v Los cromosomas son los portadores de los elementos hereditarios
v Los cromosomas están compuestos de ADN y proteínas
v Cada cromosoma está formado por una molécula de ADN
Breve Historia…
Frederick Griffith, 1928
Streptococcus pneumoniae
Cepa R inocua Cepa S letal
S: cubierta de polisacáridos PRESENTE R: cubierta de polisacáridos AUSENTE
El ADN es la molécula de la herencia La naturaleza hereditaria de cada organismo está definida por su genoma, el cuál consiste de largas secuencias de ácidos nucléicos que proporcionan la información necesaria para construir al organismo.
Reglas de Chargaff • La cantidad de adenina es la misma que la de timina: A=T • La cantidad de guanina equivale a la de citosina: G=C
• La cantidad de bases púricas es la misma que las bases pirimídicas:
A+G=T+C Pero la cantidad de A+T ≠ G+C
Complementariedad: A T G C Bases nitrogenadas: interior Fosfatos: exterior
Cadenas anti-paralelas Extremo 5’: PO4
-
Extremo 3’: OH
La estructura del ADN permite responder dos preguntas claves en la Genética:
1. ¿Cómo se puede determinar la información de una función biológica en una forma química?
2. ¿Cómo se puede copiar la información a generaciones sucesivas?
Propiedades del ADN
El contenido de GC influye en las propiedades del ADN, especialmente sobre la temperatura de desnaturalización y alineamiento
% GC Tm
Desnaturalización y Re-naturalización
Source Lysis Methods
Bacteria
Lysozyme - degrades polysaccharide cell walls SDS - detergent for cell membranes Freeze/Thaw several times French Press
Organelles Osmotic Sonication Detergent
Animal Cells Osmotic Sonication Detergent
Plant Cells Several enzymes to break down cell walls Mechanical grinding
Purificación de ADN 1. Concentrar células 2. Romper células 3. Eliminar proteínas
4. Precipitar ADN
• Etanol • Isopropanol • Butanol
http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/howto/
Si quieres extraer ADN en casa, consulta:
A260 / A280 Quality
Ratio < 1.8 Contains protein contamination
1.8 < Ratio < 1.9 no contamination Ratio > 2 DNA may contain RNA Absorbance peak or shoulder at 270 nm Phenol contamination
Nucleic Acid Form NA Concentration at 1 A260
Double -stranded DNA 50 µg/ml Single-stranded DNA 37 µg/ml RNA 40 µg/ml
Concentración y calidad del ADN
Separación y visualización de fragmentos de ADN
Bromuro de etidio: Agente intercalante entre las bases nitrogenadas que fluoresce a la luz UV
Gel de Agarosa 0.8% - 2.5%
Bibliografía: Alberts “Molecular Biology of the Cell” 4ª o 5ª Ed. (2002, 2008) Lehninger “Principles of Biochemistry” 3ª, 4ª o 5ª Ed. (2000, 2004, 2008) Lodish “Molecular Cell Biology” 4ª, 5ª o 6ª Ed. (1999, 2003, 2007)
http://learn.genetics.utah.edu/ http://www.youtube.com/watch?v=mHak9EZjySs
Continuará ….