La biología de la rizosfera a través de La biología de la rizosfera a través de un papel de cromatografíaun papel de cromatografía
Cd. Guerrero, Chih., Febrero 2009
M.C. Armenia Velázquez Gurrola
Gerente de Agrobiológicos
InnovakGlobal
Ehrenfried PfeifferEhrenfried Pfeiffer
(1899(1899--1961)1961)
Desarrolló los métodos de formación de
imágenes:imágenes:
Cristalización sensible: amplia investigación,
aplicación en medicina y en sanidad vegetal
Dinamólisis capilar: utilizada para distinguir
entre productos orgánicos y convencionales
“Cromatografía” en papel circular “Cromatografía” en papel circular
(“cromas”):(“cromas”): Amplia aplicación en
agricultura, composteo y manejo de suelos
Cromatografía
La cromatografía en papel es un proceso utilizado en los laboratorios como análisis cualitativo
La fase estacionaria se constituye por una tira de papel de filtro.
La muestra se deposita en un extremo y luego el solvente empleado se hace luego el solvente empleado se hace ascender por capilaridad.
Se coloca la tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene el solvente en el fondo.
Después de unos minutos cuando el solvente deja de ascender, se retira el papel y seca.
“Cromatografía” en papel horizontal: “Cromatografía” en papel horizontal:
“CROMAS”“CROMAS”
La muestra sube por capilaridad por un pistilo,
y se extiende horizontalmente a través
del papel
PASO 1.
Deshidratar la muestra a 70°C por 24 h (Suelo o tejido vegetal)
Moler en mortero con pistilo (suelo)
Moler en licuadora hasta obtener un polvo fino y homogéneo (tejido vegetal)
PASO 2.
Preparar una solución de nitrato de plata al 0.5 %
Preparar una solución de Hidróxido de Sodio (sosa
cáustica), al 0.1-0.5 %
El nitrato de plata puede almacenarse e incluso reciclarse, pero la solución alcalina deberá prepararse al momento de utilizarse para que
sea lo más “fresca” posible
PASO 3.
Mezclar 5 g de la muestra seca y molida en 50 mL de la solución alcalina al 0.1-0.5%
PASO 4.
Agitación manual
TIEMPOS DE AGITACIÓN MANUAL
A tiempo 0
ReposoReposo
A los 15 minutos de iniciada la extracción
Reposo
A los 60 minutos después de la última agitación
Reposo de 4 horas
PASO 5.
Impregnar con nitrato de plata el papel filtro, hasta la primera marca, dos horas antes de que finalice el último reposo
Cámara húmedaCámara húmeda
Puede fabricarse de diferentes
materiales, o formas para correr
dos o más cromas al mismo
tiempo
Humedad relativa constante entre 70 y 80 %
21-26°C de temperatura
Altura de 12-15 cm
PASO 6.
Colocar la muestra en la caja pequeña
Impregnar el pistilo con la muestra y dejar correr en cámara húmeda, hasta que toque la segunda marca
del papel
Aplicaciones
¿Qué pasa en el suelo? ¿Qué pasa en ¿Qué pasa en el suelo? ¿Qué pasa en la rizosfera?la rizosfera?
Análisis nutricionales (foliares y suelo)
Análisis microbiológicos, microorganismos benéficos y patógenos
¿?
¿Qué pasa en el suelo? ¿Qué pasa en ¿Qué pasa en el suelo? ¿Qué pasa en la rizosfera?la rizosfera?
Manejo convencional 1 año con té de composta
+
4 años con té de composta
+
Cromas del suelo rizosférico de manzano.
Muestran el mismo patrón de formación de imagen.
Los análisis microbiológicos tampoco mostraron diferencias significativas
¿Qué pasa en el suelo? ¿Qué pasa en ¿Qué pasa en el suelo? ¿Qué pasa en la rizosfera?la rizosfera?
Manejo convencional 1 año con té de composta
+
4 años con té de composta
+
Cromas de la rizosfera: raíz + suelo rizosférico
Diferencias evidentes y congruentes con lo observado en campo
Cambios en la rizosfera a través de los años….los microorganismos se mueren, pero dejan su obra.
Lo que ocurre en la rizosfera, impacta el Lo que ocurre en la rizosfera, impacta el estado general de salud del cultivoestado general de salud del cultivo
Cromas de peciolo de tomate: manejo convencional vs té de composta + ExuRoot
Lo que ocurre en la rizosfera, impacta el Lo que ocurre en la rizosfera, impacta el estado general de salud del cultivoestado general de salud del cultivo
Cromas de tallo de tomate: manejo convencional vs té de composta + ExuRoot
Guía de interpretación de cromasGuía de interpretación de cromas
1. Zona central. Indicador del contenido de oxígeno en las
sustancias.
2. Zona interna. Indicador de materia orgánica y formación
humus.
3. Zona media. Indicador de procesos de transformación en
las sustancias.
4. Zona externa o final. Indicador de nitrógeno enlazado y
de formas estables de coloides del humus del suelo
(humatos estables).
5. Formación de picos. Indicador de rompimiento y
procesos de formación de moléculas.
6. Hoyos en forma de cereza. Indicador de materia viva,
no aparece en materiales sintéticos.
7. Radiación. Indicador de actividad enzimática y/o
actividad biológica en una muestra
8. Manchas oscuras. Indicador de proteínas y nitrógeno
orgánico.
Interpretación de cromasInterpretación de cromas
Importante hacer “cromas patrón” o “cromas de referencia”
-Suelo fértil
-Suelo estéril
-Suelo compacto
-Suelo enfermo, etc.-Suelo enfermo, etc.
La guía de interpretación anterior,
No aplica para cromas de tejidos vegetales.
También es necesario hacer “cromas patrón”
Plantas sanas, enfermas, productivas, etc.
La rizosfera vista a través de un
papel de cromatografía…..
Luis Medina Vega (QEPD)
Gracias!