejodelosanimalesdurantelosexámenesdebeserlimitadoparaevitarelestrésenlasespeciessensibles,sobretodoenlaentradaacuarentena.Todolonecesarioparalaexaminaciónoidentificacióndebeestarorganizadoantesdelexamen,deestaformanosedesperdiciarátiempocuandoelanimalesteenmano.
Cap.6:Cuarentena—92
• Laduraciónyelgradodelosexámenespuedevariar.Deungrupograndedeanimalesunsubconjuntodelapoblación(de10%a30%)debeserexaminadoparaevaluarlasaluddelapoblación.
• Sedebedaratenciónespecialalacondicióncorporalycutánea,palpacionescelómicasyexámenesorales.Latransiluminación(elusodeunaluzbrillantepararesaltarlasestructurascelómicasinternas)puedeserútilparalavisualizacióndelasestructurascelómicas,sobretodoparainvestigarydetectarenfermedadescelómicastalescomolaascitis,neoplasia,procesosgranulomatososomasas.
• Todaslasanomalíastantofísicasoconductualesdebenserdocumentadasenelregistromédico.Algunasanomalíasexternascomunesquedebenseranotadassonlafaltadeextremidades/dedos,úlcerasocolor/texturaanormaldelapiel.
• Losanimalesdebenserevaluadosparaobtenersupesoysupuntajedecondicióncorporal(vermásabajo)
• Lascaracterísticasútilesparalaidentificaciónindividualdelosanimalesdebenseranotadas(porejemplo,coloraciónopatronesenlapiel).Sedeberíanobtenerfotografíasdigitalesdelosindividuosparafuturasreferenciasencasodealgunaenfermedadoparacompararlasconlascondicionescorporalesidealesolamorfologíadelaespecie.
Identificacióndelosanimales
Laidentificaciónpermanentedecadaanimalesunaherramientacríticaparalagestióndelosanimalescautivos,sobretodosisequieremantenerladiversidadgenéticaparalareproducción.Enlassituacionesdecuarentenalaidentificacióndecadaanimalesútilpara:
• Supervisarelpesoylospuntajesdecondicióncorporal.• Llevaracaboinvestigacionesepidemiológicaspormediodelaidentificaciónde
portadoresdeenfermedadesysitiosdeexposiciónaagentespatógenosuotrosagentesdañinos.
• Evaluarlaefectividaddelagestiónenlosparámetrosdecuidadozootécnicoencautiverio,talescomodieta,jaulayparámetrosambientales.Estosfactoressonmásfácilesdeanalizarconlaidentificaciónindividualdelosanimales.Losaspectosnegativosdelaidentificaciónindividualsonloscostosdelequipoy
sualmacenamiento,infeccionesotraumassecundarioscausadosporelmecanismodemarcado,ylapotencialperdidayreemplazodelosmarcadores"permanentes"deidentificación.VeaelapéndiceIparamásdetallesacercademétodosdeidentificaciónanimal.
Pesoypuntajedecondicióncorporal.Comoyasehaseñaladoenseccionesanteriores,elpesocorporalyelpuntajede
condicióncorporaldecadaanimalesunaparteimportantedelaevaluacióndesaluden
Cap.6:Cuarentena—93
cuarentena.Sedebenguardarnotasrespectoalaaparienciageneraldelacondicióncorporaldurantelacuarentenadelosanimales,dándoleespecialatenciónalospuntajesdecondicióncorporalalentraralacuarentenayantesdesalirdeesta.
Laescalade5puntosdelsistemaBCSPuntaje Descripción1 Raquítico—Vértebraslumbares,huesospélvicosytodaslas
protuberanciascorporalessonvisiblesaladistancia.Nohaygrasacorporaldistinguible.Ausenciaobviademasamuscular.
2 Delgado—Partesuperiordelasvértebraslumbaresesvisible.Huesospélvicosmenosnotorios.Reduccióncelómicaydecinturaevidente.
3 Moderado—Huesospélvicosnoprominentes.Celomarecogidosisevedeperfil.
4 Robusto—Deaparienciaregordeta.Depósitosgrasosevidentessobrecolumnalumbar,extremidadesybasedelacola.Lareduccióncelómicapuedeestarausente.
5 Obeso—Grandesdepósitosgrasossobrepecho,columnaybasedelacola.Reduccióncelómicaausente.Depósitosgrasosenelcuelloylasextremidades.Celomadistendido.
Elpesocorporaldelosanimalesdebesertomadocuandoestosentrenala
cuarentenaysemanalmentedespuésdeeso.
• Sedebeusarunabalanzadeprecisión(0,01gparaanimalespequeños).Sedeberíausarlamismabalanzacadavezqueunanimalseapesadoparaevitarconfusionesrespectoalainfluenciadelasbalanzasenelcambiodepesodelosanimales.
• Elpesoentreanimalesindividualespuedefluctuar.Elpersonalquenoestéacostumbradoatrabajarconanimalesmuypequeñosdeberíatenerencuentaqueactosnaturales,comoorinarodefecar,puedencausarpérdidasdepesoaparentesrápidasygrandes;losanfibiostienenaorinarcuandosonmanejados.Comopautaaseguir,una"pérdidasignificativadepeso"puedeconsiderarsecomopesarde10%a15%menosqueelpesocorporalsemanalanterior,ydeberíaconsiderarsecomounposibleindicadordesaludanormal.Loscambiosdepesocorporaldebenserevaluadosfrentealasvaloracionesvisualesdelpuntajedecondicióncorporal.
• Losanimalessaludablesdeberían,porlogeneral,mantenersupesocorporaloganarpesodurantelacuarentena.Lamalaadaptaciónalascondicionesdecautiverioocuarentenapodríaseruncausantedepérdidadepeso.
• Engruposgrandesdeanimales,puedeexaminarlamedianadelpesodeestosyutilizarlosvaloresmínimosymáximosdepesocorporalparacalcularlatendenciadepérdidaygananciatotaldepesoenelgrupo.
• Antesdesalirdecuarentena,sedeberíahacerunpesajedesalidadelosanimales.Engruposgrandesdeanimales,elpesodelgrupopuedesertomado
Cap.6:Cuarentena—94
deformasemanalobisemanalylosvalorespuedenserregistradosbajounnúmerodeidentificacióngrupal.Examinarlamedianadelpesodelgrupoyutilizarlosvaloresmínimosymáximosdepesocorporalparacalcularaproximadamentelatendenciadepérdidaygananciatotaldepesoenelgrupo.Lasmismaspreocupacionesexistentantoparalasperdidasgeneralesdepesodentroungrupoquesaldrádecuarentenaqueparalaliberacióndeunanimalconpérdidadepeso.
6.7PRUEBASDELABORATORIOYTRATAMIENTODEENFERMEDADESENCUARENTENA Laspruebasdediagnósticoylostratamientosprofilácticosdelaboratoriosonútilesyavecesesencialesparalasevaluacionesmédicasyderiesgosdelosanimalesencuarentena.Específicamente,laspruebasotratamientosdediagnósticodirigidospueden:
• Detectaryreducirelimpactodeaquellosagentespatógenosconocidosporcausarmortalidadsignificativaenlaspoblacionescautivasantesdequelosanimalesencuarentenaseanintroducidosalacoleccióngeneraloaunacoloniaderesguardo.
• Usteddebeayudareneldesarrollodepoblacionescautivasqueseencuentrenlibresdeagentespatógenos(porejemplo,elhongoquítridodeanfibios).Estaspoblacionesespecíficaslibresdeagentespatógenossonnecesariasparalosprogramasquepretendenreintroduciranimalesalanaturaleza,oqueintentandistribuiranfibiosaotrasinstitucioneszoológicas.
• Identifiqueproblemasdeenfermedadesinesperadosenlaspoblacionesdeorigen.
Seríadifícilcrearunprotocolodetratamientoopruebasdedeteccióndeenfermedadesúnicasparausarentodaslassituacionesdecuarentenadeanfibios.Ladecisióndeusardiferentestiposdepruebasdediagnósticodependedelasituaciónydefactorestalescomo:
• Evaluaciónderiesgosdecuarentena.Enlasección6.2hayunadescripcióndetalladadelaevaluaciónderiesgosdecuarentena.
• Disponibilidaddeapoyodelaboratoriooveterinario.Notodaslasinstalacionesquealberganaanfibioscautivostienenaccesoalaboratoriosyveterinariosquepuedanllevaracabopruebasdediagnósticoeinterpretarlosresultadosdellaboratorio.Enestassituacioneshayunamayordependenciadelostratamientosprofilácticosparaagentesdeenfermedadespreocupantes(porejemplo,elhongoquítridodeanfibiosoparásitosnemátodosrabditiformes);elusodeperíodosdecuarentenaextendidosparaobservaralosanimalesenbuscadeseñalesdeenfermedades;ydependerdeexámenesfísicosparaevaluarlasaluddelanimal.
Cap.6:Cuarentena—95
Algunosmétodosdediagnósticootratamientodelaboratorioquepuedenserutilizadosensituacionesdecuarentenason:
• Necropsia(examinaciónpostmórtem).• Examinaciónenlaboratoriodehecesytratamientoparaparásitosinternos.• Pruebasy/otratamientoprofilácticoparadetectarelhongoquítridoanfibio.• Pruebasparadetectarranavirus.• Obtenermuestrasparapatologíasclínicas(hematologíayquímicasanguínea).
Estosmétodossondiscutidosendetalleenlasseccionesmásabajo.
6.8NECROPSIALanecropsia(examinaciónpostmortem)esunaherramientamuyútilparala
revisiónenbuscadeenfermedadesenanimalesencuarentenayesta,idealmente,debellevarseacaboentodoslosanimalesquemueran.Losprocedimientosparanecropsiasenanfibiossedescribencondetalleenelcapítulo9.
• Lanecropsiaconhistopatologíaesunapruebaquenoestádirigidaaninguna
enfermedadenespecíficoy,porlotanto,tieneelpotencialparadetectarunaampliagamadeenfermedadesinfecciosas(porejemplo,quitridiomicosisoinfecciónporranavirus);infeccionesparasitariasclínicamenteimportantes(porejemplo,grandescargasdenemátodosrabditiformes);yproblemasnutricionales(porejemplo,enfermedadóseametabólica),entremuchasotrasenfermedadesquepuedenserencontradasenlosanfibioscautivos.
• Lanecropsiaconhistopatologíaeselmétododediagnósticoporelcuallamayoríadelosproblemasdeenfermedadesnuevosoinesperados,paraloscualesnoexisteunapruebadediagnósticoespecificadisponibleoválidaparaanfibios,serándetectados.
• Confrecuencia,losresultadosdeunanecropsiaseutilizanparaidentificarconrapidezlosproblemasdesaludmásimportantesenungrupodeanimalesencuarentenayayudanaenfocarlaatencióndelosdiagnósticosdelaboratorioylosesfuerzosdetratamientodurantelacuarentena.
• Dadoquemuchasenfermedadessonindetectablesasimplevistaosonsimilaresaotrascondiciones(porejemplo,unaranaconpielrojapodríatenerunainfecciónbacteriana,micóticaovira),unahistopatologíallevadaacaboporunpatólogoveterinarioamenudoesnecesaria.
Elsacrificiodeanimales(medianteeutanasia)paramuestreosdiagnósticose
histopatologíapuedeformarpartedeunprogramadevigilanciadeenfermedadesencuarentena.Losanimalesseleccionadosparasacrificardebensersacrificados
Cap.6:Cuarentena—96
humanamente;losdetallesparaesteprocedimientoseincluyenenlasección8.6.Algunassituacionesendondeelsacrificioesespecialmenteútilson:
• Lainvestigacióndeunbrotedeenfermedadesounamortalidadmasivasin
explicaciónenlacuarentena.• Elsacrificiotambiénpuedeserunaopciónsihayungrupograndedeanimales
encuarentenayexistemuypocainformaciónacercadelosproblemasdeenfermedadesimportantesdelaespecie,osilosanimalesfueronobtenidosdeunafuenteconsideradaderiesgoALTOrespectoalaintroduccióndeenfermedadesinfecciosas.También,paralosprogramasquetraigananfibiossilvestresacoloniasderesguardo,losprogramasdevigilanciadeenfermedadesqueincluyansacrificiosynecropsias,yaseadelaespecieobjetivoodelaespeciesustitutasimpátrica(odeambos),sonútilesparadeterminarriesgosdeenfermedadesyproblemasimportantesantesdeestablecerelprogramadecautiverio.Enestassituaciones,elsacrificiodeanimalesofrecelamejoroportunidadparaobtenerespecímenesdediagnósticodealtacalidadquepresentenmenosdefectoscausadosporladescomposiciónpostmortem(autolisis).
Ladecisióndesacrificaranimalesparalavigilanciadeenfermedadespuedeser
controversial.Porlotanto,esimportantequetodoslosmiembrosdelprogramadeconservacióndeanfibiosesténdeacuerdorespectoalanecesidaddesacrificareidentificaraaquellosanimalesqueseránremovidosporestospropósitos.
6.9PRUEBASYTRATAMIENTOSPARAPARÁSITOSINTERNOSLarevisiónparadetectarparásitosinternos(usualmenteintestinales)esuna
prácticaveterinariaestándarenlacuarentena.Larevisiónsesuelellevaracabopormediodelaexaminacióndelashecesenunlaboratorioenbuscadehuevecillosuotrasetapasdevidaparasitarias.Siempreseesperaungradodeparasitismointernoenlosanfibiossilvestres,yelhuéspedgeneralmentetoleraalosparásitosendémicosmuybien.
• Encondicionesdecautiverioycuidadozootécnico,lasinfeccionesdealgunos
tiposdeparásitos,especialmentelosnemátodosrabditiformestalescomoRhabdiasspp.(gusanopulmonaranfibio)oStrongyloidesspp.(parásitointestinal)puedenalcanzarnivelesdenominadoscomohiperinfeccionesosuperinfeccionesenelhuésped,loqueresultaenunestrésfisiológicoaumentadooenlaenfermedady,luego,muerte.
• Comopartedeunprogramaparacontrolarlasinfeccionesdenemátodosrabditiformes,laexaminaciónfecalparaencontrarparásitosesimportanteenlosprogramasderevisiónenbuscadeenfermedadesdecuarentena.Enlasección7.8sedescribenmétodosparalarevisiónfecalparaencontrarparásitos.
Cap.6:Cuarentena—97
• Enlasección8.5sediscutenmétodosdecontrolparaparásitosrabditiformes,incluyendoeltratamientoprofilácticoconmedicaciónantihelmíntica,ylainiciacióndeprácticasdehigieneylimpiezaquereduzcanlaexposiciónaparásitospatógenos
Elobjetivodelarevisiónfecalparaencontrarparásitosesdeterminadode
antemanoparacadagruponuevodeanimalesqueentreacuarentena.Eneldiseñodeprogramasdecuarentenaaveceshaydesacuerdosentrelasfilosofíasque:
• Busquencontrolaroreducirlascargasparasitariasaniveles"normales"que
puedenservistosenpoblacionesdeanfibiossilvestres.O
• Quebusqueneliminartodalaevidenciadeinfecciónparasitariaantesdequelosanimalesseanliberadosdecuarentena.
Pararesolverestasdiferenciasserequiereunabuenacomunicaciónentrelos
veterinariosyelpersonaldemanejo.Algunasconsideracionesimportantesalmomentodedecidirqueenfoqueutilizarparaelcontrolparasitarioson:
• Laeliminacióndetodoslosparásitosinternosconfrecuenciaesimposibleonoserecomienda.Losnemátodosrabditiformessonnotoriamentedifícilesdeeliminarporcompleto,inclusocontratamientoantihelmíntico.Envezdetratamientosantihelmínticosprolongados,puedesermejorponerénfasisenlareduccióndecargasparasitariasatravésdeunacombinacióndetratamientosymantenimientodeunabuenahigieneenlosrecintos.
• Enlaspoblacionesdeanimalesencoloniasderesguardodestinadosaserreintroducidosalanaturaleza,puedesermejormantenerbajascargasdeparásitosconocidosporserendémicosenlapoblaciónsilvestre.Estoevitalosproblemasrespectoalaperdidaderesistencianaturaladquiridahaciaestosorganismosquepodríasernecesariaparalasupervivenciadelosanimalesdespuésdesuliberación(LylesyDobson,1993;Cunningham1996).
• Sedebeestablecerunbalanceentrelanecesidaddecontrolaroeliminaralosparásitosylosrequerimientoszootécnicosdelasespeciesanfibiassensibles.Losanimalessensiblesnotolerarantiemposdealojamientoprolongadosbajocondicionesdecuarentenaylaadministraciónreiteradademedicación(sermanejados,etc..).Laaceptacióndecargasparasitariasmenoresenestosanimalesespreferibleasometerlosauntratamientoprolongado.Elpersonalzootécnicoyveterinariodeberíallevaracabounanálisisdecosto/beneficioantesdeejecutartratamientosparasitarios.
• Esimportantediferenciarentreparásitospatógenospotenciales(porejemplo,nemátodosrabditiformes)yorganismoscomensalesqueseencuentranentractosintestinalesdeanfibios.Losprotozoosciliados,opalíneosyflagelos,sonorganismoscomensalescomunesqueporlogeneralnorequierentratamiento.
Cap.6:Cuarentena—98
Lagamadeparásitosquesepuedenencontrarenespecímenesfecalesanfibios
esdiscutidaenlasección7.7.
Examinacióndeparásitosfecalesencuarentena Larevisiónfecalparaencontrarparásitosdebellevarseacaboenlaprimerasemanadelacuarentenayunasemanaantesdeltérminodeesta.Lafrecuenciadelasrevisionesesdeterminadaporlosobjetivosdelamonitorizaciónylasnecesidadesdelosanimalesencuarentena.
• Sielobjetivoeseliminaroreducirlacargaparasitariaaunnivelpredeterminado,larevisióndebellevarseacaboantesde,ydespués,todoslostratamientosparasitariosyrepetidamentehastaqueselleguealniveldeseado.
• Sesugiereincrementarlafrecuenciadelasrevisionesparasitariascomocomplementoparalostratamientosparasitariossi:1)Larevisióndeparásitosinicialmuestraunnúmeroaltodeparásitos;2)Sidentrodelgrupodecuarentenahaymuchosanimalesenfermosodelgados;o3)Siseidentificananimalesconunagrancantidaddeparásitosenlaexaminaciónapartirdelanecropsia.
Lasmuestrasfecalesseleccionadasparalarevisióndeparásitosdebenserlomásfrescasposiblesyserrefrigeradassinoseránprocesadasparaexaminacióninmediatamente.Enlasección7.7puedeencontrardetallesdelastécnicasdelaboratorioparalaexaminaciónenbuscadeparásitosymicrofotografíasdehuevecillosdeparásitosfecalescomúnmenteobservados.
Interpretacióndelarevisiónfecalparaencontrarparásitos Elhallazgomásimportanteenlarevisiónfecalparaencontrarparásitossonlosnemátodosrabditiformes.Estosincluyenalgusanopulmonaranfibio,Rhabdiassp.,yalosparásitosintestinales,Strongyloidesspp.Estosparásitosposeenunciclodevidarápidoydirectoquepuedellevarasuperinfeccionessilacargaparasitarianoesmitigada.Losnemátodosrabditiformeshansidoidentificadoscomounadelasmayorescausasdemorbimortalidadenanimalesquehaningresadoacautiveriorecientementeparasuusoencoloniasderesguardo(Leeycolaboradores,2006;Pessier,200(;Gagliardoycolaboradores,2008). Losanfibiosquepresentenevidenciadeinfeccionesdenemátodosdetiporabditiformeensuexamenfecaldeberíansertratadosencuarentena.Ademásdeltratamientoconantihelmínticossedebeprestarcuidadosaatenciónalahigienedelrecinto(verlasección8.4.)
• Comoyasehaseñalado,laeliminacióncompletadelasinfeccionesdenemátodosrabditiformesesmuydifíciloimposible.Esmásrealistareducirla
Cap.6:Cuarentena—99
cantidaddeparásitosyevitarintroduciranimalesgravementeinfectadosapoblacionescautivasanfibiasestablecidas.
• Usarunsistemadecalificacióncualitativaparalacantidaddehuevosdeparásitospuedeayudaradeterminarsilosnivelesparasitarioshandisminuidoantesdesalirdecuarentena.Antesdeserliberadosdecuarentena,losanimalesdeberíantenerunnúmerobajodelarvasdeohuevecillosdenemátodos(porejemplo,menosde1huevoolarvadenematodopor2o3camposmicroscópicosdebajoaumentoenunaexaminaciónfecaldemontajeenfresco)
6.10PRUEBASYTRATAMIENTOPARAHONGOSQUITRIDIOS Loshongosquítridosdeanfibios(Batrachochytriumdendrobatidis"Bd"yBatrachochytriumsalamandrivorans""Bsal")sonunacausaimportantedeladisminuciónlocalyglobaldepoblacionesdeanfibios.Elhongoquítridoesunproblemaimportanteparalosanfibioscautivos.Aunquealgunasespeciesuotrasetapasdevidavulnerablespuedansucumbiralaquitridiomicosisduranteunperíododecuarentenarutinario,otrasespecies,sinembargo,podríanpresentarinfeccionesdebajonivelo"subclínicas"conBdoBsalquenosonevidentesenlosexámenesclínicosoenlosprocedimientosrutinariosdenecropsia.Losanimalesinfectadossubclínicamentepodríanactuarcomounafuentedeinfecciónparalasespeciesvulnerables,porloquedebeintentarsedetectary/otrataraestosanimalesantesdeintroducirlosacoleccioneszoológicasoacoloniasderesguardo. AlgunassituacionesoespeciesquepuedenserdeespecialpreocupaciónrespectoalaintroduccióndeBdoBsalaunacoleccióndeanfibiosson:
• Animalesobtenidosrecientementedelanaturaleza.• Animalesadquiridosdeotrascoleccionesdeanimalescautivosodistribuidores
comerciales.• EspeciesdelasquesesabequecomúnmentedesarrollaninfeccionesdeBd
subclínicas.Algunosejemplossonlasranastoroamericanas(Lithobatescatesbeianus),ranasleopardo(Lithobatespipiens),tritonesorientales(Notophthalmusviridescens),salamandratigre(Ambystomatigrinum),ajolotes(Ambystomamexicanum),salamandrasamericanasgigantes(Cryptobranchusspp.),ranaafricanadeuñas(Xenopuslaevis),ydendrobátidosadultos.
• EspeciesconocidaspordesarrollarinfeccionesdeBsalsubclínicas.Algunosejemplossonlostritonesdevientredefuegojaponeses(Cynopspyrrhogaster),eltritóndevientredefuegodeChuxiong(Cynopscyanurus)ylasalamandradeTamDao(Paramesotritondeloustali)(Martelycolaboradores,2014).
• Sedebetenerespecialcuidadocuandoestéconsiderandoliberarrenacuajosdecuarentena,dadoqueestospuedenalbergarBdaunnivelsubclínicoensuspiezasbucalesqueratinizadas,nodesarrollandoenfermedadesclínicashastaquesehayacompletadolametamorfosis.LasinfeccionesBdenrenacuajospor
Cap.6:Cuarentena—100
logeneralpuedenserdifícilesdediagnosticarporlasbajascantidadesdeagentespatógenosquepuedenestarenlaspiezasbucales(peroveaaHyattycolaboradores,2007).Losmétodosdetratamientosantimicóticossegurospararenacuajosnoseencuentranampliamentedisponibles.
• LasinfeccionesBsalnohansidoregistradasenlarvasdesalamandras.Estosejemplosnoestáncompletosynosepuedeconfiarsoloenellosparadeterminaromitigarlosriesgos.AlgunasmedidasquesepuedenaplicarparadetectarBdomitigarelriesgodeinfeccionesdeBdenlosanfibiosencuarentenason:
• Necropsiasehistopatologíasrutinariasdetodoslosanimalesquemueran.LahistopatologíacutáneadetectaralesionescaracterísticasyorganismosBdsielanimalmuriódequitridiomicosis(vealasección7.3paramásdetallesdelosmétodosdiagnósticoparaBd).LahistopatologíanosiempredetectaraalosanimalesqueseanportadoressubclínicosdeinfeccionesBd.
• Pruebasdereacciónencadenadelapolimerasa(PCR)enmuestrasdepielparadetectarADNdeBd.
• Tratamientoantimicóticoprofilácticodelosanfibiosqueentrenacoleccioneszoológicasoacoloniasderesguardo.
• Manteneralosanimalesentemperaturasentrelos17y23oC(silaespeciepuedetolerarlo)durantelacuarentenaparamaximizarelpotencialdemostrarquitridiomicosisclínica(Youngycolaboradores,2007).
LaspruebasPCRyeltratamientoantimicóticoprofilácticosonlosmétodosmásadecuadoscuandosetratadeportadoressubclínicosdeBd.Estassondiscutidasendetallemásabajo.Estosejemplosnoestáncompletosynosepuedeconfiarsoloenellosparadeterminaromitigarriesgos.AlgunasmedidasquesepuedenaplicarparadetectarBsalomitigarelriesgodeinfeccionesBsalenlosanfibiosencuarentenason:
• Necropsiasehistopatologíasrutinariasdetodoslosanimalesquemueran.LahistopatologíacutáneadetectaralesionescaracterísticasyorganismosBsalsielanimalmuriódequitridiomicosis(vealasección7.3paramásdetallesdelosmétodosdiagnósticoparaBsal).LahistopatologíanosiempredetectaraalosanimalesqueseanportadoressubclínicosdeinfeccionesBsal.
• Pruebasdereacciónencadenadelapolimerasa(PCR)enmuestrasdepielparadetectarADNdeBsal.
• Manteneralosanimalesentemperaturasentre10y15oC(silaespeciepuedetolerarlo)durantelacuarentenaparamaximizarelpotencialdemostrarquitridiomicosisclínica(Martelycolaboradores,2013).
Cap.6:Cuarentena—101
PruebasPCRparadetectarBdyBsalenlacuarentena LaspruebasPCRdemuestrasdepielparadetectarBdseencuentrandisponiblesatravésdelaboratorioscomercialesydeinvestigaciónyserecomiendafirmementecomopartedelosprocedimientosrutinariosdecuarentenaparalosanfibiosquevanaentraracoleccioneszoológicasocoloniasderesguardo.DetallesacercadelosmétodosderecoleccióndemuestrasparalasPCRdeBdylainterpretacióndelosresultadosseencuentrandisponiblesenlasección7.2LaspruebasPCRenmuestrasdepielparadetectarBsalseencuentrandisponiblespormediodelaboratoriosdeinvestigacionesysonaltamenterecomendadascomopartedelosprocedimientosrutinariosdecuarentenaparaanfibioscaudadosqueentrenacoleccioneszoológicasoacoloniasderesguardo.DetallesacercadelosmétodosderecoleccióndemuestrasparalaspruebasPCRdeBsalylainterpretacióndelosresultadosseencuentrandisponiblesenlasección7.2 LaspruebasPCRparadetectarquitridiosdeanfibiossonmuysensiblesydetectanunnúmeropequeñodezoosporas(lasetapasinfecciosasdelosBdyBsal).Apesardeesto,losresultadosfalsosnegativospuedensuceder,sobretodoconinfeccionessubclínicasdemuybajonivel.
• Unensayodeinfecciónexperimentaldemostróqueuntotalde3muestrasdepielobtenidasenocasionesdiferentesenunperíodode14díasincrementaránlaprobabilidaddedetectaratodoslosanimalesinfectadosconBd(Hyattycolaboradores,2007).
Puedeque,desdeunpuntodevistafinancieroologístico,llevaracabomúltiplespruebasPCRnoseaposibleparamuchosprogramasquemantienenanfibioscautivos.Porlotanto,elnúmerodevecesenquesepruebeacadaanimal(ogruposdeanimales)dependerádeunanálisisdecostosybeneficiosqueincluyaunaevaluaciónderiesgosparacadagrupodeanimalesqueentrealacuarentena,ydelosrecursosdisponiblesparalainstitución.SilosanimalesprovienendeunapoblaciónqueestálibredeinfeccionesdeBdoBsal(vealasección8.3),laspruebasespecíficasparadetectarelhongoquítridoanfibiopodríannosernecesarias.Delocontrario,lasrecomendacionesgeneralessonlassiguientes:
• Lleveacabopruebasenlosnuevosanimalesporlomenos1vezdurantelacuarentena.Esteenfoqueeselmejorsilosanimalesprovienendecoleccionesconunhistorialmédicoconocidoysincasosrecientementeidentificados(nomenosde1año)dequitridiomicosis.Debetenerencuentaqueunasolapruebapodríanodetectaratodoslosanimalesinfectadossubclínicamenteconelhongoquítrido.
Cap.6:Cuarentena—102
• Silosanimalesprovienendesituacionesderiesgomáselevadas,debellevaracabopruebasenestosalmenos2vecesyposiblemente3durantelacuarentena.Laprimerapruebadeberíaserenlallegadaylaspruebassubsiguientesdeberíanhacerseenespaciosdetiempoaproximadamenteigualessobreunperíodode2semanas.Algunosejemplosdesituacionesderiesgomáselevadasson:1)losanimalesobtenidosdecoleccionesconhistorialesmédicosdudososodedistribuidoresquenotengancoloniasdeanimaleslibresdeBdoBsal;2)losanimalesquevienendecoleccionesconcasosrecientesdequitridiomicosis;3)losanimalesprovenientesdelanaturalezaqueentraranacautiverio;y4)casosdecoloniasderesguardomuyvaliosasenlasqueelriesgo(porpocoquesea)deintroducirBdoBsalesconsideradoinaceptable.
• Agrupacióndelasmuestrasdeprueba.Ensituacionesdecuarentenadondegrandesgruposdeanimales,provenientesdelamismaubicaciónorecinto,debenevaluadosparadetectarinfeccionesBdyBsal,podríaserposiblereducirloscostosgeneralesdelaspruebasPCRsilasmuestrassonobtenidasdeanimalesindividuales,peroselepidelaboratoriodediagnósticosquelasagrupetodasenlamismapruebaPCR.Lasdesventajasdeagruparmuestrassondiscutidasenlasección7.3
• SilaspruebasPCRparadetectarBdoBsalnoseencuentrandisponiblesonopuedenrealizarse,podríaconsiderarseeltratamientoprofilácticodelosanimalesentrantesconmedicinasantimicóticas(vea"Tratamientoprofiláctico"másabajo)oeltratamientoporcalorcuandoseaapropiado(Blooiycolaboradores,2015a).
InterpretacióndelosresultadosdelaspruebasDetallesacercadelainterpretaciónderesultadosnegativosparaBddepruebasPCRseencuentranenlasección7.3Paratomardecisionesrespectoalaliberacióndeanimalesdelacuarentena,sedebenconsiderarlossiguientesaspectos:
• SiencualquiermomentodelaspruebasllevadasacaboenlacuarentenaseidentificanaanimalesPCRpositivos,estosdeberíansertratadosconmedicaciónantimicótica(veaTratamientoprofilácticomásabajo).EnelcasodequesedetecteBsal,eltratamientoporcalorpodríaserunaopciónsiemprequeestenoexcedalatoleranciatermaldelaespeciequeestásiendotratada(Blooiycolaboradores,2015b).DebetenerencuentaquelostratamientosfallidospuedenocurriryestépreparadoparavolveraprobarpormediodePCRalosanimalesantesdeconsiderarliberarlosdelacuarentena.
• Sialgunos,peronotodos,delosanimalesdeungrupoenunahabitacióndecuarentenaresultanserPCRpositivos(osienlanecropsiaseconfirmaquelas
Cap.6:Cuarentena—103
muertesdelgruposonacausadequitridiomicosis),TODOelgrupodebeserconsideradoinfectadoconBd/Bsalsinimportarlosresultadosindividualesdecadaanimal.Elgrupodeberásertratadoconmedicaciónantimicótica(otratamientoporcalorenelcasodeBsal,cuandoseaapropiado)ydebeserprobadodenuevoantesdeserliberadodecuarentena.
Encualquiercaso,elperíododecuarentenadeberáserextendidosiseidentificaBdoBsalenungrupodeanimalesencuarentena,estoparaintentardisiparlainfecciónyacomodareltiemponecesarioparahacerpruebasdeseguimiento.
TratamientoantimicóticoprofilácticoparaBd EltratamientoprofilácticodeanfibiosencuarentenaconmedicaciónantimicóticatalcomoitraconazolesusadocomounaalternativaparalaspruebasPCRrutinariasoenconjuntoconlaspruebasPCR.Detallesdeltratamientoantimicóticoseencuentrandisponiblesenlasección8.1.EltratamientoprofilácticorutinarioparaBdserecomiendasoloenlassiguientessituaciones:
• LosanimalesfuenteseencuentraninfectadosconBdohayunaalta
probabilidaddequeloestén.Unejemplodetalsituaciónsonlosanimalesrescatadosdelanaturalezaytraídosacoloniasderesguardoporunrealosupuestobrotedequitridiomicosis(Gagliardoycolaboradores,2008).
• LaspruebasPCRnoestándisponiblesporunavariedadderazonescomolaubicación(zonasruralesopaísesendesarrollo)oporrazonesfinancieras.
• LanecropsiaolapruebaPCRidentificóunainfecciónBdenungrupodeanimalesalojadosenunahabitacióndecuarentena.Enestassituaciones,elgrupocompletodebeconsiderarseinfectadoconBdysertratado.
Lasposiblesdesventajasdeltratamientoprofilácticorutinarioquedebensertomadasencuentaalmomentodeplanearlosprocesosdecuarentenason:
• Eltratamientomediantemedicaciónantimicóticanosiempreestoleradobienypodríasignificarunafuenteimportantedeestrésparalosanimalesqueseestánadaptandoaunnuevoentornodecautiverio.
• Eltratamientoantimicóticonoes100%efectivo.Ocasionalmente,serequieren2omásciclosdetratamientoparaeliminarlainfecciónBddeungrupodeanimalesporcompleto.Enestoscasos,llevaracabosolo1ciclodetratamientopodríadarunfalsosentidodeseguridad,loquepuederesultarenlaintroduccióndeanimalesinfectadosconBdaunacolección.
Cap.6:Cuarentena—104
TratamientoantimicóticoprofilácticoparaBsalActualmente,lostratamientosantimicóticosparaBsalsoloestánsiendodesarrolladosysolosehanutilizadoparatratarlainfecciónBsalenunaespecie(Blooiycolaboradores,2015b).EltratamientoprofilácticorutinarioparaelBsalpuedeserconsideradoenlassiguientessituaciones:
• LosanimalesfuenteseencuentraninfectadosconBsalohayunaalta
probabilidaddequeloestén.Unejemplodetalsituaciónsonlosanimalesrescatadosdelanaturalezaytraídosacoloniasderesguardoporunrealosupuestobrotedequitridiomicosis(Blooiycolaboradores,2015b)
• LaspruebasPCRnoestándisponiblesporunavariedadderazonescomolaubicación(zonasruralesopaísesendesarrollo)oporrazonesfinancieras.
• LanecropsiaolapruebaPCRidentificóunainfecciónBsalenungrupodeanimalesalojadosenunahabitacióndecuarentena.Enestassituaciones,elgrupocompletodebeconsiderarseinfectadoconBsalysertratado.
Lasposiblesdesventajasdeltratamientoprofilácticorutinarioquedebensertomadasencuentaalmomentodeplanearlosprocesosdecuarentenason:
• ProtocolosdetratamientoparaelBsalestánsiendodesarrolladosactualmentey,hastalafecha,solociertascombinacionesdeantifúngicoshantratadolainfecciónBsalconéxitoenunaespeciedesalamandra(Blooiycolaboradores,2015b)
• Eltratamientomediantemedicaciónantimicóticanosiempreestoleradobienypodríasignificarunafuenteimportantedeestrésparalosanimalesqueseestánadaptandoaunnuevoentornodecautiverio.
• Eltratamientoantimicóticonoes100%efectivo.SesabemuypocoacercadeltratamientodelasinfeccionesBsalensalamandrasy,actualmente,nosesabemuchodelaeficaciadeestostratamientos.
6.11PRUEBASPARADETECTARINFECCIONESRanavirus Lasinfeccionesranavirussonunacausaimportantedeeventosdemortalidadmasivaenlaspoblacionesdeanfibiossilvestres,perosoloocasionalmentehayreportesdeinfeccionesranavirusenanfibioscautivos(Millerycolaboradores,2008;Pasmansycolaboradores,2008).Losbrotesreportadosenanimalescautivoshansidopequeñosolimitadosaunasolaespecie.
• Nosesabesilainfeccióntieneunabajaprevalenciaenlosanimalescautivos;silasinfeccionesenlosanimalescautivoshanpasadodesapercibidasporqueloshallazgosclínicosypatológicossesuperponenconaquellosdeotrasenfermedadesinfecciosasenanfibios(porejemplo,el"síndromedepierna
Cap.6:Cuarentena—105
roja");osilasinfeccionesranavirusquehanocurridoenlaspoblacionescautivassonderelativamentebajavirulencia.
• Losranavirussonungrupograndedevirusrelacionados,cadaunoconuncomportamientobiológicoúnico.Estasdiferenciasensucomportamientoyvacíosenelconocimientodelabiologíadelosranavirusinterfierenconeldiseñodeprogramasdecontrolydepruebasparalascoleccionescautivas.
• Infeccionessubclínicasderanavirusyahansidodocumentadas(Brunnerycolaboradores,2004;Robertycolaboradores,2007),peronoestáclarosilasinfeccionessubclínicassontransitoriasopersistenporperíodoslargosdetiempo.Esposiblequeanimalesinfectadosaunnivelsubclínicopuedanservircomounafuentedeinfecciónparalosanimalesnoinfectados,sinembargo,estoaúnnohasidodocumentadosencoleccionesdeanfibioscautivos.
• Laspreocupacionesmásimportantesencuantoalosranavirusenlosprogramasdeanfibioscautivossonqueuneventodemortalidadsignificativoocurraenunaespecievaliosa(oalolargodeunacoleccióndeanfibios),oquepoblacionescautivasinfectadassubclínicamentepuedanservircomoportadoresdenuevosranavirusparapoblacionessilvestresnoinfectadas.
Pruebasparadetectarranavirusenlacuarentena
Laspruebasrutinariasenanimalessaludablesvivosparadetectarinfeccionesranavirusenlacuarentenanosonrecomendadas.Adiferenciadelaspruebasparadetectarelhongoquítridodeanfibios,laspruebasPCRdisponiblesparalosranavirusnohansidovalidadasparaprobarsedeformaviableenanfibiosvivosparadetectarinfeccionessubclínicas.
• Lafaltadepruebassegurassignificaqueexistenimportantesdesventajaspara
laspruebasrutinariasenanimalessaludables.Estasincluyenloscostosdelaspruebas(conbeneficiosinciertos),elestrésresultantedelarecoleccióndemuestrasenlosanimalesencuarentenaylaposibilidaddedesarrollarunafalsasensacióndeseguridadsilosresultadosdelaspruebassonnegativos.
• Debeestaraltantodequealgunoslaboratoriosestándispuestosahacerpruebasenlasmuestrasapesardesuhabilidadparainterpretarlosresultadosconexactitud.
• Amedidaquesehacenavancesenelentendimientodelaspruebasdediagnósticoybiológicasdelosranavirus,esprobablequelasrecomendacionesvayancambiando.
Sisedeseahacerpruebasenlosanimalesencuarentena.Lasmejoresmuestras
quepuedepresentarsonmuestrasdetejidorecolectadasennecropsiasdeanimalesquehayanmuertoencuarentenay/otejidosrecolectadosdeanimalesenelgrupodecuarentenaquehayansidosacrificadosespecíficamenteconpropósitosderevisiónenbuscadeenfermedades.Enlasección7.4seencuentrandisponiblesdetallesacercadelaspruebasdediagnósticopararanavirus
Cap.6:Cuarentena—106
Actualmente,laconsideraciónmásimportanteenunasituacióndecuarentenaesevitarintroduciranimalesacoleccionesqueseencuentrenclínicamenteenfermasconunainfecciónranavirusactivayclínicamentesignificativa.Algunaspropuestasparaminimizaresteriesgoincluyen:
• Larevisióndelhistorialmédicodelosanimalesdelapoblacióndeorigen.Si
hanocurridomuertesoenfermedadesrecientes(6mesesomenos)enlapoblacióndeorigen,lascualeshansidocausadasporinfeccionesranavirus,elriesgodeintroduciranimalesenfermosserámásalto.Elhistorialmédicodelapoblacióndeorigentambiéndeberíaserrevisadoenbuscadesíntomasclínicosoresultadosdelanecropsiaquepuedansugerirunainfecciónranavirus.Estosincluyen:
o hemorragiaenmúltiplestejidos,sobretodoenlapiel("síndromedepiernaroja")yeneltractogastrointestinal.
o necrosisenelhígado,riñón,tractogastrointestinalotejidohematopoyético.
o lesionesproliferativasoulcerativasenlapiel.
Debeserreconocidoqueestossíntomasyhallazgosclínicossonalaveznoespecíficosycomunesenlosanfibioscautivos.Siseidentificansíntomasclínicosolesionessospechosas,puedeintentarconfirmarodescartarunainfecciónranavirus(vermásabajo).
• Vigilanciaapartirdelanecropsiaylahistopatología(asícomoobservaciones
clínicas)paradetectarbrotesdeenfermedadesenlosanimalesencuarentenaquepresentancaracterísticaspotencialesdelasinfeccionesranavirus(vermásarriba).
• Silosbrotesdeenfermedadesy/olosresultadosdelanecropsiasugierenunaposibleinfecciónranavirus,debeusarpruebasPCRparaconfirmarodescartarlainfección.LasmejoresmuestrasparaelPCRsonlasdehígado,riñónypiel(sisepresentanlesionesenlapiel);estasmuestrasdebenserrecolectadasenlanecropsiayluegoseralmacenadascongeladas.Sinoseencuentrandisponiblestejidoscongelados,podríaserposiblellevaracaboelPCRusandotejidosquehayansidoembebidosenparafinaparahistopatologías.Lasmuestrastambiénpuedenextraersedeanimalesvivosclínicamenteenfermos,estasmuestraspuedenserhisoposcloacalesofaríngeos,biopsiasdetejidossangre.Enlasección7.4seencuentrandisponiblesdetallesacercadetécnicasderecoleccióndemuestrasparaPCRderanavirus.
Interpretacióndelaspruebasdediagnósticoparaelranavirus
Siseidentificanenfermedadesclínicasomuertesquepuedanseratribuidasaunainfecciónranavirusdentrodeungrupodeanimalesencuarentena,elperíododecuarentenadebeserprolongadoindefinidamente.Ladecisiónacercadeladisposición
Cap.6:Cuarentena—107
delosanimalesrestantesdespuésdeunbrotedependerádemúltiplesfactores,talescomo:
• Laimportanciadelosanimalesinfectadosoexpuestosparalapoblacióncautivaylosesfuerzosderecuperacióndelaespecie.Si,durantelacuarentena,seidentificaunaenfermedadatribuidaalainfecciónranavirusenunaespeciecomúnquevaaentraraunacolecciónconfinesdeexhibición,podríaconsiderarlaeutanasiadelosanimalesrestantes.Siunaenfermedadatribuidaaunainfecciónranavirusocurreenungrupovaliosodeanimales(porejemplo,unaespecieenpeligrodeextinciónyanimalesindividualesquesonconsideradoscrucialesparaunprogramaderecuperaciónopoblaciónderesguardo),sepuedenconsideraresfuerzosadicionalesconlaesperanzadequeeventualmentelosanimaleseliminencualquierrastrodeinfeccionessubclínicas.Losanimalesenestasituacióndebensermanejadoscomounapoblaciónseparadadelapoblaciónderesguardoprimariahastaqueunavigilanciadeenfermedadesalargoplazodemuestrequeseencuentrancompletamentelibresdeinfeccionesranavirus.Vealasección8.2.
• Incidenciayduracióndeinfeccionesranavirussubclínicas.Laposibleduracióndeinfeccionesranavirussubclínicasesimpredecibleydependedemúltiplesfactorestalescomolaespeciehuésped,laespeciederanavirusyotrasinfluenciassinidentificar.XenopuslaevisinfectadosexperimentalmenteeliminaronlainfeccióndeVirusdelaranatipo3(untipoderanavirus)entansólo20días,sinembargo,ungrupodesalamandrastigreinfectadassubclínicamenteconelvirusAmbystomatigrinummostraronevidenciadeinfecciónporunmínimode6meses(Brunnerycolaboradores,2004;Robertycolaboradores,2007).Silasinfeccionessubclínicaspuedensereliminadasdeformanatural,unperíododecuarentenaextendidopuedesertodolonecesarioparalaliberaciónseguradelosanimalesencuarentena.Sinembargo,comofuemencionadoanteriormente,ladeteccióndeinfeccionessubclínicasesproblemáticaycualquierdecisiónquesetomeparaliberaraanimalesdecuarentenarequeriríaunacuidadosaevaluaciónderiesgos.
• Losresultadosdelavigilanciadeenfermedadesdeseguimientoduranteunperíododecuarentenaextendido.Algunaspruebasquepuedenserútilesson:
o Engruposgrandesdeanimales,sedebeconsiderarsacrificar(eutanasia)aalgunosmiembrosdelgrupodecuarentenaparallevaracabopruebasdediagnóstico.Enestasituación,elsacrificioesmásútilparadetectarinfeccionessubclínicaspersistentessiserealizavariassemanasdespuésdequelasenfermedadesclínicasomuertescausadasporlainfecciónranavirussehayandetenido.
o Realicenecropsiasehistopatologíasentodoslosanimalesquemueranoqueseansacrificadosconelpropósitodehacerunavigilanciadeenfermedadesparabuscarlesionescaracterísticasdelasinfeccionesranavirus.
Cap.6:Cuarentena—108
o PruebaPCRdehígadoyriñónparabuscarranavirus,estosdebenserrecolectadosenlanecropsiadetodoslosanimalesquemueranohayansidosacrificadosparalavigilanciadeenfermedades.
o PruebaPCRdeanimalesvivos(estoesunaexcepciónalarecomendaciónpreviaquedecíaquenoserealizaranpruebasPCRenanimalesvivossanos).
• Presenciaoausenciadeinfeccionesranaviruspreexistentesenlapoblacióncautivaysilvestre.Estorequiereinformescompletosdesaluddelaspoblacionescautivasysilvestresconelpropósitodeestablecerinformaciónbásicayclara.Estaconsideraciónesespecialmenterelevanteenlaspoblacionesderesguardodeanimalesenaislamientopermanentedeunacoleccióndeanfibios.Porejemplo,enunasituaciónenlaquesesabequelaspoblacionessilvestres(=fuenteorigendelosanimalesqueseusaronparafundarlacolonia)tieneninfeccionesranavirusendémicasquesucedennaturalmentedentrodelrangodelaespecie,podríatomarladecisióndemanejarlasinfeccionesranavirusenlapoblacióncautivaaislada.Estadecisiónescomplicadaydeberíasertomadacomopartedeunplangeneraldegestiónparalaespecieencuestión.Algunosfactoresatenerencuentason:1)Verificarquelasespeciesespecíficasderanaviruspresentesenlanaturalezayenlapoblacióncautivaseanlasmismas(EsteprocesoesmáscomplicadoquelaspruebasPCRnormales,vealasección7.4;2)Determinarlasprobabilidadesdequelosranaviruspresentesenlaspoblacionessilvestresycautivasrealmenteseanvirusendémicosynovirusexóticosquehansidointroducidosenlapoblaciónsilvestre.
Laconfianzaenlosresultadosyelvalordelavigilanciadeenfermedadesparalosranavirusincrementasegúnelnúmeroylacalidaddelasmuestrasdisponiblesalolargodeltiempoparalaspruebasdediagnóstico.
6.12PATOLOGÍASCLÍNICAS(HEMATOLOGÍAYBIOQUÍMICACLÍNICA) Durantelacuarentena,puederecolectarinformacióngeneraldepatologíasclínicasparaincrementarnuestroentendimientodelafisiologíayecologíanormaldediferentesespeciesanfibias.
• Lainterpretacióndelahematologíaylabioquímicaclínicaenlosanfibiosseencuentraensuinfancia,ylosresultadosinmediatosdelosdiagnósticosdecualquierpruebasonlimitadosytienenpocaimportancia.
• Lainformaciónobtenidapodríaserútilenelfuturoparamejorarladeteccióndeenfermedadesylosesfuerzosconservacionistasgenerales.
• Siserecolectainformacióndepatologíasclínicas,debeprocurarsederegistrarcuidadosamentelosmétodosdelaboratorioutilizadosparaobtenerlainformaciónytodalainformaciónnumérica.
Cap.6:Cuarentena—109
Siesviable,basadoenfactorestalescomoeltamañodelanimal,lasfinanzasyladisponibilidaddeunlaboratoriodepruebasapropiado,podríallevaracabounpanelhematológicoybioquímicocompletoencadaanimaldurantelacuarentena.
• Laextraccióndesangresesuelellevaracaboduranteelexamenfísicoenla
cuarentena.• Porrazonesdeseguridad,noserecomiendaextraersangredeanimalesque
pesenmenosde50gramos.Cuandoseangrupos,puedeextraerlasangredeunnúmeroderepresentantesdelgrupo(de10%a30%delgrupo).
• Hastaquenuestroentendimientodelahematologíaanfibianormalybioquímicaclínicamejore,lainterpretacióndelainformacióndelainformacióndeberíaserprudenteyserbasadatantoenlaexperienciaclínicacomoenlassugerenciasdepublicaciones(WrightyWhitaker,2001).Unavariedaddefactorescomoelestadodehidratación,laestacionalidadyelsexodelanimalpuedeninfluenciarelresultadodelosparámetroshematológicosybioquímicosaungradomásaltoqueelobservadoenotrosanimalesvertebrados.
• Actualmente,noexistenrecomendacionesparalosparámetroshematológicos/bioquímicosquedeberíanserutilizadoscomoherramientadeexclusiónparaprevenirlaliberacióndeunanimaldecuarentena.Podríaconsiderarincrementosodisminucionesenpruebasclavecomoenlaalbúmina,conteodeglóbulosblancos,etc.,parahacerunasupuestaestimaciónyprevenirlaliberacióndecuarentenadeunanimaldelquesesospeche.Sinembargo,dadoqueelnúmerodeanimalesnormalesenelrangodereferenciaparaunaespecieesmuybajo,hacercualquierinterpretaciónestadísticaesclínicamenteinútilynoaconsejada.
Enlasección7.8seencuentrandisponiblesdetallesacercadelarecoleccióndemuestrasyelanálisisdeinformacióndepatologíasclínicas.6.13OTRASENFERMEDADESINFECCIOSASQUESEENCUENTRANENCUARENTENA
Bacteriasaerobias(porejemplo,Aeromonashydrophila)Lasinfeccionesconunavariedaddebacteriasgramnegativas,incluyendo
AeromonashydrophilaoPseudomonasspp.,sehanvistoimplicadascomolacausadeladermatosepticemiabacterial(síndromedepiernaroja)enanfibioscautivos(Taylorycolaboradores,2001).
• Haypocosoningúnbeneficioenllevaracabocultivosbacterialesrutinariosenanfibiosaparentementesaludablesencuarentena.LasbacteriascomolaAeromonasnormalmentehabitanentornosacuáticosyseencuentranfrecuentementeaisladasdelosanimalessaludables.
• Loscultivosbacterianossonútilesparalagestiónclínica(porejemplo,patronesdesusceptibilidadantibiótica)delosanimalesenfermosencuarentena.
Cap.6:Cuarentena—110
• Elcontroldelasinfeccionesbacterianasdelosanfibiosencuarentenasecentraenreducirlosfactoresqueconfrecuenciacontribuyenaldesarrollodeestas,talescomoelestrésdelosenvíosrecientes,elhacinamientoobajacalidaddelagua(porejemplo,queestaposeaaltascargasorgánicas).
Enterobacterias(porejemplo,Salmonela)
Comolosreptiles,losanfibiosavecesportanenterobacteriastalescomolaSalmonelaspp.queposeenpotencialzoonótico(Taylorycolaboradores2001;Centrosparaelcontrolylaprevencióndeenfermedades,2010).
• Noserecomiendallevaracaborevisionesrutinariasparapatógenosentéricosnitratamientosdeanimalesinfectados.Encambio,debenexistirprácticashigiénicasparareducirlasposibilidadesdequeloscuradoresseinfectenconenterobacteriasdeorigenanfibio.
• Pautasparaprácticasdehigieneseencuentrandisponiblesenlíneaen:o CompendiumofMeasurestoPreventDiseaseAssociatedwithAnimalsin
PublicSettings2009—CentersforDiseaseControlandPrevention.www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/rr5805a1.htm
o SalmonellaBacteriaandReptiles—AssociationofReptileandAmphibianVeterinarians.www.arav.org/ECOMARAV//timssnet/arav_publications/SalmonellaOwner.pdf
ChlamydophilaLasinfeccionesdeChlamydophilapsittaci,Chlamydophilapneumoniae,yotros
organismosdetipochlamydiaestánsiendoreconocidoscadavezmásenanfibioscautivosycriadosenlibertad(CorsaroyVenditti,2004;Blumerycolaboradores,2007).
• Lachlamydophilosispuedepresentarsedevariasformas,incluyendounamuerte
inesperadaounasimilitudal"síndromedepiernaroja".• Algunaslesionesquepuedenaparecerenlahistopatologíasonlanecrosisyla
inflamaciónnosupurativaentejidostalescomopulmón,riñón,hígadoycorazón.Enlamayoríadeloscasos,sisellevaacabounahistopatologíadelostejidosafectados,sepodránobservarinclusionescitoplasmáticasbasófilasintracelularesfinamentegranulares.
• LaconfirmacióndeldiagnósticoesllevadaacabomedianteinmunohistoquímicausandoanticuerposmonoclonalesantiLPSChlamydiaceaeespecíficosalafamiliaopormediodereacciónencadenadelapolimerasa(PCR)paralaclamidia16sRNAylosgenesompA.Noserecomiendanlaspruebasrutinariasenlosanimalessaludablesencuarentena.Silachlamydophilosisesdetectada,elperíododecuarentenadeberíaextenderse
paraelrestodelosanimalesdelgrupoconelpropósitodemonitorearparaeldesarrollo
Cap.6:Cuarentena—111
desíntomasclínicosdeenfermedades.Eltratamientodelrestodelosanimalesconantibióticosdelgrupodelastetraciclinaspuedeserconsiderado(Taylorycolaboradores,2001).PuedeintentarllevaracabopruebasPCRusandohisoposdecloaca,peroestaspruebasnohansidovalidadasconestepropósitoylarevisiónrutinariadelosanimalessaludablesnoesrecomendada.
Micobacteriosis
LasinfeccionesconbacteriasacidorresistentesenelgéneroMycobacterium,incluyendoM.fortuitum,M.marinum,M.chelonaeyM.xenopi,entreotros,sonunproblemacomúnenlascoleccionesanfibiascautivas.
• Estosorganismossonhabitantesubicuosdelosambientesacuáticos(Primmy
colaboradores,2004).• Estasmicobacteriassuelenserpatógenosoportunistasqueaparecenpor
factorestalescomolesionescutáneas,malcuidadozootécnicooestrés.• Lasituaciónlosprogramasdecautiveriopodríasersimilaralaregistradaenaves
dezoológico,dondelafuenteoriginaldelainfecciónfueunareservamedioambientalenvezdelatransmisióndeanimalaanimaldeunorganismoparticular(Schrenzelycolaboradores,2008).
• Losanimalesgravementeinfectadospodríanactuarcomofuentedeinfecciónparalosotrosanimalesdeungrupo,dadoqueestospuedendesprenderungrannúmerodeorganismos,loqueexcederíalosniveles"normales"deexposiciónaestasbacteriascomparadasconloshábitatsacuáticos.
• Elobjetivodelassituacionesdecuarentenanoesdetectaracadaanimalconunainfecciónsubyacentepormicobacterias,sinoqueesevitarlaintroduccióndeanimalesconmicobacteriosisvisibleclínicamenteimportantes(quetienenlasmásaltasprobabilidadesdedesprenderungrannúmerodeorganismos)aunacoleccióndeanfibios.
Lossíntomasclínicosdelamicobacteriosisporlogeneralsonrelacionadosala
piel,estosincluyenúlcerascutáneas,abscesos,nóduloscutáneosehinchazónenlasextremidades(celulitis)quenoseresuelvencontratamientocomplementariooterapiasantibióticasoantimicóticas.
• Ladiseminacióndeórganosvisceralescomoelhígadoyelriñónsellevaacabo
frecuentemente.Enlasinfeccionesdiseminadassepuedenobservarsíntomasnoespecíficostalescomolapérdidadepesoapesardebuenapetitodelanimal.
• Lasinfeccionespuedenaparecercomobrotesenunapoblación,peroporlogeneralestasaparecencomoeventosesporádicoslimitadosaunsoloanimal.
Eldiagnósticodemicobacteriosisesproblemáticoenlosanimalessinlesionescutáneasobvias.
Cap.6:Cuarentena—112
• Lasrevisionespormediodetincionesacidorresistentesdeportaobjetosconheces,mocoorofaríngeoocapasdelodocutáneasnopuedenpredecirenfermedadesenanimalesquesuperficialmentesevensaludablesynoserecomiendan.
• Asimismo,laspruebasPCRseencuentrandisponiblesparalasmicobacteriasambientales,perosuutilidadparallevaracabodiagnósticosconfiablesbasadosenmuestrascomohisoposdecloacaocutáneos,enanimalessuperficialmentesaludables,esdesconocida(existenungranpotencialpararesultadosfalsosnegativosofalsospositivos).
• Siseobservanlesionescutáneas,unaexaminacióncitológicadelaspreparacionesoaspiracionessuperficialespormediodeunatinciónacidorresistentepuedeentregarudiagnósticorápido(Pessier2007).Lasbiopsiasehistopatologíasdelaslesionescutáneasconunatinciónacidorresistentetambiénsonundiagnóstico.
Paraelmanejodelamicobacteriosisenlacuarentena:
• Reviseelhistorialmédicodelosanimalesdelapoblacióndeorigen.Sihan
habidocasosrecientes(dentrode3a6meses)demicobacteriosis,extiendaelperíododecuarentena(90días)paraobservaralosanimalesentrantesybuscarlesionescutáneas,evidenciadepérdidadepesocrónicauotrossíntomasnoespecíficosdemalasalud.
• Sienungrupodecuarentenaseidentificaaanimalesconmicobacteriosis:o Coloquealrestodelosanimalesdelgrupoenunperíododecuarentena
extendido(90días)paraobservarlosenbuscadelesionescutáneasoevidenciadepérdidadepesocrónicauotrossíntomasnoespecíficosdemalasalud.Losanimalesenfermosquemuestrenevidenciadeinfeccióndebenserremovidosytrasladadosaunrecintodeaislamientoseparadoosedebeconsiderarsusacrificioyeutanasia.Estaopciónesmásdeseablesobretodoenanimalesdegranvalorcomoporejemplounaespecieenpeligrodeextinciónqueescríticaparalacrianzadentrodeunacoloniaderesguardo.
o Silosanimalesnosontanvaliosososinoesposibleextenderelperíododecuarentena,podríaconsiderarselaeutanasiadelosanimalesdirectamenteexpuestos(delamismajaula)yaseasipresentanonopresentanseñalesdeestarenfermos.
• Noliberedelacuarentenaaanimalesconlesionescutáneaspormicobacteriasoquepresentenotrasposiblesseñalesdemicobacteriosis.Porlogeneral,eltratamientodelamicobacteriosisanfibianohasidoexitosoyserecomiendalaeutanasiadetodoslosanimalesquepresentensíntomasclínicosdeenfermedad.Eltratamientopuedeserconsideradounmétododerescateparaanimalesmuyvaliosos.
Cap.6:Cuarentena—113
• Losanimalespertenecientesaungrupoconcasosconfirmadosdemicobacteriosispuedensercandidatosparasuliberacióndecuarentenasidespuésde90díasdeobservaciónyanopresentanlesionescutáneasuotrossíntomasclínicosquepuedansercausadosporunainfecciónpormicobacterias.
o Estonogarantizaquelosanimalesesténlibresdeunainfecciónpormicobacterias,peroreduceelriesgodeintroduciraanimalesqueesténdesprendiendounaltonúmerodeorganismosaunacoleccióndezoológicooaunacoloniaderesguardo.
o Alprincipio,tratedeintroduciraestosanimalesenrecintosenlasquenohayamuchosanimalesconlosquetengacontactodirecto(enlamismajaula).
• Finalmente,lainfecciónconlamicobacteriaambientalhasidoconsideradaunazoonosispotencial.
o Elriesgogeneraldelatransmisióndeestosorganismosdesdeanimalesahumanosesbajo,yalgunasmedidasútilesquesepuedentomarparaevitarlainfecciónhumanason:1)Elusodeguantesduranteelmantenimientodelosrecintosoduranteelmanejodelosanimalesparaminimizarlasposibilidadesdelainoculacióndeorganismosenheridascutáneas;y2)Evitarlosaerosolesdeaguaolosmaterialesambientales(comoelcontenidodelossistemasdefiltraciónbiológicos).Enesteaspecto,elusodemascarillasoprotectoresfacialespuedeserútil.
Infeccionesmicóticasydemohosacuáticos Unagranvariedaddeinfeccionesmicóticassistémicasocutáneasseproducenenanfibioscautivos.LasinfeccionesmáscomunessondermatopatíasmicóticascausadaspororganismostalescomoBasidiobolusranarum,Mucorsp.,Fusariumsp.ymohosacuáticoscomoSaprolegenia(Taylor,2001;Pessier,2003).
• Casitodoslosdiversoshongosqueafectanalosanfibiossonubicuosenelmedioambienteysuelenaparecercomoinfeccionessecundarias(enlugardeactuarcomopatógenosprimarios).
• Eliminarcompletamenteaestoshongosdelosrecintosnoespráctico.Laimportanciayaceenlasprácticaszootécnicasparareducirelestrésdelosanimales,proveerunmedioambientelibredeexcesosdedesechos(comida,heces,materialendescomposición)quepuedanfacilitarlossustratosnecesariosparaelcrecimientoexcesivodehongosymejorarlacalidaddelagua(porejemplo,laexposiciónalamoniaco).Todosestosfactoresambientalescontribuyenaldesarrollodeinfeccionesmicóticas.
Eldiagnósticodelasinfeccionesmicóticasenlacuarentenasellevaacaboatravésdelaobservacióndirectaeinvestigacióndediagnósticodelaslesionescutáneas(porejemplo,raspadocutáneoparalacitologíaounabiopsiacutánea)ounahistopatologíadelosanimalesfallecidos.
Cap.6:Cuarentena—114
• Cultivoscutáneosydelosórganosvisceralesafectadospuedenayudara
determinarlaespeciedelhongoconelqueestáinfectadoelanimal.Lainterpretacióndeloscultivospuedeserproblemáticadebidoalaincertidumbredesielhongocultivadosoloseencuentraenelmedioambienteosiestáenfermandoaunanimalenparticular.
• Eltratamientoesdoble:1)Tratealosanimalesafectadosconmedicamentostópicosy/odeadministraciónparenteralcomoelitraconazol;y2)Mejorelasprácticaszootécnicasparaincrementarlacalidaddelagua,reducirlaexposiciónmicóticayreducirelestrésdelosanimales.
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Cap.7:Pruebasdediagnóstico—117
Capítulo7
PRUEBASDIAGNÓSTICAS
7.0INTRODUCCIÓN Elcontroldelosproblemasdeenfermedadesenlascoloniasderesguardoyreintroducciónalanaturalezaparaanfibiosdependedelosprogramasdevigilanciadeenfermedades,unaidentificaciónprecisadeestosproblemaspormediodemétodosdelaboratorioyunainterpretaciónapropiadadelosresultadosdelaboratorio.
Algunosaspectosimportantesdelavigilanciaypruebasdedeteccióndeenfermedades
son:
• Principiosdemuestreodelaspoblacionesparadetectaragentesinfecciosos(porejemplo,determinarelnúmerodeanimalesdelosquesedebenobtenermuestrasparaestarsegurosdequeunapoblaciónseencuentralibredeagentesinfecciosos).
• Evaluacióneidentificacióndeloslaboratoriosquepuedenllevarcabopruebasdediagnósticodemuestrasanfibias.
• Seleccionarlapruebadediagnósticomásapropiadaparaelagenteinfecciosodeinterésyparalasituaciónocontextoenqueseusaralaprueba.
• Recolectarelmejortipodemuestraparalapruebaquesellevaraacabo.• Interpretaciónadecuadadelosresultadosdelaspruebas(Estoessobretodo
importanteparapruebasdediagnósticomolecularo"PCR").• Usarlanecropsia(examinaciónpostmórtem)comounaimportanteherramienta
paraidentificarymanejarproblemasdeenfermedadesencoloniasanfibias(yaseadeenfermedadesinfecciosasonoinfecciosas)yparallevaracaboanálisisderiesgodeenfermedadesenprogramasdereintroducciónalanaturalezaparaanfibios.
Estecapítuloapuntaaentregarunadescripcióndeestostemaseincluye:
• Discusióndemétodos,recoleccióndemuestrasdediagnósticoeinterpretacióndelaspruebasparamétodosdelaboratoriocomúnmenteusadosparaelcontroldeenfermedadesinfecciosasenlascoloniasderesguardoparaanfibios.
• Seponeénfasisenlaspruebasdediagnósticomolecularparaagentespatógenosimportantes(porejemplo,infeccionesranaviralyhongoquítridoanfibio)ylarevisióndehecesenbuscadeparásitosfecales.
• Laexaminaciónapartirdelanecropsiasediscuteendetalleenelcapítulo9.• Unalistadelaboratoriosqueaceptenmuestrasanfibias.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—118
Seesperaqueestainformaciónrecopiladaseaútiltantoparaelpersonalenubicacionesdentrodepaísesquenoposeanapoyoveterinariodisponibleasualcancecomoparaveterinariosqueesténtrabajandoparadesarrollarprotocolosdesaludparaanfibios.7.1VIGILANCIADEENFERMEDADES Lavigilanciadeenfermedadeseslaprácticadebuscarenfermedadesconlaintencióndecontrolarlassifueranecesario.Enlosprogramasdeconservación,lavigilanciadeenfermedadesexsitu(cautivos)einsitu(poblacionessilvestres)esnecesariaparadetectarproblemasdeenfermedadesquepuedanamenazarlasostenibilidaddelaspoblacionesderesguardoyeléxitodelosprogramasdereintroducciónalanaturaleza.Dehecho,dadoquelasenfermedadesinfecciosashanjugadounpapeltanimportanteeneldeclinedemuchaspoblacionesanfibias,elcontroldeproblemasdeenfermedadesqueocurranenpoblacionesinsituesnecesarioparaeléxitolosesfuerzosconservacionistasexsituqueinvolucrenlareintroduccióndeanimalesalanaturaleza.Lavigilanciadeenfermedadesesnecesariapara:
• Detectarymitigarproblemasdeenfermedadesantesdequecauseneventosdemortalidadquepuedantenerefectosnegativosenlaspoblaciones.
• Determinarrápidamentelacausademortalidadenunapoblaciónconelobjetivodelimitarlosimpactosdelosbrotesdeenfermedades.
• Limitarelpotencialdepropagacióndeenfermedadesinfecciosas.Estoesespecialmenteimportantecuandolosanfibiossontrasladadosdesdelanaturalezaacautiverio,entreinstalacionesdecautiverioydelcautiverioalanaturaleza.
• Cuandoestéplaneandounacuarentenaoreintroducciónalanaturalezadeanfibios,recopilelainformaciónnecesariaparaelanálisisderiesgodeenfermedades.
• Detectarlasenfermedadeszoonóticaspotencialesparamaximizarlasaludyseguridaddelostrabajadoresdelaconservación.
Unalistaderecomendacionesespecíficasparacuandolavigilanciadeenfermedadesseanecesariaseencuentraenlasseccionesanterioresdeestemanualquetratandeevaluaciónderiesgos,cuarentenaybioseguridad.Lavigilanciadeenfermedadesdebeadaptarseacadaespecieanfibiaydependedefactorestalescomosusceptibilidadacadaagentepatógenodeinterés,presenciadelpatógeno,objetivosdeconservaciónalargoplazoparalaespeciebajoconsideraciónyconsideracionesprácticasdelosrecursosdisponibles.Conestoenmente,laflexibilidadypriorizacióndelosprogramasdevigilanciasonimportantes.
¿Cómosellevaacabolavigilanciadeenfermedades? Lavigilanciadeenfermedadesestádiseñadaparavigilaraunapoblaciónenbuscadeagentespatógenosnovedososytambiénparadeterminarelestadodeenfermedadesdeunapoblación,lacargadeenfermedades(prevalencia)otasadepropagacióndeenfermedades(incidencia)dentrodeesta,uotrascaracterísticastalescomomorbilidadomortalidadrelacionadasaenfermedades.Porejemplo,¿Tienelapoblaciónunaenfermedad
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—119
ono?,¿quéproporcióndelapoblacióntieneunaenfermedad?,¿existeunincrementodelnúmerodeinfeccionesnuevas?,lavigilanciapuedeenfocarseespecíficamenteenconoceragentesinfecciosososuimportancia(porejemplo,hongoquítridoanfibio),opuedeserdiseñadaparadetectarunavariedaddeproblemasdeenfermedadespotencialesydiferentes.
• Elprimerpasoesrecolectarunhistorialtantodelapoblacióndeinteréscomodelasespeciesquecoexistanconlapoblaciónenlanaturalezaodentrodeunainstalacióndecautiverio.Lainformaciónquepuedeserdeutilidadincluye:Tamañodelapoblación,estructuraporedad,origen(porejemplo,criadosenlamismainstitución,atrapadosenlanaturaleza),fuentedelosproductosalimenticios,historialalimenticio,historialdelacondicióncorporal,etc.
• Dependiendodelainformaciónquesedeseeobtener,puedellevaracabopruebasengruposconunaltoriesgodeenfermedadesdentrodelapoblación,talescomoanimalesmuertosoenfermos(veaelcapítulo9),paraincrementarlasprobabilidadesdedetectarenfermedades.
• Porlogeneral,esmásrentablehacerpruebasenunaporcióndelossujetosdelapoblaciónqueentodoelgrupoopoblación.Hayvariosmétodosdemuestreodepoblaciones,peroserecomiendausarmétodosdemuestreoalazarcuandoseaposibleyapropiadoparaevitarunpotencialsesgoenelmuestreo(veamásabajoparaencontrarmétodosdemuestreoadicionales).
• Sedebenobtenertamañosapropiadosdemuestrassisequieredeterminarelestadodeenfermedadesdelaspoblaciones.
Definirlapoblacióndeinterés
Lapoblacióndeinterésparalasinvestigacionesdeenfermedadesvariarádependiendodelarazóndelmuestreoolapreguntadeinterésdelainvestigación.Cuandoseestédefiniendolapoblacióndemuestreo,sedebentenerenconsideraciónlascaracterísticasdela(s)población(es)deorigen,estoincluye,peronoestálimitadoa:
• Elperíododetiempodeobservaciónespecificado.• Cuáleslaespeciedeinterés(porejemplo,unaespecie;todaslasespeciesdeuna
regiónuhábitatespecíficos).• Sielestudioestáenfocadoenunaregión,instalaciónorecintoespecíficos.• Sielestudioestáenfocadoenanimalesenfermos;animalespresentadosparala
necropsia;animalesprobadosparaenfermedadesinfecciosasespecíficas.• ¿Estáelestudioenfocadoenunaenfermedadoespecieespecíficas,paralascuales
deberíaconsiderarlascaracterísticasimportantesdelahistoriadevidaparadefinirlaspoblacionesdeorigenomuestreo?Porejemplo,¿Laenfermedadafectasoloaadultos(encuyocasolapoblacióndemuestreodeberíaenfocarsesoloenadultos)?
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—120
Muestreodelapoblación Losmétodosporloscualessellevaacaboelmuestreodelaspoblacionessonimportantesporquelasdiferenciasenlametodologíademuestraspueden:
• Sesgarlosresultadosqueobtengayafectarlaprevalenciaopresenciapercibidasdeenfermedadesenunapoblación.
• Afectareldesempeñodelaspruebasdediagnóstico.• Afectareldesempeñodelaspruebasdediagnósticoy,porende,afectarla
capacidaddelinvestigadorpararespondersupreguntadeinvestigación.Sehandesarrolladovariosmétodosdiferentesdemuestreodeenfermedadesenpoblacionesdeanimales,ylaeleccióndelmétododemuestreodebebasarseenelpropósitoespecíficodelmuestreo,eldiseñodelestudioylafacilidadparaobtenermuestras.Sehandesarrolladométodosprobabilísticos(basadosenigualarlasposibilidadesdequeunsujetoenparticularseaseleccionado)ynoprobabilísticos(basadosenlaconvenienciaopropósitodelmuestreoengruposdealtoriesgo)utilizandodiseñossimplesycomplejos(porejemplo,muestreoestratificadooporconglomerado) yestospuedenserrevisadosentextosestándardeepidemiologíaveterinaria(Thrusfield,2007). Cuandosehagaunmuestreoenpoblacionesanfibiasparabuscarenfermedades,esimportantetenerencuentacomosonelegidoslosindividuosparaprobarlosenbuscadeagentespatógenosespecíficosycomoestoafectaríalainterpretacióndelosresultados.Paraestimarlaprevalenciadelasenfermedadesenunapoblación,senecesitanmuestrasdeunsubconjuntorepresentativodelapoblacióndeorigen.
• Sinosehaceunmuestreodetodalapoblación,lossujetosdebenserelegidosusandounametodologíasistemáticaaleatoriademuestreocuandoseaposible.Porejemplo,sisevanarecolectarmuestrasde30de100anfibios,losanfibiosdebenserseleccionadosaleatoriamenteydeberíanrepresentarrecintossimilaresoigualesquelosdelrestodelapoblación.
• Tengaencuentadiferenciasenelcomportamientodelosanfibiosquepuedanafectarlainterpretacióndeladetecciónoprevalenciadeenfermedades.Porejemplo,lossujetosquesonmásfácilesdeatraparpuedenestardesproporcionadamenteinfectadosconunagentepatógeno(porej.,losanimalesmásfácilesdeatraparsonlosenfermos)y,porconsiguiente,inclinaríansusestimacionesdeprevalenciadeinfeccionesaunnivelmásaltoqueelverdadero.Asimismo,losindividuosqueusenelespaciodelrecintodeunaformaenparticulartambiénpodríansesgarelresultadosisucomportamientoestáinfluenciadoporunainfección.
Determinareltamañodelamuestra
Laspruebasparadetectaragentespatógenospuedenestarenfocadasenanimalesindividualesparaevaluarlasaludindividualodetodaslaspoblacionesparadeterminarel
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—121
estadodeinfecciónosaluddelapoblación.Cuandosehaganpruebasenpoblaciones,sedebetenerenconsideracióneltamañodelamuestrapara:
• Asegurarsedeseleccionaralosindividuossuficientespararesponderlapreguntadeinterésdeunaprueba.
• Determinarlaprecisiónconlaquesepuedenhacerestimacionesdeprevalenciayotrasestadísticas.
• Evitarelsobremuestreoinnecesariocuandolosrecursosseanlimitados;estepodríasercostosoyconsumirmuchotiempoynosiempreproveeráinformaciónadicionalacercadelasmedicionesdeenfermedadesanivelpoblacional.
Eltamañodemuestrarequeridoparadeterminarsiunagenteinfecciosoestápresenteenunapoblaciónocualeslaprevalenciadeinfecciónenunapoblaciónporlogeneralrequiere:
• Conocimientooestimadosdeltamañodelapoblacióndelacualseránrecolectadaslasmuestras.
o Generalmente,cuandolapoblaciónesgrande,ungrannúmerodeindividuosenlapoblación(perounapequeñaproporcióndelapoblacióntotal)necesitarasermuestreadaparaestimarlaprevalenciaodetectarlapresenciadeunaenfermedad,comparadoconelmuestreoenunapoblaciónpequeña.Generalmente,cuandolapoblaciónespequeña,unaproporcióngrandedelapoblación(peromenoralnúmerototaldeesta)necesitarasermuestreadaparaestimarlaprevalenciaodetectarlapresenciadeenfermedades,comparadoconelmuestreoenunapoblacióngrande.Silapoblaciónesmuypequeña,puedequecasitodoslosindividuosnecesitensermuestreadosparatratarderesponderlaspreguntasdeinterésdelaprueba.
• Laprevalencia(oincidencia)esperadadeunainfecciónenlapoblación(porej.,laproporcióndelapoblaciónconinfección).Amenudo,laprevalenciaesperadaqueseusaenelcálculodeltamañodelamuestraseráunasuposición.Unabuenaestrategiadeestimacióndeberíaserdiseñadaparamaximizareltamañodemuestranecesariopararesponderlapreguntadeinteréssinsobremuestreosinnecesarios.
o Cuandoseestécalculandoeltamañodemuestraparadetectarlapresenciadeunaenfermedadenunapoblación,uselaprevalencia(oincidencia)mínimaesperada.Enestoscálculosunaprevalenciaesperadamenorresultaraenuntamañodemuestramásgrande.Porejemplo,siestimaquelaprevalenciaestaráentre2%y10%,calcularuntamañodemuestraquecorrespondaalaprevalenciamínima(2%)resultaráenuntamañodemuestramásgrandeyseráelmejorestimadodeprevalenciaparautilizar.
o Cuandoseestécalculandoeltamañodemuestraparaestimarlaprevalencia(oincidencia)deenfermedades,senecesitaráuntamañodemuestramás
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—122
grandeparaestimarlaprevalenciaaun50%enunaprecisiónestimadaqueen0%o100%.Porejemplo,sicreequelaprevalenciaseencuentraentre10%y20%,elegirelestimadodeprevalenciade20%paraloscálculosdetamañodemuestrasresultaraenuntamañodemuestramásgrande.Asimismo,sicreequelaprevalenciaseencuentraentre80%y90%,elegirelestimadodeprevalenciade80%paraloscálculosdetamañodemuestrasresultaraenuntamañodemuestramásgrande.Dadoqueeltamañodemuestramáximoparaestimarlaprevalenciasiempreestáen50%,losestimadosdeprevalenciamáscercanosaestenúmerosiempreresultaraenuntamañodemuestramásgrande,ypodríanserlosestimadosdeprevalenciamásconservadoresparautilizar.
• Elniveldeseadoderelevancia(precisiónestadística)alencontraralmenosa1animalinfectadooendeterminarlaprevalencia.Porlogeneralestoestafijoenunintervalodeconfianzade95%(oalpha=0,05).
o Comofueseñaladoanteriormente,porlogeneral,siunapoblaciónesgrande,seránnecesariosmásindividuosparaidentificaraunanimalinfectado.Esteeselcasohastaciertopuntohastaqueelnúmeronecesarioseestabilice,ydependerádelaprecisiónestadísticadeseada.
o Enpoblacionesmuypequeñas,todoslosindividuospodríansermuestreados,ypuedequeaunasíelestadodeenfermedadesenlapoblaciónnopuedaserdeterminadoalgradonecesariodeprecisiónestadística.
• Conocimientoacercadelaprecisióndelaprueba.Estoincluyelasensibilidaddelaprueba(lahabilidadparaclasificaratodoslosanimalesinfectadoscomopositivosparalosagentesinfecciososbasadosenlosmétodosdeprueba)ylaespecificidaddelaprueba(lahabilidadparaclasificaratodoslosanimalesnoinfectadoscomonegativosparalosagentesinfecciososbasadosenlosmétodosdelaprueba).
o Muchoscálculosdetamañodemuestranotomanenconsideraciónlasevaluacionesdeprecisióndelaspruebasyasumenquelapruebadediagnósticosiemprees100%precisa.Aunqueseanapropiadosenalgunassituaciones,silaspruebasdediagnósticonofuncionanbien,loscálculospodríansesgarsuestimadodetamañodemuestraymostrarlomáspequeñodelonecesarioparaabordarlaspreguntasdelestudio.
o Lasfórmulasparaincorporarpruebasimperfectasaloscálculosdetamañodemuestrassoncomplejas,perohansidoincorporadasalprogramainformáticoFreecalc(veaThrusfield,2007,paradiscusionesrespectoaltratamientoFreecalcdecálculosdetamañodemuestrasconpruebasimperfectas).Podríaserútilincluirvaloracionesdelasensibilidadyespecificidaddelaspruebasconcálculosdetamañodemuestrascuandoseaposible,aunqueestosparámetrosgeneralmentesondesconocidos.
o Sinoseincluyenajustesparapruebasdediagnósticoimperfectas,losinvestigadoresdeberíantenerencuentacomolaprecisióndelaspruebaspodríaafectarlainterpretaciónyresultadosdelosestudiosydeterminarsi
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—123
ajustarlosmétodosdemuestreo(porejemplo,hacermuestreosenmásanimales)seríanecesario.
• Muchosdelosparámetrosnecesariosparaestoscálculossondesconocidosenlasenfermedadesanfibias.
Loscálculosdetamañodemuestraspuedenserespecíficosparaeldiseñodeunestudio,laprevalenciaesperada,tamañosestimadosdepoblación,preguntasdeinterés,etc.Loscálculospuedensercomplicadosypodríanrequerirlaparticipacióndeunepidemiólogoounestadístico.Ejemplosdeecuacionesquepuedenserusadasparacalculareltamañodemuestraseentreganenelapéndiceoenlibrosestándardeepidemiologíaveterinaria(veaThrusfield,2007).Tablasquepodríanayudaraobteneraproximacionesrápidasdetamañodemuestrastambiénseencuentrandisponibleslostextosdeepidemiología(veaThrusfield,2007)yenalgunascalculadorasenlínea(veamásabajo);sinembargo,elinvestigadordeberíaestarconscientedelasecuacionessubyacentes(ydesussuposiciones)usadasencualquiertablaocalculadorayevaluarsuadecuaciónasuestudioenparticular.
• AusVetAnimalHealthServices:http://epitools.ausvet.com.au/• OpenEpi:http://www.openepi.com/Menu/OpenEpiMenu.htm• EpiInfo:http://www.cdc.gov/EpiInfo/
7.2EVALUACIÓNDELABORATORIOSQUEREALIZANPRUEBASDEDIAGNÓSTICOMOLECULARES(REACCIÓNENCADENADELAPOLIMERASA"PCR")
Laspruebasdediagnósticomolecularesqueutilizanpruebasdereacciónencadenadelapolimerasa("PCR")paradetectaragentesinfecciosostalescomoelhongoquítridoanfibiooranavirussonherramientasútilesparalagestióndelosproblemasdeenfermedadesenlaspoblacionesdeanfibioscautivosylascoloniasderesguardo.Estaspruebassehanvueltomuycomunespara:1)Revisióndeanimalesencuarentena;2)Revisióndepoblaciones(silvestresocautivas);3)Revisióndelosanimalesantesdesuusoenprogramasdereintroducciónalanaturaleza;y4)Paraeldiagnósticodeanimalesenfermos.
• Enelcasodemuchosagentespatógenosanfibiosimportantes,losprotocolospararealizarestaspruebasestánpublicadosenliteraturacientíficayelequiponecesarioparallevaracabolaspruebasseencuentraampliamentedisponibleenuniversidadesylaboratoriosprivados.Comoresultado,laspruebasparadetectaragentespatógenosanfibiosseencuentrandisponiblesenunacantidaddefuentesdiferentes.
• Loslaboratoriosqueofrecenpruebaspuedenvariarenormementeen:o Experienciaconpruebasdediagnósticoparadetectaragentesde
enfermedadesinfecciosas.o Suhabilidadparaayudarloainterpretarcorrectamenteresultadosde
pruebas.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—124
o Puntualidadparaentregarresultados.o Suhabilidadparaentregarresultadosconfiables.
• Enellaboratoriosedebenutilizarprácticas,validacióndepruebasymedidasdecontroldecalidadapropiadasparaevitarlainformaciónerróneaoengañosa.
• Laspautasparaunaapropiadarecolecciónymanejodemuestraspuedenserdiferentesparacadalaboratorio.Tenerunabuenacomunicaciónconellaboratorioseleccionadoparaprocesarlasmuestrasesesencialparaobtenerresultadosóptimos.Serecomiendabuscarreferenciasdellaboratorio.
Estasecciónproporcionaalgunaspreguntasypautasquepuedenserutilizadasparaevaluaryseleccionarunlaboratorioqueentregarapruebasdediagnósticomolecularesparadetectaragentespatógenosanfibiosimportantes.¿Quétipodepruebautilizaellaboratorio?ExistendostiposprincipalesdepruebaPCR:PCRconvencionalyPCRentiemporeal.
• SiellaboratorioutilizaPCRconvencional,preguntecomosonverificadoslos
resultadospositivos.EnlaPCRconvencional,elproductodelareaccióndeunapruebaporlogeneralesvisualizadomedianteelectroforesisengeldeagarosa,lacualseparalosfragmentosdeADNportamaño.DadoquelosfragmentosdeADNnopatógenospuedenteneruntamañosimilaraldelosfragmentosdeADNpatógenos,esposibleobtenerfalsospositivossisoloserealizalaelectroforesisengel.Porlotanto,esimportanteconsiderarsisonnecesariasunasecuenciacióndeADNohibridaciónespecíficaparaverificarlosresultadosdelosanálisis.
• LaPCRentiemporeal(sifuevalidadaenunlaboratorio)tienealgunasventajassobrelaPCRconvencional.Estasincluyen:1)Mayorsensibilidaddelaspruebas;2)NohaynecesidaddeverificarlosresultadospositivosmediantesecuenciacióndeADNsiseutilizaelmétodoTaqmanentiemporeal(UnasondadeADNespecíficaesincluidaenelproceso);3)LaposibilidaddeincluircontrolesinternosquepuedandetectarinhibidoresdePCR;y4)Resultadosrápidos.
• SiellaboratorioutilizaPCRentiemporeal,averigüesilaspruebasutilizantintesfluorescentes(SYBRGreen)osondasfluorescentesdereporteo(Taqman).LaPCRTaqmanutilizaunasondainternaparaincrementarlafidelidaddelosresultadosmientrasquelaPCRcuantitativaSYBRGreensebasaenpuntosdefusiónyporlotantoesmenosespecífica(existelaposibilidaddefalsospositivos).
• SiellaboratorioutilizaPCRentiemporeal,averigüecuantasvecesserealizalapruebaparacadamuestra.PodríaserimportantecorrerlasmuestrasportriplicadodebidoaerroresinherentesdelaPCRentiemporealdebidoabajosvolúmenes,erroresenelpipeteoydesviacionesenladetecciónporláserenalgunospozosindividuales.
• IndependientementedeltipodePCRutilizado,averigüequeutilizaellaboratoriocomomuestrasdecontrolnegativasypositivas.EnlasPCRentiemporeal,sedebecorrerunaseriededilucionesdemuestrasconocidacomovaloraciónencadalote
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—125
demuestrasdeprueba,sisepuededeterminarcualquiertipodeinformacióncuantitativa.
¿Cuálessonloslímitesdesensibilidadyespecificidaddelaprueba?RespectoalaspruebasPCR,esimportantedistinguirentresensibilidadyespecificidad"analíticas"yde"diagnóstico"(SaahyHoover,1997).Nuncaexistiráunapruebaquesea100%sensibley100%específica,yaquesiemprehabráunbalanceentreestosdosparámetros.Unapruebaqueseaaltamentesensibletendráunaespecificidadmenoryviceversa.
• LasensibilidadanalíticadelaspruebasPCReslamásbajaconcentracióndeADNpatógenoquepuedeserdetectadoporlaprueba.
o EstaesdeterminadaenellaboratoriousandodilucionesdeunADNestándarconocidodealgúnagentepatógenodeinterés.LasensibilidadanalíticadelaPCRTaqmanparaelhongoquítridoanfibiopuedesertanbajacomo0,1equivalentesdegenoma(Entérminosprácticos,estoseríaunasolazoospora;Boyleycolaboradores,2004).
o Loslaboratoriosdeberíansercapacesdeentregarlasensibilidadanalíticadesuspruebas.
o Lasensibilidaddediagnósticodescribelaproporcióndeverdaderospositivos(muestrasquecontienenelADNdeunagentepatógeno)detectadosporunaprueba.
o Unasensibilidadde100%significaquelapruebaescapazdeidentificartodaslasmuestrasverdaderaspositivasyquenohaymuestrasfalsasnegativas(muestrasquecontienenADNdelagentepatógeno,peroquenosondetectadasporunaprueba).
o Pocaspruebastienenunasensibilidaddediagnósticode100%,inclusositienenunasensibilidaddediagnósticomuyalta.Estoesdebidoalavariabilidadinherentealarecolecciónyelprocesamientodemuestras.
o Muypocoslaboratoriosseráncapacesdeproveerunasensibilidaddediagnóstico,dadoqueestecálculorequiereunacorrelaciónderesultadosdepruebasenanimalesdelasquesesepasisuestadoesnegativoopositivo.Lasensibilidaddediagnósticotambiénpuededependerdefactoresajenosalcontroldellaboratorio,comoporejemploelmétodoutilizadopararecolectarmuestras.SehadeterminadoenunlaboratorioquelasensibilidaddediagnósticodelprocedimientoPCRTaqmanparaelhongoquítridoanfibioesdeaproximadamente75%(Skerrattycolaboradores,2008).
• LaespecificidadanalíticaparalaspruebasPCReslahabilidaddeidentificarexclusivamenteelADNdelagentepatógenodeinterésynoelADNdeotrosorganismos.
o Estaesrealizadausualmente"desafiando"alapruebaconorganismosestrechamenterelacionadosalpatógenodeinterés.
o Porejemplo,determinarlaespecificidadanalíticadelPCRparaelhongoquítridoanfibio(Batrachochytriumdendrobatidis)requierequelaprueba
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—126
soloentregueresultadospositivosparaelBatrachochytriumynoparaunpaneldeotroshongosquitridios(Boyleycolaboradores,2004).
o Ellaboratoriodeberíasercapazdeafirmarlaespecificidadanalíticadelapruebaqueofrece.
• Laespecificidaddiagnósticaeslaproporcióndenegativosrealesdetectadosporlaprueba.Unaespecificidadde100%significaquetodaslasmuestrasnegativasrealesfueronidentificadasyquenoexistenmuestrasfalsaspositivas(porej.,muestrasquenocontienenelADNdelagentepatógeno,perosoninterpretadascomopositivas).
o LaespecificidaddiagnósticapuedevariarenlaspruebasPCR.Yaqueestaspruebastienenunaaltasensibilidadanalítica,esfácilquelasmuestrassecontaminenconADNpatógenodurantelarecoleccióndemuestrasoenellaboratorio,loquedaríacomoresultadospruebasfalsaspositivas.Laspruebasfalsaspositivasreducenlaespecificidaddiagnóstica.
¿Quécontrolesdecalidadsonutilizadosensuprueba?
• Ellaboratoriodeberíausarcontrolespositivosynegativoscadavezqueserealizaunaprueba.Estoesabsolutamentenecesariosisedeseanresultadosfiables.
• LoscontrolespositivosutilizanADNconocidodelagentepatógenodeinterésydemuestranquelapruebaescapazdeamplificarelADNyquefuncionacorrectamente.
• LoscontrolesnegativosnocontienenADNdelagentepatógenodeinterésysonutilizadosparadetectarunacontaminacióndeADNenellaboratorioolosreactivosdelaboratorio.
• EnelcasodelosmétodosPCRentiemporeal,loslaboratoriosdeberíanutilizaruncontrolinternopositivo(Hyattycolaboradores,2007).EstaesunareacciónPCRdeADNaparteynorelacionadaalagentepatógenodeinterésyesincluidaencadamuestraanalizada.ElcontrolinternopositivodetectainhibidoresdePCRquepuedanresultarenpruebasfalsasnegativas(disminuyenlasensibilidaddediagnósticodelaprueba).Porejemplo,muestrascutáneasdelhongoquítridoanfibioconfrecuenciacontieneninhibidoresdePCRyelusodelcontrolinternoesesencial(Hyattycolaboradores,2007;Skerrattycolaboradores,2008).
• LosinhibidoresdePCRtambiénsonunproblemaparaloslaboratoriosquerealizanPCRconvencionales.Deberíaaveriguarcómoellaboratorioafrontaesteproblemapotencial.
• SisedeseaobtenerresultadoscuantitativosdelosmétodosPCRentiemporeal,esimportanteaveriguarcómofuerongeneradosyadministradoslosestándaresdecuantificación.Sehademostradoqueladegradacióndelosestándaresdealmacenamientoocurreconalgunosprotocolos,loquellevaalasubestimacióndelascargasfúngicas.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—127
¿Quétiposdemuestrassonidealesparasupruebaycomodeberíanserrecolectadas,almacenadasyenviadas?
• Esimportanteconocereltipodemuestracorrectoparaeltipodepruebaquesevaallevaracabo.Porejemplo,laspruebasparadetectarelhongoquítridoanfibiorequierenunhisopouotramuestracutánea.
• Paralosanuros,lasmejoresmuestrasprovienendelassuperficiesdepielventral.Lasmuestrasprovenientesdelapieldorsal,otomadasdeotrapartedelcuerpocomoelhígado,noseránválidasyentregaránresultadosengañosos.Asimismo,unhisopocutáneoporlogeneralnoesunabuenamuestraparadetectarranavirus,loscualessueleninfectartejidosuórganosinternos.
• Lasmejoresmuestrasparalosanfibioscecílidosprovienendesuperficiesdorsalesdelcuerpoylacabeza(Gowerycolaboradores,2013;Rendleycolaboradores,2015).
• Laeleccióndematerialesderecoleccióndemuestraspuedeserimportante.Comoejemplo,loshisoposutilizadospararecoleccióndemuestrasparaelhongoquítridoanfibioestánhechosdediferentestiposdemateriales(mangosdemadera,metaloplástico).ParaelmétodoPCRTaqman,loshisoposderayónconmangodeplásticofuncionanmejorqueloshisoposconmangodemadera.Seledeberíaconsultarallaboratoriocualessonlosmejoresmaterialesparautilizarenlarecoleccióndemuestras.
• Losmétodospreferidosparaelalmacenamientodemuestrasdependerándeltipodepruebaqueserealizara.Porejemplo,elmétodoPCRTaqmanparaelhongoquítridoanfibiofuncionamejorconmuestrasdehisopossecadosalaire,peroalgunoslaboratoriosquerealizanmétodosPCRconvencionalesprefierenhisoposconservadosenetanol.Siemprepregúnteleallaboratoriocomoalmacenarmuestrasdespuésdelarecolección.
• LosmétodosutilizadosparaenviarmuestrassonmuyimportantesparalosresultadosdepruebasPCR.Comoejemplo,loshisopostomadosparapruebasPCRparadetectarelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidispodríandegradarsesisonexpuestosatemperaturasmuyaltas(VanSluysycolaboradores,2008)y,porlotanto,sedeberíantomarmedidasparaenfriarlasmuestrasdespuésdelarecolecciónyduranteelenvío.SielPCRsevaarealizarenmuestrasdetejidoparadetectarranavirusuotrosagentesinfecciosos,esimportantequelostejidospermanezcancongeladosduranteelenvíooqueseanpreservadosenetanol70%nodesnaturalizadodealtacalidad.LasmuestrasdestinadasacualquiertipodediagnósticoPCRnopueden,bajoningunacircunstancia,entrarencontactoconformalinauotrotipodeconservante.Asimismo,elalcoholisopropíliconopuede,bajoningunacircunstancia,serutilizadoenlugardeletanol.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—128
¿Cuántopuedetardarlaentregaderesultados?
• Loslaboratoriosquerealizanpruebasdediagnósticomolecularesparadetectarenfermedadesinfecciosasanfibiasestánmuyocupadosypodríandemorarsevariassemanasoinclusomesesenobtenerresultados.
• Lasaltasesperas(plazos)puedenserinaceptablesenalgunassituaciones(porejemplo,paraeldiagnósticodeanimalesenfermosoparalaspruebasencuarentenaoantesdelaliberacióndeanimalesalanaturaleza).Enestassituaciones,esimportantecomunicarseconellaboratorioparaacordarresultadosmásrápidossiesposible.
¿Quiéntienelapropiedaddelasmuestrasylosresultados?
• Lacomunicaciónycolaboraciónconellaboratorioesesencialcuandosetratadelapropiedaddelasmuestrasylosresultadosdelaspruebas.Debedecirleallaboratorioconanticipaciónsiplaneahacernuevasinvestigacionesopublicarlosresultadosdelasmuestraspresentadas.
• Loslaboratoriosdeinvestigacionespodríansercapacesderealizarlaspruebasaunbajocostosilosresultadossonincorporadosaproyectosdeinvestigaciónopublicacionesencurso.
• Antesderealizarlaspruebasdeberíaverificarquesehayanobtenidolospermisosadecuadosparalarecolección,exportacióny/oimportación.
7.3PRUEBASDEDIAGNÓSTICOPARAELHONGOQUÍTRIDOANFIBIOBATRACHOCHYTRIUMDENDROBATIDIS Elhongoquítridoanfibio(Batrachochytriumdendrobatidis"Bd")esunacausaimportantedeladisminuciónanivelmundialdelaspoblacionesdeanfibios,perotambiénestáasociadoaeventosimportantesdemortalidadenlaspoblacionesdeanfibioscautivos.Aunqueespeciesoetapasdevidavulnerablespuedansucumbiralaquitridiomicosisduranteelcursodeunperíododecuarentenarutinario,debeserreconocidoquealgunasespeciesoindividuospuedenalbergarinfeccionesdebajonivelo"subclínicas"conBdquenosonvisiblesenexámenesclínicosoenprocedimientosdenecropsiarutinarios.Losanimalesinfectadossubclínicamentepodríanactuarcomounafuentedeinfecciónparalasespeciesvulnerables,porloquedebeintentarsedetectary/otrataraestosanimalesantesdeintroducirlosacoleccioneszoológicasoacoloniasderesguardo.EsimportantedestacarquelaOIEyBergerycolaboradores(1998)definenlaquitridiomicosiscomounainfecciónconBd.Estaeslanormaconlasenfermedadesactualmente,yaqueinclusolasinfeccionessubclínicaspuedentenerunefectoqueesconsideradoenfermedad,comoporejemplounareproducciónodistribuciónreducidas.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—129
Seleccióndeunapruebadediagnóstico Almomentodeseleccionarunmétododediagnóstico,esútildistinguirentrelaenfermedadolamuertecausadasporunainfecciónBdyunainfecciónsubclínicaosubletal(animalesportadoresquenomuestransímbolosaparentesdeinfecciónoenfermedad).
• Algunosmétodosmorfológicoscomolosmontajesenfresco,lacitologíaylahistopatologíasonútilesparadiagnosticaraanimalesqueesténenfermosconquitridiomicosisporqueungrannúmerodeorganismosestápresenteensupiel.Estosnosonconfiablesparadetectarinfeccionessubclínicasynosonusadosparalarevisiónencuarentenadeanimales.
• Laspruebasdereacciónencadenadelapolimerasa("PCR")convencionalesoTaqmansonconsiderablementemássensiblesquelosmétodosmorfológicosysonútilesparadetectarelbajonúmerodeorganismospresentesenlasinfeccionessubclínicas.
• ElPCReslapruebaporelecciónenlarevisióndepoblacionescautivasosilvestresparadetectarlapresenciadeinfeccionesBdyparalarevisiónencuarentenadelosanimales.
• Loscultivosfúngicos,usandotécnicasparaorganismosfúngicosconvencionales,nosonútilesparadetectarBd(ElBdrequieretécnicasespecializadasparasucultivo).
MétodosmorfológicosparadetectarBd
Losmétodosmorfológicosdediagnósticosebasanenlaidentificacióndeorganismosfúngicoscaracterísticos(talos)delBd,pormediodelaexaminaciónmicroscópicaconluzde:
• pielmudada.• Muestrascutáneasobtenidaspormedioderaspadodepiel.• seccioneshistológicas.
Paralamayoríadelasespecies,espreferibleelmuestreodelassuperficiesventralesdelcuerpodadoquelostalosBdseencuentranmáspresentesenesoslugares.Losmétodosutilizadosnormalmenteparalosdiagnósticosmorfológicosson:
• Montajeenfresco.Lasmuestrasdepielmudadaseobtienenraspandogentilmentelassuperficiesventralesdelcuerpoodelaspatasusandoelladosuavedelbisturí,mondadientesocucharadeplásticoesterilizada.Verlaimagen7.1.Lamuestradebeser:
o Esparcidaenelportaobjetosdeunmicroscopiodevidrioconunapequeñacantidad(1o2gotas)deaguaosoluciónsalinanormalyluegoponeruncubreobjetos.
o LaimagenesexaminadausandounmicroscopioópticoconelcondensadorapuntandohaciaabajoenbuscadetalosBd(verlaimagen7.1).
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—130
Microfotografíasdebuenacalidaddetalosquitridiossintintesseencuentrandisponiblesen:www.umaine.edu/chytrids/Batrachochytrium/Photographs/htm
o Tintestalescomoazulalgodón(ParkerTMInk)y10%KOH(Mazzoniycolaboradores,2003)yRojocongo(BriggsyBurgin,2004)puedenaplicarseparaayudaravisualizarlasparedesdetalosBd.
• Citología.Lasmuestrascutáneassonobtenidaspormediodelatécnicademontaje
enfrescoyadescrita.Lasmuestrascutáneassonesparcidasenunportaobjetosdemicroscopio,secadasenaireypintadascontinteshematológicostalescomoWright'soWright-Giemsa(TambiénDiff-Quik).Verlaimagen7.2.
Imagen7.1:MontajeenfrescocutáneodeunaRanaarborícolaverde(Litoriacaerulea)examinadopormediodemicroscopíaóptica.Numerosasestructurasredondasquerepresentaneltalodelhongoquítridoanfibio(Batrachochytriumdendrobatidis)seencuentranpresentesdentrodelascélulascutáneas.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—131
Imagen7.2:Citologíacutáneadeunaranavenenosadedardo(Dendrobatessp.).Numerosasestructurasredondasquerepresentaneltalodelhongoquítridoanfibio(Batrachochytriumdendrobatidis)seencuentranpresentesdentrodelascélulascutáneas.Muchostalosposeenestructurasinternaspurpurasredondas(zoosporas),perootrostalosseencuentranvacíosyaparecencomoespaciosredondosclaros(flechas).Eltalodelaesquinaderechainferiorpresentaevidenciadeseptacióninterna(talocolonial).ReimpresodePessier(2007).
• HistologíaEldiagnósticopormediodehistologíaesmásadecuadoparamuestras
cutáneasrecolectadasennecropsia,sinembargo,loscortesdededosyfragmentosdepielmudadadeanimalesvivostambiénpuedenserprocesadosdeestaforma.
o Lasmuestrasparahistologíadebenserpreservadasenformalinatamponadaneutralal10%(veaelcapítulo9paralaelaboracióndeformalinatamponadaneutral)oenetanolal70-95%.
o Lasmuestrasdenecropsiadeberíanincluirmúltiplesseccionesdepieldeespesortotaldelcuerpoventral,incluyendolaregiónpélvica("absorción"oparchepélvico),piernasypatas.
o Enlosanimalespequeños(pesanmenosde5a10gramos),elcadáverdebeestarintacto,desmineralizadodespuésdeunafijacióndeformalinaymúltiplesseccionescompletasdelcuerpodebenserpreparadas,estotambiénincluyelapiel.
o Lasmuestrasprovenientesderenacuajosanurosdeberíanenfocarseenelqueratinizadodeldiscooral("piezasbucales").
o UnacoloraciónrutinariaconhematoxilinayeosinaporlogeneralessuficienteparademostrareltalodeBd.Lasparedesdeltalotambiénsecoloranconácidoshiffperiódico(PAS,porsussiglaseninglés)yconplatametenaminadeGomori(GMS,porsussiglaseninglés).
o LainmunihistoquímicausandoanticuerpospoliclonalescontraelBdpuedeserutilizadaparamejorarlasensibilidaddelahistología,sobretodoenlasinfeccionessubclínicas(VanEllsycolaboradores,2003).Estemétodonose
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—132
encuentraampliamentedisponibleyyanoestanutilizadodadalaaltadisponibilidaddelosdiagnósticosPCR.
o Laslesioneshistopatológicasenlapielasociadasaquitridiomicosisincluyen:! Hiperqueratosis.! Hiperplasiaepidérmica.! Diferentesgradosdeinflamaciónydegeneraciónepidérmica(muchasvecesmínima).
o Lasinfeccionesmicóticasybacterianassecundariassoncomunes.
CaracterísticasmorfológicasdelostalosBd.TodaslastécnicasmorfológicasdescritasdependendelaidentificaciónmicroscópicadeltalocaracterísticodelBddentrodelcitoplasmadelascélulascutáneas(queratinocitos).LiteraturadetalladaquedescribelascaracterísticasmorfológicasdeltaloBdseencuentradisponible(Pessierycolaboradores,1999;Longcoreycolaboradores,1999;Bergerycolaboradores,2005).Algunascaracterísticasquepodríanserútilesson(vealaimagen7.3):• Eltalosuelemedirentre7a20µmenlasecciónhistológica.Habitualmentese
puedenidentificarcuatroformas:o Etapapequeñauninucleadao Formamultinucleadapunteadaconcitoplasmamicrovacuolado.o Zoosporangiomaduroquecontienemúltiplesydiscretasde2a3µm
zoosporasesféricasbasófilaso Talovacío(Estoscontienenzoosporaspreviamentevertidas).Lostalosvacíos
son,algunasveces,laformapredominanteobservadaenlosmétodosmorfológicos.
• Laaparicióndezoosporangiosmadurospuedeserconfundidaconlasetapasdevidadeunorganismoprotozoario.Lasfuncionesprácticasmásútilesparaundiagnósticomorfológicodefinitivoson:
o Lapresenciadetalosvacíosquepresentenevidenciadeseptacióninterna.Estossonlosrestosde"taloscoloniales"característicosdeBd.
o Seobservantaloscontubosdedescargaprominentesqueledanaltalounaaparienciade"frasco".
o Enalgunoscasos,peronoentodos,unacoloraciónGMSdelasseccioneshistológicaspuedemostrarrizoides,loscualessonextensionesdelgadascomoraícesdeltalo.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—133
Imagen7.3:CaracterísticasmorfológicasdetalladasdeltaloBatrachochytriumdendrobatidisútilesparaeldiagnósticohistopatológico:A)Zoosporangiosmadurosquezoosporasbasófilasdiscretasyuntubodedescarga(flecha),tambiénhayvariostalosuninucleadosendesarrollo(asterisco);B)Talosmultinucleadosendesarrollo(flechas);C)Trestalos"vacíos"queyahandescargadosuszoosporas.Lostalosenelcentrosontalos"coloniales",locualesindicadoporunaseptacióninternafinaqueparecieradividiraltaloenlamitad;D)UnasecciónpintadaconplatametenaminadeGomori(GMS)quemuestraalosrizoides(flecha),loscualessonproyeccionesdelgadascomoraícesdelostalosquesepuedenobservardeformaintermitenteenseccioneshistológicasteñidasconplata.
MétodosbasadosenPCRparaeldiagnósticodelBd Laspruebasbasadasenlareacciónencadenadelapolimerasa(PCR)sonimportantesherramientasdediagnósticodeinfeccionesBd.Tantolastécnicasconvencionales(Annisycolaboradores,2004;Gokaycolaboradores,2009)comolasdetiemporeal(Taqman)sonutilizadasactualmente(Boyleycolaboradores,2004;Hyattycolaboradores,2007;Garlandycolaboradores,2009).ElPCReselmétododediagnósticoporelecciónde:
• Larevisióndecuarentenadenuevosanimales.• Larevisióndeanimalesantesdesureintroducciónotranslocación.• Inspeccióndepoblacionescautivasycriadasenlibertadparadetectarlapresenciay
prevalenciadeinfeccionesBd.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—134
• Confirmaciónderesultadospositivosdeexaminacionesenmontajeenfrescoocitológicasclínicas.
LosmétodosPCRsonmuysensiblesyelmétodoTaqmanpuededetectardeformaexperimentaltanpococomounazoosporaBd(Boyleycolaboradores,2004).
• EsporestaexcelentesensibilidadqueunresultadopositivodelPCRsolosignificaqueelanimalestáinfectadoconBd,lapruebanodistingueentreinfeccionessubclínicasyunainfecciónclínicaimportante(quitridiomicosis).
• Reconocerladistinciónentreunainfecciónsubclínicayunainfecciónclínicaimportanteesimportantealmomentodeinvestigareventosdemortalidadanfibia.EstosignificaquesololosresultadospositivosdeBdenPCRnopuedenprobarquelaquitridiomicosisfuelacausadeunamuerteobservada.
ComparacióndediferentestécnicasPCR.LatécnicaPCRentiemporeal(Taqman)(Hyattycolaboradores,2007)tienenventajasencomparaciónconlosmétodosPCRconvencionales(Annisycolaboradores,2004).Estasventajasincluyen:
• Mayorsensibilidaddelaprueba.• Menoresposibilidadesdecontaminacióncruzadaduranteelprocesamientodelas
muestras(loquedacomoresultadopruebasfalsaspositivas).• Nohaynecesidaddeconfirmarlosresultadospositivospormediodeuna
secuenciacióndeADNdelosproductosPCR.• ElusodecontrolesinternosquedetectaninhibidoresdePCR.Ladetecciónde
inhibidoresdePCResimportanteporquelasmuestrasdehisoposcutáneosanfibiospresentadasparaunPCRdeBdconfrecuenciaseencuentrancontaminadasconsuciedadricaeninhibidoresomaterialvegetal.Sincontrolesinternosparalosinhibidores,algunasmuestrasquesisonpositivasparaADNBdpodríanserreportadascomonegativas(falsosnegativos).
LasdesventajasdelatécnicaPCRentiemporealson:
• Costosmásaltosdelosreactivosnecesarios.• Disponibilidadlimitadadelequipoespecializadonecesarioparalapruebaylas
técnicasnodetectantodaslascepasdeBddebidoalaaltaespecificidaddelasonda(Gokaycolaboradores,2009).
LaeleccióndetécnicaPCRutilizadadependerádeunavariedaddefactores,incluyendocostosydisponibilidaddelasdiferentespruebas.Actualmente,unaampliavariedaddediferenteslaboratoriosdeinvestigacionesycomercialesseencuentranofreciendoPCRparaBd.SugerenciasparaevaluaryescogerunlaboratorioparallevaracabopruebasBdseencuentranenlasección7.2.LatécnicaPCRentiemporeal,siseencuentradisponible,es
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—135
preferibleyprobablementeformaralabaseparalosestándaresinternacionalesrelacionadosalaspruebasdediagnósticoparadetectarBd.
RecoleccióndemuestrasparaPCRdeBd
ElprocedimientodePCRpuedeserrealizadousandounavariedaddemétodosdemuestreodiferentes,incluyendohisoposcutáneos,bañosdeaguaymuestrasdetejido(cortesdededosoescisióndepiezasbucalesderenacuajos;Hyattycolaboradores,2007).
• Elprocedimientodehisopocutáneoessimple,mínimamenteinvasivoypermiteelmuestreodemúltiplesáreasdelapielquepodríanestarinfectadasconBd(Incrementandolaposibilidaddequelasáreasinfectadasseanmuestreadas).Porlogeneral,loshisoposcutáneossonelmétododemuestreopreferidoparaelPCRdeBd.
• Lasmuestrasrecolectadasconelprocedimientodebañodeaguarequierenunacentrifugaciónofiltraciónpormicroporosinmediatosynosonprácticosenmuchosparámetros.
• Elcortedededosesunprocedimientoinvasivoqueconllevapreocupacioneséticasytieneladesventajademuestrearsolounapequeñaporcióndelapielpotencialmenteinfectada.
Materialesnecesarios.LosmaterialeslistadosmásabajosonpautasgeneralespararealizarelprocedimientodehisopocutáneoparaelPCRdeBdusandoelmétododeTaqman.Puedehaberdiferenciasdependiendodelaspreferenciasdellaboratorioqueprocesaralasmuestrasylascondicionesambientalesbajolascualessonobtenidosloshisopos.
• Guantesdesechablesdelátexonitrilosintalco.• Aplicadoresestériles("hisopos");vea"Seleccióndehisopos"másabajo.• Tubosdemicrocentrifugación/criovialesde1.5ml
LarecoleccióndemuestrasparaelmétododePCRconvencionalrequierequeloshisoposseanalmacenadosenetanolal70%.EstonoserecomiendaparaelprocedimientoPCRTaqman.Paramásinformaciónvealasecciónacercadel"Almacenamientodelasmuestrasdehisoposcutáneos"másabajo.Seleccióndehisopos.Existenunavariedaddepalitosaplicadoresohisoposquedifierenenlacomposicióndelapuntadelhisopo(dealgodónorayón),lacomposicióndelmangodelhisopo(madera,plásticoometal)yeltamañodelapuntadelhisopo(puntafinaoestándar).
• EltipodehisopoutilizadopuedeafectaraldesempeñodelapruebaPCRydeberíaconsiderarsecuidadosamenteantesdeusarloenelmuestreodeanimales.
• EnelprocedimientoPCRTaqman,unhisopoderayóndepuntafinaconunmangodeplásticofabricadoporelMedicalWireandEquipmentCo.hademostradotenerel
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—136
mejorrendimiento(Hyattycolaboradores,2007yM.Schrenzel,SanDiegoZoo,sinpublicar).Estehisoposeencuentradisponiblecomo:
o MW100-100(Australia).o DryswabTMFineTipMW113(UnitedStates:www.mwe-usa.com).
Siestehisoponoseencuentradisponible,puedeutilizarotroshisoposderayóndepuntafinaconmangosplásticoscomosubstitutos.• ParaelprocedimientoPCRTaqmandeberíaevitar(siesposible)loshisoposcon
puntadealgodónoconmangodemadera.EstosestánasociadosamenorestasasderecuperacióndelADNBdeinclusoapruebasfalsasnegativas(M.Schrenzel,SanDiegoZoo,sinpublicar).
• LosposiblesresultadosfalsosnegativosdehisoposconmangodemaderapodríansercausadosporlaintroduccióndeinhibidoresdePCRalareacción(vealasección"EvitandolosinhibidoresdePCRenlasmuestras"másabajo).AlgunoslaboratoriosquerealizanelprocedimientodePCRconvencionalrecomiendanelusodehisoposconpuntadealgodónymangosdemadera.SenecesitanmásestudiosdelaboratorioparadeterminarsilosinhibidoresdePCRpuedenresultarenreaccionesfalsasnegativasenestaspruebas.
BATRACHOCHYTRIUMSALAMANDRIVORANS
Elhongoquítridodelassalamandras(Batrachochytriumsalamandrivoranso"Bsal")eslaprincipalcausadeldeclinedelasalamandradefuego(Salamandrasalamandra)enlosPaísesBajosyBélgica(Martelycolaboradores,2013),peroestetambiénhasidoencontradoenpoblacionesanfibiasencautiverio(Cunninghamycolaboradores,2015).Lasespeciesoetapasdevidavulnerablespuedansucumbiralaquitridiomicosisduranteelcursodeunperíododecuarentenarutinario,porestodebeserreconocidoquealgunasespeciesoindividuospuedenalbergarinfeccionesdebajonivelo"subclínicas"conBsalquenosonvisiblesenexámenesclínicosoenprocedimientosdenecropsiarutinarios.Losanimalesinfectadossubclínicamentepodríanactuarcomounafuentedeinfecciónparalasespeciesvulnerables,porloquedebeintentarsedetectary/otrataraestosanimalesantesdeintroducirlosacoleccioneszoológicasoacoloniasderesguardo.
Seleccióndeunapruebadediagnóstico Almomentodeseleccionarunmétododediagnóstico,esútildistinguirentrelaenfermedadolamuertecausadasporunainfecciónBsalyunainfecciónsubclínicaosubletal(animalesportadoresquenomuestransíntomasaparentesdeinfecciónoenfermedad).
• Laspruebasdereacciónencadenadelapolimerasa("PCR")sonconsiderablementemássensiblesquelosmétodosmorfológicosysonútilesparadetectarelbajonúmerodeorganismospresentesenlasinfeccionessubclínicas.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—137
• ElPCReslapruebaporelecciónparalarevisióndepoblacionescautivasosilvestresparadetectarlapresenciadeinfeccionesBsalyparalarevisiónencuarentenadelosanimales.
• Loscultivosfúngicos,usandotécnicasparaorganismosfúngicosconvencionales,nosonútilesparadetectarBsal(ElBsalrequieretécnicasespecializadasparasucultivo).
MétodosmorfológicosparadetectarBsal
Losmétodosmorfológicosdediagnósticosebasanenlaidentificacióndeorganismosfúngicoscaracterísticos(talos)delBsal,pormediodeexámenesmicroscópicososeccioneshistológicasHistologíaEldiagnósticopormediodeunahistologíaesmásadecuadoparamuestrascutáneasrecolectadasennecropsia,sinembargo,loscortesdededosdeanimalesvivostambiénpuedenserprocesadosdeestaforma.LosfragmentosdepielmudadanodeberíanserutilizadosparaladeteccióndeBsal,yaqueelhongopuedeencontrarsealrededordelaslesionesynosiempreenlacapacórnea,comoocurreconelBd(A.MartelPers.Com.)
o Lasmuestrasparahistologíadebenserpreservadasenformalinatamponadaneutralal10%(veaelcapítulo9paralaelaboracióndeformalinatamponadaneutral)oenetanolal70-95%.
o Lasmuestrasdenecropsiadeberíanincluirmúltiplesseccionesdepieldeespesortotaldelcuerpoventral,incluyendolaregiónpélvica("absorción"oparchepélvico),piernasypatas.
o Enlosanimalespequeños(pesanmenosde5a10gramos),elcadáverdebeestarintacto,desmineralizadodespuésdeunafijacióndeformalinaymúltiplesseccionescompletasdelcuerpodebenserpreparadas,estotambiénincluyelapiel.
o UnacoloraciónrutinariaconhematoxilinayeosinaporlogeneralessuficienteparademostrareltalodeBsal.LasparedesdeltalotambiénpuedenserpintadasconlatécnicaShiffdeácidoperyódico(PAS)(Martelycolaboradores,2013)
o Losorganismosintraepidérmicossetiñenenlainmunihistoquímica(Martelycolaboradores,2013)
o LaslesionescausadasporBsalsecaracterizanporunaevidenteulceracióndelapiel,contrarioalaslesionescausadasporBd,quegeneralmenteprovocanhiperplasiaepidérmicaehiperqueratosis(Martelycolaboradores,2013).
o Lassalamandrasdefuego(Salamandrasalamandra)infectadasconBsalconfrecuenciarevelanuncrecimientobacterianoexcesivoenlapiel(Martelycolaboradores,2013).
CaracterísticasmorfológicasdelostalosBsal.SeencuentradisponibleliteraturadetalladaquedescribelascaracterísticasmorfológicasdelostalosBsal(Martely
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—138
colaboradores,2013).Algunascaracterísticasquepodríanserútilesson(vealaimagen7.3):
• LostalosdeBsalestánubicadosdentrodelosqueratinocitos(Martely
colaboradores,2013).• LostalosdeBsalsonprincipalmentemonocéntricos,aunquealgunossoncoloniales
(Martelycolaboradores,2013).• Estossuelenmedirde6.9a7.2µm(Martelycolaboradores,2013).
Imagen7.4: Imagendemicroscopíaelectrónicadeunesporangiomaduroconhizoids(R)ImagenAn
Martel.
MétodosbasadosenPCRparaeldiagnósticodelBsal Laspruebasbasadasenlareacciónencadenadelapolimerasa(PCR)sonimportantesherramientasdediagnósticodeinfeccionesBsal.TantolastécnicasPCRconvencionales(Martelycolaboradores,2013)comolascualitativasseencuentranenuso(Blooiycolaboradores,2013).ElPCReselmétododediagnósticoporelecciónde:
• Larevisióndecuarentenadenuevosanimales.• Larevisióndeanimalesantesdesureintroducciónotranslocación.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—139
• InspeccióndepoblacionescautivasycriadasenlibertadparadetectarlapresenciayprevalenciadeinfeccionesBsal.
• Confirmaciónderesultadospositivosdeexaminacionesclínicas.• Dadasusensibilidad,unresultadopositivodelPCRsolosignificaqueelanimalestá
infectadoconBsal,lapruebanodistingueentreinfeccionessubclínicasyunainfecciónclínicaimportante(quitridiomicosis).
• Reconocerladistinciónentreunainfecciónsubclínicayunainfecciónclínicaimportanteesimportantealmomentodeinvestigareventosdemortalidadanfibia.EstosignificaquesololosresultadospositivosdeBsalenPCRnopuedenprobarquelaquitridiomicosisfuelacausadeunamuerteobservada.
ComparacióndediferentestécnicasPCR.LatécnicaPCRentiemporeal(Taqman)(Hyattycolaboradores,2007)tienenventajasencomparaciónconlosmétodosPCRconvencionales(Annisycolaboradores,2004).Estasventajasincluyen:
• Mayorsensibilidaddelaprueba.• Menoresposibilidadesdecontaminacióncruzadaduranteelprocesamientodelas
muestras(loquedacomoresultadopruebasfalsaspositivas).• Nohaynecesidaddeconfirmarlosresultadospositivospormediodeuna
secuenciacióndeADNdelosproductosPCR.• ElusodecontrolesinternosquedetectaninhibidoresdePCR.Ladetecciónde
inhibidoresdePCResimportanteporquelasmuestrasdehisoposcutáneosanfibiospresentadasparaunPCRconfrecuenciaseencuentrancontaminadasconsuciedadricaeninhibidoresomaterialvegetal.Sincontrolesinternosparalosinhibidores,algunasmuestrasquesisonpositivasparaADNBsalpodríanserreportadascomonegativas(falsosnegativos).
LasdesventajasdelatécnicaPCRentiemporealson:
• Costosmásaltosdelosreactivosnecesarios.• Disponibilidadlimitadadeequipomásespecializadopararealizarlaprueba.
LaeleccióndetécnicaPCRutilizadadependerádeunavariedaddefactores,incluyendocostosydisponibilidaddelasdiferentespruebas.UnnúmerolimitadodelaboratoriosdeinvestigacionesactualmenteofrecenPCRparaBsal.SugerenciasparaevaluaryescogerunlaboratorioparallevaracabopruebasBsalseencuentranenlasección7.2.LatécnicaPCRentiemporeal,siseencuentradisponible,seprefiereyprobablementeformaralabaseparalosestándaresinternacionalesrelacionadosalaspruebasdediagnósticoparaBsal
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—140
RecoleccióndemuestrasparaPCRdeBsalConsultelarecoleccióndemuestrasparaPCRdeBd.
Técnicadehisopadoparaanurosycaudadospostmetamórficos.(FotosporE.Kabay,ZooAtlanta)
1. Usandounmarcadorpermanentedepuntafina,etiqueteuncriovialconelnombre
delaespecieyelnúmerodeidentificaciónindividualdelanimal.
2. Useunpardeguantesdesechablesnuevosparacadaanimalqueseahisopado(Vealasecciónacercadecómo"Evitarlacontaminacióncruzadadelasmuestras"másabajo).
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—141
3. Abraelpaquetequecontieneelhisopoestéril.Asegúresedeevitarqueelhisopotengacontactoconsuperficiesdetrabajo,manososustratodelrecinto.
4. Gentilmente,usandounmovimientodebarrido,desliceelhisopoporlassuperficies
ventrales.Asegúresedeincluirpatas(adelanteyatrás),muslosyabdomen(sobretodoelparchepélvicoolaabsorción).Cadaáreadeberíaserhisopadade3a5veces.DadoquelasinfeccionesporBdsuelenconcentrarseenlassuperficiesventrales,noesnecesariopasarunhisopoenlapieldorsal.
5. Permitaqueelhisoposesequeconaire.Nopermitaquelapuntadelhisopohaga
contactoconsuperficies,manososustratos.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—142
6. Rompaocortelapuntadelhisopoypóngalaenelcriovialpreviamenteetiquetado.
7. AlmaceneloshisopossecadosconaireparaelanálisisPCRTaqmanaomenosde23oC(Temperaturaambiente).Vealasecciónquedescribeel"Almacenamientodemuestras".
8. Paraenviarloshisoposallaboratorio,estosdebenserenviadosconbolsasdehielo
paraprotegerlosdelastemperaturasextremasysedebecontratarunservicionocturnoode2díasdeentrega.Lasmuestrasquehayansidopreviamentecongeladasdebenenviarseenhielosecoparaprevenirsuderretimiento.
UnapresentaciónenvideodeestatécnicaparaelPCRdeTaqmanpuedeservistoaquí:http://amphibiaweb.org/chytrid/index.htmlOtrapresentaciónenvideo,lacualutilizahisoposderivadosdelamaderaadecuadosparaPCRconvencionales,puedeservistaaquí:http://www.amphibianark.org/frog_gallery.html
Técnicasdemuestreopararenacuajos
• Enlosrenacuajos,lainfecciónporBdselimitaaldiscooralo"piezasbucales"queratinizadasyelmuestreoparaPCRdebeestardirigidoaestaárea.
• LasmuestrasparaPCRincluyenlaextraccióndelaspiezasbucalesdespuésdelaeutanasiadelrenacuajo(muestreoletal)ounhisopadodelaspiezasbucalesenlosrenacuajosvivosusandounaplicadoromondadientesdemadera(Retallickycolaboradores,2006;Hyattycolaboradores,2007).
o Elusodemondadientes,aunqueseaunmétodoefectivo,hasidoasociadoamenorsensibilidaddelaspruebasencomparaciónalmétododemuestreoletal(Retallickycolaboradores,2006).
o Latécnicadehisopadoescomparablealmétododemuestreoletal,exceptoparainfeccionesdebajonivel(Hyattycolaboradores,2007).
• Paraelmuestreoletal,laeutanasiadebellevarseacabocomosedescribióenlasección8.6.Laspiezasbucalessonremovidasusandounbisturínuevoyestéril.Laspiezasbucalessedebensecaralaireyguardadasenpapeldefiltroodebenseralmacenadasenetanolal70%antesdesuprocesamiento.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—143
• Lossuministrosyprocedimientosgeneralesparalarecoleccióndemuestrasconhisopossonsimilaresalosdescritosparalosanurosycaudadospostmetamórficosmásarriba.Algunasconsideracionesespecialesson:
o Lasmuestrasdehisoposseobtieneninsertandounhisopoaplicadorenlabocaygirándolovariasveces(Hyattycolaboradores,2007).
o Lasmuestrasdemondadientesseobtienenraspandolasfilasdedientesyelpicoqueratinizadoconunmondadientesdemadera(Retallickycolaboradores,2006).Lasmuestrasdebenserpreservadasenetanolal70%.
o Existenpreocupacionesacercadelatoxicidadpotencialdelosguantesdenitriloylátexparalosrenacuajos.Pautasparaminimizarestosriesgosseencuentrandisponibles(Greerycolaboradores,2009).
Técnicasdemuestreoparacecílidos
• Enloscecílidos,lasinfeccionesconBdconfrecuenciasondetectadasenlasuperficiedorsaldelacabezayelcuerpo(Gowerycolaboradores,2013;Rendleycolaboradores,2015)yelmuestreoparaPCRdebeenfocarseenestaárea.
• Lossuministrosyprocedimientosgeneralesparalarecoleccióndemuestrasconhisopossonsimilaresalosdescritosparalosanurosycaudadospostmetamórficosmásarriba.
Evitarlacontaminacióncruzadademuestras LaspruebasPCRsonmuysensiblesypuedendetectarcantidadesmuypequeñasdeADNBdyBsal.EstoesútilparaladeteccióndeanimalesquetieneninfeccionesBdoBsaldemuybajonivel,peroincrementalasposibilidadesdequelasmuestrasdeunanimalnoidentificadopuedancontaminarseconelADNBd/Bsaldeunanimalinfectado,provocandoasíunresultadofalsopositivoenlaprueba.Porlotanto,esmuyimportantetomarprecaucionesparaevitarlacontaminacióncruzadadelasmuestras,estasprecaucionesincluyen:
• Debeusarseunparnuevodeguantesdesechablesdelátexonitriloparacadaanimalalqueselerealizaranpruebas(Mendezycolaboradores,2008).
• Evitequeloshisopos(sobretodolapuntadeestos)hagancontactoconsuperficiesosustratosquenoseanlapieldelanimalalqueselerealizaralaprueba.
• Siseusaninstrumentosparacortarlapuntadelhisopoyponerlaencrioviales,debeusaruninstrumentofrescoydesinfectadoparacadamuestra.
o Paradesinfectarlosinstrumentosconestepropósito,debesumergirlosenetanolal70%yluegoflamearlosbajounalamparitadealcohol.
o Eviteusarsolucionesdelejíaparadesinfectar,yaqueestopuededegradarelADNdeBdenlasmuestrasdehisopos(Loqueresultaríanpruebasfalsasnegativas;Cashinsycolaboradores,2008).
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—144
EvitarinhibidoresdePCRenlasmuestras LosmaterialesextrañoscomotierraomateriavegetalpuedencontenermaterialesqueinhibenlareacciónPCR.Estopodríacausarunresultadodepruebafalsonegativo(enelqueelanimalestáinfectadoconBd,peroestenoesdetectadoporlapruebaPCR).
• Antesdelhisopadocutáneo,debeprocurarsederemovermanualmentelacontaminacióngravedelapiel.Losanimalespuedenserenjuagadosgentilmenteconaguanocontaminadaantesdelmuestreo,perodebeevitarenjuagarlosbruscamentedebidoaquepodríalavarlascélulascutáneasuorganismosinfectadosdeBd/Bsal.
• Sidecidehacerlalimpiezamedianteelenjuague,elaguaqueutilicenodeberíaserdelrecintoomedioambientedelanimal.
• LoslaboratoriosquerealizanPCRparadetectarBdsiempredeberíanutilizarcontrolespositivosinternosexógenosparadetectarinhibidoresdePCR(Hyattycolaboradores,2007).
Almacenamientodeloshisoposcutáneos
Elalmacenamientodehisoposdespuésdelarecoleccióndemuestrasesuntemaimportante.Elproblemamásimportanteparaloshisopossecadosalairesonlastemperaturasextremadamentealtas:
• ElADNdeBdenloshisoposcutáneossecadosalaireesnotablementeestable,yalgunoshisoposexperimentaleshansidoalmacenadosporhasta18mesesatemperaturaambiente(23oC)sinreduccionesdelasensibilidaddelaprueba(Hyattycolaboradores,2007).LaestabilidaddelADNBsalenhisopossecadosalairenohasidoprobada,peroesprobablequeestaseasimilaraladelBd(A.Martelpers.com.).
• Encontraste,laexposicióndehisoposatemperaturasmuyaltas(>38oC)por7díasresultoenunamenorrecuperacióndeADNBd,loquepodríadarcomoresultadofalsosnegativosenlosanimalesconinfeccionesBddebajonivel(VanSluysycolaboradores,2008).
Porlotanto,serecomiendaquelasmuestrasdehisoposcutáneossecadosalaireseanalmacenadasenlatemperaturamásbajaposible(Skerrattycolaboradores,2008).
• A25oC(refrigerador)omásbaja.• Lasmuestrasdeberíansercongeladas(–20oComásbajo)sielanálisisdeestasnose
llevaraacaboenunperíodode6mesesdelarecoleccióndemuestras.Paraelenvíoallaboratorio:
• Idealmentedeberíaenviarloshisoposporenvíonocturnooporunserviciodetrasladode2días(porejemplo,FederalExpress;UPS;DHL).
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—145
• Considereutilizarpaquetesdehieloparaprotegerlosdelastemperaturasextremas(sobretodocuandoexistalaposibilidaddequelospaquetesesténexpuestosaaltastemperaturas).
• Lasmuestrasquehayansidopreviamentecongeladasdebenenviarseenhielosecoparaprevenirsuderretimiento.
Elalmacenamientodeloshisoposenetanolal70%hasidosugeridocomounaalternativaalalmacenamientoenfrío,sobretodoparaloshisoposqueseránanalizadospormediodeunmétodoPCRconvencionaloparalasmuestrasrecogidasenelcampoquenotienenaccesoarefrigeración(Annisycolaboradores,2004;Bremycolaboradores,2007).Detallesseencuentrandisponiblesen:www.amphibianark.org/pdf/Field%20sampling%20protocol%20for%20amphibian%20chytrid%20fungi%201.0.pdf.Valdríalapenaquelatécnicadepreservaciónenetanolseavalidadaexperimentalmenteenellaboratorioparalapreservacióndemuestrasexpuestasamuchocalor.
Agrupacióndelasmuestrasdehisoposcutáneos LaagrupaciónopruebaporlotesdehisoposcutáneosdemúltiplesanimalesenunareaccióndePCRhasidoutilizadaparareducirloscostosasociadosalaspruebasparadetectarelhongoquítridoenungrannúmerodeanimales.Lapruebaporlotesesmásútilenlarevisióndepoblacionesyaqueenestecasolosresultadosindividualesnosontanimportantes.
• Enlassituacionesenquelosresultadosindividualesseanimportantes,noserecomiendalaagrupacióndeloshisopos.Estoyaquesepodríareducirlasensibilidaddelapruebayexistiríalaposibilidaddepasarporaltoinfeccionesquitridiasdebajonivel(pruebasfalsasnegativas).
• Deformaexperimental,sehancombinadohasta5hisoposdeBdsinunaperdidageneraldesensibilidad(Hyattycolaboradores,2007).Sinembargo,enelmismoreporteunhisopoindividualdeuncampodeestudioconmuybajosnivelesdeBdnofuedetectadocuandoloshisoposfueronagrupadosyotroshantenidoobservacionessimilares(Skerrattycolaboradores,2008).
• Sedeberíanllevaracaboestudiosexperimentalesqueexaminenlaposibilidaddemuestrearamúltiplesanimalesconelmismohisopo.Estosoloseríaútilparagruposdeanimalesalojadosenelmismorecintoycuandolosresultadosindividualesnosonimportantes(seasumequelosanimalesalojadosjuntosestáninfectadosconBd/BsalsinimportarlosresultadosindividualesdelPCR).
InterpretacióndelosresultadosdePCRparaBd/Bsal
LosresultadosdelPCRTaqmanparaBd/Bsalporlogeneralseránreportadoscomopositivos,equívocosonegativos.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—146
• UnresultadopositivoindicaquelapruebadetectoADNdeBd/Bsalyquelos
animalesprobablementeesténinfectados.o LosresultadosfalsospositivossonpococomunesamenosqueelADNse
hayacontaminadoyaseadurantelarecoleccióndemuestras(vea"Evitarlacontaminacióncruzadademuestras"másarriba)oduranteelprocesamientodellaboratorio.
o LoslaboratoriosquerealicenPCRdeberíanusarprocedimientosquereduzcanlasposibilidadesdecontaminación,asícomocontrolesnegativosquepuedandetectareventosdecontaminación(vealasección7.2).
o Losanimalescautivospuedensertratadosconmedicamentosantimicóticosparaintentarmitigarlainfección(vealasección8.1).Estosnodeberíanserintroducidosaunacoleccióndezoológico,coloniaderesguardo,outilizadosenunprogramadereintroducciónhastaquehayaconfianzaenquelainfecciónfueeliminada.
• UnresultadoequívocoseráreportadoporloslaboratoriosquerealizanlapruebaPCRTaqmanyocurrecuando1o2delosdepósitosenunaprueballevadaacaboentriplicadosonpositivosyotrosdepósitossonnegativosparaADNdeBd/Bsal.
o LosresultadosequívocossucedenacausadeunacontaminacióndeADNenellaboratoriooporinfeccionesBd/Bsaldebajonivel(subclínicas).
o Enestecaso,lamuestraoriginalpuedeseranalizadaotravez,sepodríarecomendarunnuevomuestreodelanimalo,sepodríanrealizarambas.
• UnresultadonegativoindicaquelapruebanodetectoADNdeBd/BsalLosresultadosnegativospuedensignificarunodelassiguientes:
o UnresultadonegativorealyaqueelanimalnoseencuentrainfectadoconBd/Bsal
o UnresultadofalsonegativoyaqueelanimaltieneunainfecciónBd/Bsaldebajonivel(ohamudadounagrancantidaddepielinfectadarecientemente)ynohabíasuficienteADNBd/Bsalenlamuestraparaqueestefueradetectado.
o UnresultadofalsonegativodeunanimalinfectadoconBd/BsalyaquehayinhibidoresdePCRpresentesenlamuestra(vea"EvitarinhibidoresdePCR"másarriba).LamayoríadeloslaboratoriosquerealizanPCRTaqmanutilizancontrolesinternosparadetectarmuestrasquecontenganinhibidoresdePCR.
o PorqueelanimalestáinfectadoconunasepadeBd/BsalquenoesdetectadaporelPCRTaqman(Gokaycolaboradores,2009).
Laposibilidadderesultadosfalsosnegativos,sobretodoacausadeinfeccionesdebajonivel,parcialmenteexplicalasobservacionesacercadecómoanimalesvulnerablesingenuosexpuestosaBdamedidaquesusinfeccionesprogresanenintensidad(Hyattycolaboradores.2007).Esposiblequelosanimalesconinfeccionescrónicasdebajonivel(portadoresdeenfermedades)noseandetectadosconestesistemademuestreo.Podríasernecesarioestresaralosanimales,realizarlosmuestreosatravésdeunperíodomás
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—147
largoointroduciraanimalesingenuosyvulnerablesparadetectarelBdenlosanimalesportadores.
• Envistadeestasobservaciones,enlassituacionesenquelosresultadosdelaspruebasPCRseancríticos(porejemplo,encuarentenaanfibiaoparaprogramasdereintroducciónalanaturaleza),sesugiererecolectarmúltiplesmuestrasparaPCRdehisoposenunperíodode2semanas,omás,paraincrementarlaconfianzaenlosresultadosnegativosindividualesdecualquierPCR.
Unestudioexperimentaldemostróquelarecolecciónde3hisoposenunperíodode14díasincrementolasposibilidadesdedetectaralosanimalesconinfeccionesBddebajonivel(Hyattycolaboradores,2007).Estenúmerodemuestreospodríanoserposibledesdeunpuntodevistalogísticoofinancieroparamuchosprogramasquemantienenaanfibioscautivos.Ladecisióndellevaracabomúltiplespruebasdependerádelriesgorelativo.Ejemplosdesituacionesdealtoriesgoincluyen:
• AnimalesobtenidosdecoleccionesconunhistorialmédicodepocaconfianzaodedistribuidoresquenoposeencoloniasdeanimaleslibresdeBd/Bsal.
• Animalesprovenientesdecoleccionesofuentesconcasosrecientementeidentificadosdequitridiomicosis.
• Animalessilvestresqueentraranacautiverio.• Casosdeanimalesdealtovalorenqueelriesgo(sinimportarcuanpequeño)de
introducironodetectarBd/Bsalseainaceptable.7.4INFECCIÓNRANAVIRUS LosiridovirusenelgénerodelosRanavirussonreconocidoscomounadelasmayorescausasdeeventosdemortalidadmasivaenpoblacionesdeanfibiossilvestres(Greenycolaboradores,2002;Jancovichycolaboradores,1997;Bollingerycolaboradores,1999;Grayycolaboradores,2009;Driskellycolaboradores,2009;Kikycolaboradores,2012).
• Adiferenciadelaquitridiomicosis,lasinfeccionesRanavirusnohansidoasociadasdeformaconcluyenteconladisminuciónalargoplazodelaspoblaciones.
• LoseventosdemortalidadasociadosaRanavirusenanimalescautivosocoleccioneszoológicasanfibiassolohansidodocumentadosrecientemente(Donnellyycolaboradores,2003;Majjiycolaboradores,2006;Pasmansycolaboradores,2008;Millerycolaboradores,2008;Driskellycolaboradores,2009;Kikycolaboradores,2012)ymuypocoessabidoacercadelaprevalenciaeimportanciadelasinfeccionesenpoblacionescautivas.
o Estopuedeserporqueloshallazgosclínicosypatológicospuedensuperponerseconotrasenfermedadesinfecciosasanfibias(porejemplo,Kikycolaboradores,2012)yporquelaspruebasdediagnósticoespecíficasnosiemprehanestadodisponiblesparaveterinarios.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—148
• LasinfeccionesRanaviruspuedensersubclínicas(animalesportadoressinseñalesexternasdeenfermedad)y,porlotanto,lasinfeccionespodríanocurrirensituacionesdecautiveriosinserdetectadas.
• SonnecesariasinvestigacionesprospectivasdecoleccionesanfibiascautivasparaencontrarevidenciadeinfeccionesRanavirusyasíinformarmejoralasgestionesdeanimalesencautiverioyalosprogramasdereintroducciónalanaturalezadeanfibios.
Lasprincipalespreocupacionesrespectoalosranavirusenrelaciónalascoloniasderesguardodeanfibiosincluyen:
• Laposibilidaddecausarmortalidadsignificativaenpoblacionescautivasvulnerables.• Laposibilidaddequelosanfibioscriadosencautiveriopertenecientesacolecciones
zoológicascosmopolitassirvancomoportadoresparaelmovimientoderanavirushaciapoblacionesdeanfibiossilvestres.
o ElmovimientoantropogénicodelosranavirushasidodocumentadoenlaindustriadecebosparalapescalosEstadosUnidosytambiénenlasranastoroimportadasdesdelosEstadosUnidos(PiccoyCollins,2008;Schloegelycolaboradores,2009).
• Algunosranavirusposeenunampliorangodehuéspedes,elcualpuedeincluirnosoloadiferentesespeciesanfibias,sinotambiénadiferentesclasesdeanimales,especialmentepeces,anfibiosyreptiles,expandiendoasílapotencialimportanciaecológicadelosranavirusintroducidosanuevoslugares(Johnsonycolaboradores,2007;Schockycolaboradores,2008).
• Puedenexistirdiferenciasintraespecíficasimportantesentrecepasdepatógenosypoblacioneshuésped.Inclusocepasderanavirusrelacionadasestrechamente(porejemplo,cepasdelvirusAmbystomatigrinum)puedencausarnivelesmuydiferentesdemortalidadyenfermedad.Además,diferentespoblacionesdeanfibiospuedenresponderdemaneramuydiferentesaunasolacepadeunpatógeno.Estosignificaquenotodaslascepasynotodaslaspoblacioneshuéspedsecomportandelamismamanera(Schockycolaboradores,2010).
Losranavirussonungrupograndedevirusrelacionadosycadaunopuedeteneruncomportamientobiológicoúnico(porejemplo,rangodehuésped;virulenciahaciaespeciesanfibiasdiferentes).Losranavirusdepreocupaciónenlaconservacióndeanfibiosconfrecuenciaseránlosquecaigandentrodelosvirusdelaranatipo3(FV3),losvirusAmbystomatigrinum(ATV),elranavirusdelferreretcomún(CMTV)oeliridovirusBohle(BIV).
• LosvirusFV3porlogeneralseencuentranaisladosdelosanfibiosanuros(ranas),peroestostambiénhansidoencontradosentortugasyenalgunassalamandras(Johnsonycolaboradores,2007;Duffusycolaboradores,2008).
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—149
• LosvirusATVseencuentrannaturalmenteenlassalamandras,mientrasquelosanfibiosanurosaparentementesonresistentesalainfección.Sinembargo,infeccionesexperimentalesrecientesenránidoshanincrementadolasposibilidadesdequelosvirusATVposeanunrangodehuéspedesmásamplio(Schockycolaboradores,2008).
• Elranavirusdelferreretcomún(CMTV),provenientedeEuropa,esimportanteyaquesesabequepuedecausarmortalidadesmasivasydisminucionespoblacioneslocalizadasenmúltiplesydiversosanfitrionesanfibios(Priceycolaboradores,2014)
• EliridovirusBohle(BIV),provenientedeAustralia,esdiferentealosvirusFV3yATVyesimportanteyaquehamostradosercapazdecausarenfermedadesenlosanfibiosanurosylospeces.
LosbrotesdeenfermedadesranaviralesenanurosconvirussimilaresalosFV3confrecuenciaocurrenenrenacuajosoenranasjóvenesrecientementemetamorfoseadas,perolasenfermedadestambiénpuedenobservarseenanimalesadultos.LasenfermedadesasociadasavirusATVenlassalamandraspuedenserobservadasensusetapasdevidalarvariasyadultas.
• Algunossíntomasclínicosdeenfermedadesranaviralespuedenincluirhemorragiascutáneas(delapiel),ulceracióndelapiel,hemorragiavisceralyedemasubcutáneo.Porfuera,lasinfeccionespuedenparecerseal"síndromedepiernaroja",elcualhistóricamentehasidoatribuidoainfeccionesbacterianassistémicasenanfibios.
• Hiperplasiaepidérmicaquedacomoresultado"pólipos"enlapiel,quepuedeserobservadaensalamandrasinfectadasconvirusATV.
• Enlosanuros,sehaobservadoulceracióndelapielcrónicasinevidenciadeenfermedadesranaviralessistémicas(Cunninghamycolaboradores,2008).
Infeccionessubclínicas(Sinseñalesexterioresdeenfermedad)sipuedenocurrir.Peronoesclarosiestassontransitoriasosipuedenpersistirporlargosperíodosdetiempo.Laposibleduracióndelasinfeccionessubclínicaspuededependerdelaespeciehuésped,eltipodeRanavirusyotrosfactorestalescomoelestadoinmunitario.
• XenopuslaevisinfectadosexperimentalmenteeliminaronlainfeccióndeVirusdelaranatipo3entansólo20días,sinembargo,ungrupodesalamandrastigreinfectadassubclínicamenteconelvirusAmbystomatigrinummostraronevidenciadeinfecciónporunmínimode6meses(Brunnerycolaboradores,2004;Robertycolaboradores,2007).
SeleccióndeunapruebadediagnósticoparalosRanavirus
El diagnósticodeinfeccionesRanaviruseselmásfácildeobtenerenlosanimalesqueseencuentrenenfermosyquetenganenfermedadesranaviralessistémicas.AdiferenciadelaspruebasPCRparadetectarelhongoquítridoanfibio,laspruebasdediagnósticodisponiblesnoseencuentranvalidadasparaladeteccióndeinfeccionesenanimales
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—150
aparentementesanos(animalesinfectadossubclínicamente).Estosignificaquenoexistenpruebasconfiablesparadetectarinfeccionessubclínicasenanimalesvivosconpropósitostalescomo:
• InspeccionesdepoblacionescautivasosilvestresparadetectarlaincidenciaoprevalenciadeinfeccionesRanavirus.
• Larevisióndenuevosanimalesencuarentenaantesdesuentradaaunacoleccióncautiva.
• Larevisiónantesdesuusoenprogramasdereintroducciónotranslocación.Unavariedaddemétodosdediagnóstico,loscualesincluyenhistopatología,inmunihistoquímica,aislamientodelvirusencultivocelular,métodosmoleculares(reacciónencadenadelapolimerasa)ypruebasserológicassondescritosenlaliteraturadeinvestigaciónysonresumidosmásabajo.Paraeldiagnósticodeenfermedades,vigilanciadeenfermedadesinfecciosasyevaluaciónderiesgosparaprogramasdeconservacióndeanfibiosencautiverio,laspruebasbasadasenlareacciónencadenadelapolimerasa(PCR)sonlasmásusadasparadiagnosticardeformadefinitivalasinfeccionesRanavirus.
MétodosmorfológicosparaeldiagnósticodelosRanavirus LaNecropsiaehistopatologíapuedenserutilizadasparadesarrollarundiagnósticopreliminardeinfeccionesRanavirussiseobservanlesionesmicroscópicassospechosasconosincuerposdeinclusióncaracterísticos.AlgunaslesionescomunesasociadasconlainfecciónRanavirusincluyen:
• Necrosisconosinhemorragiaenlugarestalescomohígado,riñón,tractogastrointestinal,tejidohematopoyético(incluyendositiosdehematopoyesisenelhígado,riñónybazo)olapiel(Grayycolaboradores,2009).
• Proliferaciónepitelial(delapiel)eninfecciónATV(Bollingerycolaboradores,1999)• Enalgunoscasoselúnicohallazgopuedeserulceracióncutánea(Cunninghamy
colaboradores,2008)• Cuerposdeinclusiónbasófilosintracitoplásmicos(vealaimagen7.4abajo).Estos
puedensermuydifícilesoimposiblesdedetectar.Enalgunaslesionesestospuedenserconfundidoscondesechosnuclearesodeotrascélulas.
• Lesionessutilesonoespecíficastalescomonecrosisdeltejidohematopoyéticoquepodríannoserreconocidasamenosqueelpatólogoposeaunaextensivaexperienciahistológicaenanfibios.
Dadoqueloshallazgospuedensernoespecíficosysuperponerseconotrasenfermedadesinfecciosasanfibias,laconfirmacióndeunpresuntodiagnósticodeRanaviruspormediodeotrosmétodosdediagnósticotalescomoinmunihistoquímicaoPCRsuelesernecesario.
• Lainmunihistoquímicaharesultadoexitosausandoantisuerodeconejoparaelvirusdelanecrosishematopoyéticaepizoótica(VNHE)delospeces(Cunninghamy
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—151
colaboradores,2008)ounanticuerpomonoclonalparalaproteínacápsidemayordelFV3(Robertycolaboradores,2005).Ladisponibilidaddeestosreactivospodríaestarlimitadaalaboratoriosdeinvestigaciones.
• SehadescritounatécnicaparaamplificarelADNRanavirusdelostejidosincluidosenparafina(Kattenbeltycolaboradores,2000).
• Lamicroscopíaelectrónicadetransmisiónpuedeserutilizadaparamostrarviriónesdeiridovirusenlostejidosafectados.
Imagen7.5:Secciónhistológicadelhígadoquemuestracuerposdeinclusiónintracitoplásmicoscaracterísticosdelasinfeccionesranavirus(flechas)dentrodeloshepatocitos(célulasdelhígado).
Aislamientodelosranavirusenloscultivoscelulares
Losranaviruspuedenseraisladosencultivoscelularesylíneascelularesdepecessoncomúnmenteutilizadas(Hengstbergerycolaboradores,1993;Zupanovicycolaboradores,1998;Bollingerycolaboradores,1999;Dochertyycolaboradores,2003).
• ElaislamientodelvirusgeneralmenteesutilizadoparainvestigacionesenentornodelaboratorioypodríanoestarampliamentedisponibleparaeldiagnósticoclínicodeinfeccionesRanavirus.
• Elaislamientodelvirusesnecesariopararealizarperfilesdepolimorfismosdelongituddefragmentosderestricción(RFLP,porsussiglaseninglés)necesariosparaidentificarunRanavirusespecífico.Estopodríaserútilenalgunosprogramasdeconservacióndeanfibiosenloscualesesnecesariosabersielvirusquecirculaenunapoblaciónsilvestreeselmismovirusqueestápresenteenunapoblacióncautiva(vermásabajo).
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—152
• Lasmuestrasapropiadasparaelaislamientodelvirussontejidosfrescosocongelados,talescomohígadoyriñón,obtenidosenlanecropsiadelosanimalesafectados.
Serologíaparalosranavirus
Sehadescritounatécnicadeensayoinmunoenzimático(ELISA,porsussiglaseninglés)paraladeteccióndeanticuerposantiRanavirusensuerodesaposmarinos(Zupanovicycolaboradores,1998).
• EstatécnicasolopuededetectarexposicionespreviasaunRanavirus,noinfeccionesactivas.
• LaspruebasELISApuedenserútilesparaestudiosdesaludanivelpoblacional;sinembargo,lapruebanoseencuentradisponiblefueradelaboratoriosdeinvestigación.
• OtrasdesventajasdeunusomásgeneralizadodeestemétododepruebaseslainhabilidaddeobtenervolúmenesdemuestrasdesangregrandesdemuchasespeciescautivasylanecesidaddevalidarlapruebaparasuusoenotrasespeciesapartedelSapomarino(Rhinellamarina).
MétodosbasadosenlaPCRparaeldiagnósticodeinfeccionesRanavirus
LaspruebasdereacciónencadenadelapolimerasabasadasenlaPCRparadetectarelADNlosranavirussehanvueltoampliamentedisponiblesfueradeinvestigacionesenentornosdelaboratorio.YasehandescritolastécnicasPCRconvencionalesyentiemporeal(Taqman)basadasenlaproteínacápsidemayor(MCP)(Maoycolaboradores,1997;Pallisterycolaboradores,2007;Schockycolaboradores,2008).
• LastécnicasPCRhansidolasmejoresvalidadasparasuusoenmuestrasdetejido.Estaspuedenaplicarseaotrostiposdemuestras(porejemplo,hisoposdeanimalesvivos),perolosresultadosdebenserinterpretadosconprecaución.
ComparacióndediferentestécnicasPCR.LaPCRconvencionalusandoelconjuntoprimarioMCP4/5descritoporMaoycolaboradoresen1997escomúnmenteutilizadaparadetectarranavirus.LasventajasdelaspruebasPCRconvencionalesson:
• LahabilidadderealizarunasecuenciacióndeADNdelproductodelPCRyobtenerinformaciónadicionalacercadeltipodeRanaviruspresente(porejemplo,unvirusFV3oATV).
• BajocostodereactivosyequipoencomparaciónconlosmétodosPCRentiemporeal.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—153
LasdesventajasdelaspruebasPCRconvencionalesson:
• LanecesidadderealizarunasecuenciacióndeADNounanálisisSouthernblotparaconfirmarlosresultadospositivos.
• LaPCRconvencionalpuedesermenossensiblequelastécnicasPCRentiemporeal.
LatécnicaPCRentiemporealtieneventajasparasituacionesdediagnóstico,talescomo: • NohaynecesidadderealizarunasecuenciacióndeADNounanálisisSouthernblot
paraconfirmarlosresultadospositivos.Estoaceleraladisponibilidaddelainformacióndiagnóstica.
• LamayorsensibilidaddelaPCRentiemporealpermitedetectarcantidadesmáspequeñasdeADNRanavirus.
LasdesventajasdelaPCRentiemporealson:
• Costosmásaltosdereactivosyequipo.• Sinecesitacaracterizaralvirus(porejemplo,determinarsiesunvirusFV3oATV),
serequeriránreaccionesPCRadicionalesconmásconjuntosprimariosespecíficosdePCRentiemporealounaPCRconvencionalconsecuenciacióndeADN.
RecoleccióndemuestrasparalaPCRRanavirus
LaeleccióndetipodemuestraparalaPCRdeRanavirusdependerádesilasmuestrasfueronobtenidasenlanecropsiadeunanimalmuertoosielmuestreosellevaraacaboenunanimalvivo.Muestrasdenecropsia: ParalaspruebasenanimalesenfermosquemuerandeformanaturaloqueseansacrificadosdebidoalasospechadequetienenunaenfermedadRanavirus.LasinfeccionesRanavirusletalesafectanamúltiplessistemasorgánicosy,porlotanto,eldiagnósticodeberíaserapartirdelmuestreodeunoomásdelossiguientestejidosenlanecropsia:
• Hígado.• Riñón.• Piel(Siseobservanlesionescutáneasulcerativasoproliferativas;sesugierenPCR
simultáneosdehígadooriñónparalamayoríadeloscasos).ParausartejidosdelanecropsiaparadetectaranimalesqueseencuentrensubclínicamenteinfectadosconunRanavirus(elanimalnomurióporlainfecciónRanavirus,peroeraportadordeunainfección).EstetipodepruebaspuedeserútilparalaspruebasenpoblacionesquebusquenlapresenciaoausenciadeinfeccionesRanavirus.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—154
• Elriñónylostejidosquecontenganunaltonúmerodecélulasresidentesdetipomacrófago,comoelhígadooelbazo,podríanserútilessegúnhallazgoshechosenranasafricanasdeuñas(Xenopuslaevis)infectadassubclínicamenteconFV3(Robertycolaboradores,2005,2007).
• LapulverizaciónyelanálisisPCRdecadáveresenterossonotraconsideraciónparalosestudiosdepoblaciones(GreeryCollins,2007).
LasmuestrasdetejidodelanecropsiadebenserrecolectadasenbolsasdeestiloWhirl-Pak®(Nasco,USA,www.enasco.com)oencriovialesNuncCryoTubesTMoVangardCryosTM(SumitomoBakeliteCo.,Ltd.,Japan;www.sumibe.co.jp/english/).Sedebeutilizarunconjuntoseparadodeinstrumentosparacadatejidomuestreadoconelpropósitodeevitarlacontaminacióncruzada.Lostubosdebenseretiquetadosconelnombredelaespecie,tipodetejido,númerodeidentificaciónindividualdelanimalylafecha.Muestrasclínicasonoletales(Muestrasdeanimalesvivos):
DebidoaquelasinfeccionesletalesdeRanavirussuelenafectaramúltiplessistemasorgánicos,diferentestiposdemuestrasclínicas(noletales)tienenelpotencialdeserexitosasendetectarlainfección.
• Lasmuestrasclínicassonlasquetienenmásprobabilidadesdeserexitosasendetectarinfeccionesenanimalesevidentementeenfermosconenfermedadesranavirales.Estosanimalesconfrecuenciatienengrandescantidadesdelvirusquepuedenserdetectadasenmúltiplestejidos.
• AdiferenciadelaspruebasPCRparadetectarelhongoquítridoanfibio,laspruebasdediagnósticodisponiblesnoestánvalidadasparaladeteccióndeinfeccionesenanimalesaparentementesaludables(animalesinfectadossubclínicamente).Estosignificaquenoexistenpruebasconfiablesparadetectarinfeccionessubclínicasenanimalesvivosparapropósitostalescomo:o inspeccionesdepoblacionescautivasosilvestresparadetectarlaincidencia
oprevalenciadeinfeccionesRanavirus.o larevisióndenuevosanimalesencuarentenaantesdesuentradaauna
coleccióncautiva.o larevisiónantesdesuusoenprogramasdereintroducciónotranslocación.
Losanimalesinfectadossubclínicamentepodríantenermenorescantidadesdevirusyelviruspodríaestarpresentesoloenalgunostejidos(porejemplo,elriñón).Porlotanto,estasinfeccionespodríansermásdifícilesdedetectareneltipodemuestrasqueseobtienenfácilmentedeanimalesvivos.Siserealizanpruebasenanimalesaparentementesaludables,unresultadopositivoqueindiquequesedetectóADNRanavirusesmásdefinitivoqueinresultadonegativo.LosresultadosnegativosdepruebasenanimalesaparentementesaludablesnodeberíanutilizarseparadeterminarodeclararqueunanimalseencuentralibredeunainfecciónRanavirus.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—155
Lostiposdemuestrasquepuedenserconsideradasparaanimalesvivosincluyen:
• Hisoposcutáneos(solosiseobservanlesionescutáneastalescomoúlceras),delacavidadoral/faringeocloacales.o ParalarecoleccióndemuestrasparaPCR,sonpreferiblesloshisoposcon
mangodeplásticoypuntaderayón.o Elhisopodebeseraplicadoogiradogentilmenteenlaubicaciónqueserá
muestreaday,despuésdelarecoleccióndemuestras,lapuntadelhisopodebeserrotaocortadayluegodepositadaenuncriovialetiquetadoounabolsaestéril.
o SeusaronhisoposcloacalesyoralesparadetectardeformavariableinfeccionesRanavirusenTortugasdeorejasrojasdeFloridainfectadasexperimentalmente(Johnsonycolaboradores,2007),peroestemétodonohasidovalidadoparaanfibios.
• Labiopsiadetejidosusandocortesdededos(anuros)ocortesdealetas(puntasde
colasdesalamandras)hasidodescritacomounmétododemuestreonoletal(St-AmouryLesbarreres,2007;GreeryCollins,2007).
o Esmuyprobablequeestoentregueundiagnósticoparalosanimalesqueseanvirémicos(Quetengangrandescantidadesdeviruscirculandoporsusangre).
o TécnicassonmenossensiblesqueunaPCRdehígadouhomogeneizadosdecuerpocompleto
o Podríanodetectaraanimalesenetapastempranasdeinfecciónoaanimalesconinfeccionessubclínicas.
o Labiopsiadetejidopodríasermuyinvasivaparasuusoclínicorutinario.
• Lasmuestrasdesangreenteraodecapasleucocitariaspuedenserútilesparadetectaraanimalesvirémicos.
o Noseesperaqueestatécnicaseadiagnósticaparaanimalesenetapastempranasdeinfecciónoparaanimalesconinfeccionessubclínicas.
o Losextremosdelostubosmicrohematocritoscentrifugadosquecontienenlacapaleucocitariasonrotosydepositadosenuncriovialopuedealmacenarlostubosenunabolsaplásticaestéril.
o SiseutilizananticoagulantesprefieracitratodesodiooEDTA.Silasangrerecolectadaespuestaenvialesconanticoagulantes,asegúresedenotificarallaboratorioquerealizaralaspruebas.LapresenciadeestosanticoagulantespodríainterferirconlasreaccionesPCRycrearresultadosfalsosnegativos.Sinembargo,estosanticoagulantespuedenserfácilmentemanejadosenlasreaccionesPCRsiempreycuandoellaboratorioestéaltantodesupresenciaenlasmuestrasypuedahacerlosajustesnecesariosparalascondicionesdereaccióndelasPCR.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—156
Almacenamientodelasmuestras:TodaslasmuestrasparalasPCRdeRanavirusdebenseralmacenadasenla
temperaturamásbajaposibledespuésdesurecolección.
• Congelarlasenunfrigoríficoconvencional(–20oC)esadecuadoparaelalmacenamientoacortoplazode1a2semanas.Tengacuidadoyevite(odesactive)losciclosautomáticosdedescongelamiento,loscualesseencuentrandisponiblesenmuchosmodelosdecongeladores.Eldescongelamientocomprometerálacalidaddelasmuestras.
• Paraelalmacenamientoalargoplazo,esmejorcongelaratemperaturasde–70oC,omásbajasconfrigoríficosultrafríosonitrógenolíquido.
• Lasmuestrascongeladasdeberíanserenviadasallaboratorioenhielosecoparaprevenirsudescongelamiento.
InterpretacióndelosresultadosPCRdeRanavirus
LosresultadosdelastécnicasPCRconvencionalesoentiemporealparadetectarRanavirussuelenserreportadoscomo"positivos"o"negativos".• UnresultadopositivodelaPCRindicaquelapruebadetectoADNRanavirusenla
muestra.ElresultadopositivodelaPCRsoloindicalapresenciadeunRanavirus,peronodistinguealosanimalesqueteníaninfeccionesletalesdelosportadoressubclínicosdeinfecciones.LacorrelacióndelosresultadosdelPCRconloshallazgosclínicosydenecropsia(histopatológicos)típicosdelasinfeccionesRanavirus(vermásarriba)esnecesariaparadeterminarsiunRanavirusfuelacausaprobabledeunamuerteouneventodemortalidad.
• LaspruebasPCRfalsaspositivassoncircunstanciasenquelapruebadaunresultadopositivo,peroelanimalnoestáinfectadoconunRanavirus.Máscomúnmente,estoocurrirácomoresultadode:
o LacontaminaciónconADNRanavirusdelasmuestrasdurantelarecoleccióndemuestrasoduranteelprocesamientodelaboratorio.TodosloslaboratoriosquerealizanPCRdeberíantenerprocedimientospreparadosparareducirlaposibilidaddecontaminaciónydeberíanutilizarcontrolesnegativosdemuestrasparadetectareventosdecontaminación.
o NorealizarunasecuenciacióndeADNoanálisisSouthernblotconfirmativosenlasmuestraspositivas,comoesdeterminadoporlatécnicadePCRconvencional.LarazóndeestoesqueelADNnoRanavirusalgunasvecesseráamplificadoporlareacciónPCRyaparecerácomounafranjaenungeldeagarosaaproximadamentedelmismotamañoquelafranjaesperadadelRanavirus.LatécnicaPCRentiemporealtieneunasondainternaqueconfirmalaaplicacióndelasecuenciacorrectadeADNy,porlotanto,lasecuenciacióndeADNnoseránecesariaparaconfirmarresultadospositivos.
• UnresultadodePCRnegativoindicaquelapruebanohadetectadoADNRanavirusenlamuestrapresentadaallaboratorio.Estonosiempreindicaqueelanimalno
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—157
estáinfectadoporRanavirus;estadeclaraciónpuedecomplicarseacausaderesultadosfalsosnegativos.
• Unresultadofalsonegativo(elanimalestáinfectadoconunRanavirus,perolapruebaPCResnegativa),yaque:
o NohabíaADNdelviruspresenteenlamuestrapresentadaallaboratorio.Esmásprobablequeestoocurraenmuestrastalescomohisopos(faríngeosocloacales),biopsiasdetejidoomuestrasdesangre(capaleucocitaria)tomadasdeanimalesvivos.Estosanimalespodríannoservirémicosonoestarderramandovirusenlasubicacionesmuestreadas.AunquelamayoríadelasinfeccionesRanaviruspuedenserdetectadasenmúltiplestiposdetejidos,estasalgunasvecesestánlimitadasaunaubicaciónespecíficacomolapieloelriñón,ylamuestrapresentadaparalaspruebasesmuyimportanteparaevitarresultadosfalsosnegativos.
o ElADNdelvirusestápresenteencantidadesmenoresalasdetectablesporelmétodoPCRutilizado.Esmásprobablequeestasituaciónsedéconinfeccionessubclínicas.LosmétodosPCRentiemporealsonconsideradosmássensiblesymáscapacesdedetectarinfeccionesconpequeñascantidadesdeADNviral.
o HayinhibidoresdePCRenlamuestra.Esmásprobablequeestoocurraconhisoposdecloacaquepuedancontenercantidadessignificativasdemateriafecal.
IdentificaciónespecíficadeRanavirus
Enlamayoríadelassituaciones,paralaspoblacionesdeanfibioscautivos,laconfirmacióndeundiagnósticodeinfecciónRanavirussellevaráacabopormediodemétodosPCR,loscualesseencuentrandisponiblesenunavariedaddelaboratoriosdeinvestigaciónycomerciales.
• EstosmétodosnopuedendeterminarlaespecieespecíficadeRanaviruspresenteenlosanimalesinfectados.LaPCRconvencionaljuntoconunasecuenciaciónconfrecuenciadeterminaranelgrupo(porejemplo,grupodevirusFV3oATV)deRanaviruspresenteenelanimalogrupodeanimales.
YaqueungrannúmerodediferentesespeciesdeRanaviruspuedensercolocadasenestosampliosgrupos(Schockycolaboradores,2008),avecesserequeriráunacaracterizaciónmásprecisadelviruspresenteparapodertomardecisionesacercadelagestióndelapoblación.Porejemplo,sepodríanidentificarranavirusenpoblacionessilvestresderanasyenranascautivasdelamismaespeciealojadasenunacoloniaderesguardoquecríaanimalesparaliberarlosalanaturaleza.
• SisoloserealizanPCRconvencionalysecuenciacióndeADN,esmuyprobablequeelvirusenlapoblaciónsilvestrerecibaunacaracterizaciónsimilaraladelviruspresenteenlapoblacióncautiva(porejemplo,"Virusdelarana3").
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—158
• Taldeterminaciónpodríallevaralaconclusiónerróneadequeelvirusenlapoblacióncautivaeselmismoqueeldelapoblaciónsilvestreyqueessegurointroducirranasinfectadascriadasencautiverioalapoblaciónsilvestreinfectada.Sinembargo,especiesdiferentesdeRanavirusquevaríanencuantoasuvirulencia(habilidadparacausargravesenfermedadesenespeciesdiferentes)tendránperfilessimilaresoidénticos(Majjiycolaboradores,2006;Schockycolaboradores,2010).
• Serequierenmedidasmásavanzadasparaidentificarlaespeciedelosvirusqueafectanalaspoblacionessilvestresycautivasparaasídeterminarmejorlaprobabilidaddequelosvirusseandelamismaespecieypararealizarunabuenaevaluaciónderiesgosenelprogramadereintroducciónalanaturaleza.
LosintentosparaidentificarespecíficamenteaunRanavirusrequeriránelaislamientodelvirusencultivoscelulares(vermásarriba)seguidoporlaaplicacióndetécnicas,loqueincluyeunanálisisdepolimorfismosdelongituddefragmentosderestricción(Hyattycolaboradores,2000;Majjiycolaboradores,2006;Schockycolaboradores,2008).
• Esmásprobablequeestastécnicasseanrealizadasporlaboratoriosdeinvestigaciónyquenoseencuentrenampliamentedisponibles.
• Estostiposdecaracterizacionesmolecularesrequierentejidoscongeladosofrescosparaqueaunesténpresentesviriónesviables.Lasmuestraspreservadasenetanolnopuedenserutilizadasparaestostiposdecaracterización.
7.5ENFERMEDADPROTOZOARIASIMILARALPERKINSUSDELOSRÁNIDOS
Lainfeccióndeunprotistapatógenonuevo,llamadoporalgunoselagentedetipoPerkinsus,haresultadoeneventosdemortalidadmasivaenrenacuajosderánidossilvestresenlosEstadosUnidos(Greenycolaboradores,2003;Davisycolaboradores,2007).Losciclosdevidaymodosdetransmisióndeestenohansidodeterminadosdefinitivamente.
• EntrelasespeciesafectadasseencuentranlaRanadelamadera,Lithobatessylvaticus;Ranaleopardodelsur,L.sphenocephalus;Ranatoroamericana,Lcastesbeianus;Ranavisón,L.septrionalis;Ranaverde,L.clamitans;Ranasebosa,L.sevosusylaRanacapito,L.capito.
• Nosehadeterminadodeformaconclusivaquelasinfeccionesconestosorganismossonlacausadeldescensoalargoplazodelaspoblaciones.
• Existenpreocupacionesdequeloseventosdemortalidadmasivaasociadosalorganismopuedanamenazarlapersistenciadealgunasespeciesalreduciroeliminarelreclutamientonaturalenalgunosestanques.HayunagranpreocupaciónporunodelosanurosengravepeligrodeextinciónenNorteamérica,laRanasebosa(Lithobatessevosus),delacualsoloquedanaproximadamente100adultosenlanaturaleza.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—159
Solosehanobservadoeventosimportantesdeenfermedadomortalidadenrenacuajosránidos.
• Sehandocumentadocasosdeinfeccionessubclínicas(dondenoexisteevidenciadeenfermedadomuerte)enalgunoshylidaestalescomoel"SpringPeeper"(Pseudacriscrucifer)ylaRanagrillodelsur(Acrisgryllus).
• LasinfeccionesenanimalespostmetamórficoshansidosubclínicasysehanlimitadoallumendelintestinoconlaexcepcióndeunpequeñogrupodemetamorfosdelaRanaleopardodelsurLithobatessphenocephalus(Davisycolaboradores,2007)queteníaninfeccionesenelhígadosimilaresalasobservadasenrenacuajos.
• Conlaexcepcióndeanimalessilvestrestraídosacoloniasderesguardoencautiveriooalaboratoriosdeinvestigación,lainfecciónconlosagentesdetipoPerkinsusnohasidodocumentadaenanimalescautivosoencoleccioneszoológicasanfibias.
,LasprincipalespreocupacionesrespectoalosagentesdetipoPerkinsusenrelaciónalascoloniasderesguardodeanfibiosincluyen:
• Laincertidumbrerespectoalrangopotencialdehuéspedesparaesteorganismoylasimplicacionesdesuintroducciónacoleccioneszoológicasocoloniasderesguardo.
• Elpotencialdesconocidodeintroduciraesteorganismoenpoblacionesdeanfibiossilvestresingenuospormediodelmovimientoderanascautivasenprogramasdereintroducciónalanaturaleza.
• Elpotencialdemortalidadsignificativaenlaspoblacionescautivasdeespeciesvulnerables.
ElhistorialdevidadelosagentesdetipoPerkinsusesdesconocidoynosehanlogradoestudiosexperimentalesdetransmisiónodeinfeccioneshastalafecha.Algunossíntomasclínicosdeinfecciónreportadosenrenacuajossonletargo,hinchazóny,ocasionalmente,hemorragiacutánea.Algunoshallazgosapartirdelanecropsiarevelaronórganosinternosnotablementeensanchados,talescomohígado,bazoyriñón,quepodríahabersedecoloradohastaquedarblanco.
DiagnósticodeenfermedadesprotozoariasdetipoPerkinsus Eldiagnósticoenrenacuajosevidentementeenfermosespormediodelaidentificaciónmorfológicadeesporascaracterísticaspormediodemicroscopíaópticausandofrotisdetejidosfrescosopormediodehistopatología(veamásabajo).
• Nohayningunapruebadediagnósticoconfiablequepuedadetectarlapresenciadeinfeccionesenpoblacionesdeanfibioscautivosapartedelavigilanciaenlanecropsiadeanimalesenfermosomuertos.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—160
Losmétodosdediagnósticoincluyen:Frotisdetejidos: Estosellevaacabotomandounapequeñapartedetejidofresco(2X2mm)obtenidoenlanecropsiaycolocándoloenunportaobjetosdemicroscopiolimpio.Luego,sedebeutilizarunsegundoportaobjetosparaesparcireltejidoatravésdelprimerportaobjetos,asegurándosedequeeltejidoquedecompletamenteaplanado(Davisycolaboradores,2007).Elportaobjetosdebeserexaminadopormediodemicroscopíaópticaparabuscaresporassubesféricascaracterísticasquemidenaproximadamente6X5.5micrones(vealaimagen7.5másabajo).
Imagen.7.6:Microfotografíadeuntejidoenmontajeenfrescoquemuestralasesporas
protozoariasdetipoPerkinsuscaracterísticas. Lavadocloacaloexaminacióndeloscontenidosintestinales: Estosmaterialessonexaminadosenbuscadeesporas,comofuedescritoparalosfrotisdetejido.Estemétodopuedeserusadoenanimalesvivos,peronodeberíaconsiderarsecomounapruebadefinitivaparadeclararalosanimalescomolibresdeinfección.Histopatología: Lanecropsiaesrealizadaenrenacuajosusandolatécnicadefijacióndecadáveres(veaelcapítulo9).Elrenacuajodebeserabiertobrevementehaciendounaincisiónenlacavidadcelómicayluegotodoelcadáverdebesersumergidoenunasoluciónfijadora(porlogeneralestaesde10%formalinatamponadaneutralodeetanol).Lostejidossonprocesadosdeformarutinariaparalaexaminaciónhistológica.Enlaexaminacióndelasseccioneshistológicasseencuentranesporasesféricasbasófilascaracterísticasengrandesnúmeros,infiltrándoseenlostejidostalescomohígado,riñón,bazo,músculoesquelético,pielymesenterio.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—161
Técnicasdediagnósticomolecular: Nohayunapruebaespecíficadediagnósticomolecularqueseencuentreampliamentedisponible.SehautilizadounatécnicaPCRconvencionalusandounaimprimaciónqueamplificaelgenARNribosomal18SdeunaampliagamadeorganismosprotozoarioseucariotasseguidodeunasecuenciacióndeADN(Davisycolaboradores,2007).
7.6DECLARACIÓNDEENFERMEDADESYPARTICIPACIÓNENBASESDEDATOSDEENFERMEDADES
DeclaracióndeenfermedadesdelaOIE LaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIEporsussiglaseninglés)esunaorganizacióninternacionalresponsabledemejorarlasaludanimalanivelmundialyesreconocidacomounaorganizacióndereferenciaporlaOrganizaciónMundialdeComercio(OMC).Apartirdeabrildel2009,había174paísesyterritoriosmiembros.UnodelosobjetivosprincipalesdelaOIEesla"seguridadsanitaria",loquebuscanlograrpormediodelapublicacióndeestándaresdesaludparaelcomerciointernacionaldeanimalesyproductosanimales.EstosestándaressonreconocidosporlaOMCcomoreglassanitariasinternacionalesdereferencia. SelesrequierealospaísessignatariosdelaOIEqueensusreportesnotifiquenalaOIEdecualquierenfermedadimportantecada6meses.Actualmente,dosenfermedadesanfibiassonnotificables,laquitridiomicosisylasenfermedadesranavirales(Schloegelycolaboradores,2010).
• LaautoridadveterinariadelpaísesquienposeelaresponsabilidaddereportarlealaOIE.Losresultadosdelaspruebasparaestasenfermedades,incluyendolosresultadosnegativos,deberíanenviarsealapersonadelpaísqueenvíaelreportealaOIE(OIE,2008).EnlosEstadosUnidos,eljefeveterinarioseríaelUnitedStatesDepartmentofAgricultureAnimalandPlantHealthInspectionService(USDA/APHIS).
• Sinembargo,actualmentelaresponsabilidaddelosreportesdezoológicos,acuariosocoloniasderesguardoparaanfibiosrespectoalaincidenciadequitridiomicosisoinfecciónRanavirusnoesclara(porlomenosenlosEstadosUnidos).ActualmentenohaypautasparaelreportajeolaaplicacióndelasrecomendacionesdelaOIEparalaspruebasdeenfermedades.
• Allistadodeenfermedadesranaviralesyquitridiomicosisseleagregaranrequerimientosparalaspruebasdedeteccióndeenfermedadesinfecciosasparaelenvíointernacionalyposiblementeinterestataldeanfibios.Laslimitacionesacortoplazopodríanincluir:faltadelaboratorioscertificados;costosdelaspruebasdedeteccióndeenfermedadesylacreacióndepoblacionesanfibiaslibresdepatógenosespecíficos;faltadeunabuenapruebavalidadaparadetectarranavirusenanimalesvivos.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—162
• EllistadodequitridiomicosisyenfermedadesranaviralesdelaOIEtambiénpodríanecesitarlacertificacióndelaspruebasyestándaresinternacionalesdereferenciautilizadosenlaspruebasparadetectarestasenfermedades,yaqueestasserelacionanalosenvíosinternacionalesdeanimales.Vealossiguientesenlaces:
• www.oie.int/vcda/eng/en_background_VCDA.htm?e1d9www.oie.int/vcda/eng/en_fichier_SOP.pdf
LosdetallesacercadelosrequerimientosdelaOIEparaelmovimientointernacionaldeanfibiosbajoelcódigosanitariodeanimalesacuáticosparaquitridiomicosisyenfermedadesranaviralespuedenserobtenidosen:Quitridiomicosis:www.oie.int/eng/normes/fcode/en_chapitre_1.8.1.htmRanavirus:www.oie.int/eng/normes/fcode/en_chapitre_1.8.2.htm
Basesdedatosdeenfermedades
Actualmente,hayesfuerzosanivelmundialpararegistrarlaincidenciadeenfermedadesinfecciosasimportantesenanfibios,sobretodolasinfeccionesdelhongoquítridoanfibioBatrachochytriumdendrobatidis(Bd)(TambiénestáenprogresounregistrodeBsal).Seesperaqueestosesfuerzosnosayudenacomprendermejorladistribución,elmovimientoylagenéticadelBd.Mientrasinstituciones,laboratorioseinvestigadoresenelcampoidentificanamásanfibiosinfectadosconBd,seesperaqueestosreportentodalainformaciónpertinentealasbasesdedatosparaasírecolectartodalainformaciónposible.Algunaspreocupacionesquedeberíanabordarseporlasbasesdedatosdisponiblesincluyenlaestandarizaciónyvalidacióndelainformacióngeneradaporunavariedaddefuentesdiferentes,inquietudesrespectoalaprivacidadinstitucionalylapropiedaddelainformación.
LabasededatosmáscompletayactualizadaparaBdseencuentraenlínea:http://www.spatialepidemiology.net/bd/7.7PRUEBASYVIGILANCIAPARADETECTARPARÁSITOSFECALES Laexaminaciónenunlaboratoriodelashecesparabuscarlapresenciadeparásitosinternosesunmétodocomúndevigilanciadeenfermedadesparalagestióndeanfibiosencautiverio.Lastécnicasdeexaminaciónfecalrudimentariasrequierenpocoequipamientoypuedenutilizarseinclusoenubicacionesremotasquetengancoloniasderesguardoparaanfibios.
• Laexaminaciónfecalsirveparadetectarparásitosprotozoariosovarioshelmintos(gusanoscestodos,trematodosonemátodos).Losparásitosdetectadosnoestánlimitadosaltractointestinal.Porejemplo,losgusanosadultosdelnematodoRhabdiasseencuentranubicadosenlospulmonesdeunavariedaddeanfibios.
• Laexaminaciónfecalpuededetectaralosparásitosqueprobablementecausaranproblemasdeenfermedadesenanfibioscautivosyalosorganismoscomensalesquenoestánasociadosaenfermedades.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—163
• Losanfibiossilvestresconfrecuencia(ynormalmente)sonportadoresdeunavariedaddeparásitosinternos,perolamayoríadeestosparásitosyenfermedadesparasitariasnosonconsideradosfactorespoblacionaleslimitantesdentrodelaspoblacionessilvestres.Sinembargo,algunosdeestosparásitospuedencausargravesproblemasdeenfermedadesenpoblacionescautivasdebidoalamalahigiene,uncuidadozootécnicoinadecuadoyelestrés.
• Lavigilanciadeparásitosesnecesariaparamantenerpoblacionescautivassaludables.Losnemátodosrabditiformes,Rhabdias(gusanopulmonaranfibio)ylosStrongyloides(ungusanointestinal)sehanvueltoproblemasimportantesenmuchascoloniasderesguardoparaanfibios(Leeycolaboradores,2006;Pessier,2008;Gagliardoycolaboradores,2008).Ladeteccióndeloslaboratoriosesunaparteimportantedelosprogramasdecontrolparaestosparásitos.
Algunasconsideracionesatenercuentaalahoradedecidirpropuestasparalasupervisiónyelcontroldeparásitosenpoblacionescautivasson:
• Laeliminaciónyelcontroldetodoslosparásitosinternosensituacionesdecautiveriopodríanoserposibleodeseada.Porejemplo:
o Losnemátodosrabditiformes(RhabdiasyStrongyloides)sondifícilesdeeliminarcompletamentecontratamientosantihelmínticos.Porlotanto,unaopciónseríaporénfasisenlareduccióndelosnivelesparasitariospormediodetratamientosyunbuenmantenimientodelahigienedelrecinto,estoesmejorqueusartratamientosextenuadosconstantementeparatratardeeliminarlainfeccióncompletamente.
o Enelcasodelosanimalesencoloniasderesguardoqueserándevueltosalanaturaleza,podríasermejormantenerbajosnivelesdelosparásitosquesonendémicosenlaspoblacionessilvestresdeesaespecie.Existeunapreocupaciónteóricarespectoalaperdidaderesistencianaturaladquiridahaciaestosorganismosquepodríasernecesariaparalasupervivenciadelosanimalesdespuésdesuliberación(<biblio>).
• Esimportantediferenciaentreparásitospatógenosopotencialmentepatógenosy
losorganismoscomensalesquesoncomunesenlostractosgastrointestinalesanfibios(veamásabajo).
Técnicasparalaexaminaciónfecalenbuscadeparásitos
Lastécnicasutilizadasparalaexaminaciónfecalenbuscadeparásitossonmontajesenfresco,flotaciónfecal,sedimentaciónfecalylatécnicadeBaermann.Todasestastécnicassonexplicadascondetalleentextosestándaresdeparasitologíaysonfamiliaresparaveterinarios(Foreyt,2001).
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—164
• Lastécnicasmásrudimentarias(montajeenfrescofecalyflotaciónpasiva)paradetectarparásitosfecalessolorequierenunmicroscopiocompuesto(deluz)básicoyreactivossimples.
o Estastécnicassonútilesparalagestiónsanitariadecoloniasanfibiasenubicacionesremotas,ysonadecuadasparadetectarnemátodosrabditiformes,quesonelproblemaparasitariomáscomúnenlascoloniasderesguardo.
• Hayunafaltadeconocimientobásicorespectoalaaparienciadeloshuevosdelosparásitosanfibios.Estohacequealgunasveceslaidentificacióndefinitivaseadifíciloimposible.
Montajeenfrescofecal:• Estatécnicatambiénesllamada"frotisdirecto".• Estatécnicaesmásútilparaidentificaraparásitosmotilescomoalgunasespeciesde
protozooylarvasnematodo.• Serequierenhecesfrescas.Silashecesnopuedenserprocesadasinmediatamente
paralaexaminacióndelaboratorio,deberíanrefrigerarse(4oC).• Estatécnicaesusadafrecuentementeparadetectarparásitosenanfibiosdebidoa
quesoloserequiereunapequeñamuestradehecesparaelanálisis.• Lasdesventajasdelmontajeenfrescoson:1)bajasensibilidadparadetectarbajos
númerosdehuevosuoocistosparasitariosenlamuestra;y2)loshuevosuoocistospuedenseroscurecidosporlapresenciadedesechosfecalesenlamuestra.
• Unsistemadepuntuaciónfecalcualitativousadoeneltratamientodeinfeccionesdenemátodosrabditiformesestábasadoenlaexaminacióndemontajeenfrescofecal(vealasección8.4).
Pararealizarelmontajeenfrescofecal:
1) Apliqueunapequeñacantidad(unagota)desoluciónsalina(clorurosódico0.9%)aunportaobjetoslimpiodevidriodemicroscopio.
2) Agregueunapequeñacantidaddeheces(deltamañodelacabezadeunfosforo)alagotadesoluciónsalina.
3) Mezclelashecesylasalinaenunmovimientocircular.4) Coloqueuncubreobjetosenelportaobjetosyexaminebajo10Xy40Xobjetivosde
microscopioenbuscadeparásitos,óvulosdeparásitoyoocistos.
Flotaciónfecal:• Sepuedenconcentrarmuchoshuevosdeparásitoshelmintospormediodela
flotación.Laconcentraciónincrementalasensibilidaddelaexaminación.• Estatécnicasebasaenelusodeunasoluciónsobresaturadaquelevantahuevos
hacialasuperficiedelacolumnadelíquidodebidoasubajagravedadespecífica.Loshuevossonrecolectadosenlasuperficieysonmenososcurecidosporlamateriafecal(encomparaciónconelmontajeenfrescofecal).
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—165
• Lastécnicasdeflotaciónsonpasivas(hecesmezcladasconsoluciónparalaflotación)ocentrífugas.Lastécnicascentrífugassonmássensibles,perorequierenunacentrífuga,porloquepodríannoserprácticasparalascoloniasderesguardoremotas.Másinformaciónrespectoaestatécnicasepuedeencontraraquí:http://www.drmichaeldryden.com/parasitology/5/clinical-parasitology
Pararealizarelmétodopasivodeflotaciónfecal:
1) Prepareunasolucióndeflotación.Espreferibleunasoluciónconunagravedadespecíficade1,2o1,3.Silassolucionesseránpreparadasinsitu,unhidrómetroleresultaríaútilparapoderverificaryajustarlagravedadespecíficadelassolucionesdeflotación.Algunassolucionesdeflotaciónson:
• Sulfatodemagnesio(salesdeEpsom)(400gdisueltosen1000mldeagua).
• Azúcar(454gdeazúcargranulada+355mldeaguacalienteparadisolver)
• Nitratosódico(568gdeanhidroNaNO3+1000mldeaguatibiaparadisolver).
• Sulfatodecinc(33gdeanhidroZnSO4enaguadestilada;llevara100ml).
2) Coloquede1a2gramosdehecesentuboestrechodefondoplanooenun
vialdeflotaciónfecalcomercialmentedisponible(Fecalyzer®,VetoquinolUSA;Ovassay,SybioticsCorporation,USA).
o Paraevaluarlosproblemasdeparásitosfecalesencoloniasdeanfibios,esaceptablerecolectarycombinarhecesprovenientesdevariosanimalesdelmismorecintoparaobtenerunamuestramásgrandeparaelanálisisdeparásitosfecales.
3) Agregueaproximadamente15mldesolucióndeflotaciónymezclebien.Los
vialesdeflotacióndisponiblesenelcomerciovienenincorporadosconunfiltroqueremuevelosdesechosfecales.Siseutilizanvialesconvencionales,lashecesylamezcladesolucióndeflotaciónpuedenserpasadosporunfiltro.
4) Agreguesolucióndeflotaciónadicionalalvialhastaseformaunmeniscoligeramenteconvexoenlacima.
5) Coloqueuncubreobjetosenlacimadelvialyespere10minutos.6) Despuésde10minutos,levanteelcubreobjetosdelasuperficiedelvialy
colóqueloenunportaobjetoslimpiodemicroscopio.7) Examineconunamagnificaciónde10Xy40Xenbuscadeparásitosyóvulos
deparásito.Siseencuentrandisponibleselequipoypersonalentrenado,losmétodosdeflotaciónencentrífugadeberíanserutilizadosporellaboratorio.Losmétodosdecentrífugasonmejoresparadetectaralgunosquistesprotozoariosytambiénhuevosdecestodosynemátodos.Los
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—166
detallespararealizartécnicasdeflotaciónfecalporcentrífugaseencuentrandisponiblesenlaliteraturacitadadeparasitologíaestándaryenlínea:Dr.MichealDryden—http://www.drmichaeldryden.com/parasitology/5/clinical-parasitologyUniversityofPennsylvania,DiagnosisofVeterinaryEndoparasiticInfections—http://cal.vet.upenn.edu/projects/dxendopar/index.html Otrastécnicas:
• Lasedimentaciónfecalenaguapodríasernecesariaparadetectarhuevosdetrematodos.Loshuevosdetrematodostienenunaaltagravedadespecíficaysondifícilesdedetectarconmétodosdeflotación.Probablementenodeberíarealizarsedeformarutinariaamenosqueotrosmétodosdevigilanciadeenfermedades(porejemplo,necropsiaehistopatología)indiquenquelacoloniasufredeproblemasdesaludrelacionadosatrematodos.
• Puederealizarseunaesporulaciónendicromatodepotasioparaidentificarespecíficamentealosoocistosdeprotozoococcidios.
Parásitosanfibiosidentificablespormediodeexaminaciónfecal
Unavariedaddeparásitos,huevosdeparásitosyorganismoscomensalespuedenseridentificadosenlaexaminaciónfecaldelosanfibios(PoyntonyWhitaker2001).Laidentificacióndeestoshuevospuederesultardifícilalgunasvecesyaqueexistepocaliteraturaoficialconfiableparalosveterinarios.Puedeencontrarlascaracterísticasgeneralesdehuevosdelosgruposparasitariosprincipalesenlaliteraturarelacionadaareptilesyanimalesdomésticos,estascaracterísticaspuedenserledeutilidadenalgunascircunstancias(Foreyt2001;Jacobson2007;Klingenberg,2007;BarnardyUpton,1994).Másabajoseentregandetallesacercadelaidentificacióneinterpretacióndeparásitoscomunespormediodelaexaminaciónfecal.Nemátodosdetiporabditiforme: Enelcasodelosanfibioscautivos,estossonloshallazgospotencialesmásimportantesquesepuedenhacerenlarevisiónenbuscadeparásitosfecales,estosincluyenalgusanopulmonaranfibio,Rhabdiasspp.yalosparásitosintestinales,Strongyloidesspp.
• LosRhabdiasspp.soncomunesenunaampliavariedaddeanfibioscriadosen
libertad.Estos,enbajosnúmeros,nocausanenfermedades.• Losrabditiformesposeenunciclodevidamuyrápido,loquepuedecausar
superinfeccionesenalgunassituacionesdecautiverio.Algunosfactoreszootécnicostalescomolahigienedelrecintosonextremadamenteimportantesparaelcontroldeestosparásitos.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—167
• Bajocondicionesdecautiverio,losnemátodosrabditiformeshansidoidentificadoscomounadelasmayorescausasdemorbimortalidadenanimalesquehaningresadoacautiveriorecientementeparasuusoencoloniasderesguardo(Patterson-Kaneycolaboradores,2001;Leeycolaboradores,2006;Pessier,2008;Gagliardoycolaboradores,2008).
• Losdetallesacercadeltratamientoyelcontroldelosnemátodosrabditiformessonrevisadosenlasección8.4.
Losnemátodosrabditiformessondiagnosticadoscuandoseobservanlarvascaracterísticasdenemátodosyhuevosembrionadosdeestosenlaexaminaciónenmontajeenfrescofecaloflotaciónfecal.
• Loshuevostienenformaoval,decáscarafina,avecesselesrefierecomodetipoestróngidosoestrongílidosyfrecuentementecontienenungusanolarvalenrollado(huevoembrionado;vealaimagen7.6másabajo)
Imagen7.7:Huevosembrionadostípicosdeunparásitonematodorabditiforme.Cadahuevo
ovalcontieneunalarvainmaduradenematodoenrollada.Magnificaciónde40X• LoshuevosdeRhabdiasyStrongyloidespuedenserdifícilesoimposiblesde
diferenciar.Sitienedisponibleunmicrómetroparamedirhuevos,loshuevosdelRhabdiaspuedensermásgrandes(aproximadamentede87a120micronesdelargo)quelosdelStrongyloidessp.(40a55micrones).
• OtrosnemátodosnorabditiformesdelosanfibioscomoelCosmocerca,elAplectanayelOswaldocruziaposeenhuevosembrionadosypodríanserdifícilesdedistinguirdelosnemátodosrabditiformes.Lostamañosdeestoshuevossonmásparecidosa
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—168
losdelRhabdiasspp.Laasistenciadeunparasitólogoylaexaminacióndelosgusanosadultospodríansernecesarias.
• LaslarvasdeStrongyloidessondesenvainadasytienenunacolarectaqueseencuentratruncadaenlapunta.Bajoinmersiónenaceite,lapuntapresentaunamuescaenformadeV
• LaslarvasdeRhabdiasgeneralmentesonreconociblesporposeerunestileteconformadeagujaalfinaldelacola(Imagen7.7).Estaspuedenserdifícilesdedistinguirdelaslarvasdenemátodosdevidalibre(sobretodosilamuestrafuerecolectadadelatierrauotrolugarconmuchomaterialorgánico).
Imagen7.8:LarvadeRhabdiassp.enunmontajeenfrescofecal.Observeelestileteconformade
agujaalfinaldelacola(partesuperiordelaimagen).
• LatécnicaBaermanesutilizadaparaconcentrarlarvasvivasdenemátodosrabditiformes.Usualmente,estatécnicanoesutilizadaparalavigilanciarutinariadeparásitos,peroesútilparaobtenergrandesnúmerosdelarvasdenemátodosparaidentificar.
o Serequierenhecesfrescas.o Lashecessoncolocadasenunaestopillaenunabandejaderejillaenunembudo.Luegosesujetauntuboenlasalidadelembudoyesteesllenadoconaguatibia(30°C)paracubrirlasheces.Despuésde6horas,recolecte
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—169
elaguadeltuboypóngalaenuntubodecentrífuga,centrifugueeltuboyexamíneloconunmicroscopiocompuestoparabuscarlarvas.
Otrosnemátodosdeltractogastrointestinal: Existeunagranvariedaddeparásitosnemátodosdiferentesquehansidodescritosdelostractosgastrointestinalesdeanfibiosanivelmundial(GoldbergyBursey;2008;Goldbergycolaboradores,2009;Schotthoeferycolaboradores,2009).
• Existenmuypocosoningúncasoconocidoenqueestosnemátodoshayan
causadoproblemassignificativosdeenfermedadesenanfibioscautivos,peroaunasíestopodríaocurrirbajocondicionesdecuidadoszootécnicosencautiverio,sobretodoamedidaqueespeciesnuevassontraídasalascoloniasderesguardo.
• Existenpocasdescripcionesomicrofotografíaspublicadasquesirvanparaguiarlosdiagnósticosclínicos.Comoyasehaseñalado,elCosmocerca,elAplectanayelOswaldocruzia(untrichostrongylus)puedentenerhuevosembrionadosquepuedennecesitarserdistinguidosdeloshuevosdelosnemátodosrabditiformes.
• NemátodosdetipoOxyurid(oxiuros)Lasinfeccionesdeoxiurossepuedenobservarenrenacuajos(Adamson,1981)yenalgunosanurospostmetamórficos.Estosnohansidoasociadosaenfermedadesy,dehecho,losoxiurospuedenserorganismoscomensalesbeneficiosos(PryoryBjorndal,2005).Noserequieretratamiento.
Protozoosciliadosyopalinidos: Estossonorganismosprotozoarioscomensalescomunesdeltractogastrointestinalanfibio.Estossecaracterizanportenercilio(ciliados)omúltiplesflagelosqueseparecenaloscilios(opalinidos;PoyntonyWhitaker,1994;2001).ElprotozoarioopalíneoProtoopalinasemuestraabajoenlaimagen7.8.
• LaespecieincluyeNyctotheroides(ciliado),Zelleriella(opalíneo)yProtoopalina
entreotros.• Losopalinidossedistinguendelosciliadosporunafaltademacronúcleoo
infundíbulo.• Noserequieretratamiento.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—170
Imagen7.9:ElprotozoarioopalíneoProtoopalinasp.enpreparacionesdemontajeenfrescofecalenmagnificaciónde10X(derecha)y40X(izquierda).
Protozoosflagelados: Unagranvariedaddeprotozoosflageladossoncomensalescomunesdeltractogastrointestinalanfibio(PoyntonyWhitaker,2001).
• Losflageladosseaprecianmejorcomoorganismosmotilesmuypequeñosenunaexaminaciónenmontajeenfrescodelasheces(vealaimagen7.9).
• Eltratamientonosuelesernecesario.• Elestrés,envíorecienteolosambientesalteradospuedenllevaralcrecimiento
excesivoysíntomasclínicosdelosflagelos(pérdidadepeso/inhabilidaddeprosperar).Siaparecensíntomasclínicosjuntoanúmerosmuyaltosdeorganismosenunmontajeenfrescofecal(5a10organismosporcampomicroscópicodealtopoder[40X]),eltratamientoconmedicinascomoelmetronidazolpodríaserútil(PoyntonyWhitaker,2001).
Imagen7.10:MúltiplesprotozoosflageladosenelmontajeenfrescofecaldeunSapodelaerosolde
Kihansi(Nectophrynoidesasperginus).Magnificaciónde40X.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—171
Cestodos(Tenias): Loshuevosdeteniararavezsonidentificadosenunaexaminaciónfecal(Imagen7.10).Noserequieretratamientoamenosqueseobservenpérdidadepesouotrossíntomasclínicos.
Imagen7.11:Huevodeuncestodoenunaflotaciónfecaldeunaranatoroafricana(Pyxicephalusadspersus).Magnificaciónde40X
Trematodos: Loshuevosdeparásitostrematodos(imagen7.11)estánpresenteseneltractourinario(Gorgoderaspp.),tractorespiratorio(Hematoloechusspp.)otractointestinaly,ocasionalmente,puedenserobservadosenlaexaminaciónenmontajeenfrescofecal(PoyntonyWhitaker,2001).
Imagen7.12:Huevosdeunparásitotrematodo(Hematoloechussp.)enunmontajeenfrescofecaldeunaRanaleopardoChiricahua(Lithobateschiricahuaensis).Magnificaciónde40X.
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—172
Ameba: LaamebiasiscausadaporelprotozoarioEntamoebaranarummuyraramentehasidodescritacomounproblemaclínico(ValentineyStoskopf,1984;PoyntonyWhitaker,2001).Lostrofozoítosamebianosoquistessepuedenencontrarenmontajesenfrescofecales.Laamoebapuedeserunaespeciedifícildeidentificarytantolasespeciespatogénicascomolasnopatogénicaspuedenestarpresentesenlasmuestrasfecales.Coccidia: Parásitosprotozoariosusualmentedeltractointestinal.LostiposEimeriaeIsosporahansidoreportadosenanfibios.
• Losproblemasdeenfermedades(coccidiosis)sehanobservadoconfrecuenciaenrenacuajos.Raramenteasociadoconenfermedadesenadultos.
• Sediagnósticapormediodelaidentificacióndeoocistosenlaexaminaciónenmontajeenfrescofecaloflotación.
• Puedeconsiderareltratamientosiseobservansíntomasclínicostalescomopérdidadepesoodiarreaosireportesdenecropsiadelosanimalesmuertossugierenunaaltacargaparasitaria(PoyntonyWhitaker,2001).
Criptosporidio: Unparásitoprotozoarioqueraramenteesvistoenanfibios.
• Solohay1reportedeestaenfermedad(gastritisproliferativa)enanfibios(Green
ycolaboradores,2003).DescripciónrecientedeC.frágildelestómagodesapos(Jirkůycolaboradores,2008).
• Noserecomiendalarevisiónrutinaria.Si,basadoenresultadosdelanecropsia,sesospechaqueestápresenteenungrupodeanimales,unatinciónacidorresistentemodificadapodríaserútilparaquesemanifiestenlosoocistosenlasheces.
Acantocéfalos(gusanosdecabezaespinosa): Estosparásitospuedenserencontradoseneltractointestinalyalgunasvecespuedenestarasociadosaproblemasclínicos(perforacionesintestinales,pérdidadepeso)(PoyntonyWhitaker,2001).
7.8HEMATOLOGÍAYBIOQUÍMICASÉRICA Lahematologíaylosanálisisbioquímicosensuerosoncomúnmenteutilizadosenloscontrolessanitariosparamamíferos,avesyreptilesalojadosenentornosdecautiverio.Laexaminacióndelasfraccionescelularesdelasangreenlaformadeconteodeglóbulosblancosesutilizadacomounindicadordeinflamación(incluyendolaasociadaalasenfermedadesinfecciosas).Elanálisisdebioquímicaséricapuedeentregarinformaciónacercadefuncionesorgánicasyfisiológicas.Lahematologíaylosanálisisdebioquímica
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—173
séricararamentedebenserrealizadoscomopartedevaloracionesyvigilanciasanitariasenanfibios.Lasrazonesdeestoincluyen:
• Dificultadpararecolectarlacantidadadecuadadesangreparalaspruebasque
sequierenrealizar(especialmenteenlasespeciesmuypequeñas).• Faltaderangosfisiológicosnormalesestandarizadosparamuchasespeciesde
anfibios.• Limitadoconocimientodisponibleparalarevisióneinterpretaciónde
parámetrosdesangre,incluyendocaracterísticascitológicas/morfológicasdelasangreanfibia.
Porestasrazones,elusodelainformaciónentregadaporlahematologíaylabioquímicaensueroparaloscontrolessanitariosdeanfibiosseencuentraensuinfancia.Amedidaqueincrementaelinterésenlasaluddelosanfibios,sereúneexperienciaadicionalyserealizaninvestigacionesprospectivas,estasmetodologíaspodríanserutilizadasconmayorfrecuencia.Siseobtieneinformaciónprovenientedeespeciesanfibiasalojadasenpoblacionesderesguardo,debenhacerseesfuerzospararegistrardetalladamentelosmétodosdelaboratorioutilizadospararecolectarestainformación,asícomolosdatosnuméricos.Estosedebeaqueelmétododelaboratorioutilizadoinfluyeenlosresultadosylahabilidaddecompararhallazgosentrelaboratoriosdependedeestainformación.
Recoleccióndemuestras
Recientementehanhabidovariasrevisionesdelastécnicasdeextraccióndesangreenanfibiosyhematología(Wright,2001a;CampbellyEllis2007;AllenderyFry,2008;HeatleyyJohnson,2009).
• Algunossitioscomunesdevenopunciónincluyenlavenaabdominaldelíneamedia(anuros);plexolingual;venacaudaldelacola(salamandras)ypuncióncardiaca.
• Prefieralaheparinacomoanticoagulante.ElEDTAestáasociadoalalisisdelosglóbulosrojosenmuchasespecies.
• Dependiendodeltamañodelespécimen,essegurorecolectarhastaun1%delpesocorporal(porejemplo,0.1mldesangrepor10gdepesocorporal)deunanimalsaludable;enelcasodelosanimalesenfermosodebilitados,sedeberíanrecolectarmenoresvolúmenes.
• Elsuerooplasmapuedeserdecolorazul,verdeonaranjo,inclusoenlosanimalessaludables.
• Siunveterinarioexperimentadoseencuentradisponible,elusodeanestesiademetanosulfonatodetricaína(MS-222)odeaceitedeclavopuedenhacerlarecoleccióndemuestrasmásfácilyconestrésreducido(Wright2001b;Mitchell,2009).
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—174
Análisisdemuestras
• Enelcasodelosanimalesmuypequeños,sepuedeadquiririnformaciónsirealizaunestimadodelconteodeglóbulosblancosenunfrotisdetincióndesangre.
• LosconteossanguíneoscompletosserealizanusandométodosmanualestalescomoaquellosqueusanunasoluciónNatt-Herricks.
• Lamorfologíaylafuncióndelosglóbulosblancosanfibiosesunáreaquerequiereinvestigacionesadicionales.Existenformasmorfológicasdegranulocitosquesonsimilaresalosneutrófilosyloseosinófilos(encontrastealos"heterófilos"deavesyreptiles).
• Loslaboratoriosveterinarioscomercialesdediagnósticoqueaceptenmuestrasdereptilespuedenserutilizadosparaanalizarlasmuestrasdeanfibios.Siellaboratorioyatienepanelesparareptiles,estospuedenserusadosparaanfibios,sinembargo,unasustituciónrecomendadaesincluirnitrógenoureicoenlasangreenvezácidoúrico(asíreflejandolosresiduosnitrogenadospredominantesdelosanfibios),exceptoenelcasodelosanfibiosuricotélicos(porejemplo,Phyllomedusaspp.yChiromantisspp.)
• Lainterpretacióndelosresultadospuedeserdifícil.Unavariedaddefactorescomoelestadodehidratación,laestacionalidadyelsexodelanimalpuedeninfluenciarelresultadodelosparámetroshematológicosybioquímicosaungradomásaltoqueelobservadoenotrasespeciesnormalmentetratadasporveterinariosdezoológico.
• Pocosvaloresreferencialesnormalesseencuentrandisponibles.Unresumenseencuentradisponible(Wright2001a).LasbasesdedatosdelaInternationalSpeciesInformationSystempuedenserunabuenafuentedeinformación(www.isis.org/CMSHOME/)
• Paralainterpretacióndelosresultadosdeunanimalenfermo,esútilobtenertambiénunamuestradelamismaespecie,sexoycondicioneshabitacionalesparaluegocompararlas.
7.9LABORATORIOSQUEACEPTANMUESTRASDEANFIBIOS
NecropsiaehistopatologíaEstadosUnidos
• NorthwestZoopath,654W.MainSt.,Monroe,WA98272Phone:(360)794-0630Fax:(360)794-4312([email protected])
• Zoo/ExoticPathologyService,2825KOVRDrive,WestSacramento,CA95605Phone:
(916)725-5100([email protected])
Cap.7:Pruebasdediagnóstico—175
• AmphibianDiseaseLaboratory,SanDiegoZoo’sInstituteforConservationResearch([email protected])
Pruebasdediagnósticomoleculares("PCR")
EstadosUnidos• PiscesMolecularPCRconvencionalparadetectarelhongoquítridoanfibio
Batrachochytriumdendrobatidis.(www.pisces-molecular.com)• AmphibianDiseaseLaboratory,SanDiegoZoo’sInstituteforConservationResearch
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Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—184
CAPÍTULO8
TRATAMIENTOYCONTROLDEENFERMEDADES
8.0INTRODUCCIÓN Entrelosproblemasmásimportantesdeenfermedadesinfecciosasidentificadosenlaspoblacionesderesguardoparaanfibiosseencuentranlaquitridiomicosis,infecciónRanavirusylainfecciónconnemátodosrabditiformesRhabdiasyStrongyloides.Losobjetivosdeltratamientomédicoylasotrasmedidasdecontroldeenfermedadesdescritasenestecapítuloson:
• Mitigarlosefectosdelasenfermedadesinfecciosaseneléxitoylasostenibilidaddelaspoblacionesdeanfibioscautivos.
• Reducirelriesgodequepoblacionesdeanfibioscautivospuedanactuarcomofuentesdeenfermedadesinfecciosaslimitadorasdepoblaciones(porejemplo,laquitridiomicosisyelRanavirus)parapoblacionesdeanfibiossilvestres.Estaspoblacionescautivasnosolosedefinencomoanfibiosenpoblacionesderesguardo,sinoquetambiénpuedenseraquellasconotrosroles,comolosanimalesparaexhibicionesoconpropósitoseducacionalesycomerciales(porejemplo,intercambiodemascotas,animalesdelaboratorioocomida).
• Identifiquemétodosquepuedanserusadosparacrearpoblacionesanfibiasqueesténlibresdepatógenosespecíficos,sobretodoparaesostiposdeanfibiosquesontrasladadosfrecuentementecomoresultadodelcomerciodeanfibiosodeprogramasdeconservación.
Deberíaserreconocidoclaramenteporveterinariosyotraspersonasqueimplementenregímenesdetratamientosparaenfermedadesinfecciosasquemuypocasrecomendacionesterapéuticasparaanfibiosestánbasadasenensayosexperimentalesdobleciegosocontrolados.Lamayoríadelostratamientoshansidoderivadosempíricamentey,porlotanto,nosoneficientesentodaslascircunstanciasopodríannosersegurosdeusarentodaslasespeciesoetapasdevidaanfibias.Finalmente,enelcasodealgunosagentespatógenos(porejemplo,Ranavirus),noseencuentrandisponiblesmétodosdetratamientoespecíficoysedeberíaponerénfasisenmétodosdecontroldeenfermedades. Enelcasodelaspoblacionesderesguardo,ladecisióndetrataraanimalesporunaenfermedadinfecciosaespecíficaolosobjetivosdeltratamiento(porejemplo,lacompletaeliminacióndeunparásitopormediodetratamientoountratamientoparareducirlosnúmerosdeparásitos,peronoparaeliminarlainfección)dependerándefactorestalescomo:
• Laimportanciadelagentepatógenoparalasaluddelapoblacióncautiva.Sisevenefectosmínimosenlosanimalescautivos,eltratamientopodríanosernecesario.
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—185
• Podríaserconvenientemantenerpoblacionesderesguardoqueesténinfectadasconagentespatógenosoparásitosqueseencuentrennaturalmenteenlapoblaciónsilvestre.Supuestamente,estopermitiríaquelosanimalescautivosqueserándevueltosalanaturalezamantengansuadaptabilidaddeespeciehospedanteosuinmunidadhaciaunagentepatógenoespecífico.
• Podríaserconvenientedesarrollarpoblacionesderesguardoquehayanadquiridoalgunaresistenciaoexposiciónaagentespatógenos(porejemplo,elhongoquítridoanfibio)queseanresponsablesdedisminucionesenlapoblaciónsilvestre.
• Ladecisióndetratarporunpatógenoaunindividuoounapoblacióntambiéndependerádelaincidenciadelaenfermedadenanimalesconspecíficosydecontacto,otraspoblacionescautivasyenpoblacionessilvestres.
8.1MÉTODOSDETRATAMIENTOYCONTROLDELHONGOQUÍTRIDODE
ANFIBIOS Losmétodosdetratamientoparaelhongoquítridodeanfibiossonnecesariospara:
• Reducirlamorbimortalidadenpoblacionescautivasdebidoaestainfección.• Elsalvamentodepoblacionesdeanfibiossilvestresexperimentandomortalidad
debidoaquitridiomicosis(Gagliardoycolaboradores,2008).• Reducirelriesgohacialaspoblacionesdeanfibiossilvestresycautivos
planteadosporanfibiosqueesténinfectadosconhongoquítridoyquepuedanintroducirelhongoanuevoslugares.
• Lacreacióndepoblacionesdecrianzadeanfibiosqueesténlibresdeinfeccionesfungalesquitridias(libresdepatógenosespecíficos).Estaspoblacionespuedenserutilizadascomopoblacionesderesguardooparapropósitoscomerciales(porejemplo,animalesdelaboratorioymascotas).
Elhongoquítridoanfibio(Bd)tieneunaespecificidaddelhospedadormuybaja,locualfuedemostradoporlaidentificaciónenmásde200especiesy20familiasrepresentandoalosanuros,caudadosycecílidos(Gowerycolaboradores,2013).Aunqueunaampliagamadeespeciesanfibias(probablementelamayoría)sepuedenverinfectadas,diferentesanfibiospuedenvariardeformaconsiderableensususceptibilidadalaenfermedadquitridiomicosiscausadaporBd.ElBsalsóloseconoceporinfectaraanfibioscaudados.LosanfibioscaudadosdelPaleárticooccidentalparecenserparticularmentevulnerablesalaquitridiomicosiscausadaporlainfecciónBsal.Enelcasodemuchasespecies,lainfecciónnocausasíntomasexternosdeenfermedades(infecciónsubclínica),peroestosanimalesinfectadosaunasípuedenactuarcomofuentesdeinfeccionesparalasespeciesquesonaltamentevulnerablesalasenfermedadescausadasporBd(quitridiomicosis).Porestarazón,suelesernecesario
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—186
trataralosanfibioscautivosporinfeccionescuandoestánseanidentificadasyaseacomocausadeenfermedadocuandoseidentifiqueunainfecciónsubclínicausandounapruebaPCR(vealasección6.7–6.8yelcapítulo8). Aunquesehalogradoeltratamientoexitosoparaelhongoquítridoanfibio,existendesventajasparatodoslosmétodosdetratamientodescritos(Youngycolaboradores,2007;Bergerycolaboradores,2010;Blooiycolaboradores,2015).Estasdesventajasincluyen:
• Lostratamientosnosonconsistentementeexitososeneliminarlainfecciónquítridaentrelasespecies.
• Existeunanecesidadderealizarpruebasexperimentalescontroladasdelosmétodosdetratamientoparalainfecciónquítrida.Lamayoríadelostratamientoshansidoderivadosempíricamenteyprobadosenunasolaespecieosoloenunpequeñonúmerodeindividuos.Senecesitandesesperadamentepruebasqueexaminenaunavariedaddeespeciesanfibiasdiferentesyqueevalúentantolaeficaciadeltratamiento,asícomolatoleranciayseguridadentreespecies.Otraspruebaspodríanexaminarcombinacionesdetratamientosdiferentes(porejemplo,unacombinacióndecalorymedicamentosantimicóticos).
• Algunasmedicinasoregímenesdetratamientossontóxicosonosontoleradosporalgunasespeciesanfibiasoetapasdevidaanfibias(porejemplo,renacuajos).Muchosdelosreportesdemuertesasociadasalostratamientoshansidopobrementedocumentados
• Algunostratamientospuedenpresentarriesgosparalasaludhumana(porejemplo,malaquitaverde;cloranfenicol).
• Existenpocostratamientosconfiablespararenacuajos(Garnerycolaboradores,2009).
Algunoscomentariosgeneralesacercadetodoslosmétodosdetratamientoparaelhongoquítridoanfibioson:
• Existendiferenciasimportantesenlahabilidaddetolerarmedicaciónantimicóticadelasespeciesyetapasdevida(porejemplo,renacuajo,jóvenesyadultos).Sinohayexperienciaconunmedicamentoespecíficoenunaespecieoetapadevida,esrecomendabletrataraunnúmeropequeñodeindividuosparaevaluarlaseguridaddelmedicamentoantesdetrataraungrupoenterodeanimales.
• Yaquelainfecciónestáubicadaenlasuperficiedelapiel,lostratamientossuelenseraplicadostópicamentecomounbaño.Esimportanteagitarlasolucióndeltratamientoperiódicamenteparagarantizarquelamedicaciónhagacontactocontodaslassuperficiesdelapiel(dorsalesyventrales).
• Dadoqueelhongoquítridotienelacapacidaddepersistirenelmedioambiente,esimportantequelosanimalesseanalojadosenunrecintolibredehongo
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—187
quítridodespuésdecadatratamientodiario.Veaelpaso#1delprotocolodetratamientoitraconazolmásabajo.Ladesinfeccióndiariadelosrecintosysuamuebladoesnecesaria(veaelcapítulo5).
• Losanimalesnodeberíanserdevueltosaunrecintopermanentecontaminadodespuésdesutratamientoparaelhongoquítrido.Losrecintospermanentesdebenserlimpiadosydesinfectadosminuciosamente.Sedeberíanusarnuevossustratos.
• Dadoquelostratamientosnosonuniformementeefectivos,esaltamenterecomendadoelusodepruebasPCRdespuésdeltratamientoparaevaluareléxitooelfracasodeesteenlosanimales.Podríansernecesariasmúltiplespruebasparaestarsegurodequelosanimalesseencuentranlibresdeinfeccióndespuésdeltratamiento(vealasección7.3).
• SiunapruebaPCRresultapositivadespuésdelprimertratamiento,seránecesariounsegundotratamientoconlamismaodiferentemedicaciónométodoparagarantizarlaliquidacióndelainfecciónBd.Algunasvecessonnecesariosmúltiplesciclosdepruebasytratamientosparagarantizarlaliquidacióndelainfección.
• SilosanimalesestánenfermosomuriendoporinfeccionesBd/Bsal(quitridiomicosis),esútilentregartratamientocomplementarioconelectrolitos(Voylesycolaboradores,2007;Voylesycolaboradores,2009;Bergerycolaboradores,2010)yconantibióticos(porejemplo,Baytril).Vealasección8.5paradetallesacercadelaformulacióndesolucionesdesuplementacióndeelectrolitos.
• Mientrasquelasinstitucionesempiezanadiagnosticaryatratarquitridiosmásampliamenteensuscolecciones,surgeunaoportunidadparadeterminaranecdóticamentecualesprotocolosdetratamientoresultanmáseficacesparacualesespecies.Resultaríaútilunacoleccióndeinformaciónqueincluyalaespecie,tamaño,dosisusada,metodologíadedosis,períododetratamiento,diagnósticosdeseguimiento,resultadosynecesidadderepetirlostratamientos.Recolectarinformacióndeloquenofuncionaestanimportantecomolainformacióndeloquesifunciona.
Sehandescritounavariedaddemétodosdetratamientoenlaliteraturaoanecdóticamentedentrodelosprogramasdeconservacióndeanfibios.Estoshansidorevisadosrecientemente(Bergerycolaboradores,2010).Eltipodetratamientodependerádevariosfactores,incluyendo:
• Costo.• Ladisponibilidaddelosmedicamentosespecíficos.• Elnúmerodeanimalesquedebensertratados.• Latoleranciaconocidaoanticipadadelasespeciesalostratamientostales
comoeldealtastemperaturasambientalesoeldeitraconazol.
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—188
Másabajoseentregainformaciónrespectoalatransmisióndelhongoquítridoanfibioydatosespecíficosdealgunosdelosmétodosdetratamientomásusados.
Transmisióndelhongoquítridodeanfibios Losaspectosdelatransmisióndelhongoquítridodeanfibiosquesonútilesparaeldiseñodetratamientosyprogramasdecontrolincluyen:
• Elestadoinfecciosodelhongoquítridodeanfibiosresponsabledelatransmisióndelainfeccióneslazoosporaflagelo.Laincidenciadeesporasresistentesodeetapasdereposonohasidoclaramentedocumentada.
• Esposiblealbergaraanfibiosinfectadosconhongoquítridoenlamismahabitaciónoinstalaciónquelosanfibiosnoinfectadossinriesgodetransmisiónoinfección.Estorequierecuidadosaatenciónalasprácticasdebioseguridad(vermásabajo).
• LaszoosporasinfecciosasdeBatrachochytriumdendrobatidissonmuyvulnerablesaladesecación(secadocompleto),porlotanto,sutransmisiónporlogeneralrequierematerialesoherramientashúmedasocontactoentreanimales)JohnsonySpeare,2003;Piotrowskiycolaboradores,2004).
• ElhongoquítridoBatrachochytriumdendrobatidishaprobadosercapazdesobrevivirenaguadesionizadapor3a4semanas,enaguadelagoesterilizadapor7semanas,enarenahúmedaderiopor3mesesyenplumasdeavesporhasta3horas(JohnsonySpeare,2003;JohnsonySpeare,2005).
• Lasprácticasdebioseguridadquesonútilesparacontrolarinfeccionesytransmisionesson:
o Evitemoveranimales,sustratoshúmedosomojados(porejemplo,tierra,grava,musgo,plantas),amuebladodelajaulaoaguaentrerecintosdiferentes.Desinfecteherramientasyequipodespuésdeusarlosenrecintosdiferentes.
o Sigalasrecomendacionesparalahigiene,patronesdetrabajoehigienedelrecintoenlassecciones4.9,4.12yelcapítulo5.
o Useprácticasdedesinfecciónpararecintosyequipoqueseanconocidasporeliminarelhongoquítridoanfibio.Veaelcapítulo5.
TratamientodeinfecciónBdconitraconazol
Ladrogaantimicóticadetipoazole,itraconazol,escomúnmenteusadaenzoológicosyprogramasdeconservacióndeanfibiosparaeltratamientodequitridiomicosiscausadaporBatrachochytriumdendrobatidisenanfibiospostmetamórficos(Nicholsycolaboradores,2000;Forzanycolaboradores,2008;Gagliardoycolaboradores,2008;Pessier,2008).Existenalgunaspruebasclínicascontroladasqueapoyanelusodeitraconazol,sinembargo,estaspruebassehanbasadoenpequeñosnúmerosdeanimalesoespecies(Nicholsycolaboradores,2000;LamirandeyNichols,2001;Garnerycolaboradores,2009).
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—189
Lasventajasdelitraconazolincluyen:
• Usoexitosovariosprogramasdeconservacióndeanfibios.EnlosEstadosUnidos,losprogramasdecríaencautiverioparaelsapodeWyoming(Anaxyrusbaxteri)yelsapopuertorriqueño(Peltophrynelemur)hanusadoestamedicaciónextensivamente.Elusodeitraconazolenunaoperaciónderescatedeunavariedaddeespeciesanfibiaspanameñasparecióestarbientolerado(Gagliardoycolaboradores,2008).
• Elitraconazolpodríaposeerventajassobreotrosmedicamentosantimicóticosazole,yaqueenlosmamíferossevuelvemásconcentradoypersisteentejidosqueratinizadostalescomolapiel.Estonohasidocomprobadoenanfibios.
• Eltratamientodeaplicacióndiariaesporuncortoperíododetiempo(5a10minutos).
• Tienemenosriesgosdeseguridadparahumanoscomparadoconotrosmétodosdetratamientodescritos.
Lasdesventajasdelitraconazolson:
• Elprotocolodetratamientoquehasidousadofrecuentementeparaanfibiospostmetamórficosenprogramasanfibiosdecautiverioestóxicoparalosrenacuajosyalgunasranasrecientementemetamorfoseadas.Esteprotocoloestándar,usandounasoluciónde0,01%itraconazol,nodeberíaserusadoenestasetapasdevida.UnprotocoloalternativousandounaconcentraciónsubstancialmentemásbajadeitraconazolfuetoleradoporrenacuajosAlytesmuletensis,peroresultoendespigmentacióndelapiel(Garnerycolaboradores,2009).
• Existeunavariaciónencomolosanimalespostmetamórficostoleraneltratamientoconlasoluciónestándarde0,01%deitraconazol.Sehanregistradocasosdeanorexia,úlcerascorneales,enfermedadesdelriñónymuertesenalgunasespecies(sobretodoenránidos)relacionadaaltratamiento.Cuandoseestétrabajandoconespeciesoetapasdevidanovedosas,eltratamientodeberíaserprobadoyevaluadocuidadosamenteantesdesuaplicacióngeneralizada.
o Lasobservacionesdeefectosadversosnohansidoconsistentesypuedequelamismaespecietolereeltratamientobienenunainstalaciónyqueobtengaresultadosnegativosenunainstalacióndiferente.Losfactoresqueinfluencianelresultadodelostratamientospodríanincluirlaseveridaddelaenfermedadantesdeltratamiento;variacionesencomolamedicacióndeltratamientoesformuladaoaplicada;yreaccionesidiosincráticasalasdrogas.
o Lascausasdemuertesasociadasatratamientostambiénpodríanincluirfactoresrelacionadosalaformulacióndelitraconazol.Paralograrlasolubilidaddelmedicamentoenunaformaacuosa,lasoluciónoraldelcomercioesmuyácida.UnbajopHpodríaresultarenirritacióncutáneao
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—190
disfunciónosmótica,locualpodríaserdifícildetolerarparaanimalesqueyaseencuentranosmóticamentecomprometidosdebidoaunaenfermedadoparaformasdevidacompletamenteacuáticascomolosrenacuajos.ElusodesolucionesmenosconcentradasdeitraconazololaaplicacióndetratamientosconsolucionesconcapacidaddeproteccióncomolasoluciónparaanfibiosdeRingerpodríaresultarútil.
• Algunasdelasmedicinasantimicóticasdetipoazole(comoelitraconazol)disminuyenlasíntesisdehormonasdeesteroidestalescomolatestosteronaoloscorticosteroides,locualpodríatenerunimpactoenlaviabilidadreproductivadelosanimales.Enelcasodelitraconazol,estosefectossecundariossonmínimosenlosmamíferos,perosuefectoenanfibiosnohasidoestudiado.Algunosanfibiosenpoblacionesderesguardosometidosaltratamientoconitraconazolhanpodidoreproducirseconéxitodespuésdeltratamiento(sapodeWyoming,ranadoradadePanamá,sapopuertorriqueño).
• Lasoluciónoraldeitraconazoldisponibleenelcomercioescara,porloqueeltratamientodeungrupograndedeanimalestendríacostesprohibitivos.
Imagen8.1—Unaranahylidae(Hyloscirtuscolymba)dePanamáquemuestrasíntomasdeun
casoclínicoodequitridiomicosiscontraídaenlanaturaleza.FotoporE.Baitchman.
Protocolodetratamientoconitraconazol Elprotocolodetratamientoconitraconazol,másfrecuentementeutilizadoenprogramasdeconservacióndeanfibios,fuedesarrolladoenpequeñosensayosconranasdelgéneroDendrobatescautivasenelSmithsonianNationalZoo(Nicholsycolaboradores,2000;LamirandeyNichols,2002).Elprotocolofuederivadoempíricamenteydespuésfueaplicadoaunavariedaddeespeciesanfibiasenparámetrosdecautiverio(Rendleycolaboradores,2015).SususosincluyeneltratamientodeanimalesenfermosconquitridiomicosiscausadaporBd,eltratamientodeanimalesinfectadossubclínicamenteconBdyeltratamientoprofilácticodeanimalesdealtoriesgoantesdesuhibernación,envío,apareamiento,translocaciónyreintroducciónalanaturaleza.
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—191
Elprotocolooriginalutilizounasuspensióncompuestadeitraconazoldiluidoen0,6%NaCL(salino)diariamentepor11días.Posteriormente,hanemergidomuchasvariacionesdelprotocoloylamayoríadeestasutilizanunasoluciónoralde10mg/ml(1%)deitraconazol(Sporanox®OralSolution;Itrafungol®OralSolution)parahacerunasolucióndetratamientode0,01%pormediodeladiluciónensolucióndeRingerparaanfibios.Serecomiendaelsiguienteprotocolo:
1. Duranteelperíododetratamiento,losanimalessonmantenidosenrecintosqueseanfácilesdedesinfectar.Algunasopcionesincluyenrecintostemporaleshechosdecontenedoresplásticosdecomida(“Tupperware®”),recintosbaratosdeplásticoparaanimales(“PetPals®”),acuariosdevidrioygrandescontenedoresdeplástico(“Rubbermaid®”).
• Lossustratosdelrecintotemporaldeberíanserdesechables(por
ejemplo,toallasdepapel,musgosphangnumhúmedo)ysercambiadosdiariamente.
• Elamuebladodelrecintotemporal(porejemplo,cajasparaesconderse)deberíaestarhechodematerialesfácilesdelimpiarydesinfectados.Estosdeberíanserdesinfectadosdiariamente.
• Esútiltener2conjuntosderecintosyamuebladospararecintosquepuedanalternarseentrelosdíasdetratamiento.Despuésdequelosanimalesrecibantratamiento,estosdebensercolocadosenelrecintolimpioquedeberíahabersidodesinfectadoeldíaanterior(vermásabajo).
2. Sinohayexperienciapreviausandoitraconazolenlaespecieoetapadevida
(porejemplo,renacuajo,jovenoadulto)queserátratada,elprotocolodetratamientodeberíarealizarseenunpequeñonúmerodeanimalesparaevaluarsuseguridadantesdetrataraungrupograndedeanimales.Estopodríanoserposibleenlassituacionesqueinvolucrenaanimalesenfermosocercadelamuerte.Consideretrataraestosanimalesconconcentracionesmásbajasdeitraconazol(vea#3másabajo).
3. Lasolucióndeltratamientoconitraconazoldebeserpreparadadiariamente.La
soluciónoralde10mg/ml(1%)deitraconazol(Sporanox®OralSolution;Itrafungol®OralSolution)disponibleenelcomerciodebeserdiluidaensolucióndeRingerparaanfibios(vealasección8.5paralareceta)parahacerunasolucióndetratamientode0,01%.Nouselasolucióndetratamientode0,01%enrenacuajosoenanimalesrecientementemetamorfoseados(puedequebajasconcentracionesdeitraconazolseanseguras,vermásabajo).
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—192
• Paraprepararcadasolucióndetratamientode100ml,agregue1,0mlde10mg/mldeitraconazola99mldesolucióndeRingerparaanfibios(parapreparar1litrodesolucióndetratamientoagregue10mlde10mg/mldeitraconazola990mldesolucióndeRingerparaanfibios).Estoesequivalentea100mgdeitraconazolporlitrodesolucióndetratamiento.
• Experienciasrecientesmuestranqueelusodeconcentracionesdeitraconazolmenoresa0,01%puedenserexitosasenlaeliminacióndeinfeccionesBd.Senecesitanpruebasexperimentalesparadeterminarlaconcentraciónmínimaefectivadeitraconazol.Elusodeconcentracionesmásbajasessugeridoparatrataraespeciesquenopuedentolerareltratamientoconsolucionesde0,01%osinotieneexperienciapreviautilizandoitraconazolenunaespecie.Algunosdelosasistentesatallereshanempezadoausarsolucionesdetratamientode0,005%(50mgporlitro)omenosconéxito.
• Unensayoexperimentalúnicotratoconéxitoarenacuajosdelferreret(Alytesmuletensis)conunaconcentraciónmuybajadeitraconazol(de0,5a1,5mgdeitraconazolporlitrodesolucióndetratamiento).Sinembargo,estosrenacuajosperdieronpigmentaciónenlapiely,porlotanto,laseguridadalargoplazodeestetratamientoenrenacuajosesdesconocida(Garnerycolaboradores,2009).Actualmente,estabajadosisnoesrecomendadaparaanimalespostmetamórficos.
4. Eltratamientodebañodeitraconazoldebeseraplicadopor5minutos1vezal
díapor10díasconsecutivos.
• Elusodebolsasplásticasconunselladodetipocierre(porejemplo,Ziploc®),vasosdeplásticodesechables(Forzanycolaboradores,2008)ocontenedoresplásticosdesechablesdecomidasonútilesparalaaplicacióndelosbañosdeitraconazol.Elbajovolumenrequeridoparaestoscontenedoresreducelacantidaddesolucióndetratamientonecesaria.Elusodebolsasplásticasparecereducirelestrésdeltratamientoparaalgunosanimales.
• LasolucióndeitraconazolsevolveráblancaoparecidaalechecuandoseaagregadaalasolucióndeRingerparaanfibios.Algunosanimalesreaccionarancuandoseancolocadosenlasolucióndetratamientoytratarandeescapardelbaño(estopodríacausarirritacióncutánea).Siseobservanreaccionesextremas,deberíaconsiderarseelusodeunaconcentraciónmásbajadesolucióndeitraconazol.
• Lasolucióndetratamientodeberíacubrirlassuperficiescutáneasventralesyextenderseaproximadamentealamitaddelassuperficies
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—193
lateralesdelcuerpo.Losanimalesnodeberíannadaroflotarenlasolucióndetratamiento(exceptoenelcasodelasespeciesanfibiastotalmenteacuáticas).
• Elcontenedordetratamientodebeseragitadoregularmenteparaasegurarsedequelasolucióndetratamientoalcancetodaslassuperficiesdelapiel(dorsalyventral).Evitequelosanimalessubanalosladosdelcontenedordetratamientoparaescapardelasolucióndetratamiento.
• Despuésdecadatratamientodiario,losanimalesdebenserdevueltosaunrecintolimpioypreviamentedesinfectado(vea#1másarriba).
5. Enelcasodelosanimalesqueseencuentrenclínicamenteenfermoscon
quitridiomicosis(porejemplo,quemuestrensíntomasdeletargo,anorexia,malosreflejos,descamaciónexcesivadelapiel,posturaencorvada)untratamientodeapoyoconelectrolitosyantibióticossuplementariospuedeserútil.
• Ranasinfectadasexperimentalmenteconquitridiomicosisterminal
mostraronserhiponatrémicasehipocalémicas(Voylesycolaboradores,2007;Voylesycolaboradores,2009).
• Paraintentarcorregirlasanomalíasenloselectrolitos,sesugierelaadministraciónpormediodesondagástricade12%soluciónoralWhitaker-Wright(Voylesycolaboradores,2009;Bergerycolaboradores,2010).Vealasección8.5paralaformulacióndeWhitaker-Wright.
• Alternativamente,oademásde,losanimalesqueseencuentranafectadosclínicamenteporquitridiomicosisdebensercolocadosenunbañoRingerparaanfibios,preparadoconunaconcentraciónisotónicaounaligeramentemásgrande,estoconelpropósitodefomentarlaretencióndeelectrolitos.LafuentedeaguaregularpuedeserreemplazadaconsolucióndeRingerparaanfibios.Lasolucióndebesercambiadadiariamente.
• Tambiéndebeseradministradountratamientoantibióticoempírico(porejemplo,enrofloxacina)paratratarinfeccionesbacterianassecundarias.
• UnarevisióndelaterapiadefluidosparaanfibiosseencuentraenWrightyWhitaker(2001).Fórmulasparalassolucionesdeelectrolitosseentreganenlasección8.5.
6. Eltratamientodebeserdescontinuadodespuésde10días.Eléxitodel
tratamientopuedeserverificadopormediopruebasPCRdehisoposcutáneos(vealassecciones7.2y7.3).
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—194
• LasmuestrasparalaspruebasPCRdebenserobtenidas2semanasdespuésdequetermineeltratamiento.Estopermitequelosanimalesterminendedescamarpielquepuedacontenerorganismosquitridiosinactivosomuertos.
• Yaquelosanimalestratadospodríanpresentarmuybajosnivelesdeinfección,sesugierequealmenos2o3hisoposparaPCRseanobtenidosenunperíodode2semanas.MúltiplespruebasPCRnegativasentreganmásseguridaddequelosanimaleshayaneliminadoconéxitolainfección
• Combinarlasmuestrasdemúltiplesanimalesdelmismogrupodetratamientopuedeayudarareducirloscostosdelaspruebasposttratamiento.Sicualquieranimalenelgrupodetratamientodaunresultadopositivo,elgrupoenterodebeconsiderarseinfectadoysertratadodenuevo.
7. Unsolociclodetratamientode10díasnosiempreesefectivoparaeliminarla
infecciónBd.Unsegundociclodetratamientoy,ocasionalmente,múltiplesciclosdetratamientopodríansernecesariosparaeliminarlainfeccióndelosanimales.Algunasposiblescausasdefallasdeltratamientoincluyen:
• Nodesinfectarlosrecintosdelosanimalesdespuésdecadatratamientodiario.
• Noagitarlasolucióndetratamientoparaasegurarsedequetodaslassuperficiesdelapielesténcubiertasconmedicaciónopermitirquelosanimalesescapendelasolucióndetratamiento(porejemplo,subiéndosealosladosdelcontenedordetratamiento).
• Siseutilizansuspensionesdeitraconazolcompuestasenvezdelasoluciónoralde10mg/mldisponibleenelcomercio,elitraconazolpodríadesprendersedelasoluciónyquedarseenelfondodelcontenedordetratamiento.Agitarymezclarfrecuentementepodríasernecesarioparalassolucionesdetratamientohechasdesuspensionesdeitraconazol.
8. Laaplicaciónenelcampodelprotocolodetratamientodeitraconazolpuede
lograsefácilmenteypuedeincrementarlasupervivenciadelosanimalesprovenientesdeambientesconBdqueestánsiendorecolectadosparacoloniasderesguardoyconservación.LosanimalesqueseanpositivosparaBdcuandosoncapturadospodríandesarrollarrápidamenteenfermedadesclínicasdebidoainmunosupresióncausadaporelestrés.Aquellosanimalesquesoncapturadosenlosprimerosdíasdeexpedicionesqueduraranvariosdíaspodríanestarespecialmenteenriesgodedesarrollarenfermedadesirreversiblesparacuandotodosseantraídosalainstalaciónprimariadecuarentenaytratamiento.EnlasregionespositivasparaBd,iniciarelprotocolodetratamientodentrodelasprimeras24horasdelacapturapuedeincrementarnotablementelastasasdesupervivenciageneral.
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—195
• Lasbolsasdeplásticosellablesydesechables,losvasosdeplástico
desechablesylasreservasdesolucióndeitraconazolpuedensercargadasfácilmenteenelcampo.Lasfuenteslocalesdeaguapuedenserutilizadasparaprepararlasolucióndetratamientodiluida,estoselograusandodispositivosportablesdefiltracióndeaguaqueincluyanfiltrosde0,5micronesomáspequeñospararemoveralosorganismosBddelafuentedeagua.Losdispositivosportablesdefiltracióndeaguahechosparaproduciraguapotableparaexcursionistasseencuentrandisponiblescomercialmente.
• LlevarunareservadesolucióndeRingerparaanfibiosyantibióticosalcampopermitiráeltratamientodeapoyoparalosanimalesqueyaseencuentrenclínicamenteenfermosenáreasmuyafectadas.
Tratamientoconcloranfenicolyflorfenicol
ElantibióticocloranfenicolhademostradoparadójicamenteteneractividadinvitroeinvivocontraelBd(Poulterycolaboradores,2007;Bishopycolaboradores,2009).Losensayosinicialesusandounbañocontinuodecloranfenicolpor2a4semanaseranaparentementesegurosyefectivosenlaeliminaciónlainfecciónBdenranascampanamoteadas(Litoriaraniformis)yranasarborícolasmarrones(Litoriaewingii).Lasventajaspotencialesdeltratamientoconcloranfenicolson:
• Eltratamientopareceserbientoleradoporrenacuajosyranasadultas,inclusocuandolosanimalessonmantenidosdeformacontinuaensolucióndetratamientoporvariassemanas.
• Eltratamientopodríaserunadelaspocasmedicacionesdisponiblesparasuusoenrenacuajos.
• Laaplicaciónpormediodeinmersióncontinuaesmuyconvenienteparaeltratamientodeespeciesanfibiastotalmenteacuáticasyderenacuajos.
• Eltratamientoesbaratocomparadoconeldeitraconazol.Sinembargo,existenalgunasdesventajaspotencialesimportantesrespectoalusodecloranfenicol:
• Losprotocolosdetratamientodisponiblesrequierenquelosanimalesesténcontinuamenteexpuestosalasolucióndetratamientoporunperíodode2a4semanas.Estopuedesertoleradopormuchasespeciesanfibiasacuáticasosemiacuáticas,perolasespeciesanfibiasterrestres(porejemplo,lossapos)podríantenerproblemasconsuosmorregulaciónybalancedelosfluidosbajoestascondiciones.Senecesitanpruebasexperimentalesconespeciesanfibias
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—196
terrestresantesdeponeraestosanimalesenunprotocoloextendidodetratamientodebaño.
• Enmuyrarasocasioneselcloranfenicolestáasociadoasupresióndemédulaóseayanemiaaplásicaengatosysereshumanos.Estopodríacausarpreocupacionesrespectoalasaludlaboralenalgunospaíses.Lostrabajadoresquetratenconcloranfenicolaanfibiosdeberíanusarprecaucionesparaevitarlaexposiciónalasolucióndetratamiento.Elusodemedicamentostalescomoelflorfenicol,loscualesestánrelacionadosalcloranfenicol,peronopresentanpreocupacionesrespectoalasaludhumana,deberíanserevaluadosdeformaexperimentalparasuusoeneltratamientodequitridiomicosis.
Unprotocolodetalladodetratamientoparaelusodecloranfenicolseencuentradisponibleen:www.nzfrogs.org/site/nzfrog/files/TreatmentProtocol.pdf
• Lasolucióndetratamientoestáhechadecloranfenicoldegradoreactivo(cloranfenicolC0378;Sigma-Adrich,St.Louis,MO).Unasolucióndereservasepuedehaceragregando200mgdecloranfenicolenpolvoa1litrodeaguacaliente.Unapartedelasolucióndereservaesdiluidaen9partesdeaguaparahacerlasolucióndetratamiento(porejemplo,100mldesolucióndereservaagregadosa900mldeaguaparahacer1litrodesolucióndetratamiento).Lasolucióndetratamientocontiene20mgporlitro(20ppm)decloranfenicol.
• Losanimalessoncolocadosenlasolucióndetratamientoporunperíodode2a4semanasyestosdebenestarconstantementeexpuestosalasolucióndetratamiento.Lasolucióndetratamientodebesercambiadadiariamente.
• Losintentospreliminaresparatrataraanimalesconflorfenicol(NuFlor®)usandounasolucióndetratamientode30mgporlitro(30ppm)hansidotoleradosporalgunasespeciesanfibias(K.Wright,comunicaciónpersonal).Senecesitanestudiosparaconfirmarsueficaciacontraelhongoquítridoanfibio.También,sedesconocesihayaditivosenlasolucióninyectabledisponibleenelcomerciodeflorfenicol(comercializadoparaganadoenlosEstadosUnidos)quepuedansertóxicosparalosanfibios.Espreferibleelusodepolvodeflorfenicolobtenidodeunaformulacióndefarmacia.
• Cuandoconcluyaeltratamiento,unapruebaPCR,comofuedescritomásarribaenelprotocolodetratamientoconitraconazol,esrecomendadaparaconfirmarqueseeliminólainfección.
TratamientoquímicodelainfecciónBsal
• EltratamientoantimicóticodelainfecciónBsalensalamandrasdefuego(Salamandrasalamandra)usandoprotocolosdesarrolladosparaBdresultoenunfracasoterapéutico(Blooiycolaboradores,2015)
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—197
• LainhibicióndeBsalcrecidainvitroocurriódespuésdelaexposiciónavoriconazol,polimixinaE,itraconazolyterbinafina,peronoaflorfenicol(Blooiycolaboradores,2015)
• Eltratamientotópicoensalamandrasdefuegoinfectadas(Salamandrasalamandra)convoriconazoloitraconazolsolos(12,5μg/mly0,6μg/mlrespectivamente)oencombinaciónconpolimixinaE(2000IU/ml)atemperaturaambientede15°Cdurante10díasredujeronlascargasfúngicas,peronoeliminaronlasinfeccionesBsal.
• EltratamientotópicodeanimalesinfectadosconBsaljuntoaunacombinacióndepolimixinaE(2000IU/ml)yvoriconazol(12,5μg/ml)enunatemperaturaambientede20°CresultóenlaeliminacióndeinfeccionesBsal.Elprotocolodetratamientofuevalidadoen12salamandrasdefuegoinfectadasconBsalduranteunbrotedecampoyresultoenlaeliminacióndelainfecciónenlosanimales.
• EltratamientoquímicodeinfeccionesBsalnohasidoreportadoparaotrasespecies.
TratamientodeinfeccionesBdyBsalcontemperaturas
ambientaleselevadas Elusodetemperaturasambientaleselevadasparaeltratamientodeunainfeccióndehongoquítridoanfibioaprovechalaincapacidaddelhongodecrecerenaltastemperaturas(crecimientomáximodelBatrachochytriumdendrobatidisa17-25oCycrecimientomáximodelBatrachochytriumsalamandrivorans10-15oC).Enunestudiopiloto,ranasarborícolasverdesLitoriachlorisinfectadasexperimentalmenteconBdymantenidasa37oCpor16horaseliminaronlainfecciónmientrasquelamayoríadelosanimalesmantenidosa20oCmurierondequitridiomicosis(Woodhamsycolaboradores,2003).Elusode32oCpormediodeexposicióncontinuafueefectivoparaeliminarlainfecciónBddePseudacristriseriata(RetallickyMiera,2007).ExponerasalamandrasdefuegoinfectadasconBsal(Salamandrasalamandra)a25oCpor10díasresultoenlacompletaeliminacióndelainfecciónycuroclínicamenteatodoslosanimalesinfectadosconpropósitosexperimentales(Blooiycolaboradores,2015).
• Aligualqueconotrosmétodosdetratamiento,lasalzasdetemperaturahansidoinconsistentementeefectivasentreespecies.Noserecomiendausarlascomotratamientoúnicoenlamayoríadeloscasos.Elusodealzasdetemperaturaencombinaciónconotrométododetratamiento(porejemplo,itraconazolocloranfenicol)essugeridoparaeltratamientodeinfeccionesBd.
• Notodaslasespeciesanfibiaspuedentolerarlasaltastemperaturasambientales(37oC)necesariasparalarápidaeliminacióndeinfeccionesBdo(25oC)paralarápidaeliminacióndeinfeccionesBsalpormediodelaaplicacióndecalor.Sinembargo,elusodetemperaturasmenoresqueexcedanlastemperaturasidealesparaelcrecimientodelhongopodríaayudarenlaeliminacióndelainfección.Porejemplo,unMixophyesfasciolatusinoculadoconelhongoquítridoyalojado
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—198
a27oCnopresentoevidenciadeinfecciónpor98díasdespuésdelainoculación(Bergerycolaboradores,2004).
• CuandoestéconsiderandolatemperaturacomounmétododetratamientoparaBdyBsal,esimportantemanteneralosanimalesaunatemperaturaconstanteenvezintermitente(Youngycolaboradores,2007).
• Senecesitanensayosexperimentalesadicionalesqueusencalorparaeliminarlainfeccióndehongoquítridoanfibio.Eltratamientoporcalorpodríaserútilencombinaciónconotrosmétodosdetratamiento.
Otrosmétodosdetratamiento
Variosmétodosdetratamientomássondescritosousadosanecdóticamente.Estoshansidorevisadosrecientemente(Bergerycolaboradores,2010).Algunosdeestosmétodosposeenimportantesdesventajas.
• VerdedeMalaquitayformalina.Estaesunacombinacióndequímicosquehasidousadaampliamentecomounbañoantiprotozoarioyantimicóticoparapeces.SuusorutinarioparaeltratamientodeinfeccionesBdnoesrecomendado.
o Unacombinaciónde0,1mg/litrodemalaquitaverdey25ppmdeformalinaadministradoscomobañopor24horascadadosdíashastallegarauntotalde4tratamientosfueefectivaeneltratamientoderanasafricanasdeuñas(Xenopustropicalis)coninfeccionesBd(Parkerycolaboradores,2002).
o Apesardequeesteprotocolodetratamientopodríaserconsideradoparaotrasespecies,tantolamalaquitaverdecomolaformalinasonconocidasporserteratógenasy/ocancerígenasyestánasociadasconpreocupacionesporlasaludhumana.
o Muchosanfibiosnotoleraraneltratamientoconestosquímicos.• Clorurodebenzalconio.Elclorurodebenzalconioesundesinfectantede
amoniocuaternarioocasionalmenteusadocomomedicaciónantimicóticaenpecesyanfibios.Hasidomencionadocomountratamientopotencialparalaquitridiomicosisenelcomerciodemascotas:www.flippersandfins.net/chytridBCtreatment.htmSinembargo,elusodebensalkoniumenranasafricanasdeuñasenanasconquitridiomicosis(originalmentediagnosticadascomoconunainfeccióndeBasidiobolusranarum;veaGroffycolaboradores,1991)resultoenunnúmeroreducidodemuertes,peronoeliminocompletamentelainfeccióndeBd.Actualmente,elbensalkoniumnoesrecomendadocomountratamientodefinitivo.
• Medicinasantimicóticasdeazoleapartedelitraconazol.Sehandescritoprotocolosqueutilizanmiconazolyfluconazol(Nicholsycolaboradores,2000;Bergerycolaboradores,2010),peroestosnosonusadosampliamenteohantenidoefectosmarginales.
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—199
• SulfafiazinaytrimetoprimEstacombinaciónparecehabertenidoactividadfungistáticaenunensayolimitadoconranasdelgéneroDendrobatesinfectadasconBd(Nicholsycolaboradores,2000).
• Terbinafina(Lamisil®).EstaesunamedicaciónantimicóticadeventalibrequemuchosaficionadosydueñosdemascotasprobadoshanusadoparatrataraanimalesdelosquesesospechaqueportanBdoqueestánclínicamenteenfermosconquitridiomicosis.Losprotocolosseencuentranrápidamenteenlínea,aunquenohanhabidoestudioscontroladosqueconfirmenlaeficaciaoseguridaddeestetratamientoy,enlamayoríadeloscasos,nosehaconfirmadoquelosanimalestienenBdantesdeltratamiento.Esteprotocolonoserecomienda.
8.2CONTROLDEINFECCIONESRANAVIRUS Lasinfeccionesconranavirussolorecientementehansidoreconocidascomounproblemapotencialenlaspoblacionesdeanfibioscautivos(Millerycolaboradores,2008;Pasmansycolaboradores,2008;Driskellycolaboradores,2009)ylaextensióneimportanciadeestasinfeccionesaúnsondesconocidas.SonnecesariosmásesfuerzosparalabúsquedayeldiagnósticodeinfeccionesRanavirusenpoblacionescautivasparaasípoderadquirirestosconocimientosfaltantes. Lasopcionesdetratamientoparaagentespatógenosviralessonmuylimitadasparalosvertebradosengeneralylaeficaciadeestasesdesconocidaenanfibios.SisediagnosticaninfeccionesRanavirusenunapoblaciónanfibiacautiva,lamayoríadelosesfuerzosdeberíanapuntaralcontroldeenfermedadesmásquealtratamientodeanimalesindividuales.Losobjetivosdeestasmedidasdecontrolson:
• Evitarlatransmisióndelainfecciónaotrosanfibiosdelapoblaciónoinstalación.
• Evitarlatransmisióndelainfecciónapoblacionesanfibiasnativas.• Lacreacióndepoblacionesdecrianzadeanfibiosqueesténlibresdeinfecciones
ranavirales(libresdepatógenosespecíficos).Estaspoblacionespuedenserutilizadascomopoblacionesderesguardooparapropósitoscomerciales(porejemplo,animalesdelaboratorioymascotas).
Sehadocumentadoquelasinfeccionessubclínicasderanavirusposeenperíodosdepersistenciaquevaríandesdetanpococomo20díasa6mesesomás(Brunnerycolaboradores,2004;Robertycolaboradores,2007).
• Losanimalesinfectadossubclínicamentetieneelpotencialdepropagarlainfeccióninadvertidamenteaotrosanimalesmásvulnerables.Sinembargo,estonohasidodocumentadoenpoblacionescautivas.
• Desafortunadamente,adiferenciadelasinfeccionesconhongosquitridios,laspruebasdediagnósticoconfiablesparadetectaraanimalesinfectadossubclínicamenteconranavirusnoseencuentrandisponibles(vealasección7.4),
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—200
losquecomplicalaimplementacióndemedidasparaelcontroldeenfermedades.
TransmisióndeinfeccionesRanavirus
AspectosdelatransmisióndeRanavirusquesonútilesparaeldiseñodeuntratamientoyunprogramadecontrolincluyen:
• Latransmisiónocurrepormedioderutastalescomocontactodirectoentreanimales,exposiciónaaguaquehayacontenidoaanimalesinfectados,consumodetejidosanimalesinfectadosypotencialmentepormediodeherramientas,equipoyrecintoscontaminados.
• ElRanavirusEHNpermaneceviablepormásde97díasenaguadestiladalibredecélulasmantenidaa15oC(59oF)ypormásde113díasensuperficiessecas(Langdon,1989).
• ElRanavirusAmbystomatigrinumpuedepermanecerviableenaguaporhasta2semanasa25oC(77oF;Jancovichycolaboradores,1997).
Tratamientoymétodosdecontrol
Siseidentificaunbrotedeenfermedadesranaviralesenunapoblacióncautiva,algunosmétodosdecontrolútilesincluyen:
1. Elaislamientodelosanimalesenfermosdelosanimalessaludables.2. Apegarseestrictamentealasprácticasdebioseguridadqueminimiceno
eliminenlatransmisióndeagentespatógenosentrerecintosanimales.Estopuededisminuirelnúmerodeanimalesqueseenfermanomuerenduranteunbrote.Lasprácticasparacontrolarlainfecciónylatransmisiónson:
o Evitelatransferenciadesustratossucios(porejemplo,tierra,grava,musgo,plantas),amuebladodelajaulaoaguaentrerecintosdiferentes.Lasrecomendacionesparalahigiene,patronesdetrabajoehigienedelrecintosedetallanenlassecciones4.9,4.12yelcapítulo5.
o Desinfecteherramientasyequipodespuésdeusarlosenrecintosdiferentes.Losdesinfectantesquedesactivanranavirusseenumeranenelcapítulo5.
3. Lasopcionesútilesparaeltratamientodeanimalesindividualesconinfecciones
Ranavirussonlimitadas.o Enelcasodelassalamandrastigre(Ambystomatigrinum)expuestasa
elRanavirusATV,lastemperaturasambientalesinfluenciaronlamortalidadyeltiempohastasumuerte.Lamayoríadelosanimalessobrevivierona26oC(78,8oF)ylamayoríamurierona18oC(64,4oF)y10oC(50oF)(Rojasycolaboradores,2005).
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—201
o Eltratamientoconantibióticos(porejemplo,enrofloxacino)podríaayudaracontrolarlasinfeccionesbacterianassecundarias.
4. Sedeberíarealizarunaevaluaciónderiesgosparalosanimalesdelosquese
sabequeestáninfectadosconunaRanavirusoquehansobrevividoaunbrotedeRanavirus.Estoesdiscutidoconmásdetalleenlasección6.2.Brevemente,lasdecisionesrespectoalagestióndeestosanimalesdependeráde:
o Laimportanciadelosanimalesinfectadosoexpuestosparalapoblacióncautivayparalosesfuerzosderecuperacióndelaespecie.
o LosresultadosdelosesfuerzosdevigilanciadeenfermedadesparadetectarinfeccionesRanavirus.Lasmejoresmuestrasparalavigilanciasonlasmuestrasdetejidorecolectadasenlaexaminaciónapartirdelanecropsia.ExistenpocaspruebasconfiablesovalidadasparadetectarinfeccionesRanavirusenanimalesvivos.
o lapresenciadelamismainfecciónRanavirusenlapoblacióncautivaqueladeunapoblaciónsilvestredeunaespecieanfibiaparticular.EstorequieretécnicasespecializadastalescomoelanálisisRFLPqueestámásalláquelaspruebasestándarbasadasenPCR.Vealasección7.4
8.3CREANDOPOBLACIONESDEANFIBIOSLIBRESDEPATÓGENOSESPECÍFICOS
(HONGOQUÍTRIDODEANFIBIOSYRANAVIRUS) Sehancreadopoblacionesdeanimalescautivoslibresdeagentespatógenosespecíficos("Libresdepatógenosespecíficos"oSPF,porsussiglaseninglés)enambientesagrícolas,acuiculturayencoloniasanimalesdelaboratorio.Estaspropuestaspodríanresultarmuyútilesparalagestióndepoblacionesdeanfibioscautivos(Lotz,1997;OIEAquaticHealthCode:http://www.oie.int/Eng/normes/fcode/A_summry.htm).Comoyasehaseñaladoenelcapítulo4,existenpreocupacionesrespectoalmovimientoylaintroduccióndeagentespatógenosanfibiosanuevasubicacionesgeográficasyelimpactodeestosparalaspoblacionesdeanfibiossilvestres. LacreacióndepoblacionesanfibiasSPFparaanfibioscomúnmentedistribuidosenelcomerciodemascotas(porejemplo,ranasafricanasdeuñasenanas;ranaarborícoladeWhite);investigacionesdelaboratorio(ranaafricanadeuñas;ranasleopardo);produccióndealimentos(ranastoroamericanas)ypoblacionesderesguardoparaanfibiossonmuyrecomendadaspara:
• Reducirelriesgodemoveragentespatógenosanfibiosimportantestalescomoelhongoquítridooranavirusanuevoslugarespormediodelcomerciodeanfibios.
• Reducirlanecesidadderealizarextensivaspruebasdedeteccióndeenfermedadesinfecciosasantesdeunenvíooduranteunacuarentena(veaelcapítulo6)sisesabeosetieneuncertificadodequelosanimalesseencuentranlibresdeagentespatógenosespecíficos.Estoresultaríaen:
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—202
o Menortiempoencuarentenaymenosestrésdelosanimalesasociadoconlaspruebasdedeteccióndeenfermedades.
o Reduccióndeloscostosdelaspruebasdedeteccióndeenfermedades.
o PermitiríacumplirmásfácilmenteconlosrequerimientosdelaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE)paraelmovimientodeanfibios(vealasección7.6)
• Reducirelimpactoquetienenlasenfermedadesinfecciosasespecíficasenlasostenibilidaddepoblacionescautivasyeneléxitodepoblacionesderesguardo.
AlgunosdesafíospotencialesdelacreacióndepoblacionesSPFson:
• Laspoblacionessoncarasyrequierenmuchotiempoparasercreadas.• ElmantenimientodelestatusSPFdeunapoblaciónylaprevencióndenuevas
infeccionesrequierenuncompromisoalargoplazopara:o Mantenerestrictasprácticasdebioseguridaddelasinstalaciones(veael
capítulo4).Algunasdelasprácticasdebioseguridadmásimportantessonprevenirlaexposiciónaanfibiossilvestresoacoleccionesanfibiascosmopolitasquealberguenanimalesdemúltiplesubicacionesgeográficasofuentes.
o Mantenerlasprácticasdecuarentenaenvigorantesdelaintroduccióndenuevosanimalesaunapoblación(veaelcapítulo6).
o Crearyutilizarunprogramadevigilanciadeenfermedadesqueincluyanecropsiaehistopatologíadetodoslosanimalesquemueran(veaelcapítulo9)asícomopruebasperiódicasparadetectaragentespatógenosdeinterés.
• Enalgunoscasosseríapreferiblemantenerlainfeccióndeagentespatógenosespecíficosennivelesquenoresultenenunamorbimortalidadsignificativadentrodelapoblacióncautiva.Estoesmásadecuadoparalaspoblacionesderesguardodondeespreferiblequelosanimalescautivosdesarrollenomantenganlatoleranciaaagentespatógenosqueencontrarancuandoseanreintroducidosalanaturaleza.
Engeneral,lacreacióndepoblacionesSPFrequiere:
• Ladisponibilidaddeunaovariaspruebasdediagnósticoconfiablesparadetectarpatógenosdeinterés.
• Ladisponibilidaddetratamientosparaenfermedadesespecíficasqueseanefectivosparalaeliminacióndelainfeccióndelpatógenodeinterés.
• LahabilidadparamantenerlabioseguridaddelasinstalacionesyeliminarlaexposiciónaanfibiosquenoseanSPF.
• Elusodetécnicasqueseparenalosanimalesjuvenilesoendesarrollodesuspadresinfectadosuotrasfuentesdecontaminaciónantesdequeseinfectencon
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—203
elagentepatógenodeinterés.Ningunadeestastécnicashansidovalidadasparasuusoenanfibiosoespecíficamenteparaagentespatógenosanfibios.Lastécnicasincluyen:
o Eliminacióny/odesinfeccióndeloshuevosseguidodelaremocióndelmedioambientecontaminado.www.oie.int/eng/normes/fmanual/1.1.3_DISINFECTION.pdf
o Laremocióndelarvaspormediodecesárea(paralasespeciesanfibiasvivíparastalescomoelsapoaerosoldeKihansi,Nectophrynoidesasperginis).
AlgunosenfoquesquepodríanserusadosparalacreacióndepoblacionesSPFdeanfibioslibresdelhongoquítridodeanfibiosoranavirusseentreganmásabajo.
Crearpoblacionescautivaslibresdehongoquítridodeanfibios Lacreacióndepoblacionesdeanfibioscautivoslibresdeinfeccionesconelhongoquítridodeanfibiosesimportantepara:
• Eléxitoylasostenibilidaddelaspoblacionesderesguardoparaanfibios,especialmenteparaaquellasespeciesquesonmuysensiblesalasinfeccionesmicóticasquitridiasyqueestánenpeligrodeextincióndebidoalaquitridiomicosis.
• Proveerunafuentedeanimaleslibresdelhongoquítridodeanfibiosparasuusoenelcomerciodemascotas,consumohumanoycomoanimalesdelaboratorio.Estominimizaríalasposibilidadesdequeanimalescautivosactúencomounafuentedeinfecciónparanuevaspoblacionesanfibias.
Unaestrategiaparacrearpoblacionescautivaslibresdelhongodequítridoanfibios
1.Sedebedeterminarlapresenciaoausenciadelhongoquítridodeanfibiosenlapoblacióncautiva.Laspruebasdereacciónencadenadelapolimerasa(PCR)enanimalesseránnecesarias(vealasección7.3)amenosqueyasesepaquelapoblaciónestáinfectadayaqueloindicaronlosresultadosdelasvigilanciasapartirdenecropsiasopruebasPCRanteriores.
• EsimportantequelaspruebasPCRdeunapoblaciónseandiseñadaspararecolectareltamañodemuestraapropiadoparaestarsegurodelaausenciadelainfección.
• SerequierenmúltiplespruebasPCRparadeterminarsianimalesindividualesdefinitivamenteseencuentranlibresdelainfección.Unsoloresultadonegativonoessuficienteparaelpropósitodelacreacióndepoblacioneslibresdehongosquitridios.Losresultadosfalsosnegativosocurrenenanimalesquetieneninfeccionessubclínicasodebajonivel(vealasección7.3).Inicialmente,sedeberíanhacerpruebasenanimalesindividuales(enelcasodepoblacionespequeñas)oenmuestrasdetamañoapropiadodepoblacionesgrandesporlo
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—204
menos2vecesynomásde3vecesenunperíodode2semanas.Elusodeprotocolosqueagrupenmuestrasdehisoposdemúltiplesanimalesalojadosenelmismorecintopodríaserútilparareducirelcostodelaspruebas.
• Losanimalesquemuerandeberíanserpresentadosparalaexaminaciónapartirdelanecropsiaehistopatologíaparadeterminarsilamuertefuecausadaporquitridiomicosis(veaelcapítulo9).
2.SitodoslosanimalesdanresultadosnegativosenlapruebaPCRrealizadaenelpaso1ylosresultadosdelanecropsiadelosanimalesquemueransonnegativosparaquitridiomicosis,sepodríahacerunadeterminaciónpreliminardeunaestadolibredehongoquítrido.Vayaalpaso#5.3.SiseidentificananimalesPCRpositivososiseencuentranmuertescausadasporquitridiomicosisenlaexaminaciónapartirdelanecropsia,todalapoblaciónseconsideraráinfectadaconhongoquítrido.Estadeterminaciónsellevaacabosinimportarlosresultadosdelaspruebasdecualquieranimal.Enotraspalabras,losanimalescuyoresultadodePCRhayasidonegativoenestasituaciónseconsideraráninfectadosconhongoquítridosiotrosanimalesdelgrupotienenresultadospositivos.Todalapoblacióndeanimalesdeberíasertratadaconmedicaciónantimicóticausandolosprotocolosdiscutidosmásarribaenlasección8.1.4.Despuésdequeeltratamientoconmedicaciónantimicóticadelapoblaciónseacompletado,espereunmínimode2semanasantesderepetirlaspruebasPCRcomofuedescritoenelpaso#1.SilaseriedepruebasposttratamientodetectaanimalesPCRpositivos,sedeberepetirelpaso#3entodalapoblaciónhastaquelaspruebasPCRdelapoblaciónseannegativas.Silaseriedepruebasposttratamientosonnegativasentodalapoblación,sepodríahacerunadeterminaciónpreliminardeunestadolibredehongoquítrido.5.Laspoblacionesconunadeterminaciónpreliminardequeseencuentranlibresdehongoquítrido,comofuedescritoenelpaso#1o#4,deberíansermonitoreadasenunprogramadevigilanciadeenfermedadesporunperíodoextendido(porejemplo,de6mesesa1año)antesdedeterminarfinalmentequeseencuentranlibresdeBd.Lavigilanciadeenfermedadespuedeincluirtantonecropsiaehistopatología,asícomopruebasPCResporádicasdeanimalesdelapoblación.SiseidentificananimalesPCRpositivososisedescubrequitridiomicosisenlaexaminaciónapartirdelanecropsia,sedeberepetirelpaso#3.6.EsimportantequelaspoblacionesdeanfibiosPCRnegativasseanmantenidasenaislamientopermanentedelosanimalesinfectadosconhongoquítridoodeloscualessedesconozcasuestadodeinfección.Lasprácticasdebioseguridadindicadasenelcapítulo4podríanserútiles.Antesdeañadirnuevosanimalesalapoblación,esimportantequeestosseencuentrensujetosaunprocesodecuarentenacompleto(veaelcapítulo6),elcualincluyepruebasPCRparadetectaralhongoquítridoanfibio.
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—205
Crearpoblacionescautivaslibresderanavirus
LacreacióndepoblacionesdeanfibioslibresdeRanavirusesrecomendadaporlaOrganizaciónMundialdeSanidadAnimal(OIE)paraelcontroldeinfeccionesranaviralesenanfibioscriados.ElprocesonecesarioparacrearpoblacionesSPFdeRanavirusesmenosclarocomparadoaldelhongoquítridoanfibio,estoesdebidoalafaltadepruebadediagnósticovalidadasparasuusoenanimalesvivos.
• LaspoblacionesSPFdeRanavirustambiéntendránusosparalosanimalescriadosengrandesnúmerosparaelcomerciodemascotas.
• Enelcasodelaspoblacionesderesguardoylosprogramasdereintroducciónalanaturalezaparaanfibios,laspoblacionesSPFdeRanavirusprobablementesoloseránnecesariasensituacionesenquelapoblacióncautivahayaadquiridounRanavirusquenocirculenormalmenteenlaspoblacionessilvestresosiestáinfectadaconunRanavirusqueconsistentementecausamortalidadsignificativaenlapoblacióncautiva.
Estrategiasparacrearpoblacionescautivaslibresderanavirus
1.Determinarlapresenciaoausenciadeinfeccionesranaviralesenlapoblacióncautiva.Algunosmétodossugeridosincluyen:
• LavigilanciapormediodenecropsiaehistopatologíadelasmuertesenlapoblaciónquemuestrensignosquepodríansugerirunainfecciónRanavirus.Estosincluyen:hemorragiasenmúltiplestejidos;degeneraciónynecrosisenhígado,riñón,tractogastrointestinalotejidohematopoyético;ycondicionescutáneasproliferativasoulcerativas.
• RealicepruebasPCRenlostejidos(porejemplo,hígadoriñón)recolectadosenlanecropsiadetodoslosanimalesquemuerany/odetodoslosanimalesqueseansacrificadosparapropósitosdevigilanciadeenfermedades.Vealasección7.4
• LarecoleccióndemuestrasparapruebasPCRdeanimalesvivosaparentementesaludablesnohasidovalidadaynoesrecomendadacomolaúnicapruebadediagnósticoparadeterminarelestadodeinfeccióndeRanavirusdeunapoblación.
• Lavigilanciadeberíallevarseacaboenunperíodoextendido(porejemplo,1año).
• LosgruposdeanimalesqueseránutilizadosparalacreacióndeunapoblaciónSPFdeberíanmantenerseenaislamientoalargoplazodeotrosanfibios(vealasección4.9)
2.Silavigilanciaparadetectarranavirusdescritaenelpaso#1esnegativa,lapoblaciónpodríaserprovisionalmenteconsideradalibredeRanavirus.Vayaalpaso#4.
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—206
3.Silavigilanciaparadetectarranavirusdescritaenelpaso#1espositivaymuestraevidenciadeinfecciónRanavirusenlapoblación,lassiguientesmedidaspodríanserútiles:
• Sihayanimalesenfermos,sepárelosdelosanimalesclínicamentesaludables.• Incrementelosesfuerzosdelavigilanciacomofuedescritoenelpaso#1.Se
deberíaconsiderarelsacrificiodeanimalesparalavigilanciadeenfermedades(pruebasPCRdelostejidos).
• SigruposindividualesdeanimalesenlapoblacióndanresultadosnegativosparalaevidenciadeunainfecciónRanavirus,estosdeberíanserseparadosdelosgruposquedenresultadospositivos.Sedeberíaninstituirprácticasdebioseguridadqueaíslenaestosgruposnegativosdelosgrupospositivos.(vealasección4.9).
• Lasmedidasdevigilancia,comofuerondescritasenelpaso#1,seseguiránaplicandoenlosgruposquetenganresultadosnegativos.Lavigilanciasedeberíarealizarenunperíodoextendido(porejemplo,de6mesesa1año).SiestosgrupossiguensiendoPCRnegativos,podríanserconsideradosprovisionalmentelibredeRanavirus.Enestaetapa,vayaalpaso#4.
• Considerevolveraderivaralaspoblacionescautivaspormediodelaremocióndesushuevosdelosambientesopoblacionescontaminadas.UnaadvertenciapotencialessilasinfeccionesRanaviruspuedentenertransmisiónvertical(desconocido).
4. EsimportantequelaspoblacionesanfibiasSPFdeRanavirusseanmantenidasen
aislamientopermanentedelosanimalesinfectadosopotencialmenteinfectadosconranavirus.Antesdeañadirnuevosanimalesalapoblación,esimportantequeestosseencuentrensujetosaunprocesodecuarentenacompleto.
8.4MONITOREOYTRATAMIENTODEPARÁSITOS Aunquenosiempreespreferibleeliminarcompletamentelascargasparasitariasnaturalesdelosanimalesdestinadosalareintroducciónalanaturaleza(LylesyDobson,1993;Cunningham,1996),sonnecesariosprogramasdecontrolparaciertosendoparásitosbajocondicionesdecautiverio.InfeccionesdeespecialimportanciasonaquellasconnemátodosrabditiformestalescomoelgusanopulmonaranfibioRhabdias,yelnematodointestinalStrongyloides.Estassoninfeccionessubclínicascomunesenlosanfibiossilvestres,perocausanseriosproblemasenlosgruposdeanimalesrecientementetraídosacautiveriodesdelanaturaleza(Leeycolaboradores,2006;Pessier,2008).
• Muchosanfibiosenlanaturalezasehanadaptadoparasobrevivirconbajosnivelesdecargasparasitariasdenemátodos.Asuvez,losparásitosproducenaltosnúmerosdecríasparaincrementarlasposibilidadesdequeunadeestaseventualmenteencuentreunhuéspedviable.Cuandounanimalinfectadoes
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—207
traídoacautiverio,elanimalesrepetidamenteexpuestoaunagrancontaminaciónambientalconaltosnúmerosdeóvulosolarvasdeparásitoinfecciosos.
• Enelcasodelosnemátodosrabditiformes,estosparásitosposeenunciclodevidadirecto,elcualescompletadoentanpococomo48horas,porloquelashiperinfeccionespuedenocurrirfácilmente.(PoyntonyWhitaker,2001).
• Losnemátodosrabditiformessoncontroladosenlassituacionesdecautiveriopormediodeunacombinacióndevigilanciadeparásitosfecales,buenahigienedelrecintoeinstalaciónytratamientosantihelmínticos.
Vigilanciadeparásitos
Lavigilanciadelasmuestrasfecalesparaencontrarevidenciadeparasitismointernoesunaparteimportantedeunprogramadecontrolparasitario(vealasección7.7).
• Durantelacuarentenaparalosnuevosanimales,elobjetivoesreducirlacargaparasitariatantocomoseaposibleparaevitarintroduciranimaleshiperinfectadosalaspoblacionescautivasestablecidas.Lavigilanciafecalparalacuarentenaesdiscutidaendetalleenlasección6.11.
• Losanimalesenpoblacionescautivasquehanpasadolacuarentenaexitosamentesonvigiladospormediodeexaminaciónfecalporlomenosdecada6a12mesesotanfrecuentementecomoseanecesarioparaalcanzarunniveldeseadodecontrolparasitario.
o Ademásdeloscontrolesrutinarios,sedeberíantomaryrevisarmuestrasfecalesdetodoslosanimalesquepresentenpérdidadepeso,pérdidadeapetito,enfermedadpatológica,etc.
o Lasexaminacionesfecalestambiénsedebenrealizarmásfrecuentementesilavigilanciaapartirdelanecropsiadelapoblaciónindicaquelosproblemasparasitariossonunacausaimportantedeenfermedadomuerte.
• Enelcasodelosnemátodosrabditiformes,unsistemadepuntuaciónestandarizadoesutilizadopararegistrarconexactitudlosnivelesparasitarios.Unsistemadepuntuaciónfecalparalaslarvasdenematodorabditiformeespropuestoabajo.Ciertamente,estesistemaessubjetivoyotrosenfoquespodríanserutilizados.Elusoconsistentedeunsistemadentrodelainstalacióneslomásimportante.
Estesistemaparalalarvadenematodorabditiformeesutilizadoconunaexaminaciónenmontajeenfrescodelasheces:
• 1+=1omenoslarvasidentificadasporcada3omáscamposbajos(Objetivode10x)
• 2+=1larvaidentificadaporcada2o3camposbajos• 3+=1larvaidentificadaporcada1o2camposbajos
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—208
• 4+=1omáslarvasidentificadasencadacampobajo;paralasmuestras4+,intenteregistrarunnúmeroaproximadodecuantaslarvassonvistasporcampobajo
Nota:Yaqueelportaobjetosesescaneadoenbajopoder(Objetivo10x),cadaposiciónnuevadelportaobjetosesconsideradauncampobajo.Unpuntajeesasignadobasadoenelpromediodetodosloscampos.Serecomiendaquetodoslosanimalesenunacolecciónestablecidaconresultadosde3+omásseantratados.Lashecesdetodoslosanimalesquerecibantratamientoparasitariodeberíanserexaminadasdenuevo1semanadespuésdelúltimotratamiento.Siunamuestrafecaldaunresultadopositivoenunrecintoquecontieneamásdeunanimal,considereatodoslosanimalesdelrecintocomopositivos.
Tratamientoantiparasitario Eltratamientoparalosnemátodosrabditiformesrequiereatenciónalahigienedelrecintodelosanimalesparacontrolartantolasetapasambientalesdelparásito,asícomolaadministracióndemedicinaantihelmínticaparareducirlascargasparasitariasinternas.
• Enelcasodelosanimalesgravementeinfectadosdebeconsideraralojarlosenrecintostemporalesquesepuedanlimpiarydesinfectarfácilmenteyquecontengancantidadesmínimasdesustratosorgánicos.Lashecesdeberíanserremovidasdiariamentedelrecintoylossustratosolosrecintosdeberíanserreemplazadosylimpiadosaproximadamentecada2díasduranteeltratamiento.
• Paraelcontrolparasitarioalargoplazo,losrecintosparaanimalesdeberíanserdiseñadosdeformaquelalimpiezaylaremocióndedesechosfecalesseanfáciles.
o Elusoderecintosconpisosagujereadosypisosfalsospermiteelenjuaguefrecuente(porejemplo,semanal)delossustratosdelrecinto.
o Lamateriafecaldeberíaserremovidamanualmentedelassuperficiesdelasplantasuotrossustratosdelrecinto.
• Debeobtenerelpesocorporalengramosprecisodecadaanimalparalaadministracióndemedicinasantihelmínticas.
• Antesdelusodeunamedicaciónenunaespecienueva,seríaprudentetrataraunpequeñonúmerodeanimalesantesdetrataratodalacolección.Todaslasmedicinaspresentadasmásabajohanprobadosersegurasenunaampliagamadeespecies,aunqueaunasíesposiblequeexistasensibilidadytoxicidadenespeciesindividuales.Además,cualquiermedicaciónpodríasertóxicasiseentregaunadosisexcesiva;esesencialprestaratenciónalospesoscorporales,elcálculodelasdosisylapreparacióndelasdisoluciones.
• Algunasopcionesdemedicaciónincluyen:
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—209
o DrontalPlus®BayerHealthCareAnimalHealthDivision.Unproductodecombinaciónquecontienepraziquantel,paomatodepirantelyfebantel.Unasuspensiónescompuestausandocomprimidosoralesparaperrosdisponiblesenelcomercio.Lasuspensiónesformuladaparaproveer2,25mg/mldelcomponentedepiranteldelproducto.Ladosisesde0,01ml(o10microlitros)deformaoralporcadagramodepesocorporal.Repitaladosisen2o3semanas.Esteprotocolohasidousadodeformasegurayefectivaenanurospanameñostraídosapoblacionesderesguardo(Gagliardoycolaboradores,2008).Esútilusarunamicropipetaenlosanimalesmuypequeños.Unauñetablandadeguitarraounaparatosimilardelgadodeplásticoblandoesusadoparaabrirgentilmentelabocadelanimalparaladosificaciónoral.
o Fenbendazole(Panacur®)suspensiónoral10%(100mg/ml).Unantihelmínticocomúnmenteusadoenlamedicinaveterinariaconunamplioperfildeseguridad.Ladosisesde50–100mg/kg.De0,5a1microlitrosdesuspensiónde100mg/mlpor1gdepesocorporal(de50a100mg/kg),administradosdeformaoral(comofuedescritoparaelDrontalPlus).Repitaen10a14días.Comoalternativa,enelcasodelosanimalesmuypequeños,utilicegránulosde22%deFenbendazole(222mg/g)paraespolvorearaloselementosdepresa.Ofrezcaloselementosdepresaespolvoreadosunavezaldíapor5díasyrepítaloen2a3semanas.
o Levamisol.Esteesunantihelmínticocomúnmenteutilizadoenelganadodomésticoyseencuentradisponibleenmuchospaísescomounasolucióninyectable.Ladosisesde10mg/kg(equivalentea0,01mgdeLevamisolporcadagdepesocorporal),lacualesaplicadadeformatópicaenlapiel.Laaplicacióncutáneapresentaventajasparalosanimalesqueseestresanfácilmenteyquenopuedentolerarlasmedicinasadministradasdeformaoral.Lasolucióndetratamientosehacediluyendolasolucióninyectabledisponibleenelcomercioa10mgpormililitro.Usandoestasolución,aplique0,01mlporcada10gpesocorporal.Paralosanimalesquepesanmenosde10gramos,utiliceunamicropipetaparadar1microlitroporgramodepesocorporal.Despuésdeaplicarlasoluciónenlapiel,enjuaguelapielconaguafrescadespuésde1horadecontacto.Vigilealosanimalesporsipresentansíntomasdeparálisis;siestoocurre,enjuaguealanimalminuciosamenteymanténgaloenunambientebienoxigenadoyfrescohastaqueserecupere.Repitaeltratamientocada14díasparauntotalde2o3dosis.Estamedicaciónhasidoutilizadadeformaseguraenunaampliavariedaddeanuroscautivosycaudadosencoleccionesdezoológicosycoloniasderesguardoexsitu.Suefectividadhavariadoyesnecesariovolveraverificarlasmuestrasfecales1o2semanasdespuésdecompletareltratamientoparaverificarsusefectos,aligualqueconcualquiertratamientoantiparasitario.
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—210
o Ivermectina.Seencuentradisponibleunasolucióninyectablede1%(10mg/ml)deivermectina(Ivomec®).Estapreparaciónpuedeaplicarsedeformatópica,inyectableuoralmente.Ladosisparalamayoríadelosanfibiosesde0,2mg/kg,locualesequivalentea0,02microlitrosdeun1%delaivermectinainyectableporcadagramodepesocorporal.Laadministraciónrequeriráladilucióndelproductode1%parapodermedirladosisconexactitud.Alternativamente,sepuedeprepararunbañodeivermectinaconunaconcentraciónde10mg/L(1mldeun1%deivermectinainyectableen1litrodeagua).Losanimalesdebensercolocadosenelbañopor60minutos,loquesedeberepetiren7días.Hanhabidoreportesanecdóticosdetoxicidadalaivermectinaenalgunasespecies,porloquesedebetenercuidadocuandoseapliqueestasoluciónaespeciesconlaquenoestáfamiliarizado.
8.5MEZCLASDEELECTROLITOSLosanfibiosconquitridiomicosisuotrospatógenospuedenpresentar
importantesdesequilibriosdeelectrolitos.Porlotanto,ademásdeltratamientoantimicótico,losanimalesafectadossebeneficiandeterapiasdefluidosyelectrolitos.Laspropuestasparalasterapiasdefluidosparaanfibiossehanrevisadoenotraspublicaciones(Wright&Whitaker,2001).Enelcasodelosanimaleslevementeymoderadamenteafectados,losbañosdeelectrolitoscomoeldesolucióndeRingerparaanfibiosaplicadoscontinuamenteenelcasodeespeciesacuáticasocomofuentedeaguaparalasespeciesterrestrespodríanserútiles.Enelcasodelosanimalesdeprimidosomoribundos,podríasernecesarialaadministraciónintracelómicadesolucionesdeelectrolitosbalanceados(nolacteados)diluidosen1:1o2:1con5%dedextrosa.
• RecetaparalasolucióndeRingerparaanfibios(1litro)
o Clorurosódico(NaCl),6,6gramoso Cloruropotásico(KCl),0,15gramoso Clorurocálcico(CaCl2),0,15gramoso Bicarbonatosódico(NaHCO3),0,2gramos
Agregueaguadestiladaparahacer1litrodesolución.Mezclelasoluciónminuciosamenteparagarantizarquetodosloscristalessedisuelvan.Agitebienantesdeusar.Manténgalaenuncontenedorselladoparareducirlaevaporación(WrightyWhitaker2001).Sisecompranproductosquímicossecos,seríaconvenientepremezclarlosquímicosenbolsasseparadasqueesténlistasparaseragregadasalagua.Tambiénhaysolucioneslíquidasconcentradaspremezcladasconvenientesybaratasdereservadisponiblesenelcomercio:http://www.enasco.com/product/SA09708(LM)M
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—211
• RecetaparalasoluciónWhitaker-Wright(1litrode100%desolucióndereserva)
o Clorurosódico(NaCl),113gramoso Sulfatodemagnesio(MgSO4·7H2O),8,6gramoso Clorurocálcico(CaCl2),4,2gramoso Cloruropotásico(KCl),1,7gramos
"Disuelvaloscristalesminuciosamenteenaguadestilada.Mantengaelcontenedortapadoparaprevenirevaporación.AgreguelabasedeTrizma(7,4),calidaddepez,paraestabilizarelpHdelasoluciónentre7,0y7,3"(WrightyWhitaker,2001).Estaesunasolucióndereservaquedebeserdiluidaantesdeusarse.UnasoluciónWhitaker-Wright12%hasidoutilizadacomosuplementooraldeelectrolitospararanasconquitridiomicosis(Voylesycolaboradores,2009;Bergerycolaboradores,2010).Unasolución12%sepreparaagregando12mldesolucióndereservaa88mldeaguadestilada.8.6EUTANASIA Unavariedaddemétodosparalaeutanasiadeanfibioshansidodescritos,incluyendobañosdeinmersiónenmetanosulfonatodetricaína(MS-222)obenzocaína;inyeccióndebarbitúricostalescomoelpentobarbital;ymétodosfísicoscomoeldescabello.Estosmétodoshansidodiscutidosenrevisionesdelosmétodosdeeutanasiaparaanimales(www.avma.org/issues/animal_welfare/euthanasia.pdf) Lainmersiónenmetanosulfonatodetricaína(MS-222)(Finquel®,ArgentChemicalLaboratories)esunodelosmétodosdeeutanasiamenosestresantesyeselquemenosinterfiereconlaspruebasdediagnósticodelaboratoriotalescomolanecropsiaehistopatología.Losanimalessonpuestosenunabañeraquecontienede1a3gramosdeMS-222porlitro.Sedejaalosanimalesenlasoluciónhastaquenorespondanaestímulosyhayaevidenciadequesurespiraciónyactividadescardiacashayancesado.ElclorhidratodebenzocaínaesunadrogarelacionadaalMS-222ypuedeseradministradaenunbañoconporlomenos250mgporlitro.8.6LITERATURACITADABergerL.,R.Speare,A.P.Pessier,J.Voyles,andL.F.Skerratt.2010.Reviewoftreatmentsforchytridiomycosis.DiseasesofAquaticOrganisms:inpress.Berger,L.,R.Speare,H.B.Hines,G.Marantelli,A.D.Hyatt,K.R.McDonald,L.F.Skerratt,V.Olsen,J.M.Clarke,G.Gillespie,M.Mahony,N.Sheppard,C.Williams,andM.J.Tyler.2004.Effectofseasonandtemperatureonmortalityinamphibiansduetochytridiomycosis.AustralianVeterinaryJournal82:434–439.Bishop,P.J,R.Speare,R.Poulter,M.Butler,B.J.Speare,A.D.Hyatt,V.Olsen,andA.Haigh.2009.EliminationoftheamphibianchytridfungusBatrachochytrium
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—212
dendrobatidisbyArchey’sfrogLeiopelmaarcheyi.DiseasesofAquaticOrganisms84:9–15.Brunner,J.L,D.M.Schock,E.W.Davidson,andJ.P.Collins.2004.Intraspecificreservoirs:complexlifehistoryandthepersistenceofalethalRanavirus.Ecology85:560–566.Driskell,E.A.,D.L.Miller,S.L.Swist,andZ.S.Gymesi.2009.PCRdetectionofRanavirusinadultanuransfromtheLouisvilleZoologicalGarden.JournalofZooandWildlifeMedicine40:559–563.Forzan,M.J.,H.Gunn,andP.Scott.2008.Chytridiomycosisinanaquariumcollectionoffrogs:diagnosis,treatmentandcontrol.JournalofZooandWildlifeMedicine39:406–411.GagliardoR,P.Crump,E.Griffiths,J.R.MendelsonIII,H.Ross,andK.C.Zippel.2008.TheprinciplesofrapidresponseforamphibianconservationusingtheprogrammesinPanamaasanexample.InternationalZooYearbook42:125–135.Garner,T.W.J,G.Garcia,B.Carroll,andM.C.Fisher.2009.UsingitraconazoletoclearBatrachochytriumdendrobatidisinfectionandsubsequentdepigmentationofAlytesmuletensistadpoles.DiseasesofAquaticOrganisms83:257–260.Groff,A.Mughannam,T.S.McDowell,A.Wong,M.J.Dykstra,F.L.Frye,andR.P.Hedrick.1991.AnepizooticofcutaneouszygomycosisincultureddwarfAfricanclawedfrogs(Hymenochiruscurtipes)duetoBasidiobolusranarum.JournalofMedicalandVeterinaryMycology29:215–223.Jancovich,J.K.,E.W.Davidson,J.F.Morado,B.L.Jacobs,andJ.P.Collins.1997.IsolationofalethalvirusfromtheendangeredtigersalamanderAmbystomatigrinumstebbinsi.DiseasesofAquaticOrganisms31:161–167Johnson,M.L.,andR.Speare.2003.SurvivalofBatrachochytriumdendrobatidisinwater:quarantineanddiseasecontrolimplications.EmergingInfectiousDiseases9:922–925.Johnson,M.L.,L.Berger,L.Philips,andR.Speare.2003.Fungicidaleffectsofchemicaldisinfectants,UVlight,desiccationandheatontheamphibianchytridBatrachochytriumdendrobatidis.DiseasesofAquaticOrganisms57:255–260.Johnson,M.L.,andR.Speare.2005.PossiblemodesofdisseminationoftheamphibianchytridBatrachochytriumdendrobatidisintheenvironment.DiseasesofAquaticOrganisms65:181–186.
Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—213
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Cap.8:Tratamientoycontroldeenfermedades—214
Poynton,S.L.,andB.R.Whitaker.2001.Protozoaandmetazoainfectingamphibians.Pp.193–221In:Wright,K.M.,andB.R.Whitaker,AmphibianMedicineandCaptiveHusbandry(eds.).KriegerPublishing,Malabar,Florida,USA.Piotrowski,J.S.,S.L.Annis,J.E.Longcore,2004.PhysiologyofBatrachochytriumdendrobatidis,achytridpathogenofamphibians.Mycologia96:9–15.Poulter,R.T.M.,J.N.Busby,P.J.Bishop,M.I.Butler,andR.Speare.2007.Chloramphenicolcureschytridiomycosis(Abstract).AmphibianDeclinesandChytridiomycosis,TranslatingScienceIntoUrgentActionConference,Tempe,Arizona,USA,November5–7,2007.Rojas,S.,K.Richards,J.K.Jancovich,andE.W.Davidson.2005.InfluenceoftemperatureonRanavirusinfectioninlarvalsalamandersAmbystomatigrinum.DiseasesofAquaticOrganisms63:95–100.Retallick,R.W.R.,andV.Miera.2007.StraindifferencesintheamphibianchytridBatrachochytriumdendrobatidisandnon-permanent,sub-lethaleffectsofinfection.DiseasesofAquaticOrganisms75:201–207.Robert,J.,LAbramowitz,J.Gantress,andH.Morales.2007.Xenopuslaevis:apossiblevectorofRanavirusinfection.JournalofWildlifeDiseases43:645–652.Voyles,J.,L.Berger,S.Young,R.Speare,R.Webb,J.Warner,D.Rudd,R.Campbell,andL.F.Skerratt.2007.Electrolytedepletionandosmoticimbalanceinamphibianswithchytridiomycosis.DiseasesofAquaticOrganisms77:113–118.Voyles,J.,S.Young,L.Berger,C.Campbell,W.F.Voyles,A.Dinudom,D.Cook,R.Webb,R.A.Alford,L.F.Skerratt,andR.Speare.2009.Pathogenesisofchytridiomycosis,acauseofcatastrophicamphibiandeclines.Science326:582–585Woodhams,D.C.,R.A.Alford,andG.Marantelli.2003.Emergingdiseaseofamphibianscuredbyelevatedbodytemperature.DiseasesofAquaticOrganisms55:65–67.Wright,K.M.,andB.R.Whitaker.2001.Pharmacotherapeutics.Pp.309–330In:Wright,K.M.,andB.R.Whitaker(eds.),AmphibianMedicineandCaptiveHusbandry.KriegerPublishing,Malabar,Florida,USA.Young,S.,L.Berger,andR.Speare.2007.Amphibianchytridiomycosis:strategiesforcaptivemanagementandconservation.InternationalZooYearbook41:85–95.
Cap.9:Necropsiadeanfibios—215
CAPÍTULO9
NECROPSIADEANFIBIOS9.0INTRODUCCIÓN Lanecropsia(oexamenpost-mortem)esuncomponenteimportantedelosprogramasdevigilanciadeenfermedadesenlascoloniasdesupervivenciadeanfibios,altiempodeserunaherramientaimportanteparalasevaluacionesdelriesgodeenfermedades.
• Idealmente,sedeberealizarunanecropsiacompletaenlamayorcantidaddeanimalesquemuerenenlascoloniasdesupervivenciadeanfibios.
• Tambiénserealizannecropsiasenanimalesentresacadosdelaspoblacionesysacrificadospararecolectarinformaciónparalavigilanciadelaenfermedad.
• Unanecropsiacompletaincluyetambiénelexamenhistológicodelosprincipalesórganosydelapiel.
Lossiguientessonalgunosdelosbeneficiosqueaportanlasnecropsiasyestudioshistopatológicosparalaseguridaddelascoloniasdesupervivenciadeanfibios:
• Lahistopatologíapuededetectarunaampliagamadeenfermedadesinfecciosasynoinfecciosas(incluyendopruebasdedeficienciasnutricionalescomunesenlascoloniasdesupervivencia).Eselmétododediagnósticoqueposeemásposibilidadesdedetectarenfermedadesnuevasoinesperadasparalascualesnoexistenpruebasespecíficas(porejemplo,PCRparaelhongoquítridodelosanfibios).
• Ademásdeserunaherramientaparalaevaluaciónderiesgosdeenfermedad,losdatosrecolectadosconlasnecropsiassonutilizadosporveterinariosyadministradoresdeinstalacionesparadeterminarlosproblemasdesaludmásimportantesqueafectanaunacoloniadesupervivencia.Estopermiteconcentrarlosesfuerzosdegestiónhaciaesasacciones(porejemplo,lacorreccióndeladieta,oeltratamientodeunainfecciónespecífica)queserándegranbeneficioparamantenercoloniasdesupervivenciasegurasyautosustentables.
Notodaslasinstalacionestienenaccesoinmediatoaunpatólogoveterinario,oinclusounveterinariolocalquepuedarealizarnecropsias.
• Aúnenestassituacionessiguesiendoimportanterecolectarmuestraspostmortem,lasquesepuedenconservaryutilizarposteriormente,cuandosedispongadeunveterinarioodeunpatólogo.
Cap.9:Necropsiadeanfibios—216
• Elmétododefijacióndecuerposparalasnecropsiasquesedescribeenlasección“Realizacióndelanecropsia”puedeserenseñadofácilmentealpersonal,aunqueéstenotengaformaciónenbiologíaoveterinaria.[p.197]
• Lasmuestrasparanecropsiasonunrecursoinsustituibleparalacomprensióndelosproblemassanitariosenlascoloniasdesupervivencia.Porlotanto,esmuchomejorrecolectaryconservarmuestrassiempre,queluegolamentarnohaberlohecho.
• Estasecciónanalizalosprocedimientosdenecropsiadeanfibios,enfatizandoenlatomademuestrasenaquellascoloniasdesupervivenciaquenocuentanconapoyoveterinarioinsitu.Existenalgunasrevisionesdetalladasmétodosdenecropsiaenanfibiosyreptiles(Nichols,2001,PessieryPinkerton,2003,TerrellyStacy,2007).Lasdirectricesgeneralesparalarecoleccióndemuestrasdenecropsiadeanimalessalvajesestándisponiblesen(www.wcs.org/~/media/Files/pdfs/necropsy2.ashx),ycontieneninformaciónútil.
• Tambiénsediscutiránalgunasconsideracionesespecialesaaplicareneventosdemortalidadmasiva,enlosqueseencuentranmúltiplesanimalesmuertosomuriendo.
9.1PREPARACIÓNPARALANECROPSIA
Lanecropsiasedeberealizartanprontocomoseaposibledespuésdelamuertedelanimal.Ladescomposición(autolisis)delostejidosenanfibiosseproducerápidamente,ycuantoantessepuedanconservarlasmuestras,mayorserálaposibilidaddequelahistopatologíayotraspruebasdiagnósticasproporcioneninformaciónútil.
• Silanecropsianoserealizainmediatamente,loscuerposdebenserconservadosenrefrigeración(2-8°C)porunlapsomáximode24a72horas.
• Loscuerposnodebensercongelados,amenosquenoexistaotraalternativa,oqueserequieradeeseprocedimientoparaotrotipodepruebasdediagnóstico(ver“Investigacióndeeventosdemortalidad”,másabajo).Elcongelamientopuedecrearartefactossignificativos,quepuedeninterferirconlasinterpretacioneshistopatológicas.
• Loscuerposconservadosenelrefrigeradordebendisponerseenbolsasplásticasconcierreherméticouotrotipoderecipientesellado.Cadarecipienteestaráetiquetadoconelnombredelaespecie,elnúmeroindividualdeidentificacióndelanimalylafecha.
• Lasnecropsiasdeberánrealizarseenunespaciolimpio,alejadodelasáreasenlasquesemantienealosanimales,odeaquellasenquesepreparasucomida,secríanlosinsectososepreparanyprocesanlasrecintosylossustratos.
Cap.9:Necropsiadeanfibios—217
9.2MATERIALESNECESARIOS• Fijadordetejidos.Elmejorfijadorparalapreservacióndelostejidospara
histopatologíaesunasolucióndeformalinaneutratamponada.Lafórmulaparahacer1litroes:
o 100mldeformaldehído37%o40%.o 900mldeaguadestilada.o 4.0gdefosfatomonobásicodesodio.o 6.5gdefosfatodibásicodesodio.[p.198]
Laformalinaneutratamponadatambiénpuedeobtenersepremezcladadeproveedoresdeproductosquímicosomedicinales.Sinosedispusieradeformalina,selapuedesustituirporunasolucióndeetanolal70-90%comofijadordetejidos.
• Elementosparalarecolecciónyconservacióndemuestrascongeladasdetejidoparanecropsias.Algunosejemplosincluyen:
o BolsastipoWhirl-Pak®(Nasco,EUA,www.enasco.com).Útilesparacongelarmuestrasdegranvolumenocuerposcompletos.
o TuboscriogénicostipoNuncCryoTubesTMoVangardCryosTM(SumitomoBakeliteCo.,Ltd.Japón,www.sumibe.co.jp/english/).Útilesparacongelarórganosaisladosomuestrasdetejido.
• Instrumental.Pararealizarunanecropsiacompletaenlamayoríadelosanfibiossolosenecesitanalgunosinstrumentosbásicos,incluyendo:
o Mangoycuchillasdebisturí.o Tijeras(sesugierenmúltiplespares,asícomounpardetijerasfuertes
paracortarhuesos).o Pinzarparatejidos.o Reglagraduada(paramedirelcuerpoycualquierlesión).o Tabladecorte(paraserutilizadocomosuperficiedetrabajo).Es
preferibleutilizartablerosplásticos,porqueselavanydesinfectanmásfácilmente.
o Balanzadigital(útilpararegistrarelpesodelosdiversoselementos).Labalanzanodebeserlamismaqueseempleaparapesaralosanimalesvivos.
• Equipodeprotección.Estoselementosprotegenalapersonaquerealizalanecropsiadelaexposiciónapatógenos,ycontribuyenaasegurarquelosmaterialesinfecciososnosetrasladendelazonadenecropsiaalasáreasendondesealojananimalesvivos.Elequiposugeridoincluye:
o Guantesdesechablesdelátexonitrilo.o Batadelaboratorioodelantalplásticoparaprotegerlaropa.
• Quemadordealcoholodebutano.Paraesterilizarlosinstrumentosutilizadosenlaobtencióndemuestrasparapruebasdediagnósticomicrobiológicoomolecular.
Cap.9:Necropsiadeanfibios—218
• Formularioestandarizadoparanecropsias.Pararegistrarlainformaciónsobreelespécimenylosresultadosdelasobservacionesdelanecropsia.
9.3REALIZACIÓNDELANECROPSIA 1.Antesdecomenzarlanecropsiasedebenregistrarelpesocorporalylalongitudhocico-cloaca.Luegosedebehacerunexamenexterno,prestandoespecialatencióna:
• Estadogeneraldelosrestos.Lasevidenciasaconsiderarincluyenelgradodedescomposiciónpostmortem,cualquierdescargaproducidapornariz,bocaocloaca,ysiloshuesossonprominentes(indicacióndeadelgazamiento).[p.199]
• Estadodelasuperficiedelapiel(p.ej.,decoloración,excesivadescamación,aumentodelmoco,nóduloscutáneos,áreasdeulceración,parásitosexternos).
2.Sihaylesionescutáneas,puedeserbeneficiosorealizarunraspadodelapielpararealizarpreparadoshúmedosparaestudioscitológicos(verSección7.3).
• Ademásdeloshongosquitridiosdeanfibios,losraspadosdepielpuedenayudaradiagnosticarunagranvariedaddeotrasinfeccionesbacterianas,fúngicasyparasitarias(Pessier,2007).
• Lasáreasdelapielutilizadasparaelraspadodelapieldebenseradyacentes,peronoidénticas,alasáreasdedondesetomanlasmuestrasparahistopatología.
• Lafácildisponibilidaddecámarasdigitalesbarataspuedepermitirquepersonaldeloscentrosdecríaquecarecendeapoyoveterinarioinsitufotografíenáreasseleccionadasdeunraspadodepiel,paraluegoenviarlasporcorreoelectrónicoaunveterinarioopatólogoexternoparaeldiagnóstico.
3.Acontinuación,coloquealanimalendecúbitodorsal(sobrelaespalda)sobreunatabladecortelimpia,uotrasuperficiedetrabajofácilmentelimpiableydesinfectable.
• Conunbisturíotijeras,nuevosyestérilesoreciénlimpiadasydesinfectadas,hagaunaincisiónenlalíneamediaventral,desdelamandíbulahastaelniveldelacloaca.
• Retirelapielhaciacadaladodelaincisiónparadejaraldescubiertolamusculaturaabdominal.
• Cortarconcuidadolamusculaturaabdominal(pareddelcuerpo)alolargodelalíneamediaparaentrarenlacavidadcelómica,peroevitetocarlasvíscerassubyacentes(Figura9.1).[p.200]
Cap.9:Necropsiadeanfibios—219
Figura9.1:Necropsiadeunsapo(Anaxyrusboreas),mostrandolaincisiónenlalíneamediaventral,desdelamandíbulahastalacloaca,exponiendolacavidadcelómica.Seobservanlospulmones(L),esternón(S),queseubicaporarribadelcorazón,ehígado(LI).ImagentomadadePessieryPinkerton(2003).4.Siseobservalapresenciadelíquidosenlosespaciossubcutáneos(sacoslinfáticosenlosanuros)odentrodelacavidadcelómica,recojaunamuestrausandojeringayagujaestériles.
• Sisedispusieradelserviciodeunlaboratorioexternodepatologíaclínica,podríaserútilhaceruncultivobacterianodellíquido,asícomootrosanálisis(recuentodecélulas,proteínatotalycitología,Pessier,2007).
5.Despuésdelaincisiónenlacavidadcelómicaylaexposicióndelasvísceras,utiliceunpardetijerasfuertesparacortaryeliminarelesternón.Estoexponeelcorazónylapartemáscranealdelospulmones.6.Luegodelaexposicióndelasvíscerasyelcorazón,sedebenrecogermuestrasestérilesparamicrobiología,parapruebasdediagnósticomolecular(porejemplo,PCRparaRanavirus)oparaalmacenarlascongeladassisedesea.
• Sisedisponedelacapacidadparaalmacenarmuestrasdetejidocongelado(congeladoronitrógenolíquido),serecomiendarecogerdemanerarutinariadeunapequeñaporcióndelhígado(paralalocalizacióndelhígado,véaselafigura9.1).Espreferibleuncongeladorultra-frío(-70°C,omenos),peroescaroypuedenoestardisponibleentodaspartes.Lamuestrarecogidasecolocaen
Cap.9:Necropsiadeanfibios—220
tuboscriogénicosoenunabolsatipoWhirl-Pak,etiquetadosconelnombredelaespecie,elnúmerodeidentificacióndelanimalylafecha.Desernecesario,estamuestrasepuedeguardaryutilizarparapruebasdediagnósticoenunafechaposterior.[p.201]
• Sidurantelanecropsiaseidentificanlesionesmuyevidentes,comoórganosagrandados,nódulosenlasvíscerasoáreasdecoloradasenellas,tomarunamuestradelalesiónparacongelar,ydejarelrestoparahistopatología,coneltratamientoquesedescribemásabajo.Silalesiónfueramuypequeña(demenosde5mm),convieneguardartodoparahistopatología,másqueparaunamuestracongelada.
• Bajodeterminadascircunstanciasconvieneguardarvariasmuestrasdetejidocongeladas(versección9.5,másabajo).
• Sisedesea,sepuedenenviarmuestrasparaanálisisbacteriológicos.Lasmejoresmuestrasincluyensangredelcorazónehígado.
• Luegodeabrirelcuerpo,sedebedecidirsiseaplicaráelmétodofijacióndelcuerpoosiserealizaráunanecropsiapordisección.
Métododefijacióndelcuerpoparanecropsia
Estaeslatécnicarecomendadaparaaquellasinstalacionesquenocuentanconunveterinarioinsitu(uotrapersonaconconocimientosdeanfibios),asícomoparalamayoríadelosanfibiospequeños(<20gdepesocorporal).
• Estemétodohasidoutilizadoexitosamenteconanimalesdemásde20g,peroexisteunriesgoelevadodeunaincorrectapreservacióndelostejidossilacavidadcelómicanofueabiertalosuficientesosiseempleaunacantidadinsuficientedesoluciónfijadora.
• Parallevaracaboelmétododefijacióndecuerpos:o Abrirlacavidadcelómicayexponerlosórganos,talcomofueradescrito
anteriormente.o Tomarmuestrasdetejidoparacongelary/oparaanálisismicrobiológicos,
comoyasedescribiera.o Sumergirelcuerpoabiertoenlasoluciónfijadora.Paralapreservación
óptimadelostejidosserecomiendaunarelaciónde1partecorrespondientealcuerpoy9partesdefijador.
o Mantenerelcuerpoenelfijadorhastasuenvíoaunpatólogoveterinarioparaanálisishistopatológicos.
Sielcuerpoesgrande(>de20-30gdepeso),semodificaelprocedimientoparalograrunamejorpreservacióndetejidos:
o Separandolacabezadelcuerpoempleandounbisturíounpardetijerasfuertes.
o Utilizandojeringayaguja,inyectarpequeñascantidadesdesoluciónfijadoraenestómagoeintestino.
Cap.9:Necropsiadeanfibios—221
Estasdosmodificacionesrequierendeunaciertafamiliaridadyprácticacontécnicasdedisección,ydebenconsiderareoptativas.[p.202]
Métododenecropsiapordisección Estemétodoesmásrecomendableparaaquellosanimalesmásgrandes(>20gdepesocorporal),yparaaquellassituacionesenlasquesedisponedeunveterinario,odeotrapersonaconunadecuadoconocimientoprácticodeanatomíadeanfibios,capadellevaracabolanecropsia.Elprocedimientoconsisteenunaminuciosadiseccióndelcuerpoylapreservaciónderozosrepresentativosdelosdiferentesórganos.Siladisecciónserealizaenanimalesmuypequeños,entoncesserecomiendaelempleodeunmicroscopiodedisección(lupabinocular)parapoderregistrardetallessutiles.
• Parallevaracaboladisección:o Abrirlacavidadcelómicayexponerlosórganos,talcomofueradescrito
anteriormente.o Tomarmuestrasdetejidoparacongelary/oparaanálisismicrobiológicos,
comoyasedescribiera.o Sedebentomarmuestrasdelosprincipalesórganosycolocarlasen
soluciónfijadora.Laproporcióndetejidoafijadordebeserdeunapartedetejidoa9partesdefijador.Idealmente,laspiezasdetejidonodebenexceder0,5cmdeespesor.Losórganosmásgrandespuedencortarseserialmenteyexaminarseparadetectarlesiones.Acontinuaciónsepresentaunalistadelostejidosquesedebenfijarrutinariamenteparahistopatología.
o Lasnotasdeloshallazgosdelanecropsiadebenserregistradaenunformularioestandarizadoparatalfin.
Tabla9.1:Tejidosasercolectadosparaestudioshistopatológicosenanfibios
Piel1 VesículabiliarPulmón MúsculoesqueléticoCorazón HuesoHígado NervioperiféricoBazo VejigaurinariaRiñón Gónada(testículouovario)Estómago CloacaIntestinodelgadoygrueso OjoPáncreas LaringeCerebro
1Múltiplesseccionesparaincluirmuestrasdepieldorsalyventral,asícomodecualquierlesión.
Cap.9:Necropsiadeanfibios—222
9.4NOTASANATÓMICASPARANECROPSIASDEANFIBIOS Alrealizarlanecropsia,esconvenienteconsiderar,orecordar,algunascaracterísticasúnicasdelaanatomíaylafisiologíadelosanfibios,entrelasqueseincluyen:[p.203]
• Adiferenciadeloquesucedeenotrosvertebrados,lapielesmuyimportante,porqueallísellevanacabounaampliavariedaddeprocesosfisiológicos,comolaabsorcióndeaguayelectrolitos,osmorregulación,y,enelcasodealgunasespecies,respiración.Enconsecuencia,esextremadamenteimportanteevaluarlapiel(especialmenteporhistopatología),cuandoserealiceunanecropsiaenanfibios.
• Lasreservasdegrasacorporalseacumulanpredominantementeenloscuerposgrasoscelómicos(gonadales),ubicadosenposicióncranealalasgónadas.Enlosanurostomanelaspectodehebraso“dedos”detejidodecolorblancoaamarillo(figura9.3).
o Lamayoríadelosanimalessanostienenalgunoscuerposgrasoscelómicosclaramenteidentificables.Siestossonpequeños,onopuedenseridentificados,seconsideraqueelanimalestáenmalestadonutricionalgeneral.Entrelascausasdeestoseincluyenunamalaingestadealimentosdebidoalamalaadaptaciónalcautiverio,elestrésolacompetenciaexcesivaporalimentos,oporcondicionesdeenfermedadsubyacentes.
• Lamayoríadelosanfibiostienepulmonespares;sinembargo,lassalamandrasdelafamiliaPlethodontidaecarecendeellos,yalgunasceciliassolamentetienenelpulmónderechofuncional,mientrasqueelizquierdoesvestigial.
• EnanimalesdelafamiliaBufonidae,losmachosmuestranunpequeñoagregadodetejidoováricoenelpolocranealdelostestículos(eselórganodeBidder;figura9.2).
• Losovariosdelosanurospuedensermuygrandesyocupartodalacavidadcelómica.Enalgunasespeciesestánpigmentadosdenegro(figura9.3).Losoviductossonprominentes,ysemuestrancomoespiralesdetejidoalrededordelovario(figura9.3).
• Lavejigaurinariatieneparedesmuydelgadasytranslúcidas,yporelloconfrecuenciaselapasaporaltoenelexamendurantelasnecropsias.Lasmuestrasdevejigaparahistopatologíapuedenobtenerseextrayendolostejidosblandoselcanalpélvico.[p.204]
Cap.9:Necropsiadeanfibios—223
Figura9.2:Necropsiadelsapo(Anaxyrusboreas).Seextrajoelhígadoysedesplazóeltractogastrointestinalparamostrarloscuerposgrasoscelómicos(FB).Tambiénestánseñaladosestómago(St),intestinogrueso(LI),bazo(S)ytestículos(T).ElórganodeBidderesapenasvisibleenelpolocranealdeltestículo,adyacentealbazo.ImagendePessieryPinkerton(2003).
Figure9.3:Necropsiadelaranatoroafricana(Pyxicephalusadspersus)mostrandolosovariospigmentadosdenegro,queocupanparcialmentelacavidadcelómica(O).Tambiénsemuestranpulmón(L),hígado(Li)yvesículabiliar(G).ImagendePessieryPinkerton(2003).[p.205]
Cap.9:Necropsiadeanfibios—224
FIGURA9.4:Necropsiadelaceciliaacuática(Typhlonectesnatans)mostrandoelcorazón(H).Sonvisiblestambiénpulmón(L),hígado(LI)yvesículabiliar(GB).Tambiénestánetiquetadoselestómago(ST),ovocitos(OV),riñón(K)ycuerposgrasos(FB).ImágenesdeB.Tapley.
9.5TOMADEMUESTRASDURANTEEVENTOSDEMORTALIDAD Hablamosdeeventosdemortalidadcuandoseencuentranamuchosanimalesmoribundosomuertosenlascoloniasdesupervivenciaoenlaspoblacionessilvestresdeanfibios.Aunquesepuedesospechar,conunaltogradodecerteza,dealgunasenfermedadesinfecciosasbienconocidasdelosanfibios(porejemplo,quitridiomicosisoinfecciónporRanavirus),esimportantemantenerunamenteabiertayconsiderarsiempreotrascausaspotenciales.Lossíntomasinicialesdemuchasenfermedadesdiferentespuedeninicialmenteparecermuysimilares,yserequiereunainvestigacióndelaboratorioparalograrundiagnósticodefinitivo.
• Elpropósitoinicialdeinvestigarloseventosdemortalidadesobtenerypreservarmuestrasrepresentativasquepuedanserutilizadasposteriormenteenanálisisdelaboratorioaplicandolasdiferentestécnicasqueseannecesarias.
Sepuedendiseñarprotocoloscomplejosparalaobtencióndemuestrasduranteloseventosdemortalidad,especialmentesisedisponedelaguíadeunveterinario;sinembargo,unenfoquesimpleybásico,quepuederesultaradecuadoparalamayoríadelassituaciones,consisteen:
• Preservarunconjuntodetejidos(odecuerpos)ensoluciónfijadoraparahistopatología.
Cap.9:Necropsiadeanfibios—225
• Preservarunsegundoconjuntodetejidos(odecuerpos)congelados,quepuedanutilizarseparatécnicasdediagnósticomolecular(comoPCR),paraaislaragentesinfecciososencultivooparaanálisistoxicológicos.[p.206]
Algunasdirectricesparalaobtencióndemuestrasduranteuneventodemortalidad:
• Sinosedisponedeasesoramientoveterinario,osilosanimalessonpequeños,apliqueelmétododenecropsiaporfijacióndelcuerpo(descritomásarriba)enlamitadolosdosterciosdelosanimalesmuertos.Paralosrestantes,congeleelcuerpocompletotanrápidocomoseaposible,yetiquételosconelnombredelaespecie,elnúmerodeidentificaciónindividualylafecha.
• Sisedisponedeorientaciónveterinaria,odealguienconexperienciaenanatomíadeanfibios,apliqueelmétododenecropsiapordisección(descritomásarriba)enlosanimalesmuertos.
o Ademásdeconservarmuestrasdelosprincipalesórganosensoluciónfijadoraparahistopatología,conservartambiénmuestrasadicionalescongeladasdedichosórganos.
o Sesugiereconservarmuestrascongeladasdehígado,riñón,pulmón,intestino,cerebroydecualquierotrotejidoquemuestrealgunaanormalidadduranteladisección(p.ej.,órganosagrandadosodescoloridos,oconnódulos).Además,tambiénpuedepreservarseelcontenidoestomacal,cuerposgrasoscelómicosymúsculosesqueléticos,enespecialsisesospechadeunaexposiciónasustanciastóxicas.
o LasmuestrasdeórganosseconservanenbolsastipoWhirl-Pak®(Nasco,USA,www.enasco.com)oentuboscrioscópicostipoNuncCryoTubesTMoVangardCryosTM(SumitomoBakeliteCo.,Ltd.Japan,www.sumibe.co.jp/english/).Estosrecipientesdebenestaretiquetadosconelnombredelaespecie,elnúmerodeidentificaciónindividualdelanimalylafecha.
• Paracongelarloscuerposcompletosolasmuestrasdetejidoserecomiendan
temperaturasultrafrías(-70°Comenos),onitrógenolíquido;sinembargo,lastemperaturasdeuncongeladorfamiliarsonsuficientesparaeldepósitoacortoplazo.Comoúltimorecurso,sinosedisponedecongeladornidenitrógenolíquido,fijarloscuerposenetanol70%(enlugardeformalina)puedeaúnpermitirlaaplicacióndealgunastécnicasdediagnósticomolecular.
• Siseencuentrananimalesmoribundos,sedebeconsideralaposibilidaddeeutanasiadealgunosindividuosparanecropsiaytomademuestrasdetejidos(versección8.6).Estobrindamuestrasmuyfrescasquesonidealesparalamayoríadelosmétodosdelaboratorioempleadosenlainvestigacióndeenfermedades.
Cap.9:Necropsiadeanfibios—226
PROTOCOLOBÁSICOPARALATOMADEMUESTRASDURANTEEVENTOSDEMORTALIDADDEANFIBIOS
(Cuandonosedisponedeveterinariososeactúaenunaestacióndecampoconequipamientomuylimitado)
• Enlamitaddelosanimalesmuertosrealiceunaincisiónhacialacavidad
celómicayexpongalosórganosinternos.Encasosdeanimalesmuypequeños,osinosedisponedeunbisturí,simplementefijeelcuerpocompleto.Coloqueelcuerpoabiertoenunasoluciónfijadora,comoformalinatamponadaneutraal10%(preferible),oetanol70%.Laproporciónidealesunapartedecuerpodelanimalen9partesdesoluciónfijadora.[p.207]
• Paralaotramitaddelosanimalesmuertos,congeleloscuerposcompletosomanténgalosenfriados(porejemplo,enunaconservadoraconhielo)hastaquepuedansertrasladadosaunsitiodondeseaposiblecongelarlos.
• Siempreespreferibleguardarmuestrasconambostiposdepreservación,fijadas(enformalinaoetanol)ycongeladas.Siestonofueraposible,sedebedarpreferenciaalaconservacióndetejidosfijadosenformalinaoetanol.Conservarsolamentemuestrascongeladasdebeserelúltimorecurso(peroesmejorquenoconservarningunamuestra).
• Sinoesposiblecongelarmuestras,supreservaciónenetanolpermiterealizartantoestudiosdehistopatologíacomoalgunaspruebasmoleculares(p.ej.,PCR).
9.6 ENVÍODEMUESTRAS
Paraelenvíodetejidosquesehanconservadoenunasoluciónfijadora.Unavezquelascarcasasotejidoshanestadoenformalinauotrasoluciónfijadoraduranteunmínimode48horas,seretirandelfijador,seenvuelvenentoallasdepapelogasahumedecidaconfijador,seenvasanenbolsasdeplásticoselladasyseenvíanaunpatólogo.Estominimizaelpotencialdefugasduranteeltransporteyreduceelpesodelpaquete(yloscostosdeenvío).
• LosmaterialesdebenenviarsesiguiendolasnormasdelaAsociaciónInternacionaldeTransporteAéreo(IATA,porsussiglaseninglés)paramaterialespeligrosos.Algunaspautasgeneralesincluyen::
o Lasmuestrasdebenguardarseenunrecipienteprimarioqueseaestanco.
o Esterecipienteprimarioescolocadoenunsegundorecipienteestanco.o Entreambosrecipientessedebecolocarmaterialabsorbente(p.ej.,
toallasdepapel).Elvolumendeestematerialdebesersuficientecomoparaabsorbertodoellíquidocontenidoenelprimerreceptáculo.
o Lasprincipalescompañíasdetransportedisponendepautasparaayudaraladecuadoenvíodemuestrasbiológicas.Másinformacióndisponibleen:http://images.fedex.com/downloads/shared/packagingtips/pointers
Cap.9:Necropsiadeanfibios—227
9.7 LITERATURACITADA Berger,L.,andR.Speare.Whattodowithdeadorillfrogs
(www.jcu.edu.au./school/phtm/PHTM/frogs/pmfrog.htm)Munson,L.Necropsyofwildanimals. www.wcs.org/~/media/Files/pdfs/necropsy2.ashxNationalWildlifeHealthCenter.Collection,preservationandmailingofamphibiansfor
diagnosticexaminations(www.nwhc.usgs.gov/publications/amphibian_research_procedures/specimen_collection.jsp)[p.208]
Nichols,D.K.2001.Necropsy.Pp.331–334In:Wright,K.M.,andB.R.Whitaker(eds.),
AmphibianMedicineandCaptiveHusbandry.KriegerPublishing,Malabar,Florida,USA.
Pessier,A.P.,andM.E.Pinkerton.2003.Practicalgrossnecropsyofamphibians.
SeminarsinAvianandExoticPetMedicine12:81–88.Pessier,A.P.2007.Cytologicdiagnosisofdiseaseinamphibians.VeterinaryClinicsof
NorthAmericaExoticAnimalPractice10:187–206.Terrell,S.P.,andB.A.Stacy.2007.Reptilenecropsytechniques.Pp.219–256In:E.R.
Jacobson(ed.),InfectiousDiseasesandPathologyofReptiles:ColorAtlasandText.CRCTaylorandFrancis,BocaRaton,Florida,USA.
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 228
Apéndice1:
MÉTODOSPARAIDENTIFICARINDIVIDUALMENTEESPECÍMENES
DEANFIBIOSR.AndrewOdumyEdytheSonntag
INTRODUCCIÓN
Lacalidadenelmanejodelosanimalessemejoraenormementecuandolasmuestrassepuedenidentificarcomoindividuales.Sinlahabilidaddepoderidentificardemaneraconsistenteacadaespécimen,sevuelveimposiblemantenerhistorialesmédicos,informaciónsobrelaespecie,yotrotipodeinformaciónpertinentequeestédirectamenterelacionadoconelespécimen.Laincapacidaddeidentificaralosindividuos,deigualmaneravaacausarunimpactoenladiversidaddegenesquesemantienenenunapoblaciónencautiverio(Verseccióndemanejogenético).
Enlosúltimosveinticincoaños,laspoblacionesdeespeciesenpeligrodeextinciónenzoológicoshansidomanejadasparamantenerladiversidadgenéticadurantelareproducciónselectiva.Elmanejodelapoblacióngenéticaesmáseficienteenunnivelindividualconespeciescompletas(Schad,2007).Estorequierequecadaindividuopuedaseridentificadoalolargodesuvida,yqueellinajesepuedeestablecerparatodaslascrías.Mantenerlaidentificacióndeunanimalalargoplazo,requieredealgúntipodeidentificadorrecordableparaconectaralindividualconsusregistros.Generalmenteenalgunoszoológicosestoesunnúmerodeconsentimiento,yelalgunoscasosraros,paraunaconsideraciónparticulardelasmuestrasdeanfibios,essolounnombre.Estosidentificadoressepuedenusarcomoguíaparalainformaciónalmacenadaenelsistemaderegistro,yporconsiguiente,establecerlaespecieoraza.Lastécnicasdeidentificaciónindividualsepuedendividirendoscategoríasgenerales:Aquellosquesoninvasivosyaquellosquenoloson.Esimportantetenerencuentaquetodaslastécnicasnoestáncompletamenteaprobadas.Todashanfalladobajoalgunascondiciones,yhanocurridomortalidadesentécnicasinvasivas.Algunastécnicasinvasivaspuedenprovocarundéficitpermanente,afectarlaactividadfísica,ydisminuirlacapacidaddesupervivencia(ejemplo:amputacióndetejidos).Estastécnicasdeberserevaluadasindividualmenteporlascircunstanciasdesuusopropuestoprevioasuimplementación.
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 229
TÉCNICASNOINVASIVAS
ColorypatrónanimalUnodelosmétodosmássimplesyefectivosparaidentificaralosanfibios,esatravésdesuspatronesycoloración.Enmuchasespecies,unavezqueelanimalalcanzasuformaadulta,supatrón,marcas,estructurasglandularesycoloración,generalmenteseestabilizaporelrestodesusvidas.Apesardequepudieranhabercambiosontogenéticosamedidaqueelanimalenvejece(ejemplo:oscurecimiento),susmanchasjóvenestodavíapuedenseguirvisibles.Estospatronessepuedendocumentaratravésdeundibujo(sisedisponedetalentomínimo)afotografiandoalanimal.Dependiendodelasespecies,yparadelinearlasdiferenciasdelosespecímenes,puedesermejorusareldorso,elabdomenoáreaslaterales.Enelcasodeanimalesconpielgranularoverrugosa,laposiciónynúmerosdeestascaracterísticas,asícomolacoloración,sonidentificadoresexcelentesyúnicosparalosanimales.
Lospatronesdeanimalesjóvenespuedencambiaramedidaqueelanimalmadura;sinembargo,cuandosetomaronfotografíasrepetidamentedurante1a4meses,elequipodelzoológicodeDetroitregistróexitosamentelaidentificacióndeungrupodesalamandrasmandarinasjuvenilesdurantelaadultez,yobservócambiosmínimos.Conlaactualizaciónregulardelosregistros,esposibleutilizaridentificacióndepatronesfotográficosenespeciesdeanimalesjuveniles,dondehaycambiosontogenéticosenpatronesycolor.Sinembargo,ladependenciadeestemétododebeincluirelcompromisodeactualizarlasimágenesduranteelcrecimientoregularmente.
Existenlímitesparaestatécnica.Porsupuesto,silosanimalessonvisualmenteindistinguibles,estatécnicaesineficaz.Enadición,amedidaqueelnúmerodelosanimalesenlosrecintosaumenta,sevuelvemástediosodeterminaraunanimaldelgrupo,particularmentesilasdiferenciasentrelosespecímenesindividualessonmínimas.Otrofactorimportanteeseltamaño.Silosespecímenessonmuypequeños,esdifícilidentificarlasdiferenciassinunartefactoconaumento,sumandolanecesidaddecontarconuninstrumentoderestricciónparaelespécimen.Dependiendodelasespecies,dealgunamanera,éstatécnicasevuelveinefectivacuandohaymásdecincoadiezespecímenesalojadosjuntos.
Hayinformesanecdóticosenelusodemáquinasdefotocopiasdececílidosparadocumentarpatronesdeanillosanulares.Aunqueestemétododeidentificacióngeneralmenteperturbaalequipomanchalacopiadora,fueefectivoymenosestresantequeintentarafirmaralosanimalesparafotografiarlosodibujarlos.Elanimalfuepuestosobreelvidriolimpiodelacopiadora,ysobreestasepusounatoallahúmedaparalarestriccióndelanimal.
Amedidaquelatecnologíahamejorado,ylascámarasdigitalessehanvueltocomunes,elreconocimientodepatroneshaidomuchomásalládelascopiasdibujadasamanodelosanimalesqueestudianlosinvestigadores.Gambleetal.(2008)Sehadesarrolladounalgoritmodepatróndereconocimiento,elcualusafotografíasdesalamandrasmarmoladas(Ambystomaopacum)tomadasenelcampo.Laspruebasde
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 230
estesistemafueronunéxitoenlaidentificacióndeunindividual,contansolounminutoyconel95%deprecisiónenunabasededatosde1000imágenes.
AislamientoOtratécnicasimpleparaalbergarlaidentificaciónindividualesseparandolosanimalesendiferentesrecintos.Sihubieraunsoloanimalenlajaula,fácilmentepodrásaberquiénes.Estotambiénsepuedeaplicaralosparessexualesquesealojanjuntosenelmismorecinto,mientrasquesepuededeterminarelsexodelosespecímenesindividuales(locualpuedeonoserelcasoenalgunasespeciesdeanfibios).Aladjuntarunatarjetaconelnúmerodeingresoenlajaula,elanimaloelpardeanimales,seasocianconsuidentificador.Estatécnicahapresentadoalgunasfallascuandolamarcadelasrecintossedesvaneceoseborran,ocuandosesalelatarjetaadjuntaaesta.Estadeficienciasepuederevertirporlasimplemantencióndelosnúmerosydelastarjetas.
TÉCNICASINVASIVAS
Congelación/Calor/MarcaciónquímicaLamarcacióndelapieleselprocesodeprovocarunacicatrizenlasuperficiede
lapiel,deformaquelavuelvaunamarcaidentificable.Estosepuederealizaratravésdelcalor,conocidocomomarcaciónporcalordirectooelectrocauterización(ClarkJr,1971),porlamarcaciónporcongelamiento,dondeseusanitrógenolíquidoohieloseco(Daugherty,1976;Paineetal.,1984;Measeyetal.,2003);ofinalmenteporelusodequímicos,dondeseusaunasolucióndel0.5%deamidonegroenel7%deácidoacético(WolfandHedrick,1971).Estemétodoesdoloroso;yporlotanto,requiereunaanestesialocalogeneral.Enadición,ydebidoalanaturalezadelapieldelosanfibios,estasmarcaspuedensersolosemipermanentesenalgunasespecies(CACC,Unknown).Lamarcaciónporcongelaciónsehaempleadoenestudiosdecampoparaespeciesgrandesdeanfibioscomolassalamandrasgigantes(Cryptobranchidae).Elanimales"marcado"conunamarcaonúmerousandofríoextremo.Laherramientademarcacióndemetalseenfríaatemperaturasbajoceroconunrefrigeranteoconhieloseco.Laherramientademarcacióndebeserdeunamasasuficiente,parapodercongelardemaneraefectivalascélulasdelapielydepigmentacióndelanimal.Cuandosecolocalamarcafríaporalgunossegundossobrelapielmojadadelanfibio,lostejidosqueestánencontactoconlamarcasevanacongelaryamorir.Generalmente,elárearesultantesanasinpigmento,haciéndolounamarcapermanenteenelanimal.Existendesventajasenestemétodo.Enprimerlugar,lamarcaensímismaesantiestéticayvisible.Segundo,esunmétodoprimitivoylasmarcasgeneralmentesongrandes.Lazonacongeladapropiamentedichaporlamarca,nosepuedecontrolarfácilmente.Mientrasmástiempoestélamarcaencontactoconlapiel,lamarcaserámásancha.Ladiferenciaentreunamarcapequeñaaceptableyunazonamásgrandedetejidocicatrizado,puedeserelresultadodealgunossegundosadicionalesdecontactoentrelaherramientademarcaciónyelanfibio.
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 231
Apesardequelamarcadecongelaciónhayaduradorelativamentemástiempoenespeciesmásgrandescomoenlassalamandrasgigantes(Cryptobranchidae),puedehaberlimitesenespeciesmáspequeñas.Lasmarcasdecalorycongelaciónsehanutilizadoensapos.En1971,Clarkdescribióelmétododemarcaciónporcalor,endondesearmaunalíneaenformadenúmeros,yseutilizaparaponermarcasalos311saposdelacostadelGolfo(Inciliusnebulifer),lasquesemantienenporunaño.Paineetal.En1984serealizaronpruebasdemarcaciónporcongelaciónensapospuertorriqueños(Peltophrynelemur)enelzoológicodeBúfalo,lascualesfueronexitosasyduraronsobre2años.
Lafotografíamuestraunamarcadecongelaciónenunpez;enestecaso,essólounalínea.Aquísepuedeverconfacilidadquehaylimitacionesenelnúmerodevariacionesconestamarcaciónprimitiva.
AmputacióndetejidosDurantemuchosaños,laamputacióndelosdedoshasidounatécnicacomúnenlosproyectosdeinvestigacióndecampoparareptilesyanfibios.Estatécnicaesinvasivaycreaundéficitpermanenteenelanimal.Esprobablequeaumentelamortalidad(Clarke,1972).Sinembargo,éstaesunatécnicaquesehaempleadoenalgunosprogramasdezoológicos.Éstatécnicaimplicalaamputacióndelosdedosdelanimal,yquecorrespondeaunplannumérico.Latemperaturabajoceroesejemplodeunsistemanuméricoparamásde10.000individuales(Twitty,1966).
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 232
DeDonnelly(1994).
Elproblemaconestemétodoesquepuedequerequieralaextraccióndemúltiplesdedosdesdeunaextremidadúnica,dejandoalanimalmuchomásqueunmuñón.Estopuedecomprometerlacapacidaddelanimalparallevarcabofuncionesbiológicasesencialessimplestalescomolamovilidad,abarcarlareproducción,laalimentación,etc.Enadiciónaesto,enelsitiodeamputaciónsepuedendestacarinfeccionespococomunes.Enunlugardondesehautilizadoestatécnica,esparaalgunosprogramasdeconservacióndeliberación.Generalmente,losanfibiosjóvenessonmonitoreadosporgruposyatodosselesasignaunaúnicamarcadecodificación(ejemplo:laextraccióndeundígito).Losanimalesmásviejospuedensermarcadosconuncódigoindividual.Elusodeestatécnicadebesercuidadosamentesopesadaentrelanecesidadderastrearalosanimales,deobteneríndicesdesupervivenciadeliberación,yeldañopotencialquesepuedecausaralanimalliberado.
Además,laregeneracióndelosdedosfueunproblemaparaalgunasespecies,especialmenteparalassalamandras(DavisandOvaska,2001);entonces,en1961,Heatwoleutilizónitratodeberilioparalimitarelresurgimientodelosdedosenlassalamandrasdedorsorojo(Plethodoncinereus),locualfuebastanteexitosoparaelestudio.Heatwoleen1961declaróqueelnitratodeberilioesconocidoporsertóxicoyporprovocaredemasymuerteinclusoenbajasconcentraciones,perousounaconcentracióndiluidacuidadosamenteaplicadaaldedoamputado.LaSociedadamericanadeictiólogosyherpetólogos(2004)recomiendandelimitarelnúmerodededosamputadosporanimal,yevitarlaextraccióndedosdedosadyacentes(Beaupreetal.,2004).Mayen2004,escribióunartículoexponiendoqueelusodecortadoresdededoscomprometióestadísticamenteelestudiodelusodeestasmarcas.
Mientrasquelaecologíamolecularylacronologíaesqueletalsehanconvertidoenherramientasenlaecología,elusodecortadoresdededosesgeneralmenteunmétododemarcacióndondeeltejidoextraídotieneusosimportantes.Lienen2007,utilizóuncortadordededosparadeterminarlademografíadelaranadeTaipéi(Ranataipehensis),yutilizósusdedosparalasinvestigacionesesqueletocronológicas.Siseusancortadoresdededos,todoslosdedosextraídosdeberánsercatalogadosyalmacenadosdemaneraapropiadaparaposiblesanálisis,especialmenteenespeciespococomunesoenpeligrodeextinción.
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 233
Laextraccióndelacolahasidoutilizadatambiénensalamandrascomounatécnicademarcación;sinembargo,lahabilidadregenerativadelassalamandrashacequeésteseaunmétodotemporalenelmejordeloscasos.Arntzenetal.En1999,secomparóelmétododemarcaciónyelmétododemuestreodetejidoenuntritóncrestadoyserecomendóapesarquelossujetadorescrecieranenmenosdeochomeses.Estaesotraoportunidadparaquelosinvestigadoresrecopilenmuestrasgenéticas.Laamputacióndelacolaenrenacuajoshalimitadolautilidadasícomotambiénlamarcacióngeneralmentesepierdeentre2o3semanasdesdelaamputación.En1973,GuttmanyCreaseydestacaronquelaamputacióndelacolatambiéntieneelriesgodeprovocarundañoalosvasossanguíneosoalosnervios.
Transpondedoresdeidentificaciónpasiva-MicrochipsLostranspondedoresdeidentificaciónpasiva(normalmenteserefierealasPITs,perotambiénalostranspondedoresintegradospasivoseinductivos)sonprobablementeelmétodomáscomúndeidentificaciónparalosanimalesenloszoológicos.Seinsertaunmicrochippordebajodelapiel,enlaespaldaoenlacavidadcelómicadelanimal.Estoselograalhacerunapequeñaincisiónenelanimalyalponermanualmentelaetiqueta,outilizandounaplicador.Elaplicadoresunaparatohipodérmicolargoconunaagujadecalibre12.Luegolaetiquetasepuededetectarpormediodeunlector,elcualenciendeeltransmisordelaetiquetaparaquedevuelvauncódigoalfanuméricoúnico,elqueesdecodificadoporellector.Existenmilesdemillonesdecódigosdisponiblesqueaseguranqueloscódigossonúnicos.Elcódigoapareceenunapantallaenellector.Estaesunatécnicainvasivaquepotencialmenteexponealanimalainfecciones,sinembargoraravezhasidoreportado.Existendeigualmaneralimitacionesdebidoaltamañodelasetiquetas.Algunasetiquetaspuedensertanpequeñashastaalcanzarlos7mmdelargo,peropuedenseguirsiendomuygrandesparaalgunosanfibios.Lasranasdebenestarporlomenosentrelos25a35mmdelongitudSVparapoderaceptarlasetiquetas.Además,frecuentementelasetiquetassemuevenporelcuerpodelanimal,ynoescomúnquelasPITsseanexpulsadasdelanfibio,generalmentedeunaubicacióndiferenteadondeseinsertóoriginalmente.Estoessobretodoverdaderocuandolaetiquetaseponeenlacavidadcorporal.Essabidoquelasetiquetassepuedenpasarporlashecesfecales.Cuandoseexpulsalaetiqueta,sepuedeperderlaidentificacióndelanimal.OtroproblemaconlosPITsesqueexistenvariossistemasenelmercado,loscualessonincompatibles.Haylectoresuniversalesdisponibles,peroestospuedensercostosos.AlgunosprogramashanincluidolasetiquetasTrovancomoelestándaryotroshanincluidolasetiquetasAVID.Estopuedehacernecesariocontarconmásdeunsistemadisponibleensuinstitución.
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 234
LectordeTranspondedorAvidPortátil
EtiquetasdealambreencodificacióndecimalLatecnologíadesarrolladaporlosingenierosdepescaparamonitorearlaliberacióndelospecesesatravésdelusodepequeñasseccionesdecablesmagnetizadosconpequeños(micro)númerosimpresosenelcable(Donnellyetal.,1994).Sedetectalapresenciadelalambreconunsistemadedetecciónmagnético.Luegosedeberemoverconelfindeleerelnúmeroconunaparatoconaumento.Laextraccióndelaetiquetaesunprocedimientoquirúrgicoyexisteelriesgodemortalidad,déficitfuncionalopuededejarunacicatriz.Estatécnicatieneusoslimitadosencautiverio,peropuedeserunaherramientavaliosaparalosprogramasdeliberación,dondeseliberangrandescantidadesdeanimalespequeños.
De:http://www.nmt.us/products/cwt/cwt.htm
Marcadoroimplantedeelastómerofluorescentevisible(VIE)Otratécnicautilizandopolímerospigmentadostienetambiénsusorígenesenlos
estudiosdelospeces.Estatécnicaimplicainyectarunelastómerofluorescentevisiblesubcutáneoenelanimal(Donnellyetal.,1994).Loselastómerosestándisponiblesendiversoscolores.Algunoscoloresdelelastómerosepuedenvercuandoseponealanimalbajounaluznegra;otrosnosonfluorescentesporqueledeberíansinvisiblessinestaluzparasuidentificación.Lostintesfluorescentessepuedenverclaramentebajolapiel,inclusoconalgodepigmentación.Sepuedeidentificaralanimalalponerun
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 235
elastómerodiferentescoloresendistintaspartes.Acontinuaciónhayunejemplodemarcacióndeunaranautilizandounamembranaenlaspatastraseras.
De:http://tropicalis.berkeley.edu/home/husbandry/tags/E-ANTs.html
Estossistemastambiénhansidodesarrolladosparasalamandras.Lafotomásabajomuestracuatrolugaresquesepuedenusarparacodificarlainformaciónconvarioscolores.
De:http://www.pwrc.usgs.gov/resshow/droege2rs/salmark.htm
Otrousodeloselastómeroesparalamarcacióndelarvas.Elelastómerose
vuelveunapartepermanentedelanimal.Cuandoelanimalsetransformaasuformaadulta,laetiquetaelastómerapuedepermanecervisible.Unproblemaconestatécnicaesquecuandoelanimalalcanzasuformaadulta,esdifícilsaberenquélugarquedaráelimplante.Duranteelprocesodemetamorfosislostejidossemuevenysepropagan.Cuandosetratadelamarcacióndelaslarvas,estasdebenestaranestesiadas,especialmenteenespeciespequeñas,lasqueportansuspropiosriesgos.Alserlaslarvasdeuntamañopequeño,haceimposiblequesepuedansujetardeformasegurayefectivacuandoseestánmarcando.Conlaanestesialasespeciesmáspequeñaspuedensermarcadas.Porejemplo,enelzoológicodeDetroitsepudieronmarcarexitosamentelaslarvasdetritóndelesteyretenersusetiquetasdelacola.
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 236
Otroproblemaesquealgunosdeloselastómerospuedenmigrardentrodelcuerpodelanimal.EnlossaposdeWyoming,sedescubrióqueloselastómerosqueseinyectabanenlaspiernassepodíandetectarbajoluzultravioletaenelhígado,cuandomástardeseexaminóalanimalduranteunanecropsia(Williams,1995).Debidoaquelapieldelosanfibiosnoestádirectamenteadheridaalosmúsculos,lasetiquetasqueseponensubcutáneamenteamenudoiránmigrandoalaspartesbajasdelcuerpo.Lasetiquetasdemúltiplescoloresqueseponenenlosmuslosdelasranasfrecuentementeresultanenunacoleccióndepuntosdecoloreseneláreadelaingle.Estosepuederesolveralinyectarelelastómeroenlasuperficiedelmusculosubyacente.Unavezqueseinyecta,pasarlosdedossuavementesobreellugarenqueseinyectó,indicarásilaetiquetaestásegura.
Elusodeloselastómerossehacomparadoconotrosmétodosdemarcación,incluyendoaDavisyOvaska,quienesen2001compararonlamarcaciónelastómeracontralaamputacióndededos.Ellosencontraronquelassalamandrasdeespaldaroja(Plethodonvehiculum)marcadasconelastómeros,mostraronunmejoraumentoenelpesoadiferenciadeanimalesalosqueseleamputarondedosenlaboratoriosyenelcampo.Heeymeyeretal.En2007seprobaronloselastómerosensalamandrasdeespaldaroja(Plethodoncinereus),lasquetienenpieloscura,loquepodríalimitarelvalordeestatécnica.Suresultadoindicóqueéstatécnicademarcaciónesunaopciónviable;sinembargo,hanhabidoalgunasmigracionesdelasetiquetasyporestoserecomiendacolocarmúltiplesmarcaslomásseparadasposiblesunasdelasotras(Heemeyeretal.,2007).LosfabricantesdeesteproductopresentanunnumerodedocumentosquehanprobadolarelevanciadeesteproductoincluyendoaRegesteryWoosley,quienesen2005utilizaronVIEparaidentificaryrastrearlasmasasdehuevecillos(NorthwesternMarinTechnology,ApplicationNoteAPG02,2007).
OtrasmarcasinyectablesdecoloresConelpasodelosaños,hanaparecidounavariedaddemétodos,involucrando
lainyeccióndeproductosaltamentevisibleenlosanimales.Todosestosmétodosseaplicaroninicialmenteenlasindustriaspesqueras,dondeserefinaroneinclusoalgunasvecesseautomatizaron.OtrastécnicasusadasconmásfrecuenciaparecenserelPanjet(WrightHealthGroup,Ltd.Dundee),otrosmétodosdetatuajes,polímerosacrílicosinyectables,eimplantesdeelastómerovisible;loscualessehandiscutido(NorthwesternMarineTechnology,SalisburyUK).
Engeneral,altatuarseinyectaunaespeciedetintaenlapiel,aunaprofundidadqueevitequesedecolore.ElConsejoCanadiensedeCuidadoAnimal(CACC,Unknown),elmanualparaelcuidadodeanfibiosyreptilesrecomiendalaseleccióndelmétododetatuajebasadoen:1)usodetintaquecontrastelapieldelanimaly2)usodeuntatuajequemantengalalegibilidadalolargodeltiempo,conladifusiónenlapiel,ycondegradaciónultravioleta(ConsejoCanadiensedeCuidadoAnimal,2005).Sinembargo,inclusoconestasconsideraciones,MurrayyFulleren2005recomendaronelusodeextraccióndetejidos,marcación,marcaciónporcongelación,yelectrocauterizaciónporsobrelostatuajes,debidoalaprobabilidaddetenerproblemasconlasvisibilidadylegibilidad.ElComitéHerpetológicodecuidadoanimalyuso(HACC),delaSociedad
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 237
americanadeictiólogosyherpetólogos(Beaupreetal.,2004),apruebaelusodetatuajescomométododemarcación,peroadviertequelatintaqueseutilizatieneunpotencialdeabsorción,ysidesconocelatoxicidadenanfibios,posibilitalamuerte.Enadición,lanaturalezapermeabledelapieldelosanfibioshacequelamarcacióndetatuajeseapropensaadesvanecerse.
EltatuajePajetesunmétodoautomáticodeinyeccióndetintaintercutáneaatravésdelatensiónenvezdeusarunaaguja.Esteprocesoseusacomúnmenteenpesquerasporquelaaperturapequeñaylagranpresiónelaparatopotencialatintahacialapieldelanimal.Measeyen2003utilizóestatécnicaencecílidos,ydescubrióquelasmarcasnoseborraban,ybasadosoloenlaobservación,nocausóimpactoenlasupervivenciaocomportamientodelosanimales.
ApesardequelamarcadefábricaPanjetnosehayamencionado,Nishikawaycompañíaen1988utilizaronunmétododealtapresióninnecesario,comoenunacomparacióndeestatécnicayloscortadoresdededosparalarecapturaciónenlassalamandrasPlethodonjorndaiylosPlethodonglutinosus.Ellosalteraronelusodelmétodoprevioaldisminuireltamañodelaaperturadelapistola,utilizandountubopequeñoysituandolasmarcasendistintoslugaresdelcuerpoyextremidades.Elresultadodeesteestudiodemostróqueestemétododemarcaciónfueexitoso,conresultadosmejoresqueaquellosconanimalescondedosamputadosparalarecaptura(Nishikawaycompañía,1988).En1982TayloryDeeganestudiaronlaefectividaddeestemétodoenranasverdes(Lithobatesclamitans)yenrenacuajos,ydescubrieronqueeraexitosoparamarcargrandesnúmerosdelarvas;sinembargo,siadvirtieronquelapresiónpuedeserunproblemasiseintentamarcaranimalesmáspequeñosydelicados.Tambiénnoinvestigaronlosposiblesimpactosdelamarcacióndelarvasencrecimiento(TayloryDeegan,1982).
Otroprotocolodemarcacióninyectable,utilizadoenelestudiodeunavariedaddeanfibios,eslainyeccióndepolímeroacrílico.En1973,Wooleyutilizóestemétodoconéxitoensalamandras,aunquelamarcaciónindividualnofueposible.Esteprocesoalcanzómarcasquefueronvisiblesdesde4a5pies(1200y1500metrosaproximadamente);sinembargo,hubounaligeradifuminaciónalolargodelperímetrodelamarca,yunaligerainestabilidaddelamarcaalolargodeltiempoenalgunosanimales.LaprimeraventajaqueidentificóWooley,fuelahabilidaddeobservaralosanimalessincapturarymanipulardespuésdelamarcacióninicial.Sinembargo,elaumentodelavisibilidadeninvestigadores,significaráunaumentodelavisibilidadadepredadores,locualpuedeinfluenciarlasupervivencia.En1978,CecilyJustutilizaronelmismoprocedimientoparamarcaralaslarvasderanatoro(Ranacatesbeiana).Aunquehuboungradodedificultadaldiscriminarcoloressimilares(comoblancoyamarillo),yelmétodofueexitosoyengeneralrentable(CecilyJust,1978).
Lamarcacióndelarvasdeanfibiopresentaundesafíoúnicodebidoasutamañoyestructura.En1974,SealeyBoraasutilizaronmezclasdetinta,jaleadejaleadepetróleo,yaceitesminerales,ylasinyectaronenlacolayenlaespaldadelosrenacuajos.Descubrieronquelamarcaciónespermanente(hastalametamorfosis),ynotieneimpactoenlosanimales.Huboproblemasconlapocamovilidadenelnadoforzandoquelamarcasesalga;independientedeesto,sinoseponedemanera
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 238
correcta,luegovarequerirremarcación.Otroslogranmenoréxitoconestemétodo,desdequeelradiodelassalesmineralesconlajaleadepetróleodebenserexactas;yhayunafaltadeconsistenciaenlosproductosdisponiblesparapermitirunéxitohabitual.
MuertelarvariaDurantelosaños,renacuajostinturadoscompletos,sehanutilizadoenuna
variedaddeestudios.Entodosestosmétodos,lavariableprincipaleselpigmentoutilizado.Independientementedelpigmento,sehaceunasoluciónconelpigmentodondesecolocanlosrenacuajosporunacantidaddetiempo.Lapielsemipermeabledelalarvaabsorbeelpigmentoycoloraelcuerpocompletodelanimal.En1973,GuttmanyCreaseydescubrieronqueelazuldemetilenomatóalosrenacuajosymanchósusórganosinternos;elrojoneutralsoloduródosdías,yelBismarckcaféYprovocóuncomportamientovago.Sielpropósitodelestudioescomprenderenentendimientodelasupervivenciaycomportamientodelaslarvasdeanfibios,losefectostemporalesdelrojoneutralparecenserpreferibles.En1981,TravisutilizórojoneutralparamanchararenacuajosdeHylagratiosa,yevaluarelimpactodelapigmentaciónenelcrecimientoysupervivenciadeellos.Susdatosindicanqueelcrecimientodelosrenacuajosdisminuyecuandosonpigmentados.Estodebeserunaconsideraciónenelprocesodedecisiónparaconsiderarsuuso.
EtiquetasalfanuméricasvisiblesLasetiquetasalfanuméricasvisiblesquesepuedenaplicarenlaidentificacióndelosanfibiosestándisponiblesenelcomercio(Donnellyetal.,1994).Estaspequeñasetiquetasseinsertansubcutáneamentealhacerunapequeñaincisión,ycolocandolaetiquetadebajodelapiel.Parasuturarlapielseutilizaunpegamentoquirúrgicocomocianoacrilato.Unsitiorecomendadoparaimplantarlo,eselinteriordelmuslodelasranas(verhttp://tropicalis.berkeley.edu/home/husbandry/tags/E-ANTs.html)LalecturadeestasetiquetassehacepormediodeunalinternaespecialdeluzLEDazulyconanteojosdevisiónámbar,disponibledefábrica.Lasetiquetasvienenconcódigosalfanuméricosqueproporcionancercade46.000variantesúnicas.Estasetiquetasseimprimenconnúmerosúnicosyvariadoscolores,yvienenendostamaños:unoestándarde1.0mmx2.5mmyunograndede1.5mmx3.5mm.Lostrabajadores(Measeyetal.,2001,Measeyetal.,2003)utilizaronestemétodoexitosamenteencecílidos(Gegeneophisramswamii),loscualesfueronpreviamenteidentificadosindividualmenteengrupospequeñosencautiverio,dondelospatronesdeanulaciónerandistinguibles.Estemétodorequirióelusodeanestesiadebidoaladificultadgeneraldemanejaralosanfibiossinpiernas,peronorequirióanestesiageneralenespeciesquefueronfácilmenterestringidas.
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 239
De:http://tropicalis.berkeley.edu/home/husbandry/tags/E-ANTs.html
MarcasyetiquetasAlgunosestudiosdecampomásantiguosutilizabancuerdasalrededordela
cinturadelasranascomomarcas.Algunasdelascuerdaserancodificadasporcoloresmientrasqueotrasteníanetiquetaspequeñas.ElConsejoCanadienseenCuidadoanimal(2002),sitúaranastoroparacompararlacinturaylasmarcasdelosbrazos,ydescubriendoqueambascausanabrasiónenlasranas(CACC,Unknown).En1940,RaneysituóunestudioporBreder(BrederJr.etal.,1927),utilizandounacuerdaconunapequeñaetiqueta,ysupreocupaciónfuelafaltadepermanenciaypotencialporheridascuandolacuerdaseatabamuyfuerte(Raney,1940).Sinembargo,Lienen2007utilizóexitosamentemarcasenlacinturaparaidentificaciónindividualenranasdeTaipéi(Hylaranataipehensis);asíqueexistenprácticasactualesdeestemétodo(Lienetal.,2007).
Generalmente,lasmarcasenlacintura,conysinetiquetas,parecentenerunaduraciónlimitadaytenerelpotencialparaengancharsedeobjetosylimitarpotencialmenteelmovimiento.Enadición,loscoloresdelasmarcaspuedenllamarlaatencióndedepredadores;hemosencontradoestudiossobrelasposiblesimplicacionesdesobrevivencia.Sinembargo,estatécnicademarcacióntemporalpuedeserútilyviableparaanimalesencautiverio.
LasmarcasquerodeanlaextremidadanteriorfueronaparentementeutilizadasporDelyen1945enranascomestibles(Pelophylaxesculentus)yensaposdevientredefuegoeuropeo(Bombinabombina)deacuerdoaHonegger(Honegger,2007).PrimeramenteHoneggerseinteresóenlastécnicasdemarcaciónparazoológicosy;porlotanto,descartóestatécnicademarcacióndebidoasuscaracterísticasdesagradablesypocoestéticasmásqueenloprácticoyútildelmétodo.Laotrapreocupaciónconestamarcaciónesqueerasoloestacional.Dependiendodelmaterialutilizadoparalaconstruccióndelasbandas,existentambiénabrasionesenlesiones,interferenciaconamplexos,yatraccióndedepredadores.Lasextremidadesanterioresdemuchosmachosanurossonrobustasynoseexponenatenerlasmarcasenlugarfácilmentesinalgúntipodelesión.
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 240
En2007Honeggertambiénhisoreferenciaalestudiodondelasmarcassecolocabanalrededordelosdedosdelosanfibios.EstefueunmétododefabricacióntemporaldesarrolladoporDelyen1954enespeciesderanasnoidentificadas.Nofuimoscapacesdeencontrareldocumentooriginal,peropuedeparecerquelaestructuraanatómicadelaspatasdelasranashacequelasetiquetassesueltenmásfácil,ysisecolocanlosuficientementefuerteparaquesequedenensulugar,podríaprovocarunacontracción,laquepodríaresultarenlapérdidadelaspatas.Enadición,algunasdelasbandaspodríaninterferirconelcambiodepielenanfibios,dependiendodecómoseanaplicadas.
LasetiquetasderodillasfueronutilizadosporMcAllisteretal.(2004)enunacomparacióndetécnicasdemarcaciónconradiotelemetría.ElcitaelusodeestasetiquetasporElmbergen1989utilizandocuerdaselásticas.Lasetiquetaserandeplástico,numéricamentecodificadasdealevinesatadasenlarodilla.Ellossedieroncuentaquelasetiquetasprovocanirritaciónenlapielylaceracionesenlapielymúsculos.
Comopartedeunproyectodetelemetríademostracionalpequeño(2ranas),elzoológicodeDetroitcolocótransmisoresenranastoroamericanasmachoadultas(Lithobatescatesbeianus)utilizandounabutacapequeñacubiertadeplásticoyunamarcaenlacintura.Aunquelasetiquetaseventualmenteseperdieron,nosenotóningunalesiónenelanimalrecapturadoprevioalapérdidadesuetiqueta.Elvendajepuedesermásaplicableenelmanejodeanimalescautivos,yaquesonmonitoreadosdiariamente,ylapérdidadesolounavendasepuederesolverfácilmente.
EtiquetasexternasDistinguimoslasetiquetasexternasdelasvendasporquelasetiquetas
generalmenteimplicanpasaralgunapartedelmarcadoratravésdelapiely/oelmúsculodelanimal.Lasetiquetassonmásinvasivasytienenunpotencialparaunamayorincomodidadparalosanimales,lesiones,einfecciones;sinembargo,ellostienenungradomásaltodepermanenciayconfianza.Hahabidounaampliavariedaddeetiquetasexternasquesehanutilizadoenestudiosconanfibiosconelpasodelosaños.Algunosdeestosincluyenetiquetademandíbula(Raney,1940;RaneyandLachner,1947),cortadoresdecola(RaneyandIngram,1941),etiquetasdecuentas(NaceandManders,1982),etiquetasderodillas(McAllisteretal.,2004),yetiquetasdededos(CACC,Unknown).Elestudiodelosanfibiosporpartedeinvestigadoresentre50y70añosatráspareciódemostrarunamenorpreocupaciónporlacomodidaddelanimaldurantelacolocacióndelasetiquetas,ydurantelavidadelanimalconlaetiqueta;sinembargo,suincomodidadnofuecompletamenteignorada.Laactituddelosinvestigadoresconrespectoalacolocaciónhumanadelasmarcasesevidente,conunarevisióndelabibliografía.Además,losinvestigadoresmásrecientessevenenlaobligacióndeexaminaralosanimalesenlamismaluzquelosmamíferosyaveslopermiten.Losanfibiosfueron,hastahacepoco,clasificadosconlospecesporuniversidadesylaboratorios,loscualesnoestánreguladosparapruebasymanipulación.
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 241
UnodelosinformesmásrecientessobreelusodeetiquetasfuedeRaneyen1940,quienutilizóetiquetasmandibularesenranastoroamericanas(Lithobatescatesbeianus)yenranasverdes(Ranaclamitans).Duranteelestudio,Raneymarcó606ranasusandoetiquetasnumeradasdemetalycolocándolasatravésdelamandíbulabaja.Esteesunmétodoqueseutilizóenpeces,ylainsatisfaccióndeRaneyconlaamputacióndededos(debidoalacontabilidad)ylasmarcasdecintura(debidoalapermanencia),lollevóausarsujetadoresdemandíbulasenranas.Elcomenzócon50ranascomoenungrupodeprueba,dadoLaspreocupacionesqueteníaencuantoalasconsecuenciasdesupervivenciaycomportamientoporlasetiquetasenlasranas.Esteprocedimientofuerealizadosinanestesia,yRaneyinformósobrealgunasranasquesequitabanlasetiquetasconsuspatas,despuésdehabersidocolocadas,peronosenotóningúntipodedesprendimientoseriodelapiel.Elsostuvoquenohubounimpactoaparenteenhabilidaddecomerdelosanimales,dadoqueelestómagodelosanimalesrecapturadosconteníaalimento;atravésdelapalpacióndeestos,yqueelllamadonotablementenocambió.Raneyconcluyóqueelmétododesujetadordemandíbulasfuesatisfactorioysuperioraotrosmétodosdisponiblesenesemomento(Raney,1940).Entre1940y1946,RaneyyLacherinvestigaronelimpactodelossujetadoresdemandíbulasenelcrecimientodelossapos(Anaxyrusterrestrisamericanus)(RaneyandLachner,1947).Descubrieronquelosanimalesetiquetadosteníanuníndicedecrecimientomáslentoquelosanimalessinetiquetas.Woodburyen1954pusounestudiodeStebbins,etal.,quienencontróquelossujetadoresdemandíbulaeranunmétodoinaceptableparamarcarsalamandras(Woodburyetal.,1956).Ellossedieroncuentaquelasetiquetasprovocabanunainflamación,yquesedesprendieronatravésdelhuesomandibular.Elusorecientedelossujetadoresdemandíbulasesinexistenteenlabibliografía,aparentementeporbuenosmotivos.
Raneyen1941intentóamputarlascolasdelassalamandras,dondeadjuntóvendasdemetalatravésdelacolaylaespalda;sinembargo,estosmétodosdemarcaciónfallaron.Enalgunoscasos,loscortadoresqueutilizóerantanpesados,quelostritonesacuáticostuvierondificultadesparavolveralasuperficie.Eltambiénvioungrannúmerodeetiquetasperdidas,lesionesencola(almenoscolascompletamentecaídas),yloqueélllamópiel"putrefacta";conlocualasumimosquesignificaalgúntipodeinfección.Sinembargo,Raneysimencionaqueotrosinvestigadoresutilizaronexitosamentesujetadoresdecolaensalamandrasacuáticas(Necturus)duranteelperíododelestudio(Raney,1941).Engeneral,elusodeetiquetasensalamandrashasidomenosqueexitosoynoseestárecomendando.
En1982,NaceyMandercrearonunsistemaúnicodemarcaciónpararanascarnívorasencautiverio(Xenopus),elcualutilizauncablequirúrgicoconcuentasdecoloresunidadaeste.Elcablesecolocaatravésdelaextremidadtraseraodelantera,alrededordelhuesoparaasegurarsuestabilidad.Enesteestudio,lasranashembrafueronmarcadasenlaextremidadanteriorylosmachosenlaextremidaddelanteraparaevitarcomplicacionesyatoramientosdurantelareproducción.Lasetiquetasqueseponíanatravésdelapielseperdíanocasionalmente(NaceandManders,1982).Esposibleusaretiquetasdecablesconcuentasatravésdelosmuslosocoladelosanfibios;sinembargo,elriesgodeatoramientoexiste(CACC,Unknown).Enranasmás
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 242
grandes,lasetiquetasdededossonunaopciónparamarcaralosanimales.Estasetiquetassecolocanatravésdelamembranadelaspatastraseras,yseincluyeunaetiquetadecintadediscolaquecontieneuncódigoúnico(CACC,Unknown).En2007,HoneggerserefirióalusodelasetiquetasdededosporHeusseren1958,quienencontróunainflamaciónenelsitioderetencióncercadeunasemana,conunmáximodedostemporadas.
CONCLUSIONES
Haymuchasopcionesparamantenerlaidentificaciónindividualdelosanfibiosdurantesuvida.Muchoshansidoempleadosentrabajodecampo,yluegoadoptadosparaanimalesencautiverio.Losanimalesencautiveriosoncontinuamentemonitoreados;adiferenciademuchosanimalesenestudiosdecampo,quesonmarcadosyluegoliberadosenlanaturaleza.Siexisteunimpactoenlasupervivenciaoenlamorbilidad,provocadosporunatécnicademarcación,sepuedeobservardirectamentedurantetodalavidadelanimal.Paralostaxoneslongevos,estopuedoserdécadas.Laveterinariamodernadecienciaypatología,puedenahoraidentificarlosproblemasdelastécnicasdemarcaciónquenohansidoevidentesenelpasado(Williams,1995).Estohaproporcionadoinformaciónadicionalenlaidoneidaddealgunastécnicas.
Hoyendía,laéticaanimalactuallimitalasopcionesdisponiblesparalosanimalesdeloszoológicos.Esesencialconsiderarelbienestaranimal,laestéticadelosespecímenes,ylasaludalargoplazodelosespecímenes.Sonpreferibleslastérmicasnoinvasivassiestassonfiables,funcionalesyfactibles.Cuandolastécnicasconinvasivas,esvitalbalancearlosbeneficiosdelatécnica(ejemplo:animalesderaza),loscostospotencialesendolor,morbilidad,fecundidad,ymortalidaddelespécimen.
Lamutilaciónatravésdelaamputacióndetejidosseconsideraunatécnicainaceptableenalgunasinstituciones.Estoesparticularmenteverdaderocuandohayamputacionesmúltiplesinvolucradasenlamarcación. Estastécnicaspuedenlimitarlaactividad,darpasoaunaoportunidaddeinfección,reducirlafuncionalidad,yaumentarlamortalidad.Laregeneracióndetejidoestambiénevidentesiocurreenanimalesencautiverio.Losprosycontrasconalgunoscomentariosparasituacionesdecautiveriodemuchasdeestastécnicasdescritasenestecapítulo,seproporcionanenlasTablas1y2acontinuación.R.AndrewOdumDepartmentofHerpetology,ToledoZoologicalSocietyraodum@[email protected]
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 243
TABLADEPROSYCONTRASDELASTÉCNICASDEMARCAJETABLA1-TÉCNICASNOINVASIVAS
Técnica Aplicación Pros ContrasFotografíadeidentificación
Animalesconpatronesoestructurasúnicas(ejemplo:verrugas)
Noinvasivo 1. Requierealgodeexperienciafotográfica.
2. Lospatronespuedencambiarconlaedad.
3. Loscambiospostmórtempuedendificultarlaidentificacióndelanimal
Dibujosdepatrones Animalesconpatronesdiferentesfácilmenteidentificables
Noinvasivo 1. Requierealgodeexperienciafotográfica.
2. Lospatronespuedencambiarconlaedad.
3. Loscambiospostmórtempuedendificultarlaidentificacióndelanimal
Aislamiento Losanimalessemantienenindividualmenteoenpares(sexualmentedimórficos)
1. Noinvasivo2. Norequiereun
patrón
Lasetiquetasdelasrecintosodelastarjetassepuedenperder
Tabla2-TécnicasinvasivasTécnica Aplicación Pros Contras
Marcaciónporcongelación
anfibiosgrandes Marcaciónpermanente
1. Lasmarcacionessonprimitivas2. Puedencausarinfecciones3. Losanimalesdebenserbastante
grandesAmputacióndededosyamputacióndecola
Ranasysalamandras Unatécnicafácil 1. Puderequerirlaamputacióndemúltiplesdedosenunaextremidad.
2. Lassalamandraspuedenregenerarlosdedosylacola
3. PuedencausarinfeccionesOtrasamputaciones Norecomendadas Unatécnicafácil 1. Cesedeamputación
2. PuedecomprometerlaactividadCabledecódigodecimal
Gruposdeanimales Sepuedehacerparamarcaranimales
1. Requiereunlector2. Losanimalesdebenser
sacrificadosparaleerelcableVendas Ranasysalamandras Unatécnicafácil 1. Nosepuedeutilizarenanimales
pequeños2. Laetiquetasepuedecaer3. Puedecomprometerlaactividad
Etiquetasexternas Todoslosanfibios Fácilidentificación1. Nosepuedeutilizarenanimalespequeños
2. Laetiquetasepuedecaer3. Puedecomprometerlaactividad
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 244
Transpondedoresintegradospasivos
Animalessobrelos25gr Identificaciónúnicaydeusocomúnenzoológicos
1. Nosepuedeutilizarenanimalespequeños
2. Laetiquetasepuedecaercuandoelanimalcambiadepiel
3. LaetiquetapuedefallarImplantesvisuales-Elastómero
Marcacióndetodoslosanfibios
Sepuedeutilizarenlarvasyadultos
1. Elelastómeropudemigraraórganosinternos
2. Sistemasdecodificaciónlimitado
3. RequiereunaluznegraOtrosimplantesinyectables
Marcacióndetodoslosanfibios
Sepuedeutilizarenlarvasyadultos
1. Elelastómeropudemigraraórganosinternos
2. Sistemasdecodificaciónlimitado
3. Requiereunaluznegra
Apéndice1:Marcacióndeanfibios 245
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Apéndice1:Marcacióndeanfibios 248
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Apéndice2:Tratamientodeaguasresiduales 249
Apéndice2:
TRATAMIENTODEAGUASRESIDUALES
DiseñodeconsideracionesparaeltratamientodeaguasresidualesParalograrefectivaseneltratamientodeaguasresiduales,sedebenemplearmétodosbiológicosyquímicos.Bajociertascircunstancias,esnecesarioprocesarelaguainsitu.Paradeterminarlanecesidadyeltipoapropiadodetratamientoefluente,esnecesariohacerunaevaluaciónderiesgosparaintroduciragentespatógenosnovedososalmedioambiente.Deigualmanerasedebeconsiderarlaemisióndequímicostóxicosdeestasinstalaciones.
• Ensituacionesdondeeltratamientodeaguasresidualesnecesariamenteseconsiderainsitu,idealmenteelsistemadebeproporcionarservicioininterrumpido,requerirmantenimientomínimo,ytenercostosoperacionalesmínimos.Comoejemplo,siconsideramosqueexisteunaaltaprobabilidadquelosanimalesretenidosenelrecintopuedenacarrearagentespatógenosvirulentos,losquepodríanafectaralosanfibioslocales,lossistemasdeefectividadyfiabilidadsonunapreocupaciónprimaria.Lossistemasdebenserevaluadosporefluentescultivadosparadeterminarsueficiencia.Inclusosiunsistemaes99%fiable,significaquepodríabajarpor3.65díasalaño,ylosagentespatógenosseríanliberadosalmedioambiente.Siverdaderamentehayunagentepatógenopeligrosopresente,estonosedeberíaconsideraraceptable.
• Alevaluardiversosdesinfectantesparaeltratamientodelagua,esnecesariocontarconalgúnsistemamétricoparasueficienciacontraorganismosespecíficos(agentespatógenos).Estaeficiencianormalmenteesdefinidaporunporcentajedemuerte(ejemplo:99.99%).Unsistemamétricoestándarquesehautilizadocomúnmenteesunproductodeconcentraciónytiempodecontacto(Ct)(Ct=concentraciónenmg/l(ppm)ytiempodecontactoenminutos).ElconceptodeCtpermitedeterminarlacantidaddetiempodecontactonecesarioendiferentesconcentraciones.Porejemplo,unCtde100conun99.99%demuerteporunagentepatógenodeberíaserefectivosieltiempodecontactofuepor100minutosaunaconcentraciónde1.0mg/lode1minutoaunaconcentraciónde100mg/l.ElCtvaríaampliamentefordiferentesdesinfectantesyagentespatógenos.Esademásdependientedelatemperatura.Generalmentelosdesinfectantessonmásefectivosentemperaturasaltas.ElCtesutilizadocomoelestándarporlaAgencia deProtecciónAmbientaldeEstadosUnidosEPAparaeltratamientodeaguasresiduales;yhayinformaciónsignificativaparaapoyarsuusocomouncontrolestándardeagentespatógenosenanfibios.
• Ctesunagentepatógenoespecífico.ElCtlibredecloroes~100porE.coli,ytanaltocomo10.000porCryptosporidiumparvum.ElBatrachochytrium(Bd)tieneunCtsimilaraalgunodelosagentespatógenosmásinmunesalclorocomolaGiardiasisymicobacteriosis(Ct=~1000mg-min/litro).
Apéndice2:Tratamientodeaguasresiduales 250
• Existentambiénsistemasbiológicosquehandemostradosereficientesencontrolarlapropagacióndeagentespatógenos.Estoincluyesistemaslocalessépticosutilizadoscomúnmenteparahogaresypararecintosdetratamientodeaguasresidualesmásgrandes,queusanprocesosbiológicosconundesinfectantefinalqueaplicaantesdellanzamientofinaldeefluente.SistemassépticosUnaopciónqueproporcionaunnivelresponsabledecontroldeenfermedadesesunsistemasépticoqueincluyeuntanquedefijaciónyuncampodefiltración,quedistribuyenlasaguasresidualesbajotierra.Estossistemashandemostradosuhabilidadparacontrolarladistribucióndeagentespatógenosenlasnapasdeaguayenelmedioambiente.EstoestáclaramenteindicadoenlosestándaresparalospozosdeaguapotableyloscamposdedescargassépticasenEstadosUnidos.Elestándaresqueenladistanciaentreelpozodeconsumoyelcamposépticodebeteneralmenos100piesdedistancia(30metrosaproximadamente).Estadistanciaesadecuadaparaprevenirqueagentespatógenosingresenalossistemasdeaguapotable.Ladeficienciadeestossistemasesquenopuedencontrolarelingresodequímicosnobiodegradablesalasnapasdeagua.Eltanquedefijaciónademásnecesitamantenimientoperiódicoparaextraersedimentoalmacenado.AsuntosuspendidoenaguasresidualesElprimerpasoentodoslosprocesosdetratamientodeaguaeslaextraccióndecontaminantesquímicos.Estosepuedeconseguirpormediodelusodefiltrosmecánicosoportanquesdefijación.Lamayoríadelosdesinfectantesquímicossonineficaceseneltratamientodeaguasresidualesquecontienenpartículassuspendidas.Dependiendodelacomposicióndelaspartículas,puedequelosquímicosnopenetren,permitiendoquelasbolsasdeagentespatógenosescapendelosdesinfectantes.Estogeneraotroproblemadeeliminaciónparaelresiduo,unresiduosólido(Verresiduosólidomásabajo). Cloro(Cl2)
• Elclorolibre(Cl2)sehautilizadonormalmentecomoundesinfectanteparalosanfibios.Lasoluciónmáscomúndeclorolibreesellasolucióndehipocloritosódico(CaClO).Esfácilconseguirlocomoblanqueadordoméstico(3-6%NaClO)yenpreparacionescomercialesconconcentracionestanaltascomo+30%.OtrasolucióncomúndeclorolibreeselhipocloritodecalcioCa(ClO)2.Elúltimopuedeservendidobajounsinfindenombres,incluyendoHTHparacloracióndepiscinas.ElCa(ClO)2esunsólidoelcualpuedecontenermásdel50%declorolibre.DebidoasusconcentracioneselevadasdeCl2libre,esunaopciónidealparatratargrandescantidadesdeagua.
• Lasconcentracionesgeneralestanaltascomoel1%deNaClO(ejemplo:1partedel4%deblanqueadoren3partesdeagua)paralalimpiezahansidorecomendadasparalimpiezaydesinfección(Pessier,2008).Elclorolibreenestadisoluciónes~47.600mg/l.
Apéndice2:Tratamientodeaguasresiduales 251
Estasconcentracioneselevadassonimprácticasparalossistemasdetratamientodegrandescantidadesdeagua.
• Elcloroesunaopciónviableparaladesinfeccióndeaguasresidualesparaalgunosorganismos.Desafortunadamente,sielBdeslapreocupaciónprincipalparaelaislamiento,losexperimentoshechosporJohnson,etal.en2003,demostraronqueesmuyresistentealadesinfecciónconcloro.Ensusexperimentos,sematabael100%deBdconconcentracionesde4.00mg/lNaClO(=0.4%,1parte4.0%deblanqueadoren9partesdeefluente)poruntiempodecontactode10minutosTambiénselograeliminarconunaconcentraciónde10.000mg/lenunminuto(=1.0%1partede4.0%deblanqueadoren3partesdeagua).EstoestableceCtentre10.000y40.000mg-min/litro.Muchasinstitucionesempleanmanualesparaladesinfeccióndelaguausandoblanqueadores.Paramenorescantidadesdeagua,puedeserprácticoutilizarunadisoluciónen1:3blanqueador-aguaresidualconuntiempodecontactode40minutos(oenunadisoluciónde1:9por10minutosdecontacto).
• Paravolúmenesmásgrandes,esventajosoutilizartécnicasautomatizadas,peronuevamentelaclorinatienesusdeficienciasparaelBd.EnelzoológicodePerthenAustralia,sedesarrollóunsistemadiseñadoentornoaloscomponentesdelsistemadecloraciónparapiscinas(Robinson,etal.,2008).EstesistemaalmacenaelaguaenunareservayautomáticamenteseinyectaunadisolucióndeNaClOconunsistemaquímicodebombeo.Laconcentracióndelcloroenlareservasecontrolapormediodeunasondacensoradecloroyunanalizador.Laconcentraciónsemantieneen100mg/l.SiconsideramoselCtensulímitemásaltode40.000mg-min/l,eltiempodecontactodeberáserde400minutos(6.66horas).LaeficienciadeestesistemanohasidoevaluadaconBdactivo,peropareceprometedor.TratamientoporcalorAumentarlatemperaturadelaguaalpuntodeebullición,generalmenteseconsideracomounbuenmétododedesinfección.Desafortunadamenteestambiénbastantecostoso.Elaguatieneunatemperaturaespecíficamuyalta,yrequiereungranconsumodeenergíaparaquelleguealpuntodeebullición.Porconsiguiente,lossistemasdiseñadosparamanejargrandescantidadesdeaguatendránuncostoinaccesible.Sinembargo,estaesunaopciónviableparadesinfectarpequeñascantidadesdeaguasresiduales.OzonificaciónElozonoesunoxidantefuerte,yunodelosdesinfectantesdisponiblesmásefectivos.SehanrealizadopruebasnoespecíficasenBd,peronohaymotivosparaqueestonoseaefectivoenconcentracionesnormales.LadificultaddeCtparamataragentespatógenoscomolamicobacteriosisyelCryptosporidium,sondosclasesdemagnitudmenorqueaquellasdemostradasporelcloro(Ct=~10).Otrobeneficiodelozonoesquesedescomponerápidamenteenoxígenonotóxico,porloquenoquedanresiduosenelmedioambiente.Acontinuaciónsepresentaunesquemadeunsistemadetratamientodeaguasresidualessimple,utilizandoozonoyluzultravioleta.Lossistemasdeestetipopueden
Apéndice2:Tratamientodeaguasresiduales 252
demostrarseefectivosenladesinfeccióndeaguasresiduales.Losexperimentosconaguaconresiduosdeanfibiosrealeshanproporcionadoresultadosalentadores,perosiguesiendonecesariohacerunrefinamientomásafondo,paradesarrollarundiseñoquesepuedausarampliamente.
IlustraciónporR.A.Odum
Ladesventajadelozonoesqueesmuycostosodeproducir,requiereunainversióninicialconsiderable,yrequieredeunamantenciónconsiderable.Lasaltaspropiedadesdecorrosiónyerosióndelozono,requierequetodaslastuberías,lostanques,ylascanaletasesténfabricadasdematerialesresistentesalozono.
EsterilizacióndeluzultravioletaLaesterilizacióndeluzultravioletasehaempleadoduranteañosparaeltratamientodelagua.Parasuefectividad,sedebenremoverlamayoríadelaspartículasantesdeltratamiento.Desafortunadamente,elúnicoagentepatógenoqueparecesermuyresistenteeselBd.Sinembargo,elBdnoeselúnicoagentepatógenoqueseasociaconlosanfibios,ylaluzUVsepuedeutilizarjuntoconotrosmétodosparaproducirunsistemamásefectivo.
Tanque de
asentar Tanque de
Ozono
Generador de Ozono Ozono
Tanque de
almacenamiento
Esterilizador Ozono
Bomba Ozono
Efluente Ozono
Electronivel Ozono
Agua
Flujo constate de
agua
Apéndice3:Habitacionesdeaislamiento 253
Apéndice3:
HABITACIONESDEAISLAMIENTOPARAANFIBIOSENEL
ZOOLÓGICOHENRYDOORLYDEOMAHA
Reimpresoconautorizaciónde:Zippel,K.,R.Lacey,O.Byers(eds.)2006.CBSG/WAZAReportefinaldelTallerdePlaneacióndeConservacióndeAnfibiosexsitu.IUCN/SSCGrupoEspecialistadeCríasenCautiverio,AppleValley,MN55124,USA.Pp.65.________________________________________________________________________
HABITACIONESDEAISLAMIENTOPARAANFIBIOSENELZOOLÓGICOHENRY
DOORLYDEOMAHAUnejemplodelcumplimientoconlosestándaresdecuarentenaycríaparaanfibios
Diseñadoparalareintroducciónenlanaturaleza
JessiKrebs
SupervisordeReptilesyAnfibios,zoológicoHenryDoorlydeOmaha
3701S.10thSt.OmahaNE68107
IntroducciónEnfebrerode2006,laUICNGrupoEspecialistaenCríaenCautiverio(CBSG)ylaAsociaciónMundialdeParquesZoológicosyAcuarios(WAZA)presentaronunTallerdePlaneacióndeConservacióndeanfibiosensituenElValle,Panamá.Unodelosmuchospropósitosdelencuentro,fueformularrecomendacionesparalosestándaresdecríadeanimalesparaanfibios,quesonpartedelosprogramasdereintroducciónodelosgruposdecautiverioquepuedenregresaralanaturalezaenalgúnmomentoenelfuturo(Zippeletal.,2006).Muchasdelasrecomendacionespuedenimplicarunamejoraenelalojoactualyenlasprácticasestándaresdecuarentenapormuchoszoológicos,privados,einstitucionesacadémicas;yhansidovistosporalgunoscomoimprácticoyextremoparazoológicosyacuarios.ConlasleccionesaprendidasdelapropagaciónmundialdelaBatrachochytriumdendrobatidis(unodelosagentescausalesdelaenfermaddequitridiomicosis),yelpotencialparaqueemerjannuevospatógenos,seríaprudentequelasinstitucionesque
Apéndice3:Habitacionesdeaislamiento 254
alberganespeciesdeanfibiosdesignadasparalarepatriaciónrevisensusprácticasbásicasdecríaylasnormasdecuarentena,tratandodecumplirconlasnuevasrecomendaciones.ElzoológicoHenryDoorlydeOmaha,respondióaestellamadodeaccióneinmediatamenteseestablecieronhabitacionesdeanfibiosdentrodelosedificiosexistentesenlosterrenosdeloszoológicos.Lashabitacionesdeaislamientoparaanfibios(IARs)sehanconvertidoenunmodelodetrabajoparalaaplicacióndelosestándaresrecomendadosenlosambientesdeloszoológicosoacuarios.CadaunadelasIARsmantieneunaespecieogruposdeespeciesdelamismazonageográfica.Elsiguientelistadoproveeimágenes,precios,materiales,yfuentesparaservircomounprimerejemploparalosquepudieranconsiderarfabricarsuspropiasinstalacionesdeIARparalosanfibios.1
Imagen1.Unatípicahabitacióndeanfibiosnocompatible.
HabitacionesparaanfibiosNocompatibleconlabioseguridadLamayoríadelashabitacionesdealojamientodeanfibiosenzoológicosyacuarios,noestánencumplimientoconlasnuevasrecomendacionesdelabioseguridad.Unejemplodehabitacionesdeanfibiosnobioseguras,esunaquealojaanimalesdetodoelmundo(imagen1).Otrosproblemaspuedenserquenosetomaronmedidasparaprevenirqueaguasresidualesalmacenadasentanquesmásaltossederramenenlosdemásabajo,oquenoseempleeunprocesodetratamientodeaguasresidualesparaprevenirqueagentespatógenossalgandelainstalaciónyponganenpeligroalapoblaciónanfibialocal.Elerrordeloscuidadoresnuncasepuededescartarporcompleto,ylastapasquenoesténaseguradaspuedenaumentarmuchomáslapropagacióndelosagentespatógenosentrelosanimalesdediferenteslugaresdelmundo. Los materiales y las fuentes se presentan en base a la fabricación del zoológico Henry Doorly de Omaha, no como respaldo. Para información adicional sobre cualquiera de los productos presentados puede contactar al autor.
Apéndice3:Habitacionesdeaislamiento 255
Imagen2.Unejemplodeltamañodelashabitacionesdeaislamientodeanfibiosesde8x8x8pies
(2.4x2.4x2.4m).CompatibleconlabioseguridadCadaIARenelzoológicoHenryDoorlyenOmaha,alojasolounaespecieogruposdeespeciesdelamismazona.LasIARsonhabitacionesversátilesconstruidasconmaterialesdeinvernadero,disponiblescomercialmentecontodalaconstrucción(Imagen2).ElrangodelasIARsenelzoológicoesde8x4x8pies(2.4x1.5x2.4m)yentamañode10x16x8pies(3x4.9x2.4m).LasparedesestánconstruidastubosdealuminiohuecossuperpuestosconláminasLexandedoblehojade1.5x1.5pulgadas(3.8x3.8cm).Lasparedesindividualesestánunidasconpiezasangularesdealuminiode1pulgada(2cm).Lascontrapuertasquesecompranenelcomercioseutilizanparaaccederacadahabitación.Todaslasbisagrasylasgrietassesellancon100%siliconaparaevitarqueelaguasefiltreenáreascomunesoenotrashabitacionesdeaislamiento.Lossellossepruebanapresiónantesqueseinstalenlosequipos,yantesquelosanimalesylasinspeccionesvisualesesténencursoparamantenerlosnivelesdebioseguridad.Lacontrapuertaseponeenelpuntomásbajoyelumbraldeunapulgadapermitequecadahabitaciónalojealmenos175galones(796lt)antesquesederrameenunasalacomúnconundesagüe.Ellistadodeproductosqueseutilizaronparalaconstruccióndelahabitacióndelaimagen1semuestraacontinuación:Tapa18@8pies(2.4m)2Empalme23@8pies(2.4m)LáminasdeLexan26@6x8pies(1.8x2.4m)
Tubosdealuminio18@8pies[1.5x1.5pulgadas(3.8x3.8cm);31/8pulgadas(0.3cm)degrosor]
www.stuppy.com www.statesteel.com/omaha.htm
Apéndice3:Habitacionesdeaislamiento 256
Contrapuerta HerramientasTornillosArandelasterminadasporlosguardianesdelzoológico
Imagen3.Acercamientodelapiezadealuminioangularde1pulgada(2cm)sosteniendoeltubode
aluminioylacontrapuertade1.5x1.5pulgadas(3.8x3.8cm).
Imagen4.Launidadportabledecalefacciónyaireacondicionadoyelcalzadoespecializadopuestosencadahabitación.
Lasunidadesportablesdecalefacciónyaireacondicionadoseutilizanparacontrolarlatemperaturaambientalencadahabitación(imagen4).Estasunidadessepuedenadquirir
Apéndice3:Habitacionesdeaislamiento 257
condiferentesrangosdeBTU(unidadtérmicadeenergía)parahabitacionesdediferentestamaños:Enhabitacionesde8x8x8pies(2.4x2.4x2.4m)seutilizan10.000unidadesdeBTU;habitacionesde10x16x8pies(3x4.9x2.4.)Enlaimagen4tambiénsepuedevereldiseñodelcalzadoparaingresaraestahabitación.Elcalzadoqueesfácildedesinfectarsecambiaalmomentoenqueelcuidadorcruzaelumbraldelahabitación.Acontinuaciónsemuestraunlistadodelosartículosqueseutilizaronenlahabitacióndelaimagen4:
Calefactor/ACutiliza10.000unidadesdeBTU4 Calzado
Imagen5.Estanteríasconrecintosparaanfibios.
Lostubosqueseutilizanparalosrecintosdeanfibiosestánfabricadosdepolicarbonatodegradoalimenticioparaprevenirlafiltracióndetoxinas,quealgunasvecesseencuentranenmaterialesplásticos(Imagen5).Aunquelosacuariosdevidriopuedansermenoscostosos,lostubosdepolicarbonatotienenunamayorduraciónyversatilidad,loquelosvuelvemásapropiadosparaelalojamientodeespeciesterrestresyacuáticas.Noserequiereuntaladroespecíficoparaperforarlostubosyaquenoseagrietanniserompenfácilmentecomoelvidrio.Elvolumendelostanquesqueseutilizanbordeade5a16galones.
www.sunpentown.com/wa12poacwihe.html
Apéndice3:Habitacionesdeaislamiento 258
Acontinuaciónsemuestraellistadodelosartículosqueseutilizaronparalosestantesdentrodelahabitaciónenlaimagen5:
Estanterías5Tanquespararanas6Tapas7
Imagen6.InstalacióndelsistemaenormededrenajebajocadarepisaenlasIAR.
EldrenajeparacadarecintooperaenunsistemacomúndedrenajequeestáubicadobajocadarepisaLaslíneasdelsistemadedrenajesonde2-pulgadas(3cm)dediámetroparapermitirquegrandesvolúmenesdeaguapasenatravésdeellassinapoyarsedeotrosrecintosadyacentes(Imagen6).Lastuberíasdelsistemadedrenajefuncionanenlosbaldesderecoleccióndeaguasresiduales.
www.samsclub.com/shopping/navigate.do?dest=5&item=203424&pCatg=7085 o de los materiales adquiridos en las tiendas de herramientas. www.rcpworksmarter.com/rcp/products/detail.jsp?rcpNum=3328 www.habitatsystemsltd.com, hechas a medida.
Apéndice3:Habitacionesdeaislamiento 259
Imagen7.LosbaldesderecoleccióndeaguasresidualesdelasIARconbombadesumiderose
muestraacontinuación.Seutilizaunacombinaciónconunfregaderopararecolectaraguasresidualesdecadahabitacióndeaislamiento,ysefabricaparaensamblardosfregaderoseconómicos(Imagen7). Elbaldedelabase(sinpatas)seensambladirectamenteensuelonoperforado.Elsegundofregadero(conpatas)seensambladentrodelbaldeinferiorysebombeaparadrenarlosinsalpicaragua.Labombadesumideroconuninterruptordeencendido/apagadoautomáticoseensambladentrodelbaldeinferiorparabombearelaguaresidualalaestacióncentraldetratamiento(Imagen8).Eltubosuperiorsepuedesondearparaquefuncionecomofregaderosilodesea,otambiénsepuedenconectarlíneasdemanguerasentrecadahabitaciónparaproporcionarfuentesdeaguafiltrada.Acontinuaciónsemuestraellistadodelosartículosqueseutilizaronparalosbaldesderecoleccióndeaguasresidualesenlasimágenes6y7:
UtilidaddedosfregaderosBombadesumidero8TubosycodosdePVCTubería
www.flotecpump.com/pdf/Page_06_2004.pdf
Apéndice3:Habitacionesdeaislamiento 260
Imagen8.Estacióncentraldetratamientoyalmacenamientodeaguadeledificio.
TodaelaguaestratadacuandoentraysaledelIARenestacióncentraldetratamiento.Seutilizauncontenedordeaguamásgrandeparaalmacenarelaguareconstituidaporosmosisinversa(OI)quesebombeóacadahabitacióncomofueranecesario(ladoderechodelaimagen8;revisarcapítulo1parainformaciónadicionalcomolareconstituciónOIdeagua).Seutilizandosbarrilesparajuntartodaslasaguasresiduales(centrodelaimagen8),elcualdespuésestratadoconunblanqueadordeusodomésticopor12horasantesdeserliberadoenelalcantarilladodelaciudad.Revisarcapítulo3paramayorinformaciónsobreeltratamientodeaguasresiduales.Acontinuaciónsemuestraellistadodelosartículosutilizadosparaeltratamientodeaguaafluenteyefluentedentrodelashabitacionesenlaimagen8:
TanquedealmacenamientodeaguaOIde300galones(1135L)SistemasdefiltroOI AlimentacióndereconstituciónOIBarrildetratamientodeaguasresidualesde2@55galón(208L)SistemadealimentacióndeblanqueadorTuberíasdePVCTuberíaKitdepruebadecalidaddelagua
Apéndice3:Habitacionesdeaislamiento 261
Imagen9.Adaptacióndelailuminaciónenlosestantes.
Lailuminaciónentodoslosestantesesproporcionadadedosmaneras:comoiluminacióncompactafluorescentesobrecadarepisaparaproporcionarluzultravioleta,ypequeñaslámparasdecalorencadarecintoparaproporcionarsitiosdecalentamientoparalasespeciesquerequierantemperaturasmáselevadas(Imagen9).Acontinuaciónsemuestraunlistadodelosartículosqueseutilizaronenlailuminacióndehabitaciónenlaimagen9:
Iluminaciónfija9Focos10
ResumenpresupuestarioparaunIARde8x8x8pies(2.4x2.4x2.4m):Materialesdelahabitación1.100UDS
Estanterías270USDCalefacción700USDTanquespararanas145UDScadaunoyx18=2.160USDIluminación210USDcadaunoyx9=1.890USDTuberías450USD
Conductoseléctricos200USDTotalparaunahabitación7.220USD
www.drsfostersmith.com/Product/Prod_Display.cfm?pcatid=3773&N=2004+113345 www.esuweb.com/cardfile.asp?ItemNumber=55112&IDProductRelationship=281
Apéndice3:Habitacionesdeaislamiento 262
ConclusiónElZoológicodeJohannesburgodeSudáfricahautilizadotecnologíayprácticassimilaresparadesarrollarhabitacionesdeaislamientoparaanfibios,ensusintentosporcumplirconlosestándaresdelabioseguridadensuCentrodeConservacióndeAnfibios.EnelzoológicodeJohannesburgurgo,semodificóunedificioubicadoensusterrenosparaalojardiversasespeciesenpeligrodeextinción,previstasparaelprogramadeliberación.Losmétodosdescritosacontinuaciónparecenestarfuncionandobienparaellos;demostrandolatransferibilidaddelzoológicoHenryDoorlydeOmahanosóloaotrosparqueszoológicosyacuariosacreditadosporAZA,sinoquetambiénalasinstalacionesinternacionales.Estecapítulodemuestraqueconunpocodeimaginación,lasinstitucionessoncapacesdeseguirlasrecomendacionesdebioseguridad,recibidasporLaCBSGyelTallerdePlaneacióndeConservacióndeAnfibiosexsitudeWAZAconunainversióndeespacioyderecursosfinancierosrelativamentemásbajos.Consuerte,estovaamotivaraotrosaconsiderarlaconstruccióndesuspropiosIAR,yaintentarsalvarporlomenosunaespeciesoungrupodeanfibios.
ReferenciasZippel,K.,R.Lacey,O.Byers(eds.)2006.CBSG/WAZAReportefinaldelTallerdePlaneacióndeConservacióndeanfibiosexsitu.IUCN/SSCConservationBreedingSpecialistGroup,AppleValley,MN55124,USA.Pp.65.
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
263
Apéndice4:Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciasanitariaparaprogramasderecuperación
deespecies
Laranaverdecentroeuropea(Pelophylaxlessonae,anteriormentellamadaRanalessonae)
InformeaInglaterraNatural:
AnálisisderiesgosdeenfermedadesparaeldesplazamientoalavidasilvestrederanasverdesreintroducidasaunasegundaubicaciónenInglaterra.
Abril2015
DrJustineShottonBScBVScMScMRCVS
YDrTonySainsbury
BVetMedCertZooMedDVetMedDipECZM(Saluddelapoblaciónsilvestre)MRCVSEspecialistasEuropeosReconocidosenMedicinazoológica(saluddelapoblaciónsilvestre)
1. Introducciónyorigen
Entre2003 y2005, el grupodeAnálisis deRiesgodeEnfermedades yVigilancia Sanitaria(DRAHS) de la Sociedad Zoológica de Londres (ZSL) elaboraron un Análisis detallado deRiesgodeEnfermedades(DRA)paralareintroducciónderanasverdes(Pelophylaxlessonae,originalmente Rana lessonae) de Suecia al Reino Unido. El DRA del 2003/05 detalló ladisminución global de anfibios en ese tiempo y la asociación de esto con enfermedadesinfecciosas (Ver Sainsbury et al 2004). Estos incluyeron la consideración del ranavirus(iridovirus)quefueasociadoconlasmuertesmasivasenvariospaíses,incluyendoelReinoUnido (Cunninghamet al 1996), y el hongoquítridoBatrachochytriumdendrobatidis (Bd)quetambiénestuvoinvolucradoendisminuciónglobaldelapoblacióndeanfibios(Daszaketal2000).ElDRAde2003/05investigóelconocimientoactualdelriesgodeenfermedadesatravésdeuna revisión de la bibliografía y de consultas a expertos, llevando a cabo revisionesdetalladas por agentes infecciosos en las poblaciones de origen de ranas verdes, y laspoblaciones de destino de anfibios nativos; llevando a cabo evaluaciones de riesgos deenfermedades(Tabla1)eilustrandoguíasdemanejosparacadaagentepatógenoquefueraconsideradounriesgoeneldesplazamientoderanasverdeslibresdepoblacionesdeorigende Suecia, al lugar de liberación identificado en Inglaterra. La reintroducción apuntó arestablecer la población de ranas verdes en el Reino Unido, seguido de su extinción amediadosde1990(BuckleyandFoster2005).LosresultadosdelaDRAfueronconsiderados
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
264
comouncomponentedelcosto-beneficiodelanálisisdeestedesplazamientoantesquesellevaraacabo.Lareintroducciónderanasverdescomenzóen2005.En la revisión de las ranas verdes suecas y los anfibios nativos por agentes infecciosos,duranteelDRAde2003/05,lamayoríadeagentesinfecciososdetectadossepresentaronenlosanfibiosnativosyen lasranassuecas;yporconsiguiente,sedescartócomounriesgo.Losagentesinfecciososdetectadosenranasverdesperonoenanfibiosnativos,incluyeronhelmintos, protozoos opalíneos y parásitos parecidos a los tripanosomátidos. Sedetectaronhelmintosen los intestinosdesiete ranasverdes, losque fueron identificadoscomo nemátodos rhabditis (E Harris) y fueron considerados como no patogénicos a losanfibios.Seencontraronprotozoosenlosintestinosde29ranasverdes,ysuidentificaciónaniveldeespeciesnofueposibledebidoalaausenciadeexperiencia.Sellevóacabounaevaluación de riesgo de enfermedades en tripanosomátidos y en protozoos opalíneos,siendo ambos considerados como un riesgo bajo de causar enfermedades en anfibiosnativos.Nosehandetectadoningúntipodeagenteenasociaciónconenfermedadesenelsitiodereintroduccióndesde2005;sinembargo,hasidodifícildetectarenestoslugareslaenfermedad y muerte de los anfibios. A pesar que nuestro análisis de riesgo deenfermedades nodetectara ningúnparásito conun alto riesgode causar enfermedadenpoblaciones de anfibios nativos, no podemos descartar su presencia porque (i) labibliografía sobre parásitos y enfermedad en anfibios en Suecia era limitada, (ii) losnúmerosdemuestradelasranasverdesfueroninsuficientesparadetectaragentesdebajaprevalencia y (iii) no pudimos utilizar pruebas apropiadas para algunos parásitosdesconocidos e indetectados (presentado por Sainsbury et al). Además, hasta que lapoblaciónde ranas verdesenel sitiode reintroducciónhaya logradocapacidadde carga,puedehaberunaausenciadelosrequerimientosecológicosparaqueunparásitoprovoqueunaenfermedad(presentadoporSainsburyetal).De los agentes infecciosos que se detectaron en anfibios nativos, pero no en las ranasverdes por el DRA de 2003/05, no se pudieron identificar flagelos, ciliados y formas dequistesdeprotozoosaniveldeespecies,ylaextensióndeCandidakefyrenelpaleártico.Elranaviralnofueespecíficamentedefendido,yaquesesabíaqueestabapresenteenelReinoUnido,yelBbfuedetectadoenelReinoUnidoalmismotiempodelDRA. Nuestroanálisisdel riesgodeenfermedades, reconocióelBdyel ranaviral comounode losmásriesgosos de provocar enfermedades en las ranas verdes desplazadas, y elAmphibiocystidiumranaeconunriesgomedio (Tabla1). Nosehandetectado casosdeenfermedades asociados con estos agentes en el sitio de reintroducción, y tampoco larevisióndelBdyelranaviralhadetectadoestosagentesinsitu.EsposiblequesepresenteelBdyelranaviralperosinserdetectados,probablementeporquelosanimalesinfectadosmueren y son saqueados y por lo tanto, no se han encontrado. La presencia del Bd-asociado no detectado, o la enfermedad rana viral-asociada se da posiblemente (i)resultados positivos del estudio de anfibios nativos en otros sectores del Reino Unido(Cunningham andMinting 2008; ZSL/ Defra/ARG-UK 2011), (ii) los anfibios en el sitio dereintroducción pueden ser inmunológicamente nulos a estos agentes y por consiguiente,podríanserhastaahoraunaenfermedadepidémicanodetectada,y(iii)enelcasodelrana
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
265
viral,laenfermedadasociadaconesteagentehasidoreportadoenranasverdes(VerranaviralDRA).NohaybarrerasecológicasogeográficasevidentessobrelapropagacióndeBdoranaviralenellugardereintroducción,elcualimplicaquelapropagaciónnaturalocurriráyestosagentespermaneceráncomoamenazahacialasranasverdesreintroducidas.Tabla 1: Evaluación de riesgos para el desplazamiento de ranas verdes: patógenossignificativosyotrosidentificadosen2004.
Siguiendo el DRA, el manejo de los riesgos de enfermedades, y el post lanzamiento delprotocolodevigilanciadelasalud(DRM&PRHS)fueilustradoporlaZSLeInglaterranatural(NE), y las ranas verdes fueron trasladadas de Suecia al Reino Unido, con la primeraliberación en Julio de 2005, y las liberaciones posteriores cada Junio hasta e incluyendoJuniode2008.FueronliberadasenunsitioenNorfolk,elcualseráreferidocomositio1dereintroducción. Durante loscuatroaños,se importarondesdeSueciahuevosyranas (vertabla 3), y un total 3783 ranas verdes de clado en varias etapas de su vida (ver tabla 2)fueronliberadasenelsitio1.Tabla2:Liberaciónderanasverdes2005-8:SumariodenúmerosyetapasdevidaLiberaciónenestanques(nota-diferenciamínimadecantidadesimportadas) 2005 2006 2007 2008 TotalAdultos 23 25 17 25 90Juveniles 26 2 30 30 88Total(solopostmetamórfico)
49 27 47 55 178
larva 118 1607 802 18003 3605Huevos1 0 0 0 0 0Total(todoslosindivids.)
167 1634 127 1855 3783
Notas:1 Los huevos se importarondurante algunos años perono fueron liberados directamente en los estanques; fueron criados hasta que
eclosionaronodespuésantesdeserliberados.2En2007,seimportaron3000huevos,secriaronentanquesenunalocaciónsegura,enlamismaregiónqueellugardereintroducción,y
despuésfueronliberadoscomolarvas;sinembargo,hubouncrecimientodébilyunaltoniveldemortalidad,porloquesoloseliberaron
80larvas.
Pathogen Geographical DistributionMethod of
transmission/lifecycleInfective for other
species
Probability other species will
contact pathogen
Prevalence pathogen in translocated
animals
Chance establishment at release site
Pathogenicity for individual
Pathogenicity for target population
Pathogenicity for populations of other
speciesRanavirus USA, Canada, UK direct? probably high unknown medium High High high High
Chytrid fungiworldwide (Spain, UK, Germany in Europe direct? probably high est. 2% medium High High high HighDermocystidium sp USA, Italy direct? probably high unknown medium medium medium medium medium
Table 3. Disease risk assessment for translocation of pool frogs :significant and other pathogensProbability of establishment at release site Severity disease once established
Total Disease Risk
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
266
3En2008,seimportaron3000huevos,secriaronenelexterior,sobrevivierontodaslaslarvasperosoloseliberaron1800.Tabla 3: Cantidad de animales exportados desde Suecia (nota: al final no se liberarontodos-vermásarriba) 2005 2006 2007 2008 TotalAdultos 23 25 17 25 90Juveniles 26 2 30 30 88Total(solopostmetamórfico)
49 27 47 55 178
larva 118 1618 0 0 1736Huevos1 0 0 3000 3000 6000Total(todoslosindivids.)
167 1634 3047 3055
DesdelaúltimaliberacióndeSueciaen2008,lapoblaciónactualderanasverdesenelsitio1hamostradounadisminucióngradual,con61ranasadultasindividuales(34machosy27hembras)identificadosen2014.Sinembargo,indicadorespositivosparaelcrecimientodelapoblaciónincluyeelhechoqueseencontraronalasranasde13estanquesdiferentesalolargodelsitio,yhuboevidenciadereproducción.Enunesfuerzoporaumentarlapoblaciónde ranas verdes dentro del Reino Unido, se ha propuesto que los individuales de lapoblacióninglesaactualenelsitio1,elcualseráreferidocomositio2dereintroducción,elcualestáenlamismaregiónqueelsitio1.Elmétodosugeridoparaestedesplazamientoesvía"sitiodeinicio",dondesereúnenhuevosderanadelapoblaciónoriginal,ysecríanenun medio ambiente controlado y en un sitio separado, antes que los juveniles seanliberados en el lugar destinado (ver el documento de sitio de inicio, apéndice 1). Estémétodo fue utilizado previamente en un intento de apoyar y aumentar la población deranasverdesenelprimerositiodeliberación.El objetivo de este informe en investigar el riesgo de enfermedades asociadas con eldesplazamientonaturaleza-a-naturalezapropuestade la reintroducciónde ranasverdesaunsegundositiodentrodelReinoUnido (incluyendoelelementodesitiode inicio). EsteDRAcualitativo, continúaelmétododescritoporSainsburyetal (2012)yporSainsburyyVaughan-Higgins (2012). Este DRA ha sido ilustrado a través de revisiones literarias delestadoactualdelasenfermedadesdeanfibios,ambosenelReinoUnidoyanivelmundial;juntosconunaconsultaprofesionalyconlosresultadosdeltrabajodiariodevigilanciadesaluddelasranasverdes,yotrodepoblaciónanfibiaenSitio1,yelestadodeparásitosdeanfibiosyenfermedadesenSitio2.
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
267
1.1Objetivos1) Evaluarelpotencialparalaintroduccióndeagentesinfecciososdesconocidosaldestino
medio ambiental, particularmente aquellos que podrían tener efectos nocivos enpoblacionesderesidentessilvestres,y/oaldestinomedioambiental;
2) Analizar el potencial para la intensificación artificial de enfermedades endémicas enanfibiosenellugardeliberación,porlaintroduccióndenuevosportadores.
3) Determinar los riegos de desplazamiento de ranas verdes presentadas por agentesinfecciososenanfibiosenellugardeliberación,ymejorarledondeseaposible.
4) Analizar y proponer mitigación contra los riesgos de enfermedad de parásitos quepueden portar las ranas verdes durante el camino de desplazamiento, que durantemomentosdeestréspuedenprovocarenfermedadclínica.
5) Garantizar que el desplazamiento tiene efectos mínimos en el bienestar de ranasverdesyotrosanimales.
6) Evaluarel riesgodeenfermedaddeagentesno infecciosos,presentadosenel sitiodeinicio o lugar de liberación, que puedan afectar negativamente a las ranas verdesdesplazas.
7) Considerartodoslosriesgoszoonóticosquepudieranserrelevantesalasaludhumanaduranteelcaminodedesplazamiento.
8) Garantizarque las ranas verdesdesplazadasestánenbuena salud, conelobjetivodemejorar el éxito del desplazamiento a través de (i) buenas prácticas de cría,bioseguridad en los lugares del sitio de inicio, ymonitoreo de salud, y (ii)mitigar lasconsecuenciaspotencialesnegativasdelosriesgosidentificadosporlaDRAenlasranas;
9) Recopilarmayorinformaciónenlosriesgosidentificadosatravésdevigilanciadesaludpreypostliberación,parainformaryrevisarelDRAcontinuamente;
10) Conservar la faunaparasitaria comensal y la flora de ranas verdes desplazadas; y porconsiguiente, mejorar la biodiversidad del medio ambiente destinado, y permitir eldesarrollo de las respuestas apropiadas de los portadores inmunes previo a laexposiciónpotencialdelasranasaparásitossimilaresenelnuevositio;
11) Detectar riesgos de enfermedades desconocidos o no identificados, que podríanvolverseevidentesduranteeldesplazamiento,atravésdelaincidenciadeenfermedad,ydedesarrollar una inversiónenel seguimientoposterior a la liberaciónmedianteelseguimientos de datos demográficos y de salud para obtener información en (i) lareevaluacióndelriesgodeenfermedadesduranteladesplazamientoderanasverdes,(ii)dilucidar la interacciónentreenfermedadypoblaciónactivadeanfibiosen Inglaterra;
12) Monitorear el efecto de la reintroducción de ranas verdes en la salud de anfibiossimpátricosenellugardereintroducciónyenáreascircundantes.
1.2CambiosennuestroentendimientodelasenfermedadesdeanfibiosenelReinoUnidodesdeelúltimoDRA.Hay información disponible limitada sobre el estado actual de la distribución de hongosquitridios, Batrachochytrium dendrobatidis (Bd) y ranavirus (FV3 y cepas de CMTV) a lolargodelReinoUnido.Hayinclusomenorinformacióndisponibleparaotrospatógenosen
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
268
anfibios.Sinembargo,losanálisisderiesgosdeenfermedadparaestosagentesinfecciosos,hansidoactualizadosenbasea informaciónpublicadarecientemente,yquesedescribenmásadelanteenesteinforme.Continuando con la reintroducción de ranas verdes en el Reino Unido desde Suecia, secomenzóunavigilanciadesaludextensivadepost-liberación.1.3ResultadosdePRHSenSitio1desdeel2006La vigilancia de la salud post liberación, fue desarrollada en la reintroducción de ranasverdesyensudescendencia,yenanfibiossilvestresenellugardeliberaciónentre2006y2012;sinembargo,elmonitoreodesaluddelasranasverdessesuspendióen2010(perocomenzaremos otra vez si hay alguna evidencia de disminución del número de lapoblación).Elmonitoreoderanasysaposcomunesaumentóenel2010,2011,y2012conelpropósitodealcanzarelnúmerodestino(30)decadaespecie.Latabla4listaelnúmeroderanasverdesclínicamenteexaminadasentre2006y2012enellugardereintroducción.Laexaminacióndelasaludderanasverdesyanfibiossilvestressellevó a cabo en un intervalo de meses en el lugar de reintroducción entre Mayo ySeptiembre en el 2006 y 2007. En el 2008, las primeras examinaciones de anfibiossilvestres, se llevó a cabo enMarzo, y en Agosto no hubo examinaciones. Los anfibiossilvestres (ranas comunes, tritones crestados, y tritones comunes) fueron examinados enMayo,Julio,AgostoySeptiembreen2006y2007,yenMarzo,Mayo,JulioySeptiembreenel 2008.Desdeel 2009, lasexaminaciones se llevarona caboen tresespeciesmás saposcomunes;en2009sellevaronacaboexaminacionesenMarzo,MayoySeptiembre;en2010enMarzoySeptiembre;ydesdeahí,en2011y2012,lasexaminacionessellevaronacabosólo en Marzo. Entre paréntesis, el promedio y rango de los anfibios silvestres que seexaminaronanualmentefueelsiguiente:promediode25tritonescomunes(rangode0y62), promediode23 tritones crestados (rangode0 y42), promediode9 ranas comunes(rangode1a20),yunpromediode31saposcomunes(rangode29a34).Inmediatamentedespuésdelaexaminación,losanfibiosjuvenilesyadultosfuerondevueltosasusestanquesde origen. Continuando la examinación, las larvas son (i) re-liberadas en recintos pararenacuajos,o(ii)re-liberadasdirectamenteenunestanque.El tamañodemuestrade los anfibios silvestres y las ranas verdesque seexaminaron, seescogieronenbasealaproporcióndelapoblaciónpropensaaverseafectadaporunbrotedeenfermedades,ylaprobabilidaddedetectarindividuosenfermos.Laevaluaciónoriginalde riesgos de enfermedades sugirió que el Bd y el ranavirus fueron los agentes máspropensos a causar enfermedad en la población reintroducida de ranas verdes. En laenfermedadranaviralyenlaepidemiadequitridiomicosisquesereportóenEEUU,sehaconocido que la mortalidad excedió el 90% en los sitios afectados (Green, Converse ySchrader, 2002), probablemente dependiente en especies susceptibles (Blaustein et al2005;Brunneretal2005). Fue imposiblepredecir lasusceptibilidadde lasranasverdesbasadoencualquierevidenciaen2005,ylasinvestigacionessubsecuentessugirieronquelasusceptibilidadesvariabledentrodelasespecies(Padgett-FlohryHayes2011;Woodhamset al 2011), y entonces, se tomó una decisión para tratar de detectar un brote de
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
269
enfermedadafectandoel10%delapoblaciónporqueestegradodemortalidadpodríasersignificante para la viabilidad de la población. Con el fin de detectar una única ranaenfermaconel95%deconfianzaparaunaenfermedadqueprovocael10%demortalidaden una población de 250 ranas, se predice que 29 ranas requieren de un examen(DiGiacomo y Koepsell 1986), y por lo tanto, decidimos tratar de examinar al menos 29ranas verdes en cada visita. No tenemos información sobre el análisis de riesgo deenfermedades con el cual predecir el número de anfibios silvestres que requieran serexaminados, y probablemente la mayor amenaza de enfermedad a estas especies, fueplanteadoporagentesnodetectadosdeenfermedadconpatógenosdesconocidos; yporconsiguiente,enlaausenciadeunamejoreguía,escogimosexaminaraproximadamente30animalesdecadaespecieencadavisita.Paraelotoñodel2009,nuestrosresultadosindicaronquelareintroduccióndelapoblaciónderanasverdeserasaludabledespuésdesuliberación,ylosignosdereproducciónhabíansido detectados tan temprano cuando las ranas verdes liberadas en el 2006 habían sidoengendradas (Foster et al., en prep). Dado estos descubrimientos y restricciones derecursos, escogimos dedicar las actividades demonitoreo de salud a los anfibios nativos.Para fines de 2010, no se había detectado ninguna enfermedad preocupante en tritonescomunesoentritonescrestados;yporconsiguiente,enfocamoslasexaminacionesdesaluden ranas comunes y en sapos comunes, porque estas especies tienen una relaciónfilogenética cercanas con las ranas verdes, y por lo tanto son consideradas como máspropensas a contraer parásitos nuevos. Almismo tiempo, seguimos cuidadosamente losresultadosdelmonitoreode lapoblaciónquehabíansido llevadosacaboporFosteretal(enprep)endisposicióndealterarelenfoquedenuestrasupervisióndelasaludencasodequealgunadelaspoblacionesdeanfibiosdemuestreunadisminución.Tabla 4: Cantidad de ranas verdes examinadas clínicamente antes y después de lareintroducciónentre2006y2012
ExaminaciónderanasverdesadultasyjuvenilesantesdesureintroducciónenSueciayReino
Unido
Examinaciónderanasverdesdespuésdesureintroducción
2006 2007 2008 2006 2007 2008 2009 2010
2011
2012
27(incluyendo 2juveniles)
47(Incluyendo30juveniles)másaproximadamenteentre 2000y 4000
47(Incluyendo30juveniles) yaproximadamente3000huevos
47(incluyendo 22metamorfos)
30(incluyendo12juveniles)
55(incluyendo 1juvenil)
38(incluyendo 6juveniles)
1 1 1
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
270
huevosLa tabla5describe lasenfermedadesdetectadasen las ranasverdesyen lasespeciesdeanfibios silvestres entre 2006 y 2012 en el lugar de reintroducción. Se sospechó que lasheridas observadas en la lengua de 6 ranas verdes se asociaron con la alimentación depresas,porqueestasranasverdesfueronobservadascomiendolibélulasadultasprevioasucaptura. La siguiente bacteria fue criada en un cultivo puro: Lesiones cutáneas deBurkholderia cepacia por erythematous de dos ranas verdes antes de su liberación;Aeromonas hydrophila de una rana verde con una lesión cutáneamenor post-liberación;Pseudomonas fluorescens (0157557) por lesiones cutáneasmenores en tres ranas verdespost-liberación; Burkholderia cepacia de una úlcera superficial en un tritón crestado. Lasiguientebacteriafuecultivadacomocrecimientopredominante:Pasteurellaaerogenesdeúlceraspunteadasencontradaenunade lasranascomunesconestas lesionesyRalstoniapickettii (0041455) de una rana común macho con epidermis engrosada amarilla en elvientre y en las extremidadesmedias ocultas. Aparentemente, estos fueron los primerosaislamientosregistradosdeRalstoniapickettiiyBurkholderiacepaciadeanfibiossilvestresenelReinoUnido(yRalstoniapickettiitambiénfueaisladadetresranasverdesencultivosmezclados), pero ambas bacterias han sido ampliamente informadas por el Reino Unido(Muhdietal1996,Sousaetal.2000;Ryanetal.2006;Weidmannetal.2008,LaAgenciaMedioambiental 2002, Agencia de protección de salud 2008, 2009). En 2006 y 2007 loshisopos secos recolectados de todas las lesiones de todas las especies examinadas en ellugar de reintroducción, y examinadas por PCR por Batrachochytrium dendrobatidis (Bd)fueronnegativasparaloshongos.Desdeel2008loshisopossecosrecolectadosde lapiel inguinalyde laspatastraserasdetodaslasranasysapos(aquellosconysinlesiones)(entre2008y2009,18ranasverdesy5otrosanfibios,serecogieronmuestrasconunhisopoporBd,ytodosestosfueronademásnegativos)yporlesionesentritonesfueronnegativosporBdenPCR.PCRpararanavirusfuellevado a cabo con muestras de piel con hisopos de todos los animales con lesionescutáneas,examinadosenellugardereintroduccióndesdeel2011ynosedetectaronvirus.Las interrupciones de las úlceras descritas en dos ranas comunes fueron consistentes enaparienciaconlainfeccióndeAmphibiocystidiumranae,peroestehongonofuedetectado.Sedetectóunparásitoúnicoenunadedosranascomunes,sinsignosdeenfermedad,yunodeestosparásitosfueidentificadocomoHelobdellastagnali.
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
271
Tabla5:Lacantidaddecasosdeenfermedadesdetectadasdurantelaexaminaciónclínicade ranas verdes y anfibiosnativosexaminadosenel lugarde reintroducción (Todos losdatosrecopiladoscombinadosentre2006y2012).Descubrimientosclínicos Tritón
comúnTritóncrestad
o
Ranaverde Ranacomún
Sapocomún
Enfermedadesinfecciosas oinfeccionessospechosas
Eritemadelapiel 2 3 2 Ulceraciónsuperficial de lapiel
1 1 1 1
Otras lesionescutáneasmenores
3 2 20 3 3
Múltiples úlceraspunteadas en eldorso
2
Epidermis espesaamarilla en elvientre y patastraserasmedias
2
Inflamación de, ymovilidad excesivaen la articulaciónmandibular
1
Enfermedadesno infecciosasy lesionestraumáticas
Pérdida de unaparte de unaextremidad
4 1 3
Heridas levesmenoresenlapiel
4 2 5 2 2
Heridas rojizaspequeñas en lalengua(<1mm)
6
Trauma menor delamucosaoral
3
Enfermedadesdiversas
Condición corporalpobre, celomaflácido
2
N.B.Más de un descubrimiento clínico pudo haber sido registrado en un sólo animal; laubicacióndelaslesionesenelcuerpodelanimalfueronvariadassinoseindicaron;todoslosanimalesestabanactivosyalertas.Durante las visitas demonitoreoecológico y del salud al lugar, el personal revisaba cadaestanqueyalrededoresenellugardereintroducciónporanfibiosmuertos.
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
272
Latabla6muestrael resultadodeexaminacionespatológicasendosranasverdesqueseencontraronmuertas.Foster et al (en prep) utilizó registros de captura-marca-recaptura para mostrar que lapoblaciónderanasverdesenel lugardereintroducciónfueestableparael2012,conunapoblación máxima estimada de 7 adultos, y, de un punto bajo en 2009 fue posibleevidenciarelcrecimiento.Elproyectoaúnnodeberíaserconsideradounéxito.Tabla 6: Resultados de la examinación post-mortem para las ranas verdes que seencontraronmuertasenel lugarde lareintroduccióncomocomponentede lavigilanciadelasaludposterioralaliberación.Historia Edad Sexo Fecha en la
que seencontrómuerto
Descubrimientospatológicos
Encontrados enaguas pocoprofundas en elborde delestanque5
Adulto M 10 de Marzode2007
Se presentaron dos áreas deeritemasobreelaspectoventralenambos hombros, deaproximadamente 7mm dediámetro. El área central inguinaltambién tenía eritema. Lasheridas sin moretones en celoma,sugirieron una búsqueda postmortem. El corazón, el tractogastrointestinalmedio y caudal, elhígado y el bazo probablementehan sido removidos por uncarroñero. No se detectaron otrasanomalías.
Encontrados en lasuperficie de losestanques en ellugar dereintroducción
Adulto F 7deMarzode2010
Buena condición corporal condepósitos de grasa celómica;huevos presentados en el caudalcelómico, blanco, lana algodonadacomo crecimiento cubrió lasuperficie del cuerpo; hígadocongestionado, tractogastrointestinalyriñones,columnalumbar congestionada al nivel deluróstilo. Una mezcla decrecimiento moderado deAeromonas hydrophila/caviae fueaislado de la piel, de la cavidadoral, del corazón y de losintestinos, y la Ochrobacteriumantrhopi de la cavidad oral e
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
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intestinal.Nohayhongosaislados.PCR por hongos quitridios yranavirusnegativos.Pesocorporalde14g.
ElPRHSquesecomenzóenelSitio1nohadetectadoningúnagenteinfecciosoobrotedeenfermedades preocupantes, y la mayoría de las ranas verdes y anfibios silvestresmostraron signos de buena salud. Como se mencionó anteriormente, ni la Bd ni elranavirus han sido detectados en el Sitio 1, y ambos agentes presentaron una potencialamenazaparalasranasverdes.UnapequeñapoblaciónderanasverdespermaneceenelSitio y continúa la vigilancia de la salud. Se habría esperado que la población hubieracrecido,dado los recursosaparentementebuenos, a la capacidadde carga, yelproyectoaúnnosepuedeconsiderarunéxito.
2. Métodos
Seobtuvoelcaminodedesplazamiento.Seconsideraronlasbarrerasparalatransferenciade parásitos entre el origen y los sitios de destino. Consolidamos el conocimiento delestadoactualdeparásitosdelapoblaciónderanasverdesenelReinoUnidoatravésdeunanálisisdelosresultadosdelmuestreodevigilanciadesaludpostliberación,yelestudiodelareintroducciónenelSitio1,yvíabibliografía.Seactualizólarevisióndelabibliografíadeparásitosyagentesnoinfecciosos,llevadaacaboen2003-05porelprimerdesplazamiento.Si lasbarrerasestuvieranpresentes,planearíamosconsiderarelorigenyeldestinode lasamenazadatravésdeunanálisisderiesgodeenfermedades,utilizandoelmétododescritopor Sainsbury y Vaughan-Higgins (2012). Analizamos transporte, portadores, población yamenazaszoonóticascomoapropiadas.Una vez que se ha completado el análisis de riesgo de enfermedades, y asumiendo quealgunaformadedesplazamientoseconsideraviable,unprotocolodetalladodeDMRPRHSparamantener lasaludybienestarde lasranasverdesyotrosanimales,ymonitorear lasconsecuencias del desplazamiento, se deben tener en cuenta y ser aprobadas. Esteprotocolo incluye guías sobremanejo, cuarentena,métodos de examinación de la salud,opcionesterapéuticasymétodosdeexaminaciónpatológica.
3. Resultados
3.1CaminodedesplazamientoEl desplazamiento propuesto implica el sitio de inicio para que las ranas verdes seandesplazadas, utilizando técnicas similares a aquellas que se utilizaron en el 2013 (Baker,2014). Se tomarán los huevos del Sitio 1, entonces los renacuajos pueden crecer bajoprotección,condicionesdecautiverioenelSitio/s3. Lametamorfosis/ranitas resultantesseránliberadasdosotresmesesdespuésenelsitiosecundariodereintroducción(Sitio1),el cualestáen lamismaregiónqueel sitioprimario. El sitio2esdondeexistió laúltima
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
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poblaciónsilvestreconfirmadaderanasverdesdeCladenorteñasenelReinoUnido,antesdesuextinciónenlosaños90,ylareintroducciónsubsecuenteenelSitio1.Nohayregistrossobreenfermedadesdeanfibiosenelsitiodereintroducciónsecundaria,oencualquieradelasposiblessedesdesitiodeinicio.Paramásdetallessobreelprocesodelsitiodeinicio,porfavorveael informedelsitiodeinicio(Apéndice1).LossitiosactualesdelsitiodeiniciopropuestosestándetalladosenlaTabla7.Los huevos de rana van a eclosionar en contenedores de plástico con agua corrientecombinada agua de estanques del lugar de colección. A las 2 o 3 semanas de edad, losrenacuajos serán transferidos a estanques artificiales exteriores (dependiendo del lugar),conteniendolamismaaguaqueseutilizóparaloshuevos,peroademásdetenervegetaciónacuáticadelsitiodonante,proporcionandocoberturayalimento.Lasranitastransformadasserán liberadas en el Sitio 2. Las ubicaciones del sitio de inicio aún están por serdeterminadasypuedeincluirmásdeunlugar.Tabla7:Lugarespotencialesparaestanquesartificialesventajosos.Sitio Distancia* Comentario Lugar 1 x km Los estanques deben estar ubicados en el exterior,
posiblemente en un túnel poli vinílico. Este lugar aloja aves y mamíferos, pero no anfibios, reptiles o peces.
Lugar 2 x km Este zoológico no aloja a otros anfibios. Las opciones para el sitio de inicio dentro del zoológico incluyen un área con una mesa para preparar la comida y /o un jardín privado.
Lugar 3 x km El jardín privado de un tasador contratado será utilizado con bandejas plásticas cubiertas con tapas enmalladas.
Lugar 4 x km Esta área de pradera abierta al lado del segundo sitio de introducción propuesto es cercada de público y utilizará bandejas plásticas cubiertas con tapas enmalladas para el sitio de inicio.
*Distanciadelsitioprimariodereintroducción.
3.2 Definición y determinación de amenazas para translocaciones a la naturaleza enInglaterra
Conelfindedeterminarquegruposdeamenazassonimportantesparaundesplazamientoa la naturaleza, debemos entender el rol de las barreras geográficas y ecológicas en lapropagación de los anfibios y sus parásitos entre los 3 sitios; sitio 1, el sitio actual de lapoblaciónderanasverdes,ysitio2,elsegundositioparaeldesplazamientoysitio/s3,el
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sitio de inicio. Esto es porque las enfermedades que surgen como consecuencia de lainteracciónentreportadoresprimitivos yparásitos ajenos sonprobablementeunamayoramenaza para las poblaciones desplazadas y las poblaciones receptoras al destino(SainsburyyVaughan-Higgins2012).Dondenohaybarrerasecológicasogeográficasparaanfibios y para la propagación de parásitos de anfibios, las amenazas de interésprobablemente podrían ser limitadas a transporte, portadores, población y gruposzoonóticoscomolodefinióSainsburyyVaughan-Higgins(2012).Silasbarrerassecruzan,hayunpotencialparaelorigenydestinodelasamenazasqueprovocanlasenfermedades.La sección siguiente explorará la validez de evidencia para la existencia de barrerasecológicasygeográficasentrepoblacionesdeanfibiosenlossitios1,2y3.3.2.1Definiciónderiesgos Esprobablequeelriesgodeencontrarparásitosenlasranasverdes,encaminoaldestinode liberación, durante un desplazamiento en Inglaterra sea bajo; sin embargo, estodependedelametodologíaylasmedidasdebioseguridadenelprocedimientodelsitiodeinicio.Estosriesgosdetrasporte,puedenseragentesinfecciososonoinfecciosos.Lapoblaciónderiesgofuedefinidacomoagentesinfecciososynoinfecciosos,presentesenel origen y sitios de destino que potencialmente tienen un impacto en la cantidad depoblacióneneldestino.Los portadores de riesgos fueron definidos como aquellos organismos comensales quepodríanafectar lasaluddelasranasverdes,comoresultadodeloscambiosdelarelaciónhuésped-parásito-medioambiente, comoaumentar ladensidaddelhuéspedel cualactúacomoalgoquecausaestrés,encargadodereducirlacompetenciainmuneyeldesarrollodeenfermedad.Losriesgoszoonóticosfuerondefinidosconagentesinfecciosospotencialesderanasverdesquepodríangenerarunriesgozoonótico.AlrealizartranslocacionesalanaturalezadentrodeInglaterra,enteoríadeberíahaberunareducción considerableenel riesgodeenfermedades infecciosas cuando se compara condesplazamientos cautiverio-naturaleza o desplazamientos naturaleza-naturaleza a lo largodelafronterainternacional.Previamentesehanutilizadoestrategiasdetranslocacionesalanaturalezasimilaresalasqueseusanconlasculebraslisas(Coronellaaustriaca)(MastersySainsbury2011);estasculebraslisasfuerondesplazadasdeunossitiosenDorsetaotrossitiossecosdepáramosalsurdeInglaterra.3.3Investigacióndebarrerasgeográficasyecológicasentrelaspoblacionesdeanfibios.Puesto que las translocaciones propuestas implicarían el movimiento de ranas verdessalvajes entre tres ubicaciones, sólo algunos kilómetros de distancia entre ellos, laprobabilidaddequecualquierorigendeparásitos(porelcuallasranasdesplazadaspuedenfuncionar como portadoras), ser exóticos al destino, se presume que es bajo. A
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continuacióndeesto,todoslosagentesinfecciososenelorigentambiénestaránpresenteseneldestino,particularmentedesdeque las ranasverdeshansidopresentadasel sitio1poruna cantidadde años, entonces la poblacióndeparásitos entre los sitios geográficospróximos,puedenserconsideradosadyacentes,dadoelmovimientolibredelosanfibiosenelReinoUnido.Sinlossistemasencursoactivosdevigilanciadesaludpararánidosyotrasfamiliasdeanfibios,nohayinformaciónsuficientedisponiblesobrequéparásitosalbergannaturalmentelosanfibiossilvestres,ysihaydiferenciasentrelaspoblacionesconrespectoa lacargaparasitariaosuscepas. Lasdificultadesparadeterminar lacomposiciónde losparásitos de ranas verdes silvestres están compuestas mayormente por la falta desensibilidadydepruebasdediagnósticoespecíficas;sinembargo,lasranasverdesyotrosanfibios residentes del sitio 1, han sido extensivamente examinados a lo largo de losintentos de reintroducción. Con el fin de investigar más a fondo las suposiciones enrelaciónalasbarrerasdecruce,seinvestigóenlabibliografíayseconsultóconexpertos.3.3.1DistribucióndeanfibiosalolargodeInglaterra,ecologíaycomportamiento.El ReinoUnido tiene siete especies nativas de anfibios, el clado de ranas verdes norteña(Pelophylax, originalmente llamada Rama lessonae), el sapo corredor (Epidalea,originalmentellamadoBufocalamita),eltritóncrestado(Trituruscristatus),elsapocomún(Bufobufo),el tritóncomún(Lossotriton,originalmente llamadoTriturusvulgaris), la ranacomún(Ranatemporaria),yeltritónpalmeado(Lissotriton,originalmentellamadoTriturushelveticus)(Bakeretal2011). Todas lasespeciesademásdel sapocorredoryel cladoderanasverdesnorteñas,tienenunaextensadistribuciónalolargodeInglaterra(Bakeretal2011).Además,existeunaespeciedetritóndesconocida(eltritónalpino,Triturusalpestris);tresespeciesderanasverdesodecobredesconocidas (ranaeuropea (Pelophylaxridibundus),clado de ranas verdes sureñas (Pelophylax lessonae) y la rana comestible (Pelophylaxesculentus);ycuatrootrasespeciesdeanfibiosdesconocida(sapobombina(Bombinaspp.),sapopartero(Alytesobstetricans), laranaafricanadeuñas(Xenopus laevis)y laranitadeSanAntonio(Hylaarborea).HaypocasbarrerasconocidasparalasespeciesdeanfibiosalolargodeInglaterra.Dadalaextensión de la naturaleza de la mayoría de los anfibios británicos, y el hecho que secongreguenenestanquespara reproducirse,hayque suponerquedonde laspoblacionescomparten los sitios para la reproducción, entonces hay una alta probabilidad detransmisióndeagentesinfecciosos. Lasranasysapossoncapacesdecolonizarestanquesdentrode1kmdesussitiosdereproducción,mientrasque los tritonespuedencolonizarsitioshasta500mt(Bakeretal2011). Para lamayoríade losanfibios,elloshabitanáreascercanasasu lugaroriginal (verTabla8);sinembargo,unpequeñonúmerode individuos(menosdel1%)viajaránmáslejos,hastaalgunoskilómetrosmáslejos(Bakeretal2011).
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Tabla8:Limitesdemigracióndeanfibiosydistanciaentreestanques(deBakeretal2011)LímitesdemigraciónydistanciaentreestanquesDistanciasuperiordemigracióndeespeciesDistanciamáximarecomendadaentreestanquesTritóncrestado1300m500mTritóncomún1000m500mSapocomún5000m1000mSapocorredor>2000m500mRanacomún2000m1000mRanaverdecentroeuropea1000m300mEl informedelesquemadeanfibiosyreptilesentre2007y2012(WilkinsonyArnell2013)encontróqueenInglaterracentral(incluyendoNorfolk),laocupacióntotaldelosestanquesporanfibioseradeun86%,conlarepresentacióndetodoslosanfibiossilvestres,apartedelareintroduccióndelaspoblacionesdelsapocorredorydelaranaverdecentroeuropea.Dadoslosresultadosdelosestudiosdetalladosmásarriba,laevidenciaparecemostrarquees poco probable que hayan mayores barreras ecológicas y/o geográficas entre laspoblacionesdeanfibiosysusparásitosenInglaterra;y,porlotanto,elorigenydestinodelosriesgosprobablementenoexistaeneldesplazamientodecortadistancia,sientoprevistaenelcasoactual. Sinembargo, laevidenciaeslimitadayelestadoactualdeenfermedadparalosanfibiosdelReinoUnidonoescompletamenteconocido,yporlotantolapresenciadeparásitosnuevosenalgunaspoblacionesnopuedeserdescontada.Lasranasverdesenel Sitio1 son recientemente reintroducidas yhanestadoen cuarentenaelmayor tiempoposible; y, por lo tanto,puedenestarpresentesagentes infecciososnuevosquehan sidoimportados con ellos desde Suecia. Cualquier agente nuevo presente no han causado laenfermedadenanfibiossilvestresenlamedidaquesomosconscientes,peroestaevidenciaesdifícildereunir(presentadoporSainsburyetal)ylosbrotesdeenfermedades,debidoalaintroduccióndeagentesinfecciosos,puedetomardécadasendesarrollarse(Sainsburyetal 2008). Nuestro entendimiento de la presencia de agentes nuevos y su patogenicidadmejorará una vez que la población de ranas verdes en el sitio 1, hayan alcanzado lacapacidaddecargaporquehabrámásoportunidadpara la transmisióndeparásitosentreranas verdes y anfibios silvestres y viceversa (presentadopor Sainsburyet al). Mientrastanto, la vigilancia de la salud post liberación para monitorear enfermedades, seráextremadamente importante detectar enfermedades emergentes en el sitio dereintroducciónexistente,despuésdecualquierdesplazamiento.
3.4 Listaderiesgosidentificados
Lossiguientesriesgosinfecciososfueronidentificadosparaseranalizados:• Riesgodelapoblación• RiesgodelapoblaciónRanavirus
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• Riesgo de la población Amphibiocystidium ranae (originalmente Dermocystidiumranae)yotrosparásitosmesomicetozoos
• RiesgodelapoblaciónRanidherpesvirus• RiesgodelosportadoresBacteria• Riesgo de los portadores y de la población: agentes infecciosos asociados con la
enfermedadprovocadoporlaaltadensidaddelmanejoderanasverdesparaelsitiodeinicio.
• Otrosagentesinfecciososdeposiblepreocupaciónfuturao Batrachochytriumsalamandrivorans
AcontinuaciónseresumeunAnálisisdetalladoderiesgodeenfermedadesparatodos losagentesmencionadosanteriormente,apartede losagentes infecciosos loscualespodríanprovocar enfermedades asociadas con un manejo intensivo. Estos agentes infecciosospuedenseragentespresentesenelmedioambientey/oportadoresporranasverdes. Seespera que estos provoquen enfermedades secundarias a entidades estresantes, yrepresenten un riesgo de enfermedades esporádicas dependientes del manejo. Por lotanto,laestimaciónderiesgoyelmanejoderiesgodescritoporlosportadoresderiesgo,seesperaquelabacteriacubraesteriesgoyquenosehayaredactadounDRAseparado.Además, consideramos lo agentes infecciosos potencialmente nuevos, los que puedenhaber sido introducidos con las ranas verdes desde Suecia al sitio de reintroducción 1, ypuedenhabersidotransferidosentresitiosconestedesplazamiento.Lostripanosomátidosfueron descartados como riesgo, porque una investigación en la red de Ciencia no pudodemostrarningúninformedelaenfermedadasociadaaesteparásito,ynohaymuestrasdelaenfermedadasociadasaellasyquehayansido informadasdelSitio1. Sinembargo, laenfermedad debido a los tripanosomátidos no puede ser completamente descartada,porquehasidodifícildetectarlaenfermedadylamuertedelasranasverdesenelSitio1dereintroducción.LosprotozoosopalíneosasimismonohansidodetectadosenasociaciónconlaenfermedadderanasverdesenelSitio1,yelriesgodeenfermedadasociadaconestosagentes se considera insignificante. A través de PRHSdiligentes y detallados, seguido deotros desplazamientos de ranas verdes, podemos continuar haciendo esfuerzos paradetectarsiestasenfermedadespuedanocurrirdebidoaestosagentesinfecciososnuevos.
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5. PatógenosindividualesdeDras.
5.1Riesgosdelapoblación:BatrachochytriumdendrobatidisJustificacióndeRiesgosBatrachochytrium dendrobatidis (de aquí en adelante conocido como Bd) ha sidoidentificadocomounfactorcausalenladisminuciónyextincióndenumerosaspoblacionesdeanfibiosanivelmundial(Bergeretal1998;Lipsetal2006;Chengetal2011;Heatwole2013). Clínicamente, los anfibios afectadosmuestran la hiperqueratosis de la piel con elcambiodepielenalgunasespecies(Bergeretal2005),ylaslarvaspuedendesarrollarpiezasbucales deformes. La capacidad de osmorregulación de la epidermis se interrumpe,provocandountrastornohidroelectrolíticoydeshidratación,seguidodelamuerte(Voylesetal2009;Marcumetal2010).Lapatogénesisvaríaenambasespecies,conalgunosquesonasintomáticamente portadores (Walker et al 2010) y además con la virulencia de laaislamiento(Farreretal2011).Alafecha,lainfecciónBdhasidoinformadaen53especiesdeanfibiosenEuropa(www.bd-maps.eu).ElBdsedetectóporprimeravezenanfibiosdelReinoUnidoen2004,enlaintroduccióndeespeciesdeLitobatescatesbeianusdesconocidas(ranatorodeNorteamérica),ylasmuertessubsecuentesporquitridiomicosishansidovistasensaposcomunesenlanaturaleza,ylossapos corredores (Epidalea calamita) reproducidos para la reintroducción (Garner et al2009;Smith2014).EnAlemanialaranacomestible,génerodelasPelophylax,fuetambiénafectadoporlaquitridiomicosis(Mutschmannetal2007).Las encuestas a nivel nacional para Bd, llevadas a cabo por el Instituto de Zoología,estudiandoun totalde8882anfibiosen2008 (125)yen2011 (122sitios)mostraronunaextensióngeneralizadaperoirregulardeBdsincambiosalolargodeltiempo(Smith,2014).Laencuestatambiénrevelóquediferentesespeciesdeanfibiostienendiferentesrangosdeprevalencia,yestofueademásconfundidoporlaépocadelaño.LaprevalenciadeBdfuefuertementeasociadaconlepresenciadeespeciesnonativas,entoncessepredijoqueenlossitiosdereintroducciónderanasverdes,dondenosehabíanvistoespeciesnonativas,elriesgo de exposición de Bd debería ser bajo. Sin embargo, los clados de ranas verdesjuvenilesnonativas sureñas, fueronpositivamenteasociados con infecciones (aunque losadultos no lo fueron), sugiriendo que otros miembros de este género pueden ser
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igualmente vulnerables a la infección (Pelophylax ridibundus, la rana europea no nativa,también se probó positivo en algunos sitios) (Smith, 2014). En el 2014, Smith tambiénobservó infecciones experimentales las que sugirieron que el Bd era poco probable queprovoca una alta mortalidad en los tritones palmeados, en tritones comunes y ranascomunes,peroquepodríatenerunefectonegativoacortoplazoenpoblacionesdesaposcomunes,dondeseencontrabanlosindividualesmásvulnerables,deaquellosexaminados,alainfecciónconBd.ElcladoderanasverdesnorteñasenlaúnicaespeciesilvestreenelReinoUnidoqueseconozcaquenohayasidoinfectadaconBd;sinembargo,estasespeciesnofueronexaminadasduranteestasencuestas.Las imágenesAyBmuestran ladistribuciónde lossitiosdepruebay los resultadosde laprueba de Bb en 2008 y 2011. No se encontraron anfibios con Bd positivo en AngliaOrientaldurantelasencuestas,sugiriendoquelaprevalenciadeestasáreasesmuybaja.Antesdelaprimerareintroducciónderanasverdesen2004,seexaminaronalasespeciessiguientesenelsitiodereintroducción(sitio1)paraversiteníanBdusandoPCR:12adultosdetritonescomunesy24larvas,12adultosdetritonescrestadosy49larvas;6adultosderanascomunesy68larvas;y159larvasdesaposcomunes. Enadición,seexaminaron14ranas toros adultas de otro sitio de Sudeste de Inglaterra, y 5 adultos, 29 juveniles y 72larvasderanasverdesdeSuecia. ElPCRparadetectarelhongoquítrido fuenegativoentodas lasespeciesdeanfibios silvestresdelReinoUnidoque fueronexaminadas, yen lasranas verdes de Suecia. Dos de las 14 ranas toros tuvieron resultados positivos al hongoquítridoporPCR.LasranastorosconBdpositivo,fueronunapreocupaciónparticular,porqueestasespeciessonextremadamenteexitosasalcolonizarterrenoseingerirotrosanfibios(Adams2002),yhansidoimplicadoscomoportadoresdequítrido,responsablesdesupropagaciónenvariospaíses(Hanselmannetal2004,Daszaketal2004).Sinembargo,secreequelasranastorohansidoexitosamenteerradicadasdeInglaterra.Se han realizadomuestras en curso,muestreo y pruebas para detectar Bd a lo largo delperíodo de reintroducción de ranas verdes, ambas en ranas verdes antes de habersedesplazado,yenanfibios localesenelsitiode liberación;nosehanencontradomuestrasactualesdetenerBdpositivoenPCRparaanfibiossilvestresoranasverdes.En2006y2007lacoleccióndehisopossecosdetodaslaslesionesdetodaslasespeciesexaminadasenelsitiode reintroducción, y examinadasporPCRparadetectarBd, fueronnegativasparaelhongo. A partir del 2008, los hisopos secos recolectados de la piel inguinal de todas lasranasysapos(aquellosconysinlesiones)ydelesionestritoneserannegativasparaelBdenPCR.Pararesumir,laextensióndelBdenelReinoUnidoescapazdeinfectarunagrancantidaddeespeciesdeanfibiosincluyendolasranasverdes.Lasranasverdes,originalesdeSuecia,ysubsecuentementeexaminadasenelprimersitiodereintroducción,nohanprobadoserpositivas,ytampocosecuentaconanfibiossilvestresenestesitiodeliberación.Evidencia
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considerabledeestarevisiónparaBdenelprimersitiodereintroducción,sugierequelasranas verdes desplazadas al segundo sitio serán inmunológicamente nulas al hongo. LasusceptibilidaddelasranasenelgéneroPelophylaxalaenfermedaddeBd,noseentiendecompletamente, y se sabe que ocurren diferencias en la susceptibilidad de las especies(Stockwelletal2010),perolaenfermedadinducidaporBdnopuedeserdescontada.EvaluacióndeexposiciónLasranasverdesdesplazadasalsitio2,seránexpuestasaBdatravésdelcontactodirectoconlosanfibiosinfectadosy/oconlosparásitosqueseencuentranenalagua.Existeunabaja probabilidad de esta exposición a corto plazo (diez años) porque el Bd no ha sidodetectado en el sitio 2 de reintroducción, y no se ha encontrado en ubicacionesgeográficamentecercanas.Alargoplazo,elriesgodeexposiciónesaltoyaquehayunaaltaprobabilidad de la propagación del Bd en el sitio de reintroducción. Las imágenes A y BmuestranladistribucióndelBdenanfibiosenelReinoUnido(Smith,2014),ylaImagenCmuestraladistribuciónenEuropayenReinoUnido(Smith,2014).La probabilidad de diseminación a través del desplazamiento de ranas verdes es alta,debido a la resistencia y movilidad natural de la zoospora de Bd en medio ambientesacuáticos; las zoosporasdeBdnadan librementeenel agua (Jameset al 2006), comoenestanquesenlossitios1y2.Engeneral,laprobabilidaddeexposiciónydiseminaciónenuncortoplazoesbaja,yaumentaalargoplazo.
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
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ImagenA.Distribuciónde lossitiosexaminadosenelReinoUnidoen2008(n=125).Sitiosde loscuales al menos 26 muestras fueron recolectadas en primavera y verano, y se representan portriángulos (n = 69). Sitios donde solo se recolectaron pocasmuestras, y están representadas porcírculos (n = 56). En ambos casos, los sitios positivos (n = 25) se muestran en rojo, y los sitiosnegativos(n=100)semuestranenazul.(Smith,2014).
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ImagenB.Distribuciónde lossitiosexaminadosenelReinoUnidoen2011(n=122).Sitiosde loscualesalmenosserecolectaron26muestrasyserepresentanportriángulos(n=91).Sitiosdondesoloserecolectaronpocasmuestras,yestánrepresentadasporcírculos (n=31).Enamboscasos,lossitiospositivos(n=14)semuestranenrojo,ylossitiosnegativos(n=108)semuestranenazul.(Smith,2014).
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ImagenC.LadistribucióndeBdenEuropa(deSmith2014)EvaluacióndeconsecuenciaLaprobabilidaddeenfermedadenranasverdes,reintroducidasenelsitio2enuncorto(10años)ylargoplazoesenpromedio,porquelasusceptibilidaddelasranasverdesesincierta.LamuertetotalyloseventosdeextinciónlocalhansidoprovocadosporBd,yteóricamenteeste hongo puede ser capaz de provocar una epidemia en ranas verdes en el sitio deliberaciónysercapazdeprovocarunfalloeneldesplazamiento.Eldesplazamientoderanasverdesalsitiopuedealterarladinámicadeportador-patógeno,yconduciraunbrotedeenfermedaddeBdenanfibiossilvestresinsitu,particularmentealossapossilvestresmásvulnerables.Laprobabilidaddeestoscambiosportador-patógenocomo consecuencia de este desplazamiento específico, llevando a consecuencias medioambientalesbiológicas,seconsideramuybajo.
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EstimaciónderiesgosElriesgoestimadodeexposicióndelasranasverdesdesplazadasesbajoenelcortoplazoyalto en un largo plazo, el riesgo de las consecuencias de las enfermedades se considerapromedio. El riesgo general de enfermedad y el fallo del desplazamiento se consideranpromedio.ManejoderiesgosCon el propósito de minimizar el riesgo del desplazamiento del Bd al nuevo sitio deliberación,odeexponeralasranasverdesdesplazadasaestehongo,sepuedecolocarunacerca de cuarentena alrededor del sitio de reintroducción, e implementar medidas debioseguridadporlosprimerosañosdelareintroducción,yrevisarlosdespuésdedosaños.La prueba de los anfibios en el sitio de liberación, y las ranas verdes destinadas aldesplazamientoporBd,aumentaránuestroentendimientodelriesgodeenfermedadesdeesteagente.Estapruebatambiénsepuedellevaracaboenjuvenilesyenelaguaelsitiodeinicio, porque puede permitir la detección temprana de Bd y facilitar un tratamientopreventivoparaelBdsiesqueelhongocausaraalgunaenfermedad.Las muestras de piel por qPCR detecta la presencia de Bd (Hyatt et al 2007), y el PCRpositivo de anfibios con evidencia histopatológica de Bd y/o signos de enfermedadconfirmanlainfeccióny/oenfermedad.Labioseguridadestrictaylasmedidasdecuarentenadeberíaserllevadaacaboenelsitiodeinicio(Sitio3),paraasegurarquelainfeccióndeanfibiossilvestresenestesitioositiosen losalrededoresnosepropaguea las ranitasverdes,yque la infecciónsepropagueelsitiodereintroducción.Sedebeprocurarproporcionaradecuadamenteloscuartelesdelasranitas,yminimizartodoslosagentesdeestrésquepudierancausarlainmunosupresión,ypor consiguiente, facilitar la precipitación de la enfermedad. Las poblaciones de ranasverdesyotrosanfibiosenel sitiode liberacióndebensometersemonitoreode la saludalargo plazo y amonitoreos en la población, y toda evidencia de disminución debería serinvestigadaprontamente.ReferenciasdeBd:
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5.2Riesgosdelapoblación:RanavirusJustificaciónderiesgosLos ranavirus son virus de ADN doble trenzado de la familia Iridovirus con distribuciónglobal (Schloegel et al 2010). Una cantidad de ranavirus es capaz de infectar anfibios,incluyendo Virus de la rana tipo 3 (FV3), el virus de la salamandra tigre o Ambystomatigrinum(ATV)ymuchosotros.Elranavirushasidoaisladoenasociaciónconuneventodemortalidad masivo de vida libre, Pelophylax spp. (Ariel et al 2009) en Dinamarca. Unterratenientereportó1200ranascomestibles (Pelophylaxesculentus), lascualesencontrómuerta sobre un fin de semana desde su estanque con casi ninguna rana viva restantedespuésde lamuertemasiva (Arieletal2009). Estas ranas seencontraronmuertasa lolargo del borde del estanque, mostrando ningún síntoma clínico obvio. Los peces einvertebradosdeláreasevieronsaludables,ynohahabidocambiosrecientesenelmanejodelestanque;sinembargo,lastemperaturaseraninusualmentealtasantesyduranteestebrote. Se examinaron dos especímenes de este evento de mortalidad masivo, y lasmuestras de ambos produjeron ranavirus aislados. La experimentaciónmedio ambientalfue negativa de contaminantes, aceites y pesticidas. Las altas densidades de la rana senotaron en el estanque antes de este brote, la temperatura (aire y agua) era alta y sinsombradisponibleparalasranas.Estosfactorespuedenactuarcomoagentesestresantesenestecaso,posibilitandounaprecipitaciónypropagaciónde laenfermedadmásrápido.LasespeciesPelophylaxparecenservulnerablesa laenfermedaddel ranavirus (Fijanetal1991,Arieletal2009,Kiketal2011).Elranavirusqueinfectaalosanfibioseuropeossongeneralmente en el grupo FV3 (Hyatt et al 2000; Balseiro et al 2009), sin embargo espreocupante, se detectó una nueva y reciente especie, comúnmente conocida como virussapopartero (CMTV),el cual seoriginóenEspaña (Balseiroetal2009)yquepudohaberbrotadoenHolandayasuvezserresponsabledelamuertemasivadelosPelophylaxspp.,incluyendo las ranasverdes (Kiketal2011), sugiriendo lapropagacióndeesta cepa. Eneste brote, se encontraron más de 1000 metamorfos incompletos y ranas comestibles yranasverdesmuertas;algunasdelascualesmostraronhemorragiacutáneayedemas(Kiket al 2011). De ocho ranas adultas examinadas post mortem, todas tenían ranaviruspositivoenPCR(yBdnegativo),yCMTVfueelranavirusinvolucradomásprobable(Kiketal2011). LacomunidadanfibiacolapsaenmúltiplesespeciesdebidoaqueelCMTVhasidorecientemente informado en España (Price et al 2014); este ranavirus aún no se haencontradoenelReinoUnido.EnelReinoUnido, laenfermedadrelacionadaal ranavirus,provocódisminuciones localesenranascomunes(Ranatemporaria)durante1980s(Teacheretal2010),ensaposcomunes(Bufobufo),yentritonescomunes(Lissotritonvulgaris)(Cunninghametal1996;Hyattetal2000;DuffusyCunningham2010;Teacheretal2010).EnEuropa,elranavirusparecesermenos específico en el portador que en otras áreas delmundo (Cunninghamet al 2007;Balseiroetal2010).EnlaimagenD,semuestraladistribucióndelranavirusenelReinoUnidohastael2010(lafechadisponiblemásreciente).
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ImagenD:Distribucióndelranavirusen1992,1997,2002y2010.Lospuntosrojosindicanladetecciónderanaviruspositiva;lospuntosazulesindicanlaexaminacióndondenoseencontróenranavirus.Antes de la reintroducción inicial de las ranas verdes, como parte del DRA original de2003/05,laexaminaciónparaelranavirussellevabaacaboenranasverdessuecas(PCRycultivo viral) y enespeciesdel ReinoUnidoenel sitio de reintroducción (Sitio 1) (Cultivoviral). Todas lasmuestrasdelosanfibiossilvestresmostraronsernegativos;sinembargo,se observó un efecto citopático limitado en cultivos inoculados con varias muestras deranastoro,peronoseobservóningúnvirusdespuésdelaexaminaciónmicroscópicadeloscultivos concentrados, y el efecto citopático no fue visto enpasajes subsecuentes.No sedetectóelranavirusenranasverdessuecasniporpruebasdePCRocultivos.Sinembargo,elnúmerode ranasverdesque seobtienenporelmuestreodeSuecia fuemuypequeño(n=32 por PCR) (debido a la naturaleza invasiva y letal de las muestras que estabandisponibles en ese momento), y por lo tanto, el nivel de confidencialidad en estosresultadosfuebajo.ParalospropósitosdelDRAinicial,sesupusoqueelranavirusestabapresenteenel sitiode liberación (Sitio1), oen los alrededoresdeeste sitio; yaquea lolargo del ReinoUnido, se pensaba que el ranavirus era endémico, o que en un futuro losería.
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Previo a la reintroducción en el sitio 1, se examinaron dos tritones comunes; estasmostraron inclusiones intraeritrocitarias rojizas, similares a las que se observaron en lasinfecciones de ranavirus en otras especies de anfibios (Gray et al 2009). El PCR pararanavirussellevóacaboconmuestrasdepieldetodoslosanimalesconlesionescutáneas,lasqueseexaminaronenel sitiodereintroduccióndesdeel2011enadelanteduranteelPRHS,ynosedetectóningúnvirus.Desde que los ranavirus son endémicos en el Reino Unido, son patógenos en el géneroPelophylax y está asociado con la mortalidadmasiva, fueron considerados un riego a lapoblación.EvaluacióndeexposiciónEl ranavirus se puede trasmitir por contacto directo e indirecto, y posiblemente portransmisiónvertical(Duffusetal2008).Lasranasverdesdesplazadasalsitio2,podríanserexpuestasaBdatravésdelcontactodirectoconlosanfibiosinfectadosy/oconlosparásitosqueseencuentranenalagua.Existeunamedianaprobabilidaddeestaexposiciónacortoplazo(diezaños),porquelosranavirusnohansidodetectadosenelsitiodereintroducción,pero han sido en ubicaciones geográficamente cercanas. A largo plazo, el riesgo deexposicióneinfecciónesalto,yaquehayunaaltaprobabilidaddepropagaciónderanavirusenelsitiodereintroducción,siesqueyanoestápresente.Laprobabilidaddediseminaciónatravésderanasverdesdesplazadasesbajaenuncortoplazo,desdequelapoblaciónderanasverdesenelsitio1nuncahandemostradoserpositivasaestosvirus,peroenunlargoplazo(másde10años)esaltoporquelosranavirussonmáspropensosapropagarsealSitio2. En general, la probabilidadde exposición y diseminación enun corto plazo es baja, yaumentaalargoplazo.EvaluacióndeconsecuenciaLaprobabilidaddeenfermedadenranasverdesreintroducidasenelsitio2enuncorto(10años) y largo plazo esmedia, porque la bibliografía sugiere que la susceptibilidad de lasranas verdes a los ranaviruses alta. Lasmuertesmasivashan sidoasociadas con variosranavirus en la especie Pelophylax. (Ariel et al 2009; Fijan et al 1991, Kik et al 2011), yteóricamente estos virus podrían ser capaces de provocar una epidemia en el sitio deliberaciónyunfalloeneldesplazamiento.Eldesplazamientoderanasverdesalsitiopuedealterarladinámicadeportador-patógeno,yconduciraunbrotedeenfermedadranaviralenanfibiossilvestresinsitu;sinembargo,laprobabilidad de estos cambios portador-patógeno, que conducen a importantesconsecuenciasambientalesobiológicasseconsideramuybaja,porquelosranavirussehanextendidoenInglaterra.EstimaciónderiesgosLaprobabilidaddeexposición,infecciónydiseminaciónesbajaenuncortoplazoyaltaenunlargoplazo,ylaprobabilidaddefallarenlosdesplazamientosesmediaenuncortoplazo
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yaltaenunlargoplazo. Elriesgoengeneraldelaenfermedadporranavirusyelfallodereintroducciónesalto.ManejoderiesgosLaenfermedadranaviralesdiagnosticadadespuésdelamuerteporunaexaminaciónpostmórtem,ylapresenciadelesiones(hemorragiasyulcerasenlapiel)juntoconPCRpositivo,inmunihistoquímica (IHC) de muestras post mórtem, aislamiento de virus o microscopíaelectrónica. En losanfibiosvivos, lasmuestrasdepiel sepuedentomarporPCR,y sehaintentado la serología; sinembargo, los resultadosdeestosmétodosnoson fiables,y lasmuestras invasivas como los cortadores, pueden dar resultados más exactos (Grat et al2009),perolaexaminacióndemuestrasderiñonesehígadoporPCR,eselmétodoqueserecomiendacuandoseaposible(SPricepersonalcommunication;AACunninghampersonalcommunication).Conelpropósitodeminimizarel riesgodeexponera las ranasverdesdesplazadasaestevirushastaquelapoblacióntengaunaoportunidadparaestablecerse,sepuedecolocarunacerca de cuarentena alrededor del sitio de reintroducción, e implementar medidas debioseguridadporlosprimerosañosdelareintroducción,yrevisarlosdespuésdedosotresaños. El estudio de los anfibios en el sitio de liberación y en el Sitio 3 (o áreas en losalrededores)porranavirus,sepuedellevaracaboantesquecomienceeldesplazamiento,yladecisiónsobrecómoprocederconlareintroducciónenbaseaesto.Esteestudiotambiénsepuedellevaracaboeljuvenilesyenelaguaenelsitiodeinicio,porquepuedepermitirunadeteccióntempranayelcesedelareintroducciónsíqueessedetectara.Silosanfibiosdel Sitio 3 son positivos, se debería escoger un nuevo sitio de inicio. Una estrategiaalternativa para reducir el riesgo de contraer la enfermedad del ranavirus puede serliberadaalasranasverdesensitiosinanfibiosexistentes.Labioseguridadestrictaylasmedidasdecuarentenadeberíaserllevadaacaboenelsitiodeinicio(Sitio3),paraasegurarquelainfecciónpotencialdeanfibiossilvestresenestesitioo sitios en los alrededores no se propague a las ranitas verdes, y que la infección sepropague el sitio de reintroducción. Se debe procurar proporcionar adecuadamente loscuarteles de las ranitas, yminimizar todos los agentes de estrés que pudieran causar lainmunosupresión, y por consiguiente, facilitar la precipitación de la enfermedad. Laspoblaciones de ranas verdes y otros anfibios en el sitio de liberación deben someterse amonitoreos de salud a largo plazo y amonitoreos en la población, y toda evidencia dedisminucióndeberíaserinvestigadaprontamente.ReferenciasderanavirusAriel,E.,Kielgast,J.,Svart,H.E.,Larsen,K.,Tapiovaara,H.,Jensen,B.B.andHolopainen,R.(2009). Ranavirus inwild edible frogsPelophylax kl. esculentus inDenmark. DiseasesofAquaticOrganisms85:7-14.Balseiro,A.,Dalton,K.P.,delCerro,A.,Marquez,I.,Cunningham,A.A.,Parra,F.,Prieto,J.M., Casais, R. (2009). Pathology, isolation andmolecular characterisation of a ranavirus
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Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
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5.3Riesgosdelapoblación:Amphibiocystidiumranae(originalmentellamadoDermocystidiumranae)yotrosparásitosmesomicetozoos
1. Justificacióndelosriesgos
Amphibiocystidium ranae (originalmente llamado Dermocystidium ranae) fue reportadoentre 1999 y 2000 en una población de ranas verdes del complejo Rana esculenta,incluyendo la Rana lessonae parental (ahora llamada Pelophylax lessonae, rana verdecentroeuropea) y sus crías híbridas Rana esculenta en Italia (Pascolini et al 2003). Esteestudioviomásdel50%dedisminuciónenlapoblacióndePelophylaxlessonaeen1999,yencontróquistesdérmicos(elevacioneshemisféricasentre3-5mmendiámetroenelestratoesponjoso, algunos de los cuales se ulceraron) infectados con mesomicetozoos,Dermocystidiumrana,particularmenteenelvientredeestasranas.En1999,seinfectaronel45.5% de las ranas (n=22),mientras que en el año 2000, se infectó el 5.4% de las ranas(n=21).Estaprevalencia fuemásaltapara laRanaesculenta, lacualmostróunrangodel14.3% de infección en 1999 (n=21), y un 17.2% en el año 2000 (n=29); esta poblaciónpermanece estable. Sin embargo, estas ranas fueron, de lo contrario, aparentementesaludables,ypudieronalbergar la infecciónsinefectosadversosevidentes,ynosesabesiestainfecciónfueresponsableporladisminucióndelapoblación,sinembargoestohasidopropuesto(DiRosaandSimoncelli2007).Algunosmesomicetozoos, incluyendo aquellos del orden Ichthyophonae y Dermocystida,sonpatógenosenpeces,yenalgunoscasosviscerales,asícomolaslesionescutáneassonposibles (Rowley et al 2013). La taxonomía, la filogenia y la clasificación de las especiesAmphibiocystidiumfueinvestigadomásafondoydilucidadoporPereiraetal(2005).En 2014, Startk y Guex encontraron Amphibiocystidium ranae en tritones comunes(Lissotritonvulgaris),Pelophylaxlessonaeyranascomunes(Ranatemporaria)enHolanda.ElAmphibiocystidium,elcualprovocalesionesenlapiel,hígadoyderiñónenanfibios,juntocon parásitos Dermocystidium similares e Ichtyophonus (del cuál el último afecta a lospeces), tieneunamplio rangodeportadoresydeesporasmóvilesy resistentes, lascualespuedensertransmitidasporfómite.En 2010, Gonzalez-Hernandez et al, reportaron una infección nueva con un parasitoDermocystidium, relacionado con el Amphibiocystidium ranae en varios sitios dereproducción de tritones palmeados (Lissotriton helveticus) en Larzac, Francia. Estainfeccióndemostró laprogresiónde lesionescutáneasaextensivashemorragiasyúlcerascutáneas, el cual fue el primer informe de tal severa enfermedad por la infección porparásitosmesomicetozoos.LostritonespalmeadosdelaIsladeRumenEscocia,sonlasúnicasespeciesdeanfibiosenlaisla.Duranteelaño2000,senotaronlesionesenestostritones,yenel2008,seencontróun 63% de los tritones infectados con la especie Amphibiocystidium; todos los tritonesinfectadosteníanquistesvisibles(Wood,2014personalcommunication;Anderson2014).
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En síntesis, hay algo de evidencia en que los parásitos mesomicetozoos son capaces deprovocarconsecuenciasanivelpoblacional.Esteesciertamenteelcasoparaotrostaxones(como lospeces)yesprobablequeseaposibleparapatógenossimilaresenanfibios. Nohay información disponible para determinar si este patógeno es endémico en anfibiosbritánicos; sin embargo, se ha descubierto y asociado con la disminución del tritónpalmeado en Escocia, por lo tanto, se debería asumir que este patógeno tambiénpodríaestar presente el poblaciones de anfibios ingleses. Durante la reintroducción original deranasverdesalReinoUnidodesdeSuecia,noseencontróesteparásitoenlasranasverdessuecas. Se encontraron algunas úlceras en una de las ranas comunes en el sitio dereintroducción en 2008; sin embargo, esta rana también tenía una sanguijuela, y uncrecimiento de Pasteurella aerogenes predominante fue aislado de esta úlcera, el cualprobósernegativoparalaPCRdeBd.Unaranacomúndemostróabrasionesdermalesen2009, pero pruebas más a fondo no detectaron ningún patógeno (incluyendo A. ranae).Aúnnoseconocemuchosobre losparásitosmesomicetozoosparadeterminarelniveldeamenazaalosanfibiossilvestresingleses;sinembargo,estospuedenestarpresentesysercapacesdeprovocarenfermedadenalgunasespecies.Las ranas verdes son vulnerables a la infecciónA. ranae (Pascolini et al 2003; Startk andGuex2014),peronosesabesilaslesionesasociadasconlainfecciónestánasociadasconlamortalidad, o si estepatógenoes capazde causar disminuciones en la población. No sesabe si la población de ranas verdes en el Reino Unido es positivas a este patógeno (oasociadas a las especiesmesomicetozoos) ya que aún no han sido examinadas para estepatógeno (y la población original de donantes no fue examinada en Suecia antes de serimportadas);sinembargo,nohanhabidocasosreportadossobrelesionescutáneasduranteelprogramadereintroducciónderanasverdes,previamentevistasenasociaciónconestepatógeno. En total, se examinaron desde Suecia 2052 ranas verdes adultas, juveniles ylarvas durante el proceso de desplazamiento, y no se detectaron quistes dérmicos,indicandoqueelA.ranaeprobablementenosepresentóen lapoblaciónderanasverdessuecas. Tampoco se han publicado informes sobre A. ranae en anfibios suecos. Por lotanto, el riesgode albergarA. ranaeen la población actual de ranas verdes se considerabajo.Ensíntesis,dadalaevidenciaqueelAmphibiocystidiumranaeesendémicoenanfibiosdelReino Unido, y es capaz de provocar enfermedades en ranas verdes, y posiblementeconducir a unadisminuciónde la población, el Amphibiocystidium ranae se considera unriesgoalapoblación.Evaluaciónderiesgos
a. EvaluacióndeexposiciónEste patógeno se transmite por esporas resistentes movibles (Startk andGuex2014;Rowleyetal2014),yporlotantohayunaaltaprobabilidadquelas ranas verdes desplazadas sean expuestas e infectadas por A. ranae. Elrango de anfibios vulnerables aún no se comprende, pero los parásitosMesomycetozoean son generalistas, afectando solo un rango de especies
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
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(Rowleyetal2013;Glocklingetal2013). Seha reportado la infecciónpormesomicetozoos en 18 especies de anfibios y en 74 especies de peces(Rowleyetal2013).Desde que el A. ranae se puede transmitir entre anfibios por contactodirecto,ylasranasverdesseránliberadasenunoodosestanques,hayunaaltaprobabilidadqueelA.ranaeseadiseminadoatravésdelapoblaciónderanasverdes.
b. EvaluacióndeconsecuenciaMientras que todo el potencial patógeno de los parásitosmesomicetozoosen las poblaciones de anfibios permanezcan confusas, existe una bajaprobabilidad de que estos parásitos son capaces de provocar unadisminucióndelapoblación,yaseaporsísolaoatravésdeunacombinacióndeinfeccionesconotrospatógenoscomoelranavirusyquitridiomicosis. Silas ranas verdes se infectaran con mesomicetozoos, existe una bajaprobabilidaddeconsecuenciasen lapoblación, seguidodeldesplazamientoenunacombinaciónconagentesestresantesyunfalloeneldesplazamiento.En este caso, es probables que las ranas verdes se infectenconsiderablemente, yestopodría tener severas consecuenciasen las ranasverdesdesplazadas(DiRosaetal2007).
c. EstimaciónderiesgosExisteunaaltaprobabilidaddeexposiciónydiseminaciónenranasverdes,yuna baja probabilidad de fallo en el desplazamiento, y por lo tanto, laestimaciónderiesgosengeneralseconsiderabaja.
ManejoderiesgosConel fin de aumentar nuestro entendimiento del riesgode las enfermedades por estosparásitos en las ranas verdes, se considerarán las pruebas de anfibios en el sitio deliberaciónyen las ranasverdesdestinadasparaeldesplazamiento. Estaprueba tambiénpuedeserllevadaacaboenranasjuvenilesyenelaguaenelsitiodeinicioparalasranasverdes. No existe un método de tratamiento para estos parásitos. Todos los anfibiosexaminadosduranteelprocesodedesplazamiento,conlesionessugestivasporlainfeccióndeAmphibiocystidiumsppdebenserexaminadasynodesplazadas.Sedebenimplementarmedidasestrictasdehigieneybioseguridadalolargodelcaminodedesplazamiento,paraasegurar que la posibilidad de diseminar estos parásitos seamínima. Las poblaciones deranasverdesyotrosanfibiosenelsitiodeliberacióndebensometerseamonitoreosalargoplazo,ytodaevidenciadedisminucióndeberíaserinvestigadaprontamente.Las lesiones asociadas con las infecciones de mesomicetozoos deben ser descritas paratodos los miembros involucrados en el desplazamiento y en la vigilancia de salud postliberación,parapromoverlarápidaidentificacióndelainfecciónsillegaraaocurrir.
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5.4Riesgosdelapoblación:RanidHerpesvirus
JustificaciónderiesgosLamayor informacióndisponiblepara los herpes virusde anfibios vienedel ranidherpesvirus 1 (RsHV-1) (Davisonet al 1999) el cual provoca tumores al riñónen ranas leopardonorteñas,Ranapipiens(McKinnell1973).NohayinformessobrelainfecciónconRaHV-1enotras especies; sin embargo, se han asociados otros herpes virus con la enfermedad enotras especies. En Italia, las ranas ágiles (Rana dalmatina) fueron la primera especie deanfibios en Europa de las que se tiene registros de ser infectadas por el herpes virus(Bennatietal1994),peronoseobservómortalidad,yotrosanfibiosdelamismaáreajuntoconPelophylax spp.No fueronvisiblementeafectados. Las lesiones cutáneasporherpesvirus en R. tempraria spp. Se han informado en varios lugares del Reino Unido. (A.CunninghamandT.Garner,unpublisheddata).
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Lavirologíaquese llevóencaboenmuestrasoralesycloacalesdeanfibiosenel sitiodeliberación 1, durante la vigilancia de salud post liberación, fueron negativos en laaislamientodelvirus;sinembargo,estatécnicapuedeprovocarresultadosnegativosfalsos,y otros métodos como PCR e histopatología de lesiones cutáneas (junto con síntomasclínicossugestivos)puedenserllevadasacabosiesposibledurantepruebasfuturas.Enelcasoqueelherpesvirussepuedamanifestarenelsitiodereintroducción2ypuedaprovocar enfermedades en las ranas verdes desplazadas; y que esta enfermedad puedellevar aunadisminuciónde lapoblaciónde ranas verdes, el herpes virusesunpotencialriesgoalapoblación.EvaluacióndeexposiciónLasranasverdesdesplazasalsitiodereintroducción2,puedenserexpuestasa travésdelcontacto directo con anfibios infectados, y hay una alta probabilidad que ocurra unaexposicióneinfección.Laprobabilidaddediseminaciónporcontactodirectoatravésdelapoblaciónderanasverdesesalta.EvaluacióndeconsecuenciaHay un entendimiento insuficiente sobre la distribución actual y la patogénesis del ranidherpesvirusparapredecirconcertezalaprobabilidaddeenfermarseporestepatógeno.Lavulnerabilidad de las ranas verdes a la enfermedad de herpes virus se desconoce; sinembargo,lasranasverdesPelophylaxspp.quevivenpróximasalasranaságilesinfectadas,no presentaron lesiones (Bennati et al 1994). Los herpes virus son capaces de provocarlesionescutáneasenunavariedaddeespeciesdeanfibios,lesionessugestivasdelascualessehanvistoen las ranas comunesdelReinoUnido; sinembargo, estas lesioneshan sidoasociadasconcarcinomasdecélulasrenalesletalesenranasleopardonorteñasenlasranaspata de pala comunes europeas (Pelobates fuscus). Las ranas verdes puedenhaber sidoexpuestasaestevirusenelsitiodeliberación1sindetectarenfermedades,yporlotanto,laprobabilidaddeenfermedadenlasranasverdesdesplazadasenelsitiodereintroducción2,yelfalloenlareintroducción,seconsiderabajo.Si los virus de ranid herpes fueron diseminados debido al desplazamiento de las ranasverdes, las consecuencias ambientales y biológicas son probables a ser bajas, dada lasospecha de que ya pudieran ser altamente distribuidas a lo largo de Europa (A.CunninghamandT.Garner,unpublisheddata)yparecesolocausarenfermedady/omuerteenciertasespeciesdeanfibios.EstimaciónderiesgosExisteunaaltaprobabilidaddeexposición,infe4ydiseminaciónentrelapoblaciónderanasverdes, perounabajaprobabilidadde consecuencias, y por lo tanto, el riesgo general seconsiderabajo.
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ManejoderiesgosLasranasverdesylosanfibiosdesplazadosdeberíanrecibirexaminacionesfísicasvisualesycualquier lesión cutánea sugestiva, debería ser probada por PCR para los herpes virusdurante el desplazamiento y la vigilancia de salud post liberación, y la histopatología delesionescutáneasycualquiersospechadetumoresal riñónencontradasenpostmortem,deberíanserllevadasacaboparatratardeidentificarestevirus.ReferenciasdeRanidHerpesvirus:
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5.5Riesgosdeportadores:Bacteria
JustificaciónderiesgosDiversos agentes bacterianos pueden infectar y provocar enfermedades en anfibios. Lamicobacteria es capaz de provocarmuertesmasivas en anfibios en cautiverio (Chai et al2006; Sanchez-Mrogado et al 2009); la clamidia spp. también ha sido asociada conenfermedadesencautiverio(Marteletal2012),peropocosesabesobrelosefectosenlapoblacióndelabacteriaenlosanfibioslibres.Generalmentelabacteriaesresponsableporinfeccionesoportunistas,contrarioalasenfermedadesdeanfibios.Durante el PRHS, se detectaron numerosas especies de bacterias en bacteriología fecal(especímenesetal inpress),porejemploenAeromonashydrophilayenHafniaalvei. LamayoríadeestasespeciesestuvieronpresentesenSueciayReinoUnido,ylainvestigaciónen la Web de la Ciencia demostró que todas las especies que se detectaron fueronesparcidasglobalmente.LassiguientesbacteriascrecieronelcultivospurosdurantelapruebadePRHS:Burkholderiacepacia por las lesiones cutáneas de eritema de dos ranas verdes antes de ser liberadas;Aeromonas hydrophila de una rana verde con heridas cutáneasmenores post liberación;Pseudomonas fluorescens (0157557) de heridas cutáneasmenores post liberación en tresranas verdes; Burkholderia cepacia de una úlcera superficial en un tritón crestado. La
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siguientebacteriafuecultivadacomocrecimientopredominante:LaPasteurellaaerogenesde ulceras puntiformes que se encontró en una rana común con estas lesiones; Ralstoniapickettii(0041455)deunaranacomúnmachoconepidermisespesaamarillaenelvientreymedias patas traseras. Al parecer, estos fueron los primeros reportes separados deRalstoniapickettyyBurkholderiacepaciadeanfibiossilvestresdelReinoUnido(yRalstoniapickettii también se aisló de tres ranas verdes comunes en cultivos mixtos), pero ambasbacteriashansidoampliamenteinformadasporelReinoUnido(Muhdietal.1996;Sousaetal.2010;Kimuraetal.2005;Maroyeetal.2000;Ryanetal.2006;Weidmannetal.2008,TheEnvironmentAgency2002;HealthProtectionagency2008,2009).En el entendimiento que la bacteria está asociada con enfermedades secundarias,posiblemente asociadas con agentes estresantes, que las ranas verdes desplazadaspudieran portarmuchas especies de bacterias, y que el desplazamiento es previsto paraestresara lasranasverdesdesplazadas(yposiblementea losanfibiossilvestresenelsitiodereintroducción),lasespeciesdebacteriassonconsideradasunriesgodelportador.EvaluacióndeliberaciónLa bacteria albergada por las ranas verdes desplazadas, serán liberadas en el sitio dereintroducción2.Laprobabilidaddequelasranasverdesseveaninfectadasyexpuestasalabacteria, previo al desplazamiento, yque lasbacterias sean liberadas conellas esmuyalta.EvaluacióndeexposiciónLas ranas verdes reintroducidas, continuarán albergando las bacterias después de habersidoliberadas,yvolveránainfectarse.Otrosanfibiosenelsitiodereintroducción2puedenserexpuestosaestasbacteriasatravésdelcontactodirecto. Existeunaaltaprobabilidadde que las ranas verdes y los anfibios silvestres sean expuestos, y luego la bacteria sediseminaráatravésdelaspoblacionesdeanfibiosenelsitio2.EvaluacióndeconsecuenciaComosesuponequenoexistenbarrerasentrelaspoblacionesdeanfibiosenlossitiosdereintroducción 1 y 2, es probable que a la bacteria a la que estén expuestos sea similarentrelossitios1y2. Generalmentelasbacteriassoninvasoressecundariosenindividuosdeciertamaneraestresadosoinmunocomprometidos,yelestréspuedeserunprecipitadormayor para las enfermedades bacterianas clínicas. Hay una alta probabilidad deenfermedades esporádicas en ranas verdes desplazadas debido a las enfermedadesasociadasalestrés,peroexisteunabajaprobabilidadqueestoafectaráunacantidaddelapoblaciónderanasverdes.EstimaciónderiesgosExisteunaaltaprobabilidadde liberación,unaaltaprobabilidaddeexposición,yunabajaprobabilidaddeefectosambientalessignificantesydeefectoseconómicos,yporlotanto,elriesgogeneralesbajo.
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ManejoderiesgosEsesencialquelasmedidasestrictasdebioseguridad,higieneylareduccióndeestrésesténenordenalolargodelcaminodedesplazamiento,paraminimizarlaprecipitacióndeestasinfecciones.Por último, la vigilancia post liberación debe ir tras lesiones en todos los anfibios (pararesidentesypoblacionesdeanfibiosdesplazadas)einvestigarlasafondo;lasexaminacionescompletas post mortem deberían ser llevadas a cabo en anfibios muertos que seencuentrenenel sitiode liberación. Además, si los fondos lopermiten, sedeben tomarmuestras a las ranas verdes desplazadas para buscar infecciones bacterianas, previo a aldesplazamientoycomopartedeunarutinademonitoreodePRHS,comodeberíaserparalosanfibiosresidentesenlossitios1y2. Estoayudaráadefinirsiesquesejustificanlassuposicionessobresinoexistenbarrerasentrelaspoblacionesdeanfibiosgeográficamentecontiguas.Referenciasdebacterias
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5.6OtrosagentesinfecciososdepreocupaciónfuturaBatrachochytriumsalamandrivorans
OrigenyestimaciónderiesgosRecientemente,hongoquítridonuevo,Batrachochytriumsalamandrivorans,fueaisladodelas poblaciones de salamandras comunes (Salamandra salamandra) en Noruega, las quehabíanmostrado una disminución de la población hace tres años atrás (Spitzen-van derSluijs et al 2013;Martel et al 2013). Estehongoquítrido fue capazdeprovocar lesionescutáneaserosivasyaltamortalidadensalamandrasinfectadasparaexperimentaciones.Sinembargo, la infección experimental de sapos parteros (Alytes obstetricans) no provocóenfermedades (Martel et al 2013). Esta investigación también demostró que las B.salamandrivorans tienen una preferencia a las bajas temperaturas (10-15 grados C) encomparación a Bd (Martel et al 2013), y por consiguiente, se consideró utilizar un nichoecológicodiferente.Lainvestigaciónextensayafondoinvolucrandolarevisióndemásde5000especiesdeanfibiosanivelmundial,juntosconlaspruebasdeinfecciónexperimental,confirmóqueestequítridoes altamentepatológicopara salamandras y tritones,peronohayevidenciaactualquesugieraquepatológicoparaotrosgruposdeanfibios incluyendolos anuros (Martel et al 2014). En una infección experimental de ranas comunes (Ranatemporaria)ysaposcorredores(Epidaleacalamita),sedescubrióquedosanurossilvestresdelReinoUnidoeran inmunes(Marteletal2014). Estudiosfilogenéticossugierenqueeseste patógenooriginado enAsia, donde la infecciónde salamandras y tritones silvestres,concepasidénticasdehongos,noestánasociadasconenfermedadescondisminucionesdelapoblaciónenurodelossilvestres(Marteletal2014).DesdequeelB. salamandrivorannosehaencontrado todavíaenanfibiossilvestresenelReinoUnido,ynohayevidenciasobresilasranasverdessonvulnerablesaestepatógeno,noseconsideracomoamenazaparaeldesplazamientopropuesto,ynosehallevadoacabounDRAcompletoparaestepatógeno.Sinembargo,mientrassellevaacabolarevisióndeanfibioscontiguos,duranteeldesplazamientoderanasverdes, seríaposibleconsiderar laprueba de tritones crestados (Triturus cristatus) por PCR, comohamostrado ser letal enestas especies (Martel et al 2014). Aunque no se prestó atención en los sitios 1 y 2,afortunadamente el tritón palmeado (Lissotriton helveticus) fue inmune a la infecciónexperimental(Marteletal2014).Aúnnosesabesieltritóncomún(Lissotritonvulgaris)esvulnerable al B. salamandrivorans. El afloramiento actual de este hongo en nuevoscontinentesylacausadeladisminucióndelapoblaciónenespeciesprimitivas,ejemplificala importancia de una bioseguridad estricta a lo largo de cualquier proceso dedesplazamiento(incluyendoelcomerciodemascotasenanfibios).ReferenciasdeB.salamandrivorans
• Martel,A.,Spitzen-vanderSluijs,A.,Blooi,M.,Bert,W.,Ducatelle,R.,Fisher,M.C.,Woeltjes,A.,Bosman,W.,Chiers,K.,Bossuyt,F.,Pasmans,F.(2013).Batrachochytriumsalamandrivoranssp.nov.causeslethalchytridiomycosisinamphibians.PNAS110(38):15325-15329.
Apéndice4Análisisderiesgosdeenfermedadesyvigilanciadelasaludparalasespeciesdelprogramaderecuperación
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• Martel,A.,Blooi,M.,Adriaensen,C.,VanRooij,P.,Beukema,W.,Fisher,M.C.,Farrer,R.A.,Schmidt,B.R.,Tobler,U.,Goka,K.,Lips,K.R.,Muletz,C.,Zamudio,K.R.,Bosch,J.,Lötters,S.,Wombwell,E.,Garner,T.W.J.,Cunningham,A.A.,Spitzen-vanderSluijs,A.,Salvidio,S.,Ducatelle,R.,Nishikawa,K.,Nguyen,T.T.,Kolby,J.E.,VanBocxlaer,I.,Bossuyt,F.,PasmansF.(2014).RecentintroductionofachytridfungusendangersWesternPalearcticsalamanders.Science346(6209):630-631.
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6. Discusiónyconclusiones
Eneste informehemosutilizado la informaciónenelanálisisdelriesgodeenfermedades,llevado a cabo entre los años 2003 y 2005 para la reintroducción de ranas verdes aInglaterra,actualizadoenbasea labibliografía, lacualhasidopublicadadesdeel2005,yque incluye información de nuestra vigilancia de enfermedades post liberación desde elprimer sitio de reintroducción, producir un nuevo DRA para el desplazamiento de ranasverdesdesdeelsitiooriginaldereintroducciónaunsitionuevoespecíficoenInglaterra.Apesardelgranaumentoenelvolumendelainformaciónpublicadaenlasenfermedadesdeanfibiosdesdeel2005,elDRAhasidollevadoacaboconsiderablementemásrápidoqueeloriginal DRA, el cual se completó después de dos años. Hemos descrito el camino dedesplazamiento, hemos mostrados que es probables que esto no acurra a lo largo debarreras geográficas o ecológicas, y que se identifiquen riesgos de enfermedades. Estasamenazas han sido materia de análisis detallados sobre el riesgo de enfermedades, unriesgomedio de amenaza (Bd) y se ha detectado y analizado un riesgo alto de amenaza(ranavirus).SitiosdeinicioHubo insuficiente información disponible en los sitios de inicio para concluir el DRA altiempo de la redacción. Recomendamos que cada sitio propuesto sea evaluadocuidadosamenteparaver si existen riesgosdeenfermedadesa lo largodel sitioantesdetomarunadecisión.ExisteunaposibilidadqueelDRAdebaserreescrito,siesqueungrupozoológico se involucre en el proceso de sitios de inicio, porque pueden haber anfibiosexóticos,pecesoreptilesencontactoconelpersonalquemanejaalasranasverdes.Laamenazadelranavirusalasranasverdes.Desde el 2005, se encuentra disponible informaciónmás detallada sobre la patología delranavirusenlasranasverdes,yhansidoasociadosconlosbrotesdeenfermedades.Hayungradode incertidumbresobresiunade lasespeciesmáspatológicas (CMTV)oaltamenterelacionadaconlosvirus,estánpresentesenelReinoUnido.ComoelvirusCMTVsolohasidodescritoporHolanda,enasociaciónconelbrotedeenfermedadesenPelophylaxspp,y
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porconsiguiente,hayunaumentoevidentede laamenazaplanteadaporestosvirusa lasranas verdes. El brote informado por Ariel et al (2009) en Dinamarca, sugirió que losagentes estresantes pueden gatillar el brote de enfermedades. Debido a que las ranasverdesexistenenpoblacionespequeñasenInglaterra,sonvulnerablesalosbrotesfortuitosdelaenfermedad.Comounanuevapoblación,tambiénestánpotencialmentebajoestrés,y por lo tanto, sonmás propensos a sufrir por brotes de enfermedades asociadas con elranavirus. Por consiguiente, los ranavirus ya presentes en Inglaterra, representan unaamenaza significativa a los establecimientos de poblaciones de ranas verdes, y de otrasespeciespatógenasquepudieranemergerenelReinoUnido.Existenvariaspropuestasposiblessobreelmanejodelaconservacióndelasranasverdesallidiarcon laamenazadel ranavirus. Eldesplazamientoderanasverdesanuevossitiossepuedevercomounaventaja,yaqueladefuncióndeunapoblación,comoresultadodeunaenfermedad rana viral, puede ser menos desastrosa si es que hay otras poblacionesdisponibles para garantizar la sobrevivencia de la especie. La revisión de los anfibiossilvestres en el nuevo sitio de desplazamiento puede permitir que, en un corto plazo, elriesgodecontraerunaenfermedadranaviralseaevaluadaantesdeldesplazamiento,perovaarequerirdepruebasletalesenlosanfibiossilvestres,yporconsiguiente,talpropuestavaarequerirunareflexiónydiscusiónmáscuidadosa.Eldesplazamientoderanasverdesaunnuevo sitio, sin anfibios nativos (si estándisponibles y/o si es factible) va a reducir elriesgo de contraer una enfermedad rana viral en un medio plazo, y va a aumentar laprobabilidaddefundarunanuevapoblación.Estaúltimaopciónprobablementereduceelriesgo de contraer enfermedades en una gran extensión, pero ubicar tal sitio puede serdifícil.Alargoplazo(20-50años)esmuyprobablequelasranasverdesentodoslossitiosdedesplazamientoseanexpuestasalranavirus,yactualmente,laevidenciaprediceunaltoriesgodeunaepidemiadeenfermedadranaviralenestaspoblaciones.Recomendamos el comité que supervise el desplazamiento propuesto, considerecuidadosamenteelriesgodecontraerenfermedadesporlosranavirus.Lasinvestigacionesparamejorarnuestroentendimientodelarelaciónparásito-portadorentre losranavirusylas ranas verdes, puede ser útil previo al (o al mismo tiempo) desplazamiento, con elpropósitodemejoraralargoplazolasexpectativasdelasranasverdesenInglaterra.Sisetomaunadecisiónparaprocederconeldesplazamiento,estamosenposicióndemanejarcuidadosamente el riesgo, y reducir al mínimo el uso de las técnicas de manejo, y másimportante aún, monitorear la salud y las enfermedades de las ranas verdes y de losanfibiossilvestres,conelfindeaumentarnuestroconocimientosobrelaamenazadeestaenfermedad.HongoquítridoydesplazamientoEl Bd sigue siendo una amenaza en el proceso de desplazamiento, pero cada vezmenorporquelapatogenicidaddeestehongoquítridoenelgéneroPelophylax,parecesermenorqueenotrasespeciesdeanfibios.Elmanejodelasopcionessepuedellevaracaboparareducirelriesgodecontraerenfermedadesydemejorarnuestroconocimientosobreestaamenaza.
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ManejodelriesgodelasenfermedadesUnavezqueseescogenlossitiosdeinicioydedesplazamiento,sepuedenreducirlosriesgosdecontraerenfermedadesporlaadhesiónaunabioseguridadestricta,higieneyprotocolosdelpersonal,loscualesseránextendidosenlosdocumentosdelManejodelRiesgodeEnfermedadesypostliberación,yVigilanciadelasalud.Porejemplo,probablementeserecomendarácolocarestanquesenelsitiodeiniciodentrodeunpolitúnelbioseguromásqueenelexterior(encuyocasoseráncubiertasconunamallaparaprevenirelcontactocondepredadoresyotrosanfibios).Dadosestosrequerimientosparalabioseguridadylarevisiónadicional,elnúmerodesitiosdeinicioqueseescojan,debensercuidadosamenteconsiderados.Losriesgosmásaltosdecontraerenfermedadesseránplanteadosporlossitiosencontactoconotrosanfibios,seguidoporzoológicosconotrostaxonescomopeces,invertebradosyreptiles,losquecompartenalgunospatógenossimilares.Lossitiosquealojenavesymamíferosdebencontarconunmenorriesgodecontraerenfermedades.Los documentos de un manejo completo de los riesgos de contraer enfermedades, y lavigilanciadelasaludpostliberación,deberánserilustradosseguidosdelDRAyantesqueserealice cualquier desplazamiento, para exponer los pasos necesarios con el fin demonitorear el resultado del desplazamiento naturaleza-a-naturaleza, desde el punto devista de sus efectos en la salud y en la demografía de la población de ambos; lareintroducción de ranas verdes y las especies de anfibios nativos en el sitio dedesplazamiento.ElDMRPRHSdesarrolladoparalaprimerareintroducciónderanasverdespuede formar la base, pero aumenta las opciones sobre nuestro conocimiento deenfermedadesdeanfibiosymonitoreopostliberaciónvandictarloscambiosquesehacen.El monitoreo de las enfermedades post liberación serán particularmente importantesporque, casi con certeza, no tenemos conocimiento sobre la identidad y la cantidad detodoslosposiblespotencialesparásitospatológicosquesealberganenlasranasverdes,losque podrían provocar enfermedades en anfibios silvestres. Creemos que tendremos unmejor conocimiento sobre la amenaza de estos agentes desconocidos, una vez que lapoblaciónderanasverdesenelSitio1alcancesucapacidaddecarga.Apartirdeesto,yatravés de monitoreos cercanos a los animales post reintroducción, y a la detección deenfermedadeseintervencióncuandoseanecesario,apuntaremosamantenerlasaludyelbienestar de estos anfibios, y de proteger el ecosistema de consecuencias nocivas ydesconocidas.VigilanciadeenfermedadespostliberaciónExistenseveraslimitacionesenlainformaciónquesepuedeconseguirdelosmétodosescogidosparalavigilanciapostliberaciónenelprimersitiodereintroducciónentre2006y2012:examinacionesdelasaludymuestrasdeconvenienciaparaanfibiosmuertos,losquefueronexaminadospostmortem.Esposiblequeestasenfermedadesjueguenunrolenelcrecimientopaulatinodelapoblacióndelasranasverdesenelprimersitiodereintroducción,peroesimprobablequelosmétodosdisponiblesparaelmonitoreoproporcionesinformaciónsobreestaposibleamenaza.Hayunanecesidadporrevisarel
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plandevigilanciadelasenfermedadespostliberaciónenelnuevositio,paraversipodemoshacermejorasrentablesenlosmétodosinvolucrados,yobtenerunmejorconocimientosobrelasamenazasdeenfermedadesaestaspoblaciones.AgradecimientosNosgustaríaagradeceraJohnBakeryJimFosterporlainformaciónsobreeldesplazamientopropuesto;AndrewCunninghamyStephenPriceporlasdiscusionesylainformaciónenlasamenazaspropuestasporlosranavirus;yaPaulEdgarporlasdiscusionesenelresultadodelDRA.
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APÉNDICE:PROCEDIMIENTODESITIOSDEINICIOPROPUESTO
DescripciónLosrenacuajosserániniciadosutilizandotécnicassimilaresaaquellasutilizadasen2013(Baker,2014).Setomaránloshuevosdelsitioprimariodereintroducción,entonceslosrenacuajospuedencrecerbajoprotecciónycondicionesdecautiverio.Lametamorfosisoranitasresultantesseránliberadasdosotresmesesdespuésenelsitiosecundariodereintroducción,elcualestáenlamismaregiónqueelsitioprimario.Unadiferenciasignificanteentreelsitiodeiniciodel2013yelqueseplaneóenel2015,esquelaliberaciónfuturaserállevadaacaboenThompsonCommonenvezqueenelsitioprimariodereintroducción.
EstadodeenfermedadElanálisisderiesgodecontraerenfermedades(McGill&Sainsbury,2006),larevisiónyvigilanciahansidollevadasacaboporelInstitutodezoologíacomopartedelproyectodereintroducciónderanasverdes(Buckley&Foster,2005).LasmismasranasverdesfueronrevisadasenbuscadeenfermedadesinmediatamenteyprevioalaliberaciónenInglaterra,ylavigilanciaanualsellevóacabohastael2011.Losanfibiosqueyaresideneneláreadeliberacióntambiénfueronrevisados,previoalaliberacióndelasranasverdes,ymuchasveceshastael2011(Vaughan&Sainsbury,2011).Enlosexámenesmédicosnoseencontraronevidenciassustancialessobresilasaluddelosanfibiossilvestresodelasranasverdessehavistoadversaysignificativamenteafectadaporlareintroducción.Aunquesehayanidentificadoalgunasbacteriascomopatógenosnuevospotenciales(Vaughanetal.2009),nosehandetectadoagentesinfecciosossignificativosoenfermedadesenningunodelosanfibiosexaminadosresidentesointroducidos,yenparticular,losanálisisdehongoquitridiosyranavirusnoloshandetectado.Nohayregistrosdeenfermedadesdeanfibiosnienelsegundositiodereintroducciónnienningunodelossitiosdeiniciopotenciales.
RecoleccióndehuevosAproximadamentesetomaránmuestrasde12gruposderanasverdesdelsitiodonante,teniendocuidadodemaximizarlasoportunidadesdequeestosseandediferenteshembras(idealmentetomadosdeunrangodelocacionesdediferentesestanques,endiferentesmomentossobreelperíododemuestra).Laubicaciónytomademuestrasvanarequerirquesecamineentrelosestanquesdereproducción,yposiblevaarequerirelusodeunpequeñobotearemos.Losriesgosdelabioseguridadseránminimizadosporelusodelaimplementaciónprotocolosyequipamientoduranteelmonitoreodelasranasverdes,eltrabajodemantenimientodelsitio,elequipoylaropaqueentrahabitualmenteenelagua,
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sóloseutilizaenelsitiodeldonante;cualquierotroequipoquesepuedausarenelagua,debeserlimpiadoyesterilizadoantesdeusarloenelsitio.
Eclosiónycrecimientoinicial(interior)Loshuevosserántransportadosalacasadelsupervisorcontratado(46kmdelsitiodedonación),dondelaeclosiónylasetapasinicialesdelcrecimientodelosrenacuajosseránadaptadosenelinterior.sevanamanteneraloshuevosyalosrenacuajosencontenedoresdeplástico,conaguadelallaveinoculada,yconaguadelestanquequesesacadelsitiodeldonante.Estaetapatieneamenazasdebioseguridadmínimas,porquealestarenelinterior,elriesgodecontactoconotrosanfibiosesnulo(nootrosanfibiosocualquierotroanimalquetengaquesupervisor).Cuandolosrenacuajosnadalibremente,yhancrecidoauntamañoquepermitaelmanejoytransportaciónfácil(enaproximadamentedosotressemanas),serántransportadosaestanquesartificialesenelexterior.
Crecimientoenestanquesartificiales(exterior)Losrenacuajosseráncriadosenelexteriorenestanquesartificiales.Estosestanquesseránsimilaresalosqueseutilizaronenel2013.Lastinasdeyesosevanahundirparcialmenteenelsueloparaamortiguarlosdelastemperaturascambiantes.Estassevanallenarconaguadelallaveinoculada,yconaguadelestanquetransportadadelprimersitiodereintroducción.Sevaatomarvegetaciónacuáticadelprimersitiodereintroducciónparaincluirlaenelestanqueartificialyasíproporcionarcubrimientoysustratoalimenticio.Losestanquesvanaserprotegidosdeinvasionesquepuedensucederenlosalrededoresconunacubiertademalla,porotrosanfibiossilvestresopotencialesdepredadores(ejemplo:invertebradosacuáticos,culebrasdepastoyaves).Losrenacuajosvanasermonitoreadosyalimentadosconfrecuenciascomolalógicalopermita;idealmentevariasvecesaldíacuandolosrenacuajosestáncreciendorápidamente.
LiberacióndelametamorfosisUnavezquelosrenacuajoslleguenalasetapasfinalesdelarva,latransformaciónaranitasserátransportadaalsitiosecundariodereintroducción,ThompsonCommon.Losrenacuajoscrecenysedesarrollanendiferentesrangos,entonceslaliberaciónocurriráporetapas,amedidaquelosrenacuajosindividualeslleguenalfinaldelaetapadelarvaentrelosmesesdejulioyagosto.Losrenacuajosserántransportadosdelosestanquesartificialesencontenedoresde10litros,parcialmentellenos,conaguadellavemezcladaconaguadelestanque,yllenosconvegetaciónacuáticadeestosestanques.
UbicacióndelosestanquesartificialesLossitiosquevanaalojarlosestanquesartificialesestánbajorevisióncomopartedelapreparaciónactualparalareintroduccióndelasranasverdesalsitiosecundariodereintroducción.Idealmente,losrenacuajosvanainiciarensitioscercanosalossitiosde
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reintroducción,bajoelcuidadodepersonasconexperienciaenlacríadeanfibios.Sinembargo,laadhesiónalosprotocolosdebioseguridadefectivamenteexcluyealaspersonasmásexperimentadas,quienesgeneralmentemantienenotrosanfibiosencautiverio,loqueconstituyeunaltoriesgodecontraerenfermedades.Sehaconfirmadounsitiodeinicioyotrostresseránrevisados.Enlatablaacontinuaciónsehaceunresumendelospotencialessitiosconfirmados.Idealmente,elsitiodeiniciosevaapropagaralolargodealmenosdossitios.Todoelpersonalinvolucradoenelcuidadoderenacuajosseráminuciosamenteentrenadoenmedidasdebioseguridadyenelcuidadoderenacuajos. Sitiospotencialesparalosestanquesartificiales Sitio Distancia* Comentario Sitio 1 x km Este sitio es confirmado como sitio de inicio. Los
estanques serán colocados en poli túneles. Este sitio aloja otros animales que no son anfibios.
Sitio 2 x km Una evaluación de bioseguridad y las potenciales negociaciones serán llevadas a cabo como parte de la preparación actual.
Sitio 3 x km El jardín privado del supervisor contratado será evaluado como parte de la preparación actual.
Sitio 4 x km Una evaluación de bioseguridad y las potenciales negociaciones serán llevadas a cabo como parte de la preparación actual.
*Distanciadelsitioprimariodereintroducción.
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