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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
DIRECCION GENERAL DE DOCENCIA
BIENESTAR ESTUEIANTIL UNIVERSITARIO
UNIDAD DE SALUD
LABORATORIO
DOCUMENTO DE APOYO
Martha Eugenia Campos Urizar
Guatemala, Noviembre 2011
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CAPITULO I
PIPETA DE THOMA
La pipeta de Thoma es frecuentemente utilizada para realizar diluciones previas al conteo de células en cualquier
líquido corporal y para contar elementos formes en la sangre.
Generalmente se les conoce como la pipeta de blancos y la pipeta de rojos, éstas están divididas en partes iguales; la de
blancos en 11 partes y la de rojos en 101 partes. La dilución de la muestra se concentra en el bulbo:
BLANCOS ROJOS
11 101 100 10 1.0
0.5
COMO USAR LA PIPETA DE THOMA
Para calcular el factor de dilución en la pipeta de blancos colocamos la muestra (en el caso de los leucocitos sangre)
hasta la marca de 0.5 y luego diluyente hasta la marca de 11 con diluyente (ácido clorhídrico 0.1 N) calculando la
dilución de esta manera:
(FD) Factor de dilución= Volumen Total = 10* = 20
Volumen de Muestra 0.5
Pipeta de blancos Pipeta de rojos
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Donde volumen total va hacer igual a = Volumen de muestra + Volumen de diluyente
* La muestra se encuentra concentrada en el bulbo por lo tanto el volumen de dilución son 10 partes, la parte restante
de diluyente está en el vástago y es la que se descarta (4 gotas) previo al hacer el llenado de la cámara.
La variante con la pipeta de rojos es que el volumen total es de 100 por lo que el factor de dilución será 200 (100/0.5)
IMPORTANTE
La pipeta de Thoma se puede utilizar para diluir diferentes LÍQUIDOS la variante será la cantidad de muestra que
utilicemos al hacer la dilución, EJEMPLO
Un líquido articular turbio podemos llenar una pipeta de rojos con líquido hasta la marca de 3 y luego agregar solución
salina hasta la marca de 101 y la dilución será:
FD = 100/0.3 = 333.3 Volumen total = Muestra 0.3 + líquido 99.7 = 100
Luego de contar las células en la cámara colocaremos en la fórmula 333.3 como factor de dilución.
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CAPITULO II
QUE ES LA CAMARA DE NEWBAUER
La Cámara de Newbauer es un instrumento utilizado para realizar el recuento de células en cualquier líquido corporal,
orina y sangre.
Esta cámara de conteo está adaptada al microscopio. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente
deprimidas y que en el fondo de las cuales se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula de dimensiones
conocidas. Se cubre la cámara con un cubre cámaras que se adhiere por simple tensión superficial.
Luego se introduce el líquido a contar, al que generalmente se ha sometido a una dilución previa con un diluyente, por
capilaridad entre la cámara y el cubre cámara; puesto que tiene dos zonas esto permite hacer dos recuentos
simultáneamente.
Cada cuadrante consta de 9 cuadrados grandes, cada uno de 1 mm de lado y por ende de 1 mm2 de superficie, así
pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 milímetro cuadrado. La profundidad es de 0.1 mm respecto a la
superficie.
El volumen de cada cuadrito es = Área X profundidad
Volumen = 1 mm2 X 0.1 mm = 0.1mm3
Por lo tanto volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 milímetro cúbico, es decir 0.1 micro
litro.
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La fórmula de valoración del número de células (válida universalmente) es la siguiente:
Células/ mm3= (células contadas contadas) X (factor de dilución)
# de cuadros contados X área (mm2) X profundidad de la cámara (mm)
Células/ mm3= # células contadas X factor de dilución
# de cuadros X 0.1 mm3
COMO SE HACE UN RECUENTO
Para realizar el recuento celular, debe colocarse el cubreobjetos sobre el portaobjetos de esta cámara e introducir entre
ambos la muestra celular previamente preparada. Debe evitarse que la muestra rebalse, porque si esto sucede las
células a contar también se perderán. La velocidad de llenado de la cámara debe ser homogénea, evitando así una mala
distribución de las células en el preparado que traerá con ello errores en el recuento.
La muestra no debe secarse, debe esperar por lo menos 2 minutos para que sedimenten las células. Luego se coloca la
cámara en un microscopio óptico y se procede al conteo de la siguiente manera:
Volumen
contado
Volumen contado
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Una vez contadas las células se calcula considerando: la dilución de la muestra, la cantidad de cuadrados considerados,
el número de células contadas y el volumen de muestra debajo de cada cuadrado.
LA CUADRICULA CENTRAL de la cámara de Newbauer se utiliza para el conteo de eritrocitos y plaquetas en
sangre, se diferencia de los otros cuadrantes porque esta subdividido en 25 cuadros, el volumen de conteo variara de
0.1 mm3 a 0.1/25= 0.004 mm3.
Por lo tanto la fórmula para eritrocitos o plaquetas en sangre será:
Células/ mm3= # células contadas X factor de dilución
# de cuadros X 0.004 mm3
DE NE
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Líquidos corporales
1 2 3
4
5
8 9
6
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USOS DE LA CAMARA DE NEWBAUER
Esta cámara de recuento está diseñada para el conteo celular de cualquier líquido corporal, en ella se puede contar
dependiendo de la cantidad celular 4 cuadrantes como en el recuento de células blancas en sangre o bien los 9
cuadrantes si la cantidad celular fuera baja (se pueden contar tanto leucocitos como eritrocitos).
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Tréveris, 1825-Bonn, 1863) Físico
alemán. Profesor en la Universidad
de Bonn, estudió diversos fenómenos
ópticos.
August Beer
CAPITULO III
GENERALIDADES “LEY DE LAMBERT Y BEER”
LOS DESCUBRIDORES
PRINCIPIOS
LEY DE BEER-LAMBERT
La Absorbancia de una especie en solución homogénea es directamente proporcional a su actividad óptica, longitud del
paso óptico y su concentración. Es una relación empírica que relaciona la absorción de luz con las propiedades del
material atravesado.
Su uso es en distintos métodos de la espectrofotometría para química analítica.
En iguales condiciones podemos determinar la concentración de una sustancia X a partir de una solución estándar de
concentración conocida.
Fue un suizo – alemán, nació en
Mülhausen, astrónomo, matemático,
físico y hombre docto.
Johann Heinrich Lambert
Un cuerpo que radia
obedece a la ley de Lambert si
su luminancia espectral
energética es la misma para
un elemento cualquiera de su
superficie, y no depende de la
dirección de emisión.
La absorbancia de una
sustancia o especie es
directamente proporcional a
la concentración de la misma.
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De esto podemos deducir:
Abs Muestra = Abs Estándar
[Muestra ] [Estándar]
[Muestra] = Absorbancia Muestra X [Estándar]
Absorbancia Estándar
EN CADA PROCEDIMIENTO BIOQUÍMICO DEBEMOS TOMAR EN CUENTA QUE LA MUESTRA O EL ESTÁNDAR NO
ESTEN PREVIAMENTE DILUÍDOS.
Los procedimientos espectrofotométricos generalmente se trabajan, no importando el número de muestras a
determinar; un tubo Blanco, uno estándar y uno o más de muestra(s):
Dentro del procedimiento se deben agregar los componentes de la siguiente forma:
TUBO BLANCO ESTANDAR MUESTRA
Agua 0.5 ml -- --
Estándar -- 0.5 ml --
Muestra(s) -- -- 0.5 ml
REACTIVO DE REACCIÓN 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
Blanco Estándar Muestra
Toda dilución que se realice
previo a este procedimiento
debe tomarse en cuenta para el
resultado final
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DE ESTO PODEMOS MODIFICAR NUESTRA FÓRMULA DE LA SIGUIENTE FORMA:
[Muestra] = Absorbancia Muestra X FD Muestra X [Estándar]
Absorbancia Estándar FD Estándar
Donde FD es factor de dilución
Si no se hubiera hecho ninguna dilución a cualquiera de los componentes se colocar un 1.
DILUCIONES
Al igual que en la pipeta de toma en bioquímica son muy utilizadas las diluciones. La fórmula como lo vimos
anteriormente es:
(FD) Factor de dilución = Volumen Total (Volumen de diluyente + Volumen de Muestra)
Volumen de Muestra
Por medio de esta fórmula se puede averiguar cuanta cantidad de diluyente necesitamos para una dilución específica,
cuando tenemos una cantidad limitada de muestra; siempre recordando que al final debemos despejar del volumen total
el volumen de diluyente.
EL FACTOR DE DILUCIÓN:
Es el número total de volúmenes al que se lleva un volumen dado de muestra original.
En otros términos, el factor de dilución también corresponde a la división de la concentración de la muestra original
sobre la concentración de la muestra diluida.
Las diluciones se pueden expresar así:
1 ó 1/2 ó 1: 2 lo que significa una parte de muestra diluida en una parte de diluyente para 2
un volumen total de 2 partes
Volumen TOTAL
Entonces en una dilución 1: 25 será:
Muestra Diluyente
Las diluciones también pueden expresarse como porcentajes, ejemplo:
Volumen Muestra Volumen Diluyente
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1/2 = 0.5 X 100 = 50%
3/5= 0.6 X 100= 60%
TRATE DE RESOLVER LA GUIA ENTREGADA CON ANTERIORIDAD SI TUVIERA ALGUNA DUDA QUE SURGIERA EN EL
DESARROLLO DE LA MISMA TRATARÉ DE RESOLVERSELA ATRAVÉS DEL ESPACIO INTERACTIVO DE
WIKISPACES.COM (UNIDAD DE SALUD) AL QUE PODRA INGRESAR AL PINCHAR EL LINK QUE LE INCLUYO JUNTO
AL CORREO CON ESTE DOCUMENTO.
50% 50%
60% 40%