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INFORME DE PRACTICA: Genero BRUCELLAS
CURSO:
MICROBIOLOGIA
SEMESTRE ACADÉMICO:
2015-II(VI CICLO)
UNIDAD: I
ALUMNA:
VERA CARBAJAL, ANGELA YOHANA COD. 20112005
DOCENTES:
Dra Celinda Usquiano Marquez
Dra Yolanda Soto Caceres
Dra Jessica Perleche García
Lic. Blga. Sonia Fiestas Purizaca
Lic. Blgo. Oscar Curo Fanning
FECHA DE PRESENTACION:
PIMENTEL, 27 DE OCTUBRE DEL 2015
INTRODUCCIÓN
Los microorganismos a diferencia de las plantas no son capaces de crear materia orgánica a
partir de elementos inorgánicos, por eso, han de nutrirse a expensa del medio en que se
encuentren, y de ahí que en el interior de estos ocurran una serie de reacciones de
síntesis y de descomposición de sustancias orgánicas, las cuales reciben el
nombre de metabolismo. A partir de estas características metabólicas se realizan pruebas
obtenidas para la identificación de microorganismos y productos obtenidos de la relación
microorganismo-medio. Otro de los aspectos importantes de la realización de estas pruebas,
es que a partir de estas ayudan a dar una respuesta ante la posible contaminación de los
alimentos por medio de microorganismos patógenos. Las técnicas de bioquímica han
proporcionado una herramienta útil para la detección directa de los microorganismos
contaminantes. La identificación bacteriana se puede realizar por medio de una serie de
análisis que necesitan de diferentes cultivos y procedimientos para llegar a identificar las
especies bacterianas que contaminan los alimentos o las aguas. A continuación, se
desarrollan diferentes técnicas para la identificación de algunos microorganismos y
productos obtenidos en la relación ya mencionada, microorganismo-medio.
MICROBIOLOGÍA
OBJETIVOS
-Realizar y analizar las diferentes técnicas de identificación bacteriana.
-Observar e interpretar el mewtabolismo de bacteriano
MICROBIOLOGÍA
CONCLUSIONES
-Las pruebas bioquímicas convencionales, generalmente determinan la actividades una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no.
-A partir de las pruebas bioquímicas de identificación bacteriana, mediante estándares establecidos, podemos conocer que bacteria tenemos en una muestra problema basándonos en sus reacciones metabólicas las cuales son características de cada microorganismo.
Son funciones específicas del metabolismo:
Obtención de energía para los procesos celulares.
Conversión de los compuestos nutritivos en precursores de los componentescelulares.
Organización de esas macromoléculas en polímeros.
Formación y degradación de las biomoléculas necesarias para las funcionesespecializadas de la célula
MICROBIOLOGÍA
PROCEDIMIENTO
A. DEGRADACIÓN DE GLUCOSA, LACTOSA, SACAROSA, PRODUCCIÓN DE GAS E
H2S en medio Agar TSI: (Triple Azúcar,
Hierro)
Medio empleado para la diferenciación de enterobacterias en base a la
fermentación de los hidratos de
Carbono glucosa, sacarosa y lactosa y a la producción de ácido sulfídrico
Muestra: Cultivos Bacterianos
Medio de Cultivo: TSI
Procedimiento:
Rotular los tubos con medio de TSI
Coger una asa de siembra en punta y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger un cultivo bacteriano y sembrar por picadura en el fondo y estría
en la superficie del medio TSI flameando la boca del tubo.
Incubar a 37ºC por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e interpretación del TSI:
a) La degradación de los azúcares con formación de ácido (acidez positiva)
se manifiesta por un cambio de color del indicador Rojo de fenol que hace
virar
- el color del medio de anaranjado rojizo a amarillo, en caso de acidez
y se simboliza con la letra A,
- o por un viraje del medio de anaranjado rojizo a rojo intenso en caso
de alcalinización (alcalinidad positiva) y se simboliza con la letra K.
b) La presencia de gas se manifiesta por el resquebrajamiento del medio
(Gas positivo). Se simboliza según su intensidad de 1+ a 3+.
MICROBIOLOGÍA
c) Producción de H2S: El tiosulfato es reducido por algunos gérmenes a
ácido sulfhidríco, el cual reacciona con la sal férrica produciendo sulfuro de
hierro que se manifiesta por un precipitado negro en el medio (H2S positivo).
Se simboliza de acuerdo a su intensidad de 1+ a 3+.
d) Lectura:
- Pico alcalino/fondo alcalino (NN): No hay fermentación de azúcares.
Característica de bacterias no fermentadoras.
- Pico alcalino/fondo Amarillo (K/A) : Glucosa fermentada, Ni lactosa ni
sacarosa fermentadas.
- Pico alcalino/fondo Amarillo y negro (K/A/H 2S +): Glucosa fermentada, Ni
lactosa, ni sacarosa fermentadas,
producción de ácido sulfhídrico.
- Pico Amarillo/fondo Amarillo ( A/A/H2S - ): Glucosa y lactosa y/o sacarosa
fermentadas. H2S : Negativo.
B. DESCARBOXILACION DE LA LISINA en medio agar LIA:
Esta prueba permite diferenciar los microorganismos que producen
descarboxilación o desaminación de la lisina. Se puede detectar además
la producción de H2S y es más sensible que el TSI para la detección H2S
Es muy utilizado para descartar Salmonella de aislamientos primaros.
Muestra: Cultivos Bacterianos
Medio de Cultivo: LIA
Procedimiento:
Rotular los tubos con medio de LIA
Coger una asa de siembra en punta y flamear al rojo vivo deja enfriar
MICROBIOLOGÍA
Coger un cultivo bacteriano sembrar tanto por por picadura central
en el taco como por estría sobre la superficie inclinada.
Incubar a 37ºC por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e interpretación del Agar LIA:
La Lisina puede ser descarboxilada (Descarboxilación) por
microorganismos LD positivas, que la transforman en la amina
cadaverina, esto produce un viraje del indicador Púrpura de bromocresol
a un color violeta intenso.
Se simboliza con la letra K.
Puesto que la descarboxilación solo tiene lugar en un medio ácido (pH
inferior a 6) es necesario que se produzca previamente la acidificación del
medio de cultivo por fermentación de la glucosa.
Los microorganismo LD negativos, pero fermentadores de la glucosa,
producen un viraje al amarillo de la totalidad del medio de cultivo. Se
simboliza con la letra A. La incubación prolongada puede ocasionar una
alcalinización en la zona de la superficie del medio de cultivo y en
consecuencia, se produce un viraje al violeta. La producción de H2S
produce una coloración negra debido al sulfuro de hierro producido.
C. DESAMINACIÓN DE LA LISINA en medio Agar LIA:
Las cepas del grupo Proteus y Providencia, con excepción de algunas
cepas de Proteus morganii, desaminan la Lisina a ácido alfa-cetocarbónico
formando compuestos pardorojizos en la superficie del medio con la sal de
hierro y bajo la influencia del oxígeno. Se simboliza con la letra R.
MICROBIOLOGÍA
D. PRUEBA DE MOVILIDAD, HIDROGENO SULFURADO Y PRODUCCIÓN DE
INDOL en Medio de cultivo: Agar SIM
El medio SIM es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad,
producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo. Es útil
para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.
Procedimiento:
Rotular los tubos con medio SIM
Coger una asa de siembra en punta y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger un cultivo bacteriano sembrar por picadura central en la
columna vertical del medio
Incubar a 37ºC por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e Interpretación:
La motilidad se pone de manifiesto por la turbidez difusa del medio de
cultivo alrededor del canal de la picadura. La no motilidad se
caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de
dicho canal.
La formación de H2S se reconoce por el ennegrecimiento de la zona de
crecimiento.
La producción de Indol pone de manifiesto la presencia de la Enzima
Triptofanasa que degradará el triptofano y liberará al medio Indol que
se combina con el aldehido (paradimetilbenzaldehido) presente en el
reactivo de Kovacs, si hay indol se formará un anillo rojo en la
superficie.
E. DEGRADACIÓN DEL CITRATO en medio Agar Citrato de Simons
MICROBIOLOGÍA
Algunas enterobacterias tienen la capacidad de usar citrato como única
fuente de carbono y energía
Finalidad: Determinar la utilización del citrato por bacterias como la única
fuente de carbono.
Medio de cultivo: Agar Citrato de Simons
Procedimiento:
Rotular los tubos con medio CITRATO
Coger una asa de siembra en punta y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger un cultivo bacteriano sembrar por estría en la superficie del
medio
Incubar a 37ºC por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e interpreatción
La degradación del citrato como única fuente de carbono origina la
alcalinización del medio.
Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol
que vira a azul oscuro, dando una reacción positiva (Citrato +) si el
crecimiento es visible; y como reacción negativa (citrato -) si no cambia
de color
F. DEGRADACION DE LA UREA
Evalúa en las bacterias la capacidad de utilizar la urea como fuente de
nitrógeno, mediante la enzima ureasa, que degrada la urea en dióxido de
carbono y amoniaco. El amoniaco actúa como fuente de nitrógeno y capta
protones, transformándose en amonio y alcalinizando el medio. Contiene
rojo fenol como indicador de pH, el cual vira el medio a fucsia cuando el pH
MICROBIOLOGÍA
se torna alcalino.
Finalidad: Determinar la hidrólisis de la Urea por bacterias.
Medio de cultivo: Agar Urea de Christensen
Procedimiento:
Rotular los tubos con medio Urea
Coger una asa de siembra en punta y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger un cultivo bacteriano sembrar por estría en la superficie del
medio
Incubar a 37ºC por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e Interpretación de los resultados.
La positividad viene dada por una coloración rosada o fucsia en el medio.
Ejm Proteus sp es positivo para la prueba
G. AGAR Mc CONKEY :
El Agar Mc Conkey es un medio Sólido, Diferencial y Selectivo para el
aislamiento de Enterobacterias
Permite diferenciar bacterias que fermentan o no, la lactosa en muestras
clínicas, de agua y alimentos.
Las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano,
Las sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de gran parte de
la flora Gram positiva.
Procedimiento:
Rotular las placas
MICROBIOLOGÍA
Coger una asa de siembra en aro y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger con el asa un cultivo bacteriano sembrar por agotamiento en la
superficie del medio
Incubar a 37ºC por 24 hrs.
Realizar la lectura
Fundamento:
Por fermentación de la lactosa, se producirá ácido lo que disminuye el
pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador
de pH (rojo neutro), y darán al medio un aspecto rosáceo con un halo
turbio debido al descenso del pH provocados por los ácidos biliares en las
colonias. Si por el contrario son Lactosa (-) el medio se alcalinizará por el
uso de la peptona y se tornará amarillo o incoloro
Lectura e Interpretación
Las colonias lactosa positivas son rojas o rosadas con un halo turbio
debido al descenso de pH
Las colonias Lactosa negativas son incoloras
H. Agar XLD :
El Agar XLD (Xilosa Lisina Desoxicolato) es un medio selectivo y de
diferenciación, utilizado para el aislamiento y diferenciación de
enterobacterias patógenas especialmente del género Salmonella, Shigella
y Providencia.
- La xilosa se incorpora en el medio dado que la fermentan
prácticamente todos los entéricos, excepto Shigella, y esta propiedad
hace posible la diferenciación de dicha especie
- La lisina se incluye para permitir la diferenciación del grupo
Salmonella de los organismos no patógenos, dado que, sin lisina,
Salmonella fermentaría rápidamente la xilosa y no se distinguiría de
las especies no patógenas. Cuando la Salmonella agota el suministro
MICROBIOLOGÍA
de xilosa, la lisina es atacada por la enzima lisina descarboxilasa, lo
que genera un cambio a un pH alcalino que imita la reacción de
Shigella.
- Utiliza el desoxicolato de sodio como agente selectivo y, por
consiguiente, inhibe los microorganismos gram positivos
- El tiosulfato y la sal de hierro revelan la formación de ácido sulfídrico
por la precipitación de sulfuro de hierro produciendo un color negro
en las colonias.
Procedimiento:
Rotular las placas
Coger una asa de siembra en aro y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger con el asa un cultivo bacteriano sembrar por agotamiento en la
superficie del medio
Incubar a 37ºC por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e interpretación:
La degradación de la xilosa, lactosa y sacarosa a ácido produce un
viraje al color amarillo alrededor de las colonias por su indicador rojo de
fenol (Xilosas +)
Las bacterias que descarboxilan la lisina, produciendo cadaverina, se
reconocen por la presencia de un color rojo púrpura, debido al aumento
de pH, alrededor de sus colonias (Xilosas -)
I. AGAR SS (SALMONELLA Y SHIGELLA) Empleo e Interpretación:
MICROBIOLOGÍA
Medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento de
especies de Salmonella y Shigella a partir de muestras clínicas, heces y de
alimentos
El verde brillante, la bilis de buey y la elevada concentración de tiosulfato
y de citrato inhiben considerablemente la flora acompañante, bacterias
Gram positivas, la mayoría de bacterias Gram negativas
Con el tiosufato e iones de hierro se pone de manifiesto la formación de
sulfuro por el ennegrecimiento de las correspondientes colonias. Las
colonias de coliformes quedan señaladas por la demostración de la
degradación de lactosa a ácido, a cargo del indicador de pH Rojo de fenol
Procedimiento:
Rotular las placas
Coger una asa de siembra en aro y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger con el asa un cultivo bacteriano sembrar por agotamiento en la
superficie del medio
Incubar a 37ºC por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e interpretación:
Las colonias de gérmenes Lactosa + son rosadas hasta rojas
Las colonias de gérmenes lactosa – negativas son incoloras
Las colonias de microorganismos formadoras de H2S presentan un
centro negro.
CUESTIONARIO
MICROBIOLOGÍA
¿Por qué es necesario ajustar el pH del medio?
El pH de los medios se ajusta en el momento de la fabricación, sin embargo, la
calidad del agua utilizada para la hidratación o la utilización de medios no
recientes pueden modificar este parámetro por lo que es aconsejable verificarlo
y reajustarlo si fuera necesario. Para la verificación del pH, se debe medir una
muestra extraída del volumen total del medio preparado a 25ºC, tanto en
medios líquidos como sólidos. En los casos donde se deba reajustar el pH, se
puede utilizar una solución estéril de ácido clorhídrico (para acidificar el medio)
o hidróxido sódico (para basificar el medio). En medios sólidos, el reajuste de pH
debe ser realizado antes de la solidificación, por lo que será necesario utilizar
una muestra del volumen total para la medición a 25ºC y otra muestra a 45ºC
para conocer el volumen de ácido clorhídrico o hidróxido sódico que hay que
añadir en un volumen conocido.
¿Para qué se añade el agar-agar? ¿Qué cualidades tiene esta sustancia?
Se añaden para preparar medios de cultivo sólidos y semisólidos. El agar-agar es
el agente solidificante más común. El agar-agar es un polisacarido de galactosa y
galactomanano que se obtiene de las algas rojas (Echema, Gelidium, Gracilaria).
Contiene un 70% de agarosa y un 30% de agaropectina. El agar-agar es el agente
solidificante más utilizado. Su composición química es indefinida y solidifica con
mayor dificultad a medida que desciende el pH. Es insoluble en agua fría, pero
se funde y solubiliza en agua hirviendo y solidifica a 45°C. Forma geles
transparentes muy estables y es degradado por muy pocas bacterias.
MICROBIOLOGÍA
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
-METABOLISMO BACTERIANO. Consultada el 11/09/2015 Hora: 3:00 pm.
URL disponible en archivo PDF:
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/
procedimientosmicrobiologia/seimc-procedimientomicrobiologia37.pdf
-FISIOLOGÍA Y METABOLISMO BACTERIANO. Consultada el 11/09/2015
Hora: 3:00 pm. URL disponible en archivo PDF:
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/FisiologiayMetabolismoBacteriano.pdf
MICROBIOLOGÍA