Diagnóstico de Bacterias fitopatógenas
25 de abril de 2012
Ing. Agr. María José Montelongo
Síntomas de enfermedades bacterianas
• Manchas foliares• Manchas en frutos• Cancros• Marchitez• Hiperplasia• Podredumbre• Costras• Necrosis
Lesiones en frutos
Síntomas de enfermedades bacterianas
Pseudomonas syringae pv. