UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA
Unidad Xochimilco
División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Tronco Común Divisional
Módulo: Procesos Celulares Fundamentales
EXAMEN DE LABORATORIO.
Por: Alberto Aráoz Vásquez
Matricula: 2152028961
Lic. En Medicina Veterinaria y Zootecnia
Docente:
Dr. Jorge Antonio Amézquita Landeros
Grupo: BB12A
CUESTIONARIO.
1. Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización.
R= medios físicos:
-Vapor saturado a presión: autoclave: es el medio más específico y efectivo de menor costo para esterilizar la mayoría de los objetos de uso hospitalario
-Calor seco: pupinel: este sistema elimina microorganismos por coagulación de las proteínas de estos. Su efectividad depende de la cantidad de calor, la cantidad de calor disponible y los niveles de perdida de calor, requiere largos periodos de exposición.
Medios químicos:
-Óxido de etileno: este es un producto químico con un alto poder desinfectante, su presencia está en forma líquida y se volatiza formando un compuesto gaseoso que elimina microorganismos por cualquier alquilación de la pared celular del microorganismo.
-Peróxido de hidrogeno: es un agente químico que se ha utilizado como desinfectante de alto nivel y esterilizante por inmersión, esteriliza a baja temperatura por medio de plasma de peróxido de hidrogeno
-Ácido paracetico: esterilizante de alto nivel, es esporicida, por lo tanto esteriliza en tiempos menores al glutaraldehido, hay dos formas por este agente: líquido y plasma.
2. Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuando es recomendable utilizar cada uno de estos.
R= Físicos: ventajas: más efectivo y de bajo costo, eleva la temperatura tiempo corto y no deja residuos tóxicos.
Desventajas: su efectividad depende de la cantidad de calor disponible, largos periodos.
Químicos: ventajas: alto poder desinfectante.
Desventajas: alto costo, largos periodos de esterilización y alto nivel de infraestructura.
3. Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección.
R=Antisépticos: alcoholes, tintura de yodo, povidona yodada, clorhexidina, triclosan.
Desinfectantes: glutaraldehido, hipoclorito de sodio1%
4. ¿Qué tipo de sustancias suele utilizarse continuamente para desinfectar superficies?
R= para las superficies muy comúnmente es usado el cloro y productos a base de cloro, incluidas los compuestos de hipocloruro, yodoforos, amonio, ácidos y álcalis fuerte, fenol, agentes gaseosos.
5. Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala que factores influyen en la creación de la zona estéril.
R=el mechero te ayuda a crear corrientes de aire caliente que arrastran partículas de polvo y microorganismos dispersos en el área que rodea tu área de trabajo, es decir el aire caliente que genera la flama arrastra hacia afuera toda partícula y microorganismo.
6. Menciona otros métodos usados en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estéril.
R= se pueden realizar limpiezas con agua jabonosa, se limpian con una compresa impregnada de alcohol al 70%
Limpieza de la cabina, desinfección de todo el material que se vaya a introducir a la cabina sumergiéndola en un baño de alcohol.
7. Explica los riesgos que puede correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir cada sesión.
R= los riesgos que se corren son primero que el material pueda caerse y por lo tanto romperse, también puede quedar sucio y contaminarse al hacerse una nueva técnica.
8. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir cada sesión.
R= al no lavar los materiales de laboratorio corremos el riesgo que queden sucios y por lo tanto después se contaminen o se infecten o algún virus se quede ahí.
9. Realiza el diagrama del microscopio describe cada una de sus partes e indica su intención.
10. Explica que tipo de bacterias pueden aislarse en el agua.
R= se han encontrado bacterias como por ejemplo Vibrio, e-coli, pseudomonas.
11. Explica cuál es el objetivo de sembrar diluciones del agua.
R=su principal propósito es disminuir la concentración bacteriana de una muestra especifica.
12. Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada.
R= es la técnica más utilizada, para aislar los microorganismos en un placa de agar, se colocan muestras y se realiza un barrido con una asa inoculada hasta lograr separar colonias individuales de la cepa de interés.
13. Explica que tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.
R= este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos gram negativos de fácil desarrollo aerobios y anaerobios facultativos.
14. Explica que se le llama medio de cultivo bacteriológico.
R= son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y condiciones físicas optimas, permite el crecimiento de microorganismos.
15. Explica que es un medio de cultivo enriquecido.
R= son aquellos que además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores, indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por medio de adición de sangre u otros tipos biológicos.
16. Explica que es un medio de cultivo selectivo.
R= son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población poli microbiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica.
17. Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gram negativas, resaltando las diferencias.
R= bacterias gram positivas: pared celular interna y una pared de peptiduglucano que es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicación y supervivencia de la batería, no tiene membrana externa, no tiene espacio peri plasmático.
Bacterias gram negativas: pose una pared celular más compleja , pared celular interna, pared de peptiduglucano, bicapa lípida externa, membrana externa, espacio peri plasmático.
18. ¿Cómo se diferencia las bacterias coliformes?
R= las bacterias del grupo coliformes totales que son capaces de fermentar lactosa a 44-45° se conocen como coliformes termo tolerantes.
19. ¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
R= lo que indica es que el agua está contaminada y por lo tanto no puede ser consumida por el ser humano.
20. ¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?
R=su importancia se debe que al ser analizadas se pueden crear procesos y tratamientos para el agua y así lograr que el agua esté libre de e-coli.
21. ¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?
R= todas están y se considera que el Escheria coli es el índice de contaminación fecal más adecuado.
22. ¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la muestra de agua que colectaste?
R= puede contener parásitos en el agua y así desencadenar unan posible contaminación y un riesgo de una suma importancia de la salud humana.
23. ¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?
R= Shigellae dysenteriae, Salmonella, Fiebre tifoidea, Salmonella ssp, Vibrio, Escheria Colli.
24. ¿Qué significan las siglas IMViC?
I: Indol, M: rojo de metilo, V: V-P (Voges- Proskauer), iC: citrato de Simons
25. ¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMViC?
R= se utiliza en la biología para identificar bacterias. El resultado de test expresa mediante símbolos de positivo o negativo (+,-) según el resultado de cada prueba siguiendo siempre el orden establecido por las iniciales del método.
26. ¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para realizar la prueba de la oxidasa?
R= para las pruebas de oxidasa, se utiliza un reactivo llamado Kovacs, el cual está compuesto de alcohol osaomílico, p-dimetilamino- benzaldehído, y ácido clorhídrico. El ácido puede reaccionar con el metal y darles falsos positivos.
27. Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se origina a partir de una sola bacteria (UFC) y estas de dividen en un promedio de 30 minutos.
R= el número de bacterias resultante depende mucho del tipo de muestra pero lo aproximado es que se generen alrededor de unas 4 a 6 bacterias.
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA
Unidad Xochimilco
División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Tronco Común Divisional
Módulo: Procesos Celulares Fundamentales
EXAMEN DE LABORATORIO.
Por: Alicia Maribel Curiel Rojo
Matricula: 2152026985
Lic. en Estomatologia
Docente:
Dr. Jorge Antonio Amézquita Landeros
Grupo: BB12A
1.- Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización.
Garantizan la destrucción total de los microorganismos presentes en sustancias o materiales. De esta forma se asegura que los microorganismos detectados en alguna experimentación provengan de las muestras estudiadas y no de alguna contaminación del ambiente o de la persona.
Dentro de los métodos físicos se pueden encontrar:
Calor: Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la acción del calor, el cual provoca una desnaturalización de proteínas, fusión desorganización de las membranas en los microorganismos.
Radiaciones: se atribuye a la absorción por DNA, existen uniones covalentes entre residuos de primigenia pertenecientes a la misma cadena, se distorsiona el DNA y se inhibe la síntesis del DNA, por tanto también el crecimiento y respiración de los microorganismos. Su uso principal es para esterilizar el aire y superficies.
Dentro de los métodos químicos: Pueden ser Gaseosos (óxido de etileno) o no Gaseosos (Aldehídos, ácido peracético y peróxido de hidrógeno)
Los antisépticos son considerados venenos que al actuar sobre gérmenes, estos son destruidos. Algunos de ellos ejercen su acción nociva sobre todas las células y otros actúan sobre algunas especies bacterianas en específico. Es óptimo para la antisepsia de las manos del experimentador, mesas de trabajo, material, etc.
2.- Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos.
Métodos físicos:
Ventajas: Rápido calentamiento y penetración, destrucción de bacterias en un periodo corto, no hay residuos tóxicos, además de que no es corrosivo.
Entre sus desventajas se encuentra que: En algunas ocasiones el material a esterilizar no soporta altas temperaturas y pueden sufrir algún daño o simplemente el material a esterilizar puede ser inflamable. En cuanto a las radiaciones, no penetran en sólidos y pobremente en líquidos.
Métodos químicos:
Ventajas: el ciclo de esterilización dura de 54-75 minutos, el material sometido a estos procesos no precisa de aireación.
Desventajas: se necesita un mayor tiempo, las sustancias son inflamables, tóxicas y de muy alto costo.
3.- Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección.
Los desinfectantes son productos químicos que matan a los microorganismos y se utilizan sobre objetos inanimados. Como: Glutaraldehído, hipoclorito de sodioLos antisépticos son sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los tejidos vivos. Como: Alcoholes, tintura de Yodo,
4.- ¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desinfectar superficies?
*Hipoclorito de sodio al 10%*Solución de benzal diluido 1:10
5.- Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala qué factores influyen en la creación de la zona estéril.
Ayudan a mantener un ambiente de esterilidad, a través del calor, cuando se trabaja con siembra de microorganismos.
Factores que influyen en la zona estéril: Una manipulación correcta de las muestras y del material, evitar contaminar a través de microorganismos propios del experimentador, aire externo, al igual que material no esterilizado previamente a su uso.
6.- Menciona otros métodos usados en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles.
Desinfectantes: son productos químicos que matan a los microorganismos y se utilizan sobre objetos inanimados
Antisépticos: sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los tejidos vivos
El calor es el método más utilizado para la esterilización y puede emplearse calor seco con hornos con una temperatura de 170°C por una hora o como calor húmedo con autoclaves con una temperatura de 121°C a 15 libras de presión por pulgada durante 20minutos.
7.- Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión.
Primero que nada se corre el riesgo de la ruptura de alguno de los materiales lo que puede causar algún accidente además de que es importante recoger el material y desinfectarlo para evitar la contaminación bacteriológica en especial si los materiales serán usados después.
8.- Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir cada sesión.
De no limpiar la mesa se propaga la contaminación, hay que tratar de mantener el campo estéril. Además que hay que tener el mayor cuidado en la limpieza para el manejo de las muestras y evitar alteraciones en los resultados.
10.- Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.
Enterobacterias como Shigella, Salmonella, Yersina pestis y algunas pertenecientes a la flora oportunista como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Proteus mirabilis.
11.- Explica cuál es el objetico de sembrar diluciones de agua.
Las diluciones son recomendadas debido al alto contenido de bacterias ya que permiten trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables así como el aislamiento adecuado de las colonias. Es importante no trabajar con una dilución tan grande ya que el número de bacterias sería tan bajo que podría impedir el detectar las colonias.
12. Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada.
El objetivo es obtener, a partir de elevado número de bacterias, un número reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al incubar esta, cada una de las bacterias originara una colonia.
13. Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en agar macconkey.
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Microorganismos ColoniasEscherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas
14. Explica a qué se le llama medio de cultivo bacteriológico.
Un cultivo es un método para la multiplicación de microorganismos, tales como bacterias, hongos y parásitos, en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un método fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades en medicina humana y veterinaria.
15. Explica que es un medio de cultivo enriquecido.
El enriquecimiento es una técnica que utiliza un medio selectivo líquido para permitir el desarrollo de un microorganismo a partir de una muestra que contiene una gran variedad de microorganismos. Así, aquellos microorganismos para los que el ambiente sea más favorable crecerán más que los otros y finalmente serán predominantes
Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo. El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).
16. Explica que es un medio de cultivo selectivo.
Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.
17.- Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.
Bacteria Gram Positiva:
a) Su envoltura celular comprende:1. La membrana citoplasmática2. La pared celular.
b) La pared celular está compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano o mureína (polímero de N-acetil-2-D-glucosamina, unido en orientación ß-1,4 con N-acetil murámico), su grosor le confiere una gran resistencia, las protege de una ruptura osmótica en ambientes acuáticos, les confiere forma y es la responsable de retener el tinte azul oscuro o violeta durante la tinción de Gram.
c) Presentan sólo una membrana lipídica (membrana citoplasmática) y la capa gruesa de peptidoglicano.
Posee dos clases de ácidos teicoicos: ácido lipoteicoico (ácido teicoico unido a un lípido) y ácido teicoico. Son polisacáridos que se unen al ácido N-acetil murámico del peptidoglicano.
La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico.
Ciertas bacterias Gram-positivas, cuando se someten a un régimen de limitación de fosfato son incapaces de sintetizar ácidos teicoicos, pero en su lugar producen ácidos teicurónicos. Los teicurónicos consisten en polímeros aniónicos formados por la alternancia de ácidos urónicos (que tienen grupos -COOH libres) y aminozúcares como la N-acetil-galactosamina.
d) Pueden presentar una capa superficial cristalina denominada capa S o capa superficial (es la parte más externa de la envoltura celular bacteriana) unida a la capa de peptidoglicano.
e) No existe presencia de endotoxinas.
Bacteria Gram Negativa:
a) Conformada por 4 zonas: 1. La membrana citoplasmática. 2. El espacio periplasmático, ubicado entre la membrana citoplasmática y el peptidoglicano.3. Una fina capa de peptidoglicano. 4. Membrana externa que contiene fosfolípidos, el lipopolisacárido (LPS) y proteínas (proteínas de membrana 6 externa). Esta capa está estrechamente unida al peptidoglicano y se la considera un componente de la pared celular.
b) Su estructura didérmica, es decir, de doble membrana celular (una externa y la otra citoplasmática) está íntimamente ligada al color rosado tenue que presentan ante la tinción de Gram.
c) Presentan dos membranas lipídicas (membrana citoplasmática y membrana externa) entre la fina pared celular de peptidoglicano
Entre la membrana citoplasmática interna y la membrana externa que recubre la pared celular se localiza el espacio periplásmico, relleno de una sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes para la nutrición en estas bacterias. Retienen la safranina.
La membrana externa contiene diversas proteínas; entre ellas, las porinas o canales proteicos que permiten el paso de ciertas sustancias, además de los lipopolisacáridos (LPS), formados por tres regiones: el polisacárido O (antígeno O), una estructura polisacárida central (KDO) y el lípido A (endotoxina).
d) Pueden presentar una capa S que se apoya directamente sobre la membrana externa.
e) Presencia de endotoxinas: el lipopolisacárido (LPS)
18.- ¿Cómo se definen a las bacterias coliformes?
Se definen como coliformes totales a aquellas bacterias entéricas en forma de bacilos cortos que se caracterizan por tener las siguientes propiedades bioquímicas:
Ser aerobias o anaerobias facultativas Ser bacilos Gram negativos; No ser esporógenas; (Si es Gram negativo NO esporula) Fermentan la lactosa a 35°C en menos 48 horas Con producción de ácido y gas
Incluye los géneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter. Durante mucho tiempo se consideraron evidencia de contaminación fecal, pero se ha demostrado que muchos de ellos pueden vivir e incluso crecer en el suelo, el agua y otros ambientes. Actualmente se consideran un excelente indicador de la eficiencia de los procesos de sanitización y desinfección, así como de calidad sanitaria en agua, vegetales y diversos productos procesados. Su determinación se basa generalmente en la capacidad de fermentar lactosa. Se pueden utilizar los métodos del número más probable (NMP ó MPN por sus siglas en inglés) que es un método estadístico en tres etapas y permite el hallazgo de cantidades muy bajas de coliformes. También se pueden detectar por cuenta en placa utilizando agar bilis-rojo violeta (ABRV ó RVBA por sus siglas en inglés) en el cual las colonias fermentadoras de lactosa causan el vire del indicador; pueden detectarse por filtración en membrana (Millipore) e incubación en medios adecuados, por métodos rápidos como Petrifilm y reacciones cromogénicas o fluorogénicas.
Coliformes fecales: dentro del grupo coliforme, los de origen fecal son capaces de fermentar la lactosa también a 44.5 °C; se consideran el indicador más adecuado de contaminación con heces de animales y humanos, por ejemplo en pescados y mariscos, carnes, leche, alimentos RTE, entre otros. La determinación se hace a partir de la segunda etapa (confirmativa) del método de NMP, cultivando en caldo lactosado con incubación a 44.5 °C. Generalmente se combinan las determinaciones, según se requiere.
Escherichia coli: se considera indicador de contaminación fecal reciente, humana o animal en productos como agua embotellada, leche y jugos, alimentos infantiles, y alimentos procesados, en general. Se caracteriza por ser coliforme termotolerante (fermenta lactosa a 44.5°C) que produce indol a partir de triptofano y produce β-glucuronidasa, características que se usan para su identificación en laboratorio, generalmente en la etapa final del NMP o de alguno de los otros métodos, incluyendo Petrifilm.
19.- ¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de agua puede estar contaminado, ya sea con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposición. Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo.
20.- ¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?
La determinación de la calidad bacteriológica reviste gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad (incapacidad para hacer daño) del agua destinada al consumo, evitando así epidemias gastrointestinales, y además de descubrir enfermedades que son comunes al hombre y animales.
21.- ¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?
No todas las bacterias coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminación. Dentro del grupo de los coliformes totales (que comprende la totalidad del grupo) existe un subgrupo que es el de los coliformes fecales (los de origen fecal).
Véase pregunta número 18.
22.- ¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la muestra de agua que colectaste?
Las complicaciones pueden ser que venga una epidemia de E.coli así como también de Salmonella y muy graves que no se puedan controlar.
23.- ¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?
* Enf. trasmitidas por el agua: Cólera, Fiebre Tifoidea y Paratifoidea, Disenterías, Poliomelitis, Hepatitis, Salmonelosis, Cryptosporidiosis, Gastroenteritis.
* Enf. con base en el agua: Ascariasis, Clonorquiasis, Dracunculosis, Paraginimiasis, Esquistosomiasis.
* Enf. vectoriales relacionadas con el agua: Dengue, Filariasis, Paludismo, Oncocercosis, Fiebre del Valle del Rift (FVR).
24.- ¿Qué significan las siglas IMViC?
I: Indol M: Rojo de metilo V: V-P (Voges-Proskauer) i C: Citrato de Simmons
25.- ¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMViC?
Las bacterias pertenecientes a la familia enterobacteriaceae, pueden identificarse a través de una serie de pruebas bioquímicas, que permiten determinar la presencia o ausencia de ciertas enzimas y a veces incluso permiten determinar la existencia de una secuencia metabólica. Con este fin se han desarrollado diversos esquemas de clasificación, uno de los más conocidos y utilizados corresponde al IMVIC que se desarrolló para clasificar especies de la familia antes mencionada y correspondientes al grupo de bacterias coliformes (bacterias aeróbicas o anaeróbicas facultativas, Gram (-), bacilares, no esporógenas que producen ácido y gas durante la fermentación de la lactosa).
26.- ¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para realizar la prueba de la oxidasa?
Ya que la prueba tiene como fundamento demostrara la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo, que es reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana.
Los metales pueden interferir de manera oxidativa ya que las enzimas están íntimamente relacionadas a la cadena de transporte de electrones.
27. Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se origina a partir de una sola bacteria (UFC) y estas se dividen en un tiempo promedio de 30 minutos.
El número de bacterias totales según su fusión binaria es de 281, 474, 976, 710, 656.
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA
Unidad Xochimilco
División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Tronco Común Divisional
Módulo: Procesos Celulares Fundamentales
Cuestionario de Laboratorio.
Por: Carlos Martínez MartínezMatricula: 2152026921
Lic. en Medicina Veterinaria y Zootecnia
Docente:
Dr. Jorge Antonio Amézquita Landeros
Grupo: BB12A
Métodos básicos para el aislamiento e identificación de enterobacterias del agua.
Cuestionario de Laboratorio.
1. Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización.
Depende de factores como tiempo, exposición y temperatura. El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: El calor húmedo el cual destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El calor es considerado como el método de esterilización por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir algún daño.
2. Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuándo es recomendable utilizar cada una de estas.
Métodos físicos:
-Ventajas
No es corrosivo para metales e instrumentos. Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas y sustancias
viscosas no volátiles.
-Desventajas Requiere de mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo
debido a la baja penetración del calor.
Métodos químicos:
-Ventajas
No deja ningún residuo tóxico. Se convierte en agua y oxígeno al final del proceso. El material no precisa aeración. El ciclo de esterilización dura entre 54 y 75 min.
-Desventajas No se pueden esterilizar objetos que contengan celulosa. Algodón, líquidos,
humedad o instrumental con lúmenes largos y estrechos.
Es el método de esterilización más caro.3. Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la
desinfección.
Desinfectantes: Cloro y compuestos clorados, aldehídos, óxido de etileno, compuestos fenólicos, ácidos y colorantes.
Antisépticos: Alcoholes, Iodo, agentes catiónicos y anfóteros.
4. ¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desinfectar superficies?
Hipoclorito de sodio o solución benzal.
5. Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala qué factores influyen en la creación de la zona estéril.
Crea corrientes de aire caliente que arrastran partículas de polvo y microorganismos dispersos en el aire que rodea el área de trabajo, es decir el aire caliente que genera la flama arrastra hacia fuera toda partícula y microorganismos. (convención de masas de aire).
6. Menciona métodos usados en la industria y en laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles.
El uso de bata, guantes y cubrebocas con la finalidad de evitar contaminación. Lavar con hipoclorito de sodio al 10% la mesa de trabajo.
7. Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión.
Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones o accidentes de contaminación así como romperse dicho material de vidrio y cortarse.
8. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo.Se puede provocar un foco de infección.
9. Realiza el diagrama de un microscopio y describe cada una de las partes y su función.
Brazo: Es la parte donde se debe sujetar.
Base o pie: Proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del microoscopio.
Platina: Tiene en su centro una cobertura circular por la que pasará la luz.
Macrométrico: Permite hacer un movimiento rápido hacia arriba o hacia abajo del tubo para localizar la imagen a observar.
Micrométrico: Permite colocar en posición cualquiera de los objetivos que se encuentran en él.
Tubo: Proporciona sostén a los oculares y los objetivos.
Ocular: Lentes que captan y amplian la imagen formada para los objetivos.
Objetivos: Pequeños cilindros colocados en el revolver quue proporciona poder de resolución del microscopio.
Fuente de luz: Foco de energía eléctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condesador.
10. Explica qué tipo de bacterias pueden aislarse en el agua.
Enterobacterias como Shigella, Salmnoella, Yersina pestis.
11.Explica cuál es el objetivo de sembrar diluciones del agua.
Trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables, así como aislamiento adecuado de colonias.
12.Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada.
El objetivo es obtener a partir de un número elevado de bacterias, uno más reducido de ellas, distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al incubar ésta, cada una de las bacterias originará una colonia.
13.Explica qué tipos de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.
En un medio diferencial para la selección y recuperación de enterobacterias y bacilos gram negativas entéricas relacionadas.
14.Explica a qué se le llama medio de cultivo bacteriológico.
Sustancias que pueden ser líquidas o sólidas que contienen los nutrientes necesarios para que una bacteria pueda crecer y desarrollarse.
15.Explica a qué se llama medio de cultivo enriquecido.
Están compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos. Ej. sangre, suero, líquidos etcétera. Se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.
16. Explica qué es un medio de cultivo selectivo.
Son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones físicas del medio añadiendo o suprimiendo componentes químicos específicos con el fin de inhibir el crecimiento de especies químicos cuyo crecimiento no interesa.
17.Describe las características de la pared celular de las bacterias gram+ y gram-, resaltando sus diferencias.
Gram-positivas:
Se tiñen de azul oscuro o violeta. Membrana citoplasmática. Capa gruesa de peptidoglicano. Ácidos teicóicos y lipoteicóicos, que sirven como agentes quelantes y en
ciertos tipos de adherencia. Polisacáridos de la cápsula.
Gram-negativas:
Se tiñen de un color rosado oscuro. Pobre membrana celular (externa y citoplasmática)
Membrana externa.
Tanto las bacterias gram+ como las gram- pueden presentar una capa superficial cristalina denominada capa S; en las gram- la capa S está unida directamente a la membrana externa. Mientras que en las gram+, la capa S está unida a la capa peptidoglicano.
18.¿Cómo se definen a las bacterias coliformes?
Coliforme signifca con forma de coli, refiriéndose a la bacteria del grupo, la Escheriachia Coli. Pero en sí consta de un grupo homogéneo de bacterias que se encuentran normalmente y en abundancia en el intenstino humano. Se utiliza cómo índice de contaminación de las aguas y por lo general están desprovistas de peligrosidad.
19.¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
Su presencia se interpreta como una indicación de que los organismos patógenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua se halla exenta de organismos productores de enfermedades.
20.¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?
La determinación de la calidad bacteriológica resiste gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al consumo evitando así epidemias gastrointestinales.
21.¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?
No, también están las coliformes totales que se encuentran en aguas contaminadas (aguas negras y otro tipo de desechos en descomposición).
22.¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de entero-bacterias en la muestra de agua que se colectó?
Cuando se tiene un nivel alto con presencia de entero-bacterias en el agua pueden contener todo tipo de microorganismos tales como parásitos, bacterias y
virus causantes de enfermedades como infecciones urinarias, pulmonía, septicemia o sobreinfecciones, en especial en inmunosuprimidos, en el uso de ciertos antibióticos, desnutrición, étc.
23.¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?
Fiebre tifoidea (Sallmonella typhi) Disentería bacilar (Shigella dysenteriae) Gastroenteritis infantil (Escherichia Coli) Peste (Yersinia pestis)
24.¿Qué significa las siglas IMViC?
Se emplea en biología para la identificación de bacterias. I = Indo, M = Rojo de Metilo, V = V-P (Voges –Proskquer) y iC = Citrato de Simons.
25.¿Cuál es el objeto de realizar las pruebas de IMViC?
Para la identificación de enterobacterias (bacilos gram-, anareobios facultativos con metabolismo fermentado).
26.¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para realizar las pruebas de oxidasa?
Porque se utiliza un reactivo llamado Kovacs, el cual está compuesto de alcohol y ácido clorhídrico. El ácido puede reaccionar con el metal y dar falsos-positivos.
27.Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 hrs. de incubación.
281, 474, 976, 710, 656 (apróx. 290, 00
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANAUnidad Xochimilco
División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Tronco Común Divisional
Módulo: Procesos Celulares Fundamentales
Tema. Cuestionario sobre los métodos básicos para el aislamiento e identificación de
enterobacterias del agua
Por: Delfina García BetanzoMatricula: 2152025960
Médico Cirujano
Docente:Dr. Jorge Antonio Amézquita Landeros
Grupo: BB12A
Cuestionario Laboratorio
1.- Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de
esterilización
Garantiza la destrucción total de microorganismos presentes en sustancias o
materiales. De esta forma se asegura que los microorganismos detectados en
alguna muestra provenga de la experimentación y no de alguna contaminación.
Físicos:
a) Calor: Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la acción
del calor, el cual provoca una desnaturalización de proteínas, fusión y
desorganización de membranas de los microorganismos.
b) Radiaciones: Se atribuye a la absorción por DNA, existen uniones covalentes
entre residuos de pirimidina perteneciente a la misma cadena, distorsiona el DNA
e inhibe su síntesis por tanto el crecimiento. Su uso principal es para esterilizar
aire y superficies.
Químicos:
a) Gaseosos: Los antisépticos son considerados venenos que destruyen
gérmenes, algunos ejercen su acción nociva sobre toda célula y otros sobre
algunas, son mas específicos. Óptimos para antisepsia y en mesas de trabajo;
como el óxido de etileno.
b) No gaseosos: Se encuentran los aldehídos, ácido peracético y peróxido de
hidrógeno.
2.- Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior
e indica cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos.
a) Físicos:
Ventajas: Son de rápido calentamiento y penetración, destruyen bacterias en un
periodo corto, no hay residuos tóxicos y no son corrosivos.
Desventajas: El material a veces no soporta altas temperaturas y pueden sufrir
daño o incluso puede ser inflamable. Las radiaciones no penetran sólidos y de
manera muy pobre a los líquidos.
3.- Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en
la desinfección
-Desinfectantes: Productos químicos que matan a los microorganismos y se
utilizan sobre objetos inanimados; como el glutaraldehído, hipoclorito de sodio.
-Antisépticos: Sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los
microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los
tejidos vivos; como los alcoholes, tintura de yodo.
4.- ¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desinfectar
superficies?
Hipoclorito de sodio al 10%
Solución de Benzal diluida 1:10
5.- Explica cual es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona
estéril para el trabajo microbiológico y señala que factores influyen en la
creación de la zona estéril.
Ayuda a mantener un ambiente de esterilidad, a través del calor, cuando se
trabaja con siembra de microorganismos. Los factores que influyen: una
manipulación correcta de la muestra y material ayudan a no contaminar, además
de evitar la contaminación por medio del aire externo o agentes provenientes del
mismo experimentador. De igual forma interviene aquel material que no es
previamente esterilizado para su uso.
6.- Menciona otros métodos usados en la industria y en los laboratorios de
investigación para crear zonas de trabajo estériles
El uso de desinfectantes, antisépticos y empleo de calor, tanto seco, como
húmedo, el uso de una estufa y de un autoclave.
También se pueden emplear rayos infrarrojos, filtración, el método de tindalización
(autoclave que se purga) y radiaciones ionizantes.
7.- Explica los riesgos que puedes correr si no recoges en frasco, los tubos y
las pipetas después de concluir la sesión
Se corre el riesgo de la ruptura del material ¡Causa un accidente” Es importante
recoger el material y desinfectarlo para evitar la contaminación bacteriológica
8.- Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa
de trabajo después de concluir cada sesión
Se propaga la contaminación y genera una alteración en los resultados
9.- Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e
indica su función.
10.- Explica que tipos de bacterias puedes aislarse en el agua
Enterobacterias, como: Shigella, Salmonella, E.Coli, klebsiellla pneumoniae, etc.
11.- Explica cuál es el objetivo de sembrar diluciones del agua
Se recomiendan debido al alto contenido de bacteria, ya que permite trabajar con
un número apropiado de células para realizar cuentas viables asi como el
aislamiento adecuado de las colonias
12.- Explica el fundamento de aislamiento por estría cruzada
El objetivo es obtener a partir de un número elevado de bacterias, un número
reducido de ellas, distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al
incubarla, cada una de las bacterias originará una colonia (UFC) Y además puede
estimarse la cantidad relativa de microorganismos en la muestra original.
13.- Explica que tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey
Se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram (-) de fácil desarrollo, aerobios y
anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no lactosa en
muestras clínicas, de agua y alimentos. Se pueden aislar en este tipo de agar,
todas aquellas bacterias que pertenecen a la familia de las enterobacterias.
14.- Explica a qué se le llama medio de cultivo bacteriológico
Al proceso de crecimiento de microorganismos mediante la toma de bacteria de un
sitio de invención (in vivo) por métodos de recolección de muestra y crecimiento
en un ambiente artificial (in Vitro)
15.- Explica qué es un medio de cultivo enriquecido
Contiene nutrientes específicos requeridos para el desarrollo de determinados
patógenos; el enriquecimiento se hace por adición de sangre y otros productos
biológicos que aportan factores nutritivos al medio de cultivo y por tanto a las
bacterias.
16.- Explica qué es un medio de cultivo selectivo
Son aquellos medios que son utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas
bacterias; facilitan nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana
específica.
17.- Describe las características de la pared celular de las bacterias Gram+ y
Gram-, resaltando sus diferencias
a) Gram (+) Tienen una capa gruesa de peptidoglucanos, presentan una gran
resistencia debido a esta capa que posee ácidos lipoteicoicos y se tiñen de color
azul-púrpura.
b) Gram (-) Poseen una capa de peptidoglucanos sin embargo es mas delgada, su
membrana externa contiene lipopolisacáridos, fosfolípidos y proteínas. Este tipo de
bacterias se tiñen de color rojo.
18.- ¿Cómo se definen a las bacterias coliformes?
Se definen como indicadores de contaminación fecal en el agua, que se
encuentran en el intestino del humano y animales homeotermos. Son bacterias
entéricas en forma de bacilos cortos, Gram (-), aerobios o anaerobios facultativos,
no es pirógenos, fermentan lactosa y producen ácido y gas.
19.- ¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
Indican que el agua esta contaminada, con aguas negras o de otro tipo de
desechos en descomposición.
20.- ¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?
Permite garantizar la inocuidad (incapacidad para hacer daño) del agua destinada
al consumo, evitando así epidemias, enfermedades gastrointestinales y
enfermedades de tipo diarreicas muy fuertes, que inclusive pudieran ser mortales.
21.- ¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?
No, ya que las coliformes fecales, se encuentran en las coliformes totales.
22.- ¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de
enterobacterias en la muestra de agua que recolectaste?
Una posible epidemia si es que esta agua se encuentra destinad apara el
consumo humano, epidemia de E. Coli, Salmonella, enfermedades diarreicas y
disentería.
23.- ¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua
contaminada con material fecal?
Transmitidas por el agua: Cólera, fiebre, tifoidea, paratifoidea, disenterías, polio,
hepatitis, salmonelosis.
Con base en el agua: Ascariasis, paragonimiasis.
Vectoriales relacionadas con el agua: Dengue, filariasis, paludismo
24.- ¿Qué significan las siglas IMViC?
I= Indol
M= Rojo de metilo
V= Vogues-Proskawer
iC= Citrato de Simmons.
25.- ¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMViC?
Las bacterias pertenecientes a la familia de enterobacterias pueden identificarse a
través de una serie de pruebas bioquímicas, que permiten notar la presencia o
ausencia de ciertas enzimas y la existencia de una secuencia metabólica. Por lo
tanto el IMViC sirve para clasificar especies de la familia de las enterobacterias y
dependiendo los resultados arrojados por dichas pruebas, saber de que bacteria
se trata.
26.- ¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para
realizar la prueba de la oxidasa?
Porque los metales pueden inferir de manera oxidativa, ya que las enzimas están
íntimamente relacionadas a la cadena de transporte de electrones. La prueba
tiene como objetivo demostrar la presencia de un sistema citocromooxidasa que
activa la oxidación del citocromo, el cual es reducido por el oxígeno molecular que
produce agua o peróxido de hidrógeno, según la especie bacteriana.
27.- Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de
las 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se
origina a partir de una sola bacteria (UFC) y éstas se dividen en un tiempo
promedio de 30 minutos.
281,474,976,710,656 bacterias en 24 horas.
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA
Unidad Xochimilco
División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Tronco Común Divisional
Módulo: Procesos Celulares Fundamentales
CUESTIONARIO DE LABORATORIO
MÉTODOS BÁSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.
Alumna: Ventura Maqueda Diana
Docente:
Dr. Jorge Antonio Amézquita Landeros
Grupo: BB12A
1.- Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización.
Agentes fisicos: el calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas:
el calor humedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalizacion de las proteínas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares.
La radiación, la emisión y propagación de la energía puede ser utilizada como agente para la eliminación de microorganismos
Radiaciones ionizantes se pueden utilizar para esterilizar materiales platicos y la luz uv para áreas cerradas
Quimicos: capaces de dañar los componentes célulares (proteínas, membranas, etc)
Gaseosos-----> oxido de etileno
No gaseosos ---------> alheidos ej: glutaraldehido Ácido paracético y peroxido de hidrógeno
1. Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos.
La elección del método, va a depender de las características del elementos que se va a esterilizar, tiempo, costo, que tan peligrosos son, consecuencias secundaria, entre otros factores.
Calor Húmedo
VENTAJAS
Rápido calentamiento y penetración.
Destrucción de bacterias y esporas en poco tiempo.
No deja residuos tóxicos.
Bajo deterioro del material expuesto.
Económico.
DESVENTAJAS
No se permite para emulsiones con agua.
Es corrosivo sobre algunos metales.
Calor Seco
VENTAJAS
No es corrosivo para metales e instrumentos.
Permiten esterilización de sustancias en polvo y no acuosas y de viscosas no volátiles.
DESVENTAJAS
Mayor tiempo esterilización.
Baja penetración del calor.
Radiaciones de acuerdo al tiempo de radiación, tiempo exposición y dosis
QUIMICOS (Oxido de Etileno)
VENTAJAS
Esteriliza material termosensible, equipos electrónicos, bombas cardiorrespiratorias, metal etc.
DESVENTAJAS
Peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, ademas cancerígeno.
Aldehídos
VENTAJAS
Método rápido y único esterilizanrte frío.
DESVENTAJAS
No se pueden esterilizar algunos objetos con celulosa, algodón,, líquidos, humedad, madera, etc
Gas-Plasma de Peróxido de Hidrógeno
VENTAJAS
No deja ningún residuo toxico.
Se convierte en agua y oxigeno al final del proceso.
Material sin aireación.
Ciclo dura entre 54 y 75 min.
DESVENTAJAS
Método mas costoso.
2. Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección.
Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Detergentes catiónicos (compuestos de amonio cuaternario)
hipoclorito sódio 1%
cloroxilenol
Formaldehído.
Glutaraldehído.
Peróxido de hidrógeno.
Dicloruro de mercurio.
Antisépticos:
Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua).
Tintura de Yodo
Providona yodada
Clorhexidina
Triclosán
3. ¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desifenctar superficies?
bactericidas, fungicidas,fungistatica y virusidas
4. Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala que factores influyen en la creación de la zona estéril.
Al Trabajar cerca del mechero se crea una corriente de aire cálido que no permite que las bacterias entren a la zona de trabajo.
5. Menciona otros métodos usados en la industria y en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles.
El uso de equipo para evitar contaminación (bata, guantes y cubrebocas) así como el
lavado del area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido además del uso del mechero.
6. Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión.
Se puede sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminacion.
7. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir cada sesión.
Riesgo de contaminación (foco de infección.)
8. Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e indica su función.
PARTE FUNCION
BRAZO Es la parte de donde se debe sujetar, las pinzas el carro el tubo del microscopio y el revólver. Además sirve para trasladar el microscopio de un lugar a otro
BASE O PIE Es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del microscopio
PLATINA Es una pieza metálica, cuadrada, que
tiene en su centro una abertura circular por la que pasará la luz del sistema de iluminación. Aquí se coloca el portaobjetos con la muestra a observar
PINZAS DE SUJECION Parte mecánica que sirve para sujetar la preparación. La mayoría de los microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con dos tornillos, que permiten un avance longitudinal y transversal de la preparación.
TORNILLO MACROMETRICO Permite hacer un movimiento rápido hacia arriba o hacia abajo del tubo o la platina, y se utiliza para localizar la imagen a observar.
TORNILLO MICROMETRICO Parte mecánica de movimiento giratorio que nos permite colocar en posición cualquiera de los objetivos que se encuentran en él
TUBO Parte mecánica que proporciona sostén a los oculares y objetivos.
OCULAR Se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que Capta y amplia la imagen formada en los objetivos. Los primeros microscopios eran monoculares, es decir, poseían una sola lente. Los microscopios actuales poseen dos oculares, uno para cada ojo y se les llama binoculares.
OBJETIVOS Se encuentran incrustados en el revólver Son unos pequeños cilindros colocados en el revólver que proporciona el poder de resolución del microscopio y determinan la cantidad
total de aumento.
DIAFRAGMA Existe un diafragma en el condensador, que elimina el exceso de luminosidad para tener una buena iluminación del objeto a observar
FUENTE DE LUZ Para observar la muestra microscópica es necesario que ésta se ilumine con algún tipo de luz y nuestros microscopios cuentan con un foco que da energía eléctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador
9. Explica qué tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.
Las enterobacteriaceae
10.Explica cual es el objetivo de sembrar diluciones de agua.
Trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables, así como un aislamiento adecuado de colonias.
11.Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada.
Proceso semicuantitativo.Técnica que se utliza para obtener apartir de un elevado núero de bacterias un número reducido de ellas distribuidas individualmente, cada una originará una colonia.
12.Explica qué tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.
El agar MacConkey es un medio diferencial para la selección y recuperación de Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entéricos relacionados. Contiene
sales biliares y cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas y de algunas gramnegativas exigentes. Contiene lactosa como única fuente de carbono. Identificando con un color rojo las bacterias fermentadoras de lactosa.
13.Explica a que se llama medio de cultivo bacteriológico.
Cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos,
14.Explica qué es un medio enriquecido.
Aquellos medios que han sido complementados con líquidos corporales, vitaminas específicas, aminoácidos, proteínas y otros nutrientes claramente definidos como tales. Se utilizan para favorecer el crecimiento de ciertas especies bacterianas al mismo tiempo que inhibe el desarrollo de microorganismos no deseados.
15.Explica qué es un medio de cultivo selectivo.
Favorecen el crecimiento específico de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta.
16.Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.
BACTERIAS GRAM POSITIVAS
*Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano.
*No tiene membrana externa
* No tiene espacio periplasmático
* La red de mureína está muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas
* La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la formación de enlaces peptídicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucano
* No contiene LPS
* En la tinción de Gram, retienen la tinción azul
* Conservan el complejo yodocolorante
* Son esporulantes y no esporulantes, como Streptococcus, Cisteria, Frankia.
* Poseen otros componentes: ácidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacáridos complejos.
BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
° Poseen una pared celular más compleja:
-pared celular interna
-pared de peptidoglucano
- bicapa lipídica externa
° Membrana externa: forma un saco rígido alrededor de la bacteria, mantiene estructura y es barrera impermeable a macromoléculas, ofrece protección en condiciones adversas
° Espacio periplasmático: espacio entre la superficie externa de la membrana citoplasmática y la interna de la membrana externa.
° La red de mureína presenta una sola capa
° La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de lipopolisacáridos situada en la parte externa de la pared celular.
° Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa células B, liberación de IL, FNT, IL 6 por macrófagos.
°En la tinción son rosas
°Pierden el complejo yodocolorante
° Pueden ser anaerobios o aerobios
° Poseen proteínas con concentraciones elevadas.
17.¿Cómo se definen a las bacterias coliformes?
Son un grupo de bacterias que se comparten caracteristicas bioquimicas en comun y son utiles microorganismos indicadores de sanidad de alimentos y agua en el que se encuentran las enterobacterias
18.¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgánicos
19.¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?
Tiene gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que permite saber la calidad del agua destinada al consumo humano evitando así epidemias gastrointestinales.
20.¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?
No, también existen coliformes de vida libre.
21.¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la muestra de agua que colectaste?
Pueden sucitarse enfermedades leves como las infecciones agudas del oído, hasta otras más graves como la fiebre tifoidea y la hepatitis.
22.¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?
Salmonelosis, Fiebre paratifoidea, shiguelosis, Colera
23.¿Qué significan las siglas IMViC?
es una prueba utilizada en biología para la identificación bacterias. Se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.
24.¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMViC?
Se emplean fundamentalmente para la identificación de las Enterobacterias (bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador).
25.Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se orgina a partir de una sola bacteria (UFC) y éstas se dividen en un tiempo promedio de 30 minutos.
24hrs=281 474 976 710 656
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA
Unidad Xochimilco
División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Tronco Común Divisional
Módulo: Procesos Celulares Fundamentales
CUESTIONARIO PRÁCTICA
MÉTODOS BÁSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS DEL AGUA
Por: Eduardo Jerónimo HernándezMatricula: 2152033604
Lic. Médico CirujanoDocente:
Dr. Jorge Antonio Amézquita Landeros
Grupo: BB12A
1.-Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización.
Métodos físicos
Depende de factores como tiempo, exposición y temperatura. El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor húmedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalización de las proteínas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El calor es considerado como el método de esterilización por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningún tipo de daño.
Métodos químicos
Algunas sustancias químicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque tienen la capacidad de promover una o más reacciones químicas capaces de dañar los componentes celulares de los microorganismos (proteínas, membranas, etc.)
1. Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos.
La elección del método, va a depender de las características del elementos que se va a esterilizar, tiempo, costo, que tan peligrosos son, consecuencias secundaria, entre otros factores.
Método Métodos Físicos
Calor húmedo Ventajas Desventajas
Rápido, no deja residuos tóxicos, bajo deterioro del material expuesto, económico
No se permite para emulsiones con agua, es corrosivo sobre algunos metales
Calor seco No es corrosivo para metales e instrumentos, permite esterilización de sustancias en polvo
Mayor tiempo de esterilización. Baja penetración del calor. Radiaciones de acuerdo al tiempo de radiación.
Ionizantes RUV Esterilizan superficies Escasamente penetrantes
Filtración Esteriliza aceites, pomadas, soluciones oftálmicas
No retienen virus ni microplasma.
Método Métodos Químicos
Ventajas Desventajas
Óxido de Etileno
Esteriliza material que es termosensible, como equipos electrónicos, et.
Peligroso por ser altmente inflamable y explosivo, adem+ás de ser cancerígeno
Aldehidos Método rápido y único esterilizante frío.
No se puede estrilizar objetos con celulosa, algodón, líquidos, humedad, madera, etc.
Gas-Plasma de Peróxido de Hidrógeno
No deja ningún residuo tóxico, se convierte en agua y oxígeno al final del proceso, material sin aireación, dura aproximadamente entre una hora y hora y media.
Muy costoso.
2. Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección.
Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Detergentes catiónicos (compuestos de amonio cuaternario) Gas cloro. Compuestos clorados (cloraminas, hipoclorito sódico, dióxido de cloro) Sulfato de cobre. Óxido de etileno (gas). Formaldehído. Glutaraldehído. Peróxido de hidrógeno. Compuestos yodóforos que contienen yodo en solución. Dicloruro de mercurio. Ozono. Ácido peracético. Compuestos fenólicos.
Antisépticos: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Compuestos que contienen fenol (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol, clorhexidina). Detergentes
catiónicos, especiamente compuestos de amonio cuaternario (cloruro de benzalconio). Peróxido de hidrógeno (solución al 3%). compuestos yodorosos que contienen yodo en solución. Nitrato de Plata.
3. ¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desifenctar superficies?
Los desinfectantes como lo son bacterisidas, fungisidas y virusidas
4. Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala que factores influyen en la creación de la zona estéril.
Trabajar cerca del mechero (radio de 20 centímetros aproximadamente) crea corriente de aire cálido que impide la entrada a esta zona de bacterias contaminantes esto creando un inoculo más puro del microorganismo a trabajar.
5. Menciona otros métodos usados en la industria y en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles.
Uso de bata, guantes y cubrebocas con la finalidad de evitar contaminación. Lavado del area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido 1:10. El uso del mechero.
6. Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión.
Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminacion.
7. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir cada sesión.
Se puede provocar un foco de infección.
8. Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e indica su función.
PARTE FUNCION
BRAZO Es la parte de donde se debe sujetar, las pinzas el carro el tubo del microscopio y el revólver. Además
sirve para trasladar el microscopio de un lugar a otro
BASE O PIE Es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del microscopio
PLATINA Es una pieza metálica, cuadrada, que tiene en su centro una abertura circular por la que pasará la luz del sistema de iluminación. Aquí se coloca el portaobjetos con la muestra a observar
PINZAS DE SUJECION Parte mecánica que sirve para sujetar la preparación. La mayoría de los microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con dos tornillos, que permiten un avance longitudinal y transversal de la preparación.
TORNILLO MACROMETRICO Permite hacer un movimiento rápido hacia arriba o hacia abajo del tubo o la platina, y se utiliza para localizar la imagen a observar.
TORNILLO MICROMETRICO Parte mecánica de movimiento giratorio que nos permite colocar en posición cualquiera de los objetivos que se encuentran en él
TUBO Parte mecánica que proporciona sostén a los oculares y objetivos.
CREMALLERA Permite que el movimiento de los tornillos macro y micrométrico sea de mayor o de menor amplitud.
OCULAR Se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que Capta y amplia la imagen formada en los objetivos. Los primeros microscopios
eran monoculares, es decir, poseían una sola lente. Los microscopios actuales poseen dos oculares, uno para cada ojo y se les llama binoculares.
OBJETIVOS Se encuentran incrustados en el revólver Son unos pequeños cilindros colocados en el revólver que proporciona el poder de resolución del microscopio y determinan la cantidad total de aumento.
DIAFRAGMA Existe un diafragma en el condensador, que elimina el exceso de luminosidad para tener una buena iluminación del objeto a observar
FUENTE DE LUZ Para observar la muestra microscópica es necesario que ésta se ilumine con algún tipo de luz y nuestros microscopios cuentan con un foco que da energía eléctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador
9. Explica qué tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.
Las enterobacteriaceae
10.Explica cual es el objetivo de sembrar diluciones de agua.
Trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables, así como un aislamiento adecuado de colonias.
11.Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada.
La técnica de estría cruzada es un procedimiento semicuantitativo.
Es una técnica que se utiliza para obtener a partir de un elevado número de bacterias, unnúmero reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al incubar ésta, cada una de las bacterias originará una colonia.
12.Explica qué tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.
El agar MacConkey es un medio diferencial para la selección y recuperación de Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas y de algunas gramnegativas exigentes. Contiene lactosa como única fuente de carbono. Identificando con un color rojo las bacterias fermentadoras de lactosa.
13.Explica a que se llama medio de cultivo bacteriológico.
Cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos,
14.Explica qué es un medio enriquecido.
Aquellos medios que han sido complementados con líquidos corporales, vitaminas específicas, aminoácidos, proteínas y otros nutrientes claramente definidos como tales. Se utilizan para favorecer el crecimiento de ciertas especies bacterianas al mismo tiempo que inhibe el desarrollo de microorganismos no deseados.
15.Explica qué es un medio de cultivo selectivo.
Son aquellos que favorecen el crecimiento específico de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta.
16.Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.
BACTERIAS GRAM POSITIVAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano.
*Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicación y supervivencia de la bacteria.
Poseen una pared celular más compleja:
-pared celular interna
-pared de peptidoglucano
- bicapa lipídica externa
No tiene membrana externa Membrana externa: forma un saco rígido alrededor de la bacteria, mantiene estructura y es barrera impermeable a macromoléculas, ofrece protección en condiciones adversas
No tiene espacio periplasmático
Espacio periplasmático: espacio entre la superficie externa de la membrana citoplasmática y la interna de la membrana externa.
La red de mureína está muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas
La red de mureína presenta una sola capa
La penicilina mata a las gram positivas, La penicilina no mata a las Gram
ya que bloquea la formación de enlaces peptídicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucano
negativas, a causa de la capa de lipopolisacáridos situada en la parte externa de la pared celular.
No contiene LPS
Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa células B, liberación de IL, FNT, IL 6 por macrófagos.
En la tinción de Gram, retienen la tinción azul
Quedan decoloradas.
Conservan el complejo yodocolorante Pierden el complejo yodocolorante
Son esporulantes y no esporulantes, como Streptococcus, Cisteria, Frankia.
Pueden ser anaerobios o aerobios
Poseen otros componentes: ácidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacáridos complejos.
Poseen proteínas con concentraciones elevadas.
17.¿Cómo se definen a las bacterias coliformes?
Los coliformes son un grupo de bacterias que comparten características bioquímicas en común y son útiles como microorganismos indicadores de sanidad de alimentos y agua. Entre los coliformes se encuentran las enterobacterias. Poseen morfología bacilar, pueden ser aerobias o anaerobias facultativas. No forman endosporas, son gramnegativas, fermentan la lactosa produciendo ácido y gas en 24 a 38 horas a 36 ºC.
18.¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
Indican la presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgánicos sin tratar, que pueden tener un alto impacto en el ambiente. Indican la sanidad de alimentos y agua. Es un indicador de calidad de los alimentos.
19.¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?
La determinación de la calidad bacteriológica reviste gran importancia en el ámbito de
la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al consumo
evitando así epidemias gastrointestinales.
20.¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?
No, también existen coliformes de vida libre.
21.¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la muestra de agua que colectaste?
Las bacterias coliformes fecales pueden tener efectos graves en la salud pública. Los volúmenes de agua con altos niveles de esta bacteria pueden contener una amplia gama de parásitos, bacterias y virus causantes de enfermedades, las cuales pueden variar desde condiciones leves como las infecciones agudas del oído, hasta otras más graves que amenazan la vida tales como la fiebre tifoidea y la hepatitis. Los gusanos parásitos y los patógenos bacterianos tales como Salmonella, también se encuentran comúnmente en el agua que da positivo en la prueba que busca altos niveles de bacterias coliformes fecales.
22.¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?
Salmonelosis, Fiebre paratifoidea, shiguelosis, Colera
23.¿Qué significan las siglas IMViC?
IMVIC es una prueba utilizada en biología para la identificación bacterias. Se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.
24.¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMViC?
Se emplean fundamentalmente para la identificación de las Enterobacterias (bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador).
25.Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se orgina a partir de una sola bacteria (UFC) y éstas se dividen en un tiempo promedio de 30 minutos.
24hrs=281 474 976 710 656
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA
Unidad Xochimilco
División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Tronco Común Divisional
Módulo: Procesos Celulares Fundamentales
CUESTIONARIO PRÁCTICA
MÉTODOS BÁSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.
Por: Dimas Guzmán Cristian.Matricula: 2152031146Lic. Médico cirujano.
Docente:
Dr. Jorge Antonio Amézquita Landeros
Grupo: BB12A
CUESTIONARIO PRÁCTICA
MÉTODOS BÁSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.
26.Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización.
El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor húmedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalización de las proteínas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares.
El calor es considerado como el método de esterilización por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningún tipo de daño.
Algunas sustancias químicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque tienen la capacidad de promover una o más reacciones químicas capaces de dañar los componentes celulares de los microorganismos (proteínas, membranas, etc.)
27.Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos.
La elección del método, va a depender de las características del elementos que se va a esterilizar, tiempo, costo, que tan peligrosos son, consecuencias secundaria, entre otros factores.
MÉTODOS FÍSICOS.
Calor húmedo.
Ventajas: Rápido, no deja residuos tóxicos, bajo deterioro del material expuesto, económico.
Desventajas: No se permite para emulsiones con agua, es corrosivo sobre algunos metales.
Calor seco.
Ventajas: No es corrosivo para metales e instrumentos, permite esterilización de sustancias en polvo.
Desventajas: Mayor tiempo de esterilización. Baja penetración del calor. Radiaciones de acuerdo al tiempo de radiación.
Ionizantes RUV.
Ventajas: Esterilizan superficies.
Desventajas: Escasamente penetrantes.
Filtración.
Ventajas: Esteriliza aceites, pomadas, soluciones oftálmicas.
Desventajas: No retienen virus ni microplasma.
MÉTODOS QUÍMICOS.
Óxido de Etileno.
Ventajas: Esteriliza material que es termo sensible, como equipos electrónicos, etc.
Desventajas: Peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, además de ser cancerígeno.
Aldehídos.
Ventajas: Método rápido y único esterilizante frío.
Desventajas: No se puede estrilizar objetos con celulosa, algodón, líquidos, humedad, madera, etc.
Gas-Plasma de Peróxido de Hidrógeno.
Ventajas: No deja ningún residuo tóxico, se convierte en agua y oxígeno al final del proceso, material sin aireación, dura aproximadamente entre una hora y hora y media.
Desventajas: Muy costoso.
28. Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección.
Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Detergentes catiónicos (compuestos de amonio cuaternario) Gas cloro. Compuestos clorados (cloraminas, hipoclorito sódico, dióxido de cloro) Sulfato de cobre. Óxido de etileno (gas). Formaldehído. Glutaraldehído. Peróxido de hidrógeno. Compuestos yodóforos que contienen yodo en solución. Dicloruro de mercurio. Ozono. Ácido peracético. Compuestos fenólicos.
Antisépticos: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Compuestos que contienen fenol (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol, clorhexidina). Detergentes catiónicos, especiamente compuestos de amonio cuaternario (cloruro de benzalconio). Peróxido de hidrógeno (solución al 3%). compuestos yodorosos que contienen yodo en solución. Nitrato de Plata.
29.¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desifenctar superficies?
Los desinfectantes como lo son bacterisidas, fungisidas y virusidas
30.Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala que factores influyen en la creación de la zona estéril.
Trabajar cerca del mechero (radio de 20 centímetros aproximadamente) crea corriente de aire cálido que impide la entrada a esta zona de bacterias contaminantes esto creando un inoculo más puro del microorganismo a trabajar.
31.Menciona otros métodos usados en la industria y en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles.
Uso de bata, guantes y cubrebocas con la finalidad de evitar contaminación. Lavado del area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido 1:10. El uso del mechero.
32.Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión.
Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminacion.
33.Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir cada sesión.
Se puede provocar un foco de infección.
34.Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e indica su función.
PARTE FUNCION
BRAZO Es la parte de donde se debe sujetar, las pinzas el carro el tubo del microscopio y el revólver. Además sirve para trasladar el microscopio de un lugar a otro
BASE O PIE Es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del microscopio
PLATINA Es una pieza metálica, cuadrada, que tiene en su centro una abertura circular por la que pasará la luz del sistema de iluminación. Aquí se coloca el portaobjetos con la muestra a observar
PINZAS DE SUJECION Parte mecánica que sirve para sujetar la preparación. La mayoría de los microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con dos tornillos, que permiten un avance longitudinal y transversal de la preparación.
TORNILLO MACROMETRICO Permite hacer un movimiento rápido hacia arriba o hacia abajo del tubo o la platina, y se utiliza para localizar la imagen a observar.
TORNILLO MICROMETRICO Parte mecánica de movimiento
giratorio que nos permite colocar en posición cualquiera de los objetivos que se encuentran en él
TUBO Parte mecánica que proporciona sostén a los oculares y objetivos.
CREMALLERA Permite que el movimiento de los tornillos macro y micrométrico sea de mayor o de menor amplitud.
OCULAR Se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que Capta y amplia la imagen formada en los objetivos. Los primeros microscopios eran monoculares, es decir, poseían una sola lente. Los microscopios actuales poseen dos oculares, uno para cada ojo y se les llama binoculares.
OBJETIVOS Se encuentran incrustados en el revólver Son unos pequeños cilindros colocados en el revólver que proporciona el poder de resolución del microscopio y determinan la cantidad total de aumento.
DIAFRAGMA Existe un diafragma en el condensador, que elimina el exceso de luminosidad para tener una buena iluminación del objeto a observar
FUENTE DE LUZ Para observar la muestra microscópica es necesario que ésta se ilumine con algún tipo de luz y nuestros microscopios cuentan con un foco que da energía eléctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador
35.Explica qué tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.
Las enterobacteriaceae
36.Explica cual es el objetivo de sembrar diluciones de agua.
Trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables, así como un aislamiento adecuado de colonias.
37.Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada.
La técnica de estría cruzada es un procedimiento semicuantitativo.
Es una técnica que se utiliza para obtener a partir de un elevado número de bacterias, unnúmero reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al incubar ésta, cada una de las bacterias originará una colonia.
38.Explica qué tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.
El agar MacConkey es un medio diferencial para la selección y recuperación de Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas y de algunas gramnegativas exigentes. Contiene lactosa como única fuente de carbono. Identificando con un color rojo las bacterias fermentadoras de lactosa.
39.Explica a que se llama medio de cultivo bacteriológico.
Cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos,
40.Explica qué es un medio enriquecido.
Aquellos medios que han sido complementados con líquidos corporales, vitaminas específicas, aminoácidos, proteínas y otros nutrientes claramente definidos como tales. Se utilizan para favorecer el crecimiento de ciertas especies bacterianas al mismo tiempo que inhibe el desarrollo de microorganismos no deseados.
41.Explica qué es un medio de cultivo selectivo.
Son aquellos que favorecen el crecimiento específico de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta.
42.Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.
Bacterias Gram positivas.
1. Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano. Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicación y supervivencia de la bacteria.
2. No tiene membrana externa.3. No tiene espacio periplasmático4. La red de mureína está muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas.5. La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la formación de
enlaces peptídicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucano.6. No contiene LPS.7. En la tinción de Gram, retienen la tinción azul.8. Conservan el complejo yodocolorante.9. Son esporulantes y no esporulantes, como Streptococcus, Cisteria, Frankia.10.Poseen otros componentes: ácidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacáridos
complejos.
Bacterias Gram negativas.
1. Poseen una pared celular más compleja:Pared celular internaPared de peptidoglucano bicapa lipídica externa
2. Membrana externa: forma un saco rígido alrededor de la bacteria, mantiene estructura y es barrera impermeable a macromoléculas, ofrece protección en condiciones adversas.
3. Espacio periplasmático: espacio entre la superficie externa de la membrana citoplasmática y la interna de la membrana externa.
4. La red de mureína presenta una sola capa.5. La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de
lipopolisacáridos situada en la parte externa de la pared celular.6. Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa células B,
liberación de IL, FNT, IL 6 por macrófagos.7. Quedan decoloradas.8. Pierden el complejo yodocolorante.9. Pueden ser anaerobios o aerobios.10.Poseen proteínas con concentraciones elevadas.
43.¿Cómo se definen a las bacterias coliformes?
Los coliformes son un grupo de bacterias que comparten características bioquímicas en común y son útiles como microorganismos indicadores de sanidad de alimentos y agua. Entre los coliformes se encuentran las enterobacterias. Poseen morfología bacilar, pueden ser aerobias o anaerobias facultativas. No forman endosporas, son gramnegativas, fermentan la lactosa produciendo ácido y gas en 24 a 38 horas a 36 ºC.
44.¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
Indican la presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgánicos sin tratar, que pueden tener un alto impacto en el ambiente. Indican la sanidad de alimentos y agua. Es un indicador de calidad de los alimentos.
45.¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?
La determinación de la calidad bacteriológica reviste gran importancia en el ámbito de
la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al consumo
evitando así epidemias gastrointestinales.
46.¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?
No, también existen coliformes de vida libre.
47.¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la muestra de agua que colectaste?
Las bacterias coliformes fecales pueden tener efectos graves en la salud pública. Los volúmenes de agua con altos niveles de esta bacteria pueden contener una amplia gama de parásitos, bacterias y virus causantes de enfermedades, las cuales pueden variar desde condiciones leves como las infecciones agudas del oído, hasta otras más graves que amenazan la vida tales como la fiebre tifoidea y la hepatitis.
48.¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?
Salmonelosis, Fiebre paratifoidea, shiguelosis, Colera
49.¿Qué significan las siglas IMViC?
IMVIC es una prueba utilizada en biología para la identificación bacterias. Se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.
50.¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMViC?Se emplean fundamentalmente para la identificación de las Enterobacterias (bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador).
51.-Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se orgina a partir de una sola bacteria (UFC) y éstas se dividen en un tiempo promedio de 30 minutos.
24hrs=281 474 976 710 656
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA
Unidad Xochimilco
División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Tronco Común Divisional
Módulo: Procesos Celulares Fundamentales
EXAMEN DE LABORATORIO.
Por: Melina Trejo Lara
Matricula: 2152034003
Lic. en Enfermería
Docente:
Dr. Jorge Antonio Amézquita Landeros
Grupo: BB12A
1.- Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización.
Garantizan la destrucción total de los microorganismos presentes en sustancias o materiales. De esta forma se asegura que los microorganismos detectados en alguna experimentación provengan de las muestras estudiadas y no de alguna contaminación del ambiente o de la persona.
Dentro de los métodos físicos se pueden encontrar:
Calor: Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la acción del calor, el cual provoca una desnaturalización de proteínas, fusión desorganización de las membranas en los microorganismos.
Radiaciones: se atribuye a la absorción por DNA, existen uniones covalentes entre residuos de primigenia pertenecientes a la misma cadena, se distorsiona el DNA y se inhibe la síntesis del DNA, por tanto también el crecimiento y respiración de los microorganismos. Su uso principal es para esterilizar el aire y superficies.
Dentro de los métodos químicos: Pueden ser Gaseosos (óxido de etileno) o no Gaseosos (Aldehídos, ácido peracético y peróxido de hidrógeno)
Los antisépticos son considerados venenos que al actuar sobre gérmenes, estos son destruidos. Algunos de ellos ejercen su acción nociva sobre todas las células y otros actúan sobre algunas especies bacterianas en específico. Es óptimo para la antisepsia de las manos del experimentador, mesas de trabajo, material, etc.
2.- Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos.
Métodos físicos:
Ventajas: Rápido calentamiento y penetración, destrucción de bacterias en un periodo corto, no hay residuos tóxicos, además de que no es corrosivo.
Entre sus desventajas se encuentra que: En algunas ocasiones el material a esterilizar no soporta altas temperaturas y pueden sufrir algún daño o simplemente el material a esterilizar puede ser inflamable. En cuanto a las radiaciones, no penetran en sólidos y pobremente en líquidos.
Métodos químicos:
Ventajas: el ciclo de esterilización dura de 54-75 minutos, el material sometido a estos procesos no precisa de aireación.
Desventajas: se necesita un mayor tiempo, las sustancias son inflamables, tóxicas y de muy alto costo.
3.- Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección.
Los desinfectantes son productos químicos que matan a los microorganismos y se utilizan sobre objetos inanimados. Como: Glutaraldehído, hipoclorito de sodioLos antisépticos son sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los tejidos vivos. Como: Alcoholes, tintura de Yodo,
4.- ¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desinfectar superficies?
*Hipoclorito de sodio al 10%*Solución de benzal diluido 1:10
5.- Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala qué factores influyen en la creación de la zona estéril.
Ayudan a mantener un ambiente de esterilidad, a través del calor, cuando se trabaja con siembra de microorganismos.
Factores que influyen en la zona estéril: Una manipulación correcta de las muestras y del material, evitar contaminar a través de microorganismos propios del experimentador, aire externo, al igual que material no esterilizado previamente a su uso.
6.- Menciona otros métodos usados en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles.
Desinfectantes: son productos químicos que matan a los microorganismos y se utilizan sobre objetos inanimados
Antisépticos: sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los tejidos vivos
El calor es el método más utilizado para la esterilización y puede emplearse calor seco con hornos con una temperatura de 170°C por una hora o como calor húmedo con autoclaves con una temperatura de 121°C a 15 libras de presión por pulgada durante 20minutos.
7.- Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión.
Primero que nada se corre el riesgo de la ruptura de alguno de los materiales lo que puede causar algún accidente además de que es importante recoger el material y desinfectarlo para evitar la contaminación bacteriológica en especial si los materiales serán usados después.
8.- Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir cada sesión.
De no limpiar la mesa se propaga la contaminación, hay que tratar de mantener el campo estéril. Además que hay que tener el mayor cuidado en la limpieza para el manejo de las muestras y evitar alteraciones en los resultados.
10.- Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.
Enterobacterias como Shigella, Salmonella, Yersina pestis y algunas pertenecientes a la flora oportunista como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Proteus mirabilis.
11.- Explica cuál es el objetico de sembrar diluciones de agua.
Las diluciones son recomendadas debido al alto contenido de bacterias ya que permiten trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables así como el aislamiento adecuado de las colonias. Es importante no trabajar con una dilución tan grande ya que el número de bacterias sería tan bajo que podría impedir el detectar las colonias.
12. Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada.
El objetivo es obtener, a partir de elevado número de bacterias, un número reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al incubar esta, cada una de las bacterias originara una colonia.
13. Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en agar macconkey.
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Microorganismos ColoniasEscherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas
14. Explica a qué se le llama medio de cultivo bacteriológico.
Un cultivo es un método para la multiplicación de microorganismos, tales como bacterias, hongos y parásitos, en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un método fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades en medicina humana y veterinaria.
15. Explica que es un medio de cultivo enriquecido.
El enriquecimiento es una técnica que utiliza un medio selectivo líquido para permitir el desarrollo de un microorganismo a partir de una muestra que contiene una gran variedad de microorganismos. Así, aquellos microorganismos para los que el ambiente sea más favorable crecerán más que los otros y finalmente serán predominantes
Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo. El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).
16. Explica que es un medio de cultivo selectivo.
Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.
17.- Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.
Bacteria Gram Positiva:
d) Su envoltura celular comprende:1. La membrana citoplasmática2. La pared celular.
e) La pared celular está compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano o mureína (polímero de N-acetil-2-D-glucosamina, unido en orientación ß-1,4 con N-acetil murámico), su grosor le confiere una gran resistencia, las protege de una ruptura osmótica en ambientes acuáticos, les confiere forma y es la responsable de retener el tinte azul oscuro o violeta durante la tinción de Gram.
f) Presentan sólo una membrana lipídica (membrana citoplasmática) y la capa gruesa de peptidoglicano.
Posee dos clases de ácidos teicoicos: ácido lipoteicoico (ácido teicoico unido a un lípido) y ácido teicoico. Son polisacáridos que se unen al ácido N-acetil murámico del peptidoglicano.
La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico.
Ciertas bacterias Gram-positivas, cuando se someten a un régimen de limitación de fosfato son incapaces de sintetizar ácidos teicoicos, pero en su lugar producen ácidos teicurónicos. Los teicurónicos consisten en polímeros aniónicos formados por la alternancia de ácidos urónicos (que tienen grupos -COOH libres) y aminozúcares como la N-acetil-galactosamina.
f) Pueden presentar una capa superficial cristalina denominada capa S o capa superficial (es la parte más externa de la envoltura celular bacteriana) unida a la capa de peptidoglicano.
g) No existe presencia de endotoxinas.
Bacteria Gram Negativa:
f) Conformada por 4 zonas: 1. La membrana citoplasmática. 2. El espacio periplasmático, ubicado entre la membrana citoplasmática y el peptidoglicano.3. Una fina capa de peptidoglicano. 4. Membrana externa que contiene fosfolípidos, el lipopolisacárido (LPS) y proteínas (proteínas de membrana 6 externa). Esta capa está estrechamente unida al peptidoglicano y se la considera un componente de la pared celular.
g) Su estructura didérmica, es decir, de doble membrana celular (una externa y la otra citoplasmática) está íntimamente ligada al color rosado tenue que presentan ante la tinción de Gram.
h) Presentan dos membranas lipídicas (membrana citoplasmática y membrana externa) entre la fina pared celular de peptidoglicano
Entre la membrana citoplasmática interna y la membrana externa que recubre la pared celular se localiza el espacio periplásmico, relleno de una sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes para la nutrición en estas bacterias. Retienen la safranina.
La membrana externa contiene diversas proteínas; entre ellas, las porinas o canales proteicos que permiten el paso de ciertas sustancias, además de los lipopolisacáridos (LPS), formados por tres regiones: el polisacárido O (antígeno O), una estructura polisacárida central (KDO) y el lípido A (endotoxina).
i) Pueden presentar una capa S que se apoya directamente sobre la membrana externa.
j) Presencia de endotoxinas: el lipopolisacárido (LPS)
18.- ¿Cómo se definen a las bacterias coliformes?
Se definen como coliformes totales a aquellas bacterias entéricas en forma de bacilos cortos que se caracterizan por tener las siguientes propiedades bioquímicas:
Ser aerobias o anaerobias facultativas Ser bacilos Gram negativos; No ser esporógenas; (Si es Gram negativo NO esporula) Fermentan la lactosa a 35°C en menos 48 horas Con producción de ácido y gas
Incluye los géneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter. Durante mucho tiempo se consideraron evidencia de contaminación fecal, pero se ha demostrado que muchos de ellos pueden vivir e incluso crecer en el suelo, el agua y otros ambientes. Actualmente se consideran un excelente indicador de la eficiencia de los procesos de sanitización y desinfección, así como de calidad sanitaria en agua, vegetales y diversos productos procesados. Su determinación se basa generalmente en la capacidad de fermentar lactosa. Se pueden utilizar los métodos del número más probable (NMP ó MPN por sus siglas en inglés) que es un método estadístico en tres etapas y permite el hallazgo de cantidades muy bajas de coliformes. También se pueden detectar por cuenta en placa utilizando agar bilis-rojo violeta (ABRV ó RVBA por sus siglas en inglés) en el cual las colonias fermentadoras de lactosa causan el vire del indicador; pueden detectarse por filtración en membrana (Millipore) e incubación en medios adecuados, por métodos rápidos como Petrifilm y reacciones cromogénicas o fluorogénicas.
Coliformes fecales: dentro del grupo coliforme, los de origen fecal son capaces de fermentar la lactosa también a 44.5 °C; se consideran el indicador más adecuado de contaminación con heces de animales y humanos, por ejemplo en pescados y mariscos, carnes, leche, alimentos RTE, entre otros. La determinación se hace a partir de la segunda etapa (confirmativa) del método de NMP, cultivando en caldo lactosado con incubación a 44.5 °C. Generalmente se combinan las determinaciones, según se requiere.
Escherichia coli: se considera indicador de contaminación fecal reciente, humana o animal en productos como agua embotellada, leche y jugos, alimentos infantiles,
y alimentos procesados, en general. Se caracteriza por ser coliforme termotolerante (fermenta lactosa a 44.5°C) que produce indol a partir de triptofano y produce β-glucuronidasa, características que se usan para su identificación en laboratorio, generalmente en la etapa final del NMP o de alguno de los otros métodos, incluyendo Petrifilm.
19.- ¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de agua puede estar contaminado, ya sea con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposición. Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo.
20.- ¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?
La determinación de la calidad bacteriológica reviste gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad (incapacidad para hacer daño) del agua destinada al consumo, evitando así epidemias gastrointestinales, y además de descubrir enfermedades que son comunes al hombre y animales.
21.- ¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?
No todas las bacterias coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminación. Dentro del grupo de los coliformes totales (que comprende la totalidad del grupo) existe un subgrupo que es el de los coliformes fecales (los de origen fecal).
Véase pregunta número 18.
22.- ¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la muestra de agua que colectaste?
Las complicaciones pueden ser que venga una epidemia de E.coli así como también de Salmonella y muy graves que no se puedan controlar.
23.- ¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?
* Enf. trasmitidas por el agua: Cólera, Fiebre Tifoidea y Paratifoidea, Disenterías, Poliomelitis, Hepatitis, Salmonelosis, Cryptosporidiosis, Gastroenteritis.
* Enf. con base en el agua: Ascariasis, Clonorquiasis, Dracunculosis, Paraginimiasis, Esquistosomiasis.
* Enf. vectoriales relacionadas con el agua: Dengue, Filariasis, Paludismo, Oncocercosis, Fiebre del Valle del Rift (FVR).
24.- ¿Qué significan las siglas IMViC?
I: Indol M: Rojo de metilo V: V-P (Voges-Proskauer) i C: Citrato de Simmons
25.- ¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMViC?
Las bacterias pertenecientes a la familia enterobacteriaceae, pueden identificarse a través de una serie de pruebas bioquímicas, que permiten determinar la presencia o ausencia de ciertas enzimas y a veces incluso permiten determinar la existencia de una secuencia metabólica. Con este fin se han desarrollado diversos esquemas de clasificación, uno de los más conocidos y utilizados corresponde al IMVIC que se desarrolló para clasificar especies de la familia antes mencionada y correspondientes al grupo de bacterias coliformes (bacterias aeróbicas o anaeróbicas facultativas, Gram (-), bacilares, no esporógenas que producen ácido y gas durante la fermentación de la lactosa).
26.- ¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para realizar la prueba de la oxidasa?
Ya que la prueba tiene como fundamento demostrara la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo, que es reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana.
Los metales pueden interferir de manera oxidativa ya que las enzimas están íntimamente relacionadas a la cadena de transporte de electrones.
27. Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se origina a partir de una sola bacteria (UFC) y estas se dividen en un tiempo promedio de 30 minutos.
El número de bacterias totales según su fusión binaria es de 281, 474, 976, 710, 656.
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA
Unidad Xochimilco
División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Tronco Común Divisional
Módulo: Procesos Celulares Fundamentales
Tema: CUESTIONARIO
MÉTODOS BÁSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE
ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.
Por: Thania Sarahi Álvarez Román.
Matricula: 2152025880Lic. En Estomatología.
Docente:
Dr. Jorge Antonio Amézquita Landeros
Grupo: BB12A
CUESTIONARIO
MÉTODOS BÁSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE
ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.
1. Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de
esterilización.
Métodos físicos
Depende de factores como tiempo, exposición y temperatura. El calor se puede
aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor húmedo el cual destruye
a los microorganismos por desnaturalización de las proteínas y el calor seco que
destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El
calor es considerado como el método de esterilización por excelencia siempre y
cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningún tipo de
daño.
Métodos químicos
Algunas sustancias químicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes
porque tienen la capacidad de promover una o más reacciones químicas capaces
de dañar los componentes celulares de los microorganismos (proteínas,
membranas, etc.)
2. Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e
indica cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos.
La elección del método, va a depender de las características del elementos que se
va a esterilizar, tiempo, costo, que tan peligrosos son, consecuencias secundaria,
entre otros factores.
Método Métodos Físicos
Calor húmedo Ventajas Desventajas
Rápido, no deja residuos
tóxicos, bajo deterioro del
material expuesto,
económico
No se permite para
emulsiones con agua, es
corrosivo sobre algunos
metales
Calor seco No es corrosivo para
metales e instrumentos,
permite esterilización de
sustancias en polvo
Mayor tiempo de
esterilización. Baja
penetración del calor.
Radiaciones de acuerdo al
tiempo de radiación.
Ionizantes RUV Esterilizan superficies Escasamente penetrantes
Filtración Esteriliza aceites, pomadas,
soluciones oftálmicas
No retienen virus ni
microplasma.
Método Métodos Químicos
Ventajas Desventajas
Óxido de
Etileno
Esteriliza material que es
termosensible, como
equipos electrónicos, et.
Peligroso por ser altmente
inflamable y explosivo,
adem+ás de ser cancerígeno
Aldehidos Método rápido y único
esterilizante frío.
No se puede estrilizar objetos
con celulosa, algodón,
líquidos, humedad, madera,
etc.
Gas-Plasma de
Peróxido de
Hidrógeno
No deja ningún residuo
tóxico, se convierte en agua
y oxígeno al final del
proceso, material sin
aireación, dura
aproximadamente entre una
hora y hora y media.
Muy costoso.
3. Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la
desinfección.
Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua).
Detergentes catiónicos (compuestos de amonio cuaternario) Gas cloro.
Compuestos clorados (cloraminas, hipoclorito sódico, dióxido de cloro) Sulfato de
cobre. Óxido de etileno (gas). Formaldehído. Glutaraldehído. Peróxido de
hidrógeno. Compuestos yodóforos que contienen yodo en solución. Dicloruro de
mercurio. Ozono. Ácido peracético. Compuestos fenólicos.
Antisépticos: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Compuestos que
contienen fenol (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol, clorhexidina). Detergentes
catiónicos, especiamente compuestos de amonio cuaternario (cloruro de
benzalconio). Peróxido de hidrógeno (solución al 3%). compuestos yodorosos que
contienen yodo en solución. Nitrato de Plata.
4. ¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desifenctar
superficies?
Los desinfectantes como lo son bacterisidas, fungisidas y virusidas
5. Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona
estéril para el trabajo microbiológico y señala que factores influyen en la
creación de la zona estéril.
Trabajar cerca del mechero (radio de 20 centímetros aproximadamente) crea
corriente de aire cálido que impide la entrada a esta zona de bacterias
contaminantes esto creando un inoculo más puro del microorganismo a trabajar.
6. Menciona otros métodos usados en la industria y en la industria y en los
laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles.
Uso de bata, guantes y cubrebocas con la finalidad de evitar contaminación.
Lavado del area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido 1:10.
El uso del mechero.
7. Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y
las pipetas después de concluir la sesión.
Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminacion.
8. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de
trabajo después de concluir cada sesión.
Se puede provocar un foco de infección.
9. Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e
indica su función.
PARTE FUNCION
BRAZO Es la parte de donde se debe sujetar,
las pinzas el carro el tubo del
microscopio y el revólver. Además
sirve para trasladar el microscopio de
un lugar a otro
BASE O PIE Es una pieza que proporciona
estabilidad y sirve de soporte a todas
las partes del microscopio
PLATINA Es una pieza metálica, cuadrada, que
tiene en su centro una abertura
circular por la que pasará la luz del
sistema de iluminación. Aquí se
coloca el portaobjetos con la muestra
a observar
PINZAS DE SUJECION Parte mecánica que sirve para
sujetar la preparación. La mayoría de
los microscopios modernos tienen las
pinzas adosadas a un carro con dos
tornillos, que permiten un avance
longitudinal y transversal de la
preparación.
TORNILLO MACROMETRICO Permite hacer un movimiento rápido
hacia arriba o hacia abajo del tubo o
la platina, y se utiliza para localizar la
imagen a observar.
TORNILLO MICROMETRICO Parte mecánica de movimiento
giratorio que nos permite colocar en
posición cualquiera de los objetivos
que se encuentran en él
TUBO Parte mecánica que proporciona
sostén a los oculares y objetivos.
CREMALLERA Permite que el movimiento de los
tornillos macro y micrométrico sea de
mayor o de menor amplitud.
OCULAR Se localiza en la parte superior del
tubo ocular y son las lentes que Capta
y amplia la imagen formada en los
objetivos. Los primeros microscopios
eran monoculares, es decir, poseían
una sola lente. Los microscopios
actuales poseen dos oculares, uno
para cada ojo y se les llama
binoculares.
OBJETIVOS Se encuentran incrustados en el
revólver Son unos pequeños cilindros
colocados en el revólver que
proporciona el poder de resolución del
microscopio y determinan la cantidad
total de aumento.
DIAFRAGMA Existe un diafragma en el
condensador, que elimina el exceso
de luminosidad para tener una buena
iluminación del objeto a observar
FUENTE DE LUZ Para observar la muestra
microscópica es necesario que ésta
se ilumine con algún tipo de luz y
nuestros microscopios cuentan con un
foco que da energía eléctrica que
dirige sus rayos luminosos hacia el
sistema condensador
10.Explica qué tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.
Las enterobacteriaceae
11.Explica cual es el objetivo de sembrar diluciones de agua.
Trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables, así
como un aislamiento adecuado de colonias.
12.Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada.
La técnica de estría cruzada es un procedimiento semicuantitativo.
Es una técnica que se utiliza para obtener a partir de un elevado número de
bacterias, un número reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la
superficie de la placa. Al incubar ésta, cada una de las bacterias originará una
colonia.
13.Explica qué tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.
El agar MacConkey es un medio diferencial para la selección y recuperación de
Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entéricos relacionados. Contiene
sales biliares y cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas
y de algunas gramnegativas exigentes. Contiene lactosa como única fuente de
carbono. Identificando con un color rojo las bacterias fermentadoras de lactosa.
14.Explica a que se llama medio de cultivo bacteriológico.
Cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos,
15.Explica qué es un medio enriquecido.
Aquellos medios que han sido complementados con líquidos corporales, vitaminas
específicas, aminoácidos, proteínas y otros nutrientes claramente definidos como
tales. Se utilizan para favorecer el crecimiento de ciertas especies bacterianas al
mismo tiempo que inhibe el desarrollo de microorganismos no deseados.
16.Explica qué es un medio de cultivo selectivo.
Son aquellos que favorecen el crecimiento específico de un microorganismo
particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de
microorganismos a partir de una población microbiana mixta.
17.Describe las características de la pared celular de las bacterias
grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.
BACTERIAS GRAM POSITIVAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
Poseen una pared celular interna y una
pared de peptidoglucano.
*Peptidoglucano: es un exoesqueleto
que da consistencia y forma esencial
para replicación y supervivencia de la
bacteria.
Poseen una pared celular más
compleja:
-pared celular interna
-pared de peptidoglucano
- bicapa lipídica externa
No tiene membrana externa Membrana externa: forma un saco
rígido alrededor de la bacteria,
mantiene estructura y es barrera
impermeable a macromoléculas,
ofrece protección en condiciones
adversas
No tiene espacio periplasmático
Espacio periplasmático: espacio entre
la superficie externa de la membrana
citoplasmática y la interna de la
membrana externa.
La red de mureína está muy
desarrollada y llega a tener hasta 40
La red de mureína presenta una sola
capas capa
La penicilina mata a las gram positivas,
ya que bloquea la formación de
enlaces peptídicos entre las diferentes
cadenas del peptidoglucano
La penicilina no mata a las Gram
negativas, a causa de la capa de
lipopolisacáridos situada en la parte
externa de la pared celular.
No contiene LPS
Contiene LPS: estimulador de
respuestas inmunes: activa células B,
liberación de IL, FNT, IL 6 por
macrófagos.
En la tinción de Gram, retienen la
tinción azul
Quedan decoloradas.
Conservan el complejo yodocolorante Pierden el complejo yodocolorante
Son esporulantes y no esporulantes,
como Streptococcus, Cisteria, Frankia.
Pueden ser anaerobios o aerobios
Poseen otros componentes: ácidos
teicoicos y lipoteicoicos, y
polisacáridos complejos.
Poseen proteínas con concentraciones
elevadas.
18.¿Cómo se definen a las bacterias coliformes?
Los coliformes son un grupo de bacterias que comparten características
bioquímicas en común y son útiles como microorganismos indicadores de sanidad
de alimentos y agua. Entre los coliformes se encuentran las enterobacterias.
Poseen morfología bacilar, pueden ser aerobias o anaerobias facultativas. No
forman endosporas, son gramnegativas, fermentan la lactosa produciendo ácido y
gas en 24 a 38 horas a 36 ºC.
19.¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?
Indican la presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgánicos
sin tratar, que pueden tener un alto impacto en el ambiente. Indican la sanidad de
alimentos y agua. Es un indicador de calidad de los alimentos.
20.¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?
La determinación de la calidad bacteriológica reviste gran importancia en el ámbito
de
la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al
consumo
evitando así epidemias gastrointestinales.
21.¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?
No, también existen coliformes de vida libre.
22.¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias
en la muestra de agua que colectaste?
Las bacterias coliformes fecales pueden tener efectos graves en la salud pública.
Los volúmenes de agua con altos niveles de esta bacteria pueden contener una
amplia gama de parásitos, bacterias y virus causantes de enfermedades, las
cuales pueden variar desde condiciones leves como las infecciones agudas del
oído, hasta otras más graves que amenazan la vida tales como la fiebre tifoidea y
la hepatitis. Los gusanos parásitos y los patógenos bacterianos tales como
Salmonella, también se encuentran comúnmente en el agua que da positivo en la
prueba que busca altos niveles de bacterias coliformes fecales.
23.¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua
contaminada con materia fecal?
Salmonelosis, Fiebre paratifoidea, shiguelosis, Colera
24.¿Qué significan las siglas IMViC?
IMVIC es una prueba utilizada en biología para la identificación bacterias. Se
compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.
25.¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMViC?
Se emplean fundamentalmente para la identificación de las Enterobacterias
(bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador).
26.¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para
realizar la prueba de oxidasa?
Pueden alterar el resultado dando falsos positivos
27.Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24
horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se
orgina a partir de una sola bacteria (UFC) y éstas se dividen en un tiempo
promedio de 30 minutos.
24hrs=281 474 976 710 656
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA
Unidad Xochimilco
División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Tronco Común Divisional
Módulo: Procesos Celulares Fundamentales
Practica de Laboratorio.
Por: Loeza Coatzozon GriselMatricula: 2143026539
Lic. Agrónoma
Docente:Dr. Jorge Antonio Amézquita Landeros
Grupo: BB12A
1.- EXPLICA EL FUNDAMENTO DE LOS DIFERENTES MÉTODOS FÍSICOS Y QUÍMICOS DE ESTERILIZACIÓN:
Garantizan la destrucción total de los microorganismos presentes en sustancias o materiales. De esta forma se asegura que los microorganismos detectados en alguna experimentación provengan de las muestras estudiadas y no de alguna contaminación del ambiente o de la persona.
Dentro de los métodos físicos se pueden encontrar:
Calor: Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la acción del calor, el cual provoca una desnaturalización de proteínas, fusión desorganización de las membranas en los microorganismos.
Radiaciones: se atribuye a la absorción por DNA, existen uniones covalentes entre residuos de primigenia pertenecientes a la misma cadena, se distorsiona el DNA y se inhibe la síntesis del DNA, por tanto también el crecimiento y respiración de los microorganismos. Su uso principal es para esterilizar el aire y superficies.
Dentro de los métodos químicos: Pueden ser Gaseosos (óxido de etileno) o no Gaseosos (Aldehídos, ácido peracético y peróxido de hidrógeno)
Los antisépticos son considerados venenos que al actuar sobre gérmenes, estos son destruidos. Algunos de ellos ejercen su acción nociva sobre todas las células y otros actúan sobre algunas especies bacterianas en específico. Es óptimo para la antisepsia de las manos del experimentador, mesas de trabajo, material, etc.
2.- EXPLICA LAS VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MÉTODOS DE LA PREGUNTA ANTERIOR E INDICA CUÁNDO ES RECOMENDABLE UTILIZAR CADA UNO DE ÉSTOS:
Métodos físicos:
Ventajas: Rápido calentamiento y penetración, destrucción de bacterias en un periodo corto, no hay residuos tóxicos, ademas de que no es corrosivo.
Entre sus desventajas se encuentra que: En algunas ocasiones el material a esterilizar no soporta altas temperaturas y pueden sufrir algún daño o simplemente el material a esterilizar puede ser inflamable. En cuanto a las radiaciones, no penetran en sólidos y pobremente en líquidos.
Métodos químicos:
Ventajas: el ciclo de esterilización dura de 54-75 minutos, el material sometido a estos procesos no precisa de aireación.
Desventajas: se necesita un mayor tiempo, las sustancias son inflamables, tóxicas y de muy alto costo.
3.- INDICA LOS PRINCIPALES AGENTES DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS UTILIZADOS EN LA DESINFECCIÓN:
Los desinfectantes son productos químicos que matan a los microorganismos y se utilizan sobre objetos inanimados. Como: Glutaraldehído, hipoclorito de sodioLos antisépticos son sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los tejidos vivos. Como: Alcoholes, tintura de Yodo,
4.- ¿QUÉ TIPO DE SUSTANCIAS SUELEN UTILIZARSE COMÚNMENTE PARA DESINFECTAR SUPERFICIES?
*Hipoclorito de sodio al 10%*Solución de benzal diluido 1:10
5.- EXPLICA CUÁL ES EL OBJETIVO DE UTILIZAR EL MECHERO PARA PREPARAR LA ZONA ESTÉRIL PARA EL TRABAJO MICROBIOLÓGICO Y SEÑALA QUÉ FACTORES INFLUYEN EN LA CREACIÓN DE LA ZONA ESTÉRIL:
Ayudan a mantener un ambiente de esterilidad, a través del calor, cuando se trabaja con siembra de microorganismos.
Factores que influyen en la zona estéril: Una manipulación correcta de las muestras y del material, evitar contaminar a través de microorganismos propios del experimentador, aire externo, al igual que material no esterilizado previamente a su uso.
6.- MENCIONA OTROS MÉTODOS USADOS EN LA INDUSTRIA Y EN LOS LABORATORIOS DE INVESTIGACIÓN PARA CREAR ZONAS DE TRABAJO ESTÉRILES:
Desinfectantes: son productos químicos que matan a los microorganismos y se utilizan sobre objetos inanimados
Antisépticos: sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los tejidos vivos
El calor es el método más utilizado para la esterilización y puede emplearse calor seco con hornos con una temperatura de 170°C por una hora o como calor
húmedo con autoclaves con una temperatura de 121°C a 15 libras de presión por pulgada durante 20minutos.
7.- EXPLICA LOS RIESGOS QUE PUEDES CORRER SI NO RECOGES EL FRASCO, LOS TUBOS Y LAS PIPETAS DESPUÉS DE CONCLUIR LA SESIÓN:
Primero que nada se corre el riesgo de la ruptura de alguno de los materiales lo que puede causar algún accidente además de que es importante recoger el material y desinfectarlo para evitar la contaminación bacteriológica en especial si los materiales serán usados después.
8.- EXPLICA LOS RIESGOS QUE PUEDES CORRER SI NO LAVAS Y DESINFECTAS LA MESA DE TRABAJO DESPUÉS DE CONCLUIR CADA SESIÓN:
De no limpiar la mesa se propaga la contaminación, hay que tratar de mantener el campo estéril. Además que hay que tener el mayor cuidado en la limpieza para el manejo de las muestras y evitar alteraciones en los resultados.
10.- EXPLICA QUE TIPOS DE BACTERIAS PUEDEN AISLARSE EN EL AGUA:
Enterobacterias como Shigella, Salmonella, Yersina pestis y algunas pertenecientes a la flora oportunista como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Proteus mirabilis
11.- EXPLICA CUÁL ES EL OBJETICO DE SEMBRAR DILUCIONES DE AGUA:
Las diluciones son recomendadas debido al alto contenido de bacterias ya que permiten trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables así como el aislamiento adecuado de las colonias. Es importante no trabajar con una dilución tan grande ya que el número de bacterias sería tan bajo que podría impedir el detectar las colonias.
12. EXPLICA EL FUNDAMENTO DEL AISLAMIENTO POR ESTRÍA CRUZADA:
El objetivo es obtener, a partir de elevado número de bacterias, un número reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al incubar esta, cada una de las bacterias originara una colonia.
13. EXPLICA QUE TIPOS DE BACTERIAS PUEDEN AISLARSE EN ANGAR MACCONKEY:
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Microorganismos ColoniasEscherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas
14. EXPLICA A QUÉ SE LE LLAMA MEDIO DE CULTIVO BACTERIOLÓGICO:
Un cultivo es un método para la multiplicación de microorganismos, tales como bacterias, hongos y parásitos, en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un método fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades en medicina humana y veterinaria.
15. EXPLICA QUE ES UN MEDIO DE CULTIVO ENRIQUECIDO:
El enriquecimiento es una técnica que utiliza un medio selectivo líquido para permitir el desarrollo de un microorganismo a partir de una muestra que contiene una gran variedad de microorganismos. Así, aquellos microorganismos para los que el ambiente sea más favorable crecerán más que los otros y finalmente serán predominantes
Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo. El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).
16. EXPLICA QUE ES UN MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO:
Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.
17.- DESCRIBE LAS CARACTERÍSTICAS DE LA PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS GRAMPOSITIVAS Y GRAMNEGATIVAS, RESALTANDO SUS DIFERENCIAS:
Bacteria Gram Positiva:
g) Su envoltura celular comprende:1. La membrana citoplasmática2. La pared celular.
h) La pared celular está compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano o mureína (polímero de N-acetil-2-D-glucosamina, unido en orientación ß-1,4 con N-acetil murámico), su grosor le confiere una gran resistencia, las protege de una ruptura osmótica en ambientes acuáticos, les confiere forma y es la responsable de retener el tinte azul oscuro o violeta durante la tinción de Gram.
i) Presentan sólo una membrana lipídica (membrana citoplasmática) y la capa gruesa de peptidoglicano.
Posee dos clases de ácidos teicoicos: ácido lipoteicoico (ácido teicoico unido a un lípido) y ácido teicoico. Son polisacáridos que se unen al ácido N-acetil murámico del peptidoglicano.
La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico.
Ciertas bacterias Gram-positivas, cuando se someten a un régimen de limitación de fosfato son incapaces de sintetizar ácidos teicoicos, pero en su lugar producen ácidos teicurónicos. Los teicurónicos consisten en polímeros aniónicos formados por la alternancia de ácidos urónicos (que tienen grupos -COOH libres) y aminozúcares como la N-acetil-galactosamina.
h) Pueden presentar una capa superficial cristalina denominada capa S o capa superficial (es la parte más externa de la envoltura celular bacteriana) unida a la capa de péptidoglicano.
i) No existe presencia de endotoxinas.
Bacteria Gram Negativa:
k) Conformada por 4 zonas: 1. La membrana citoplasmática. 2. El espacio periplasmático, ubicado entre la membrana citoplasmática y el peptidoglicano.3. Una fina capa de peptidoglicano. 4. Membrana externa que contiene fosfolípidos, el lipopolisacárido (LPS) y proteínas (proteínas de membrana 6 externa). Esta capa está estrechamente unida al peptidoglicano y se la considera un componente de la pared celular.
l) Su estructura didérmica, es decir, de doble membrana celular (una externa y la otra citoplasmática) está íntimamente ligada al color rosado tenue que presentan ante la tinción de Gram.
m) Presentan dos membranas lipídicas (membrana citoplasmática y membrana externa) entre la fina pared celular de peptidoglicano
Entre la membrana citoplasmática interna y la membrana externa que recubre la pared celular se localiza el espacio periplásmico, relleno de una sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes para la nutrición en estas bacterias. Retienen la safranina.
La membrana externa contiene diversas proteínas; entre ellas, las porinas o canales proteicos que permiten el paso de ciertas sustancias, además de los lipopolisacáridos (LPS), formados por tres regiones: el polisacárido O (antígeno O), una estructura polisacárida central (KDO) y el lípido A (endotoxina).
n) Pueden presentar una capa S que se apoya directamente sobre la membrana externa.
o) Presencia de endotoxinas: el lipopolisacárido (LPS)
18.- ¿CÓMO SE DEFINEN A LAS BACTERIAS COLIFORMES?
Se definen como coliformes totales a aquellas bacterias entéricas en forma de bacilos cortos que se caracterizan por tener las siguientes propiedades bioquímicas:
Ser aerobias o anaerobias facultativas Ser bacilos Gram negativos; No ser esporógenas; (Si es Gram negativo NO esporula) Fermentan la lactosa a 35°C en menos 48 horas Con producción de ácido y gas
Incluye los géneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter. Durante mucho tiempo se consideraron evidencia de contaminación fecal, pero se ha demostrado que muchos de ellos pueden vivir e incluso crecer en el suelo, el agua y otros ambientes. Actualmente se consideran un excelente indicador de la eficiencia de los procesos de sanitización y desinfección, así como de calidad sanitaria en agua, vegetales y diversos productos procesados. Su determinación se basa generalmente en la capacidad de fermentar lactosa. Se pueden utilizar los métodos del número más probable (NMP ó MPN por sus siglas en inglés) que es un método estadístico en tres etapas y permite el hallazgo de cantidades muy bajas de coliformes. También se pueden detectar por cuenta en placa utilizando agar bilis-rojo violeta (ABRV ó RVBA por sus siglas en inglés) en el cual las colonias fermentadoras de lactosa causan el vire del indicador; pueden detectarse por filtración en membrana (Millipore) e incubación en medios adecuados, por métodos rápidos como Petrifilm y reacciones cromogénicas o fluorogénicas.
Coliformes fecales: dentro del grupo coliforme, los de origen fecal son capaces de fermentar la lactosa también a 44.5 °C; se consideran el indicador más adecuado de contaminación con heces de animales y humanos, por ejemplo en pescados y mariscos, carnes, leche, alimentos RTE, entre otros. La determinación se hace a partir de la segunda etapa (confirmativa) del método de NMP, cultivando en caldo lactosado con incubación a 44.5 °C. Generalmente se combinan las determinaciones, según se requiere.
Escherichia coli: se considera indicador de contaminación fecal reciente, humana o animal en productos como agua embotellada, leche y jugos, alimentos infantiles, y alimentos procesados, en general. Se caracteriza por ser coliforme termotolerante (fermenta lactosa a 44.5°C) que produce indol a partir de triptofano y produce β-glucuronidasa, características que se usan para su identificación en laboratorio, generalmente en la etapa final del NMP o de alguno de los otros métodos, incluyendo Petrifilm.
19.- ¿QUÉ INDICA LA PRESENCIA DE BACTERIAS COLIFORMES EN EL AGUA?
La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de agua puede estar contaminada, ya sea con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposición. Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo.
20.- ¿CUÁL ES LA IMPORTANCIA CLÍNICA DE LAS BACTERIAS COLIFORMES?
La determinación de la calidad bacteriológica reviste gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad (incapacidad para hacer daño) del agua destinada al consumo, evitando así epidemias gastrointestinales, y además de descubrir enfermedades que son comunes al hombre y animales.
21.- ¿TODAS LAS BACTERIAS COLIFORMES SON DE ORIGEN FECAL?
No todas las bacterias coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminación. Dentro del grupo de los coliformes totales (que comprende la totalidad del grupo) existe un subgrupo que es el de los coliformes fecales (los de origen fecal).
Véase pregunta número 18.
22.- ¿QUÉ IMPLICACIONES EPIDEMIOLÓGICAS TIENEN LA PRESENCIA DE ENTEROBACTERIAS EN LA MUESTRA DE AGUA QUE COLECTASTE?
Las complicaciones pueden ser que venga una epidemia de E.coli así como también de Salmonella y muy graves que no se puedan controlar.
23.- ¿QUÉ ENFERMEDADES GASTROINTESTINALES PUEDEN TRANSMITIRSE EN EL AGUA CONTAMINADA CON MATERIA FECAL?
Enfermedades trasmitidas por el agua: Cólera, Fiebre Tifoidea y Paratifoidea, Disenterías, Poliomelitis, Hepatitis, Salmonelosis, Cryptosporidiosis, Gastroenteritis.
Enfermedades con base en el agua: Ascariasis, Clonorquiasis, Dracunculosis, Paraginimiasis, Esquistosomiasis.
Enfermedades vectoriales relacionadas con el agua: Dengue, Filariasis, Paludismo, Oncocercosis, Fiebre del Valle del Rift (FVR).
24.- ¿QUÉ SIGNIFICAN LAS SIGLAS IMVIC?
I: Indol M: Rojo de metilo V: V-P (Voges-Proskauer) i C: Citrato de Simmons
25.- ¿CUÁL ES EL OBJETIVO DE REALIZAR LAS PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN IMVIC?
Las bacterias pertenecientes a la familia enterobacteriaceae, pueden identificarse a través de una serie de pruebas bioquímicas, que permiten determinar la presencia o ausencia de ciertas enzimas y a veces incluso permiten determinar la
existencia de una secuencia metabólica. Con este fin se han desarrollado diversos esquemas de clasificación, uno de los más conocidos y utilizados corresponde al IMVIC que se desarrolló para clasificar especies de la familia antes mencionada y correspondientes al grupo de bacterias coliformes (bacterias aeróbicas o anaeróbicas facultativas, Gram (-), bacilares, no esporógenas que producen ácido y gas durante la fermentación de la lactosa).
26.- ¿POR QUÉ RAZÓN NO ES RECOMENDABLE UTILIZAR EL ASA BACTERIOLÓGICA PARA REALIZAR LA PRUEBA DE LA OXIDASA?
Ya que la prueba tiene como fundamento demostrara la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo, que es reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana.
Los metales pueden interferir de manera oxidativa ya que las enzimas están íntimamente relacionadas a la cadena de transporte de electrones.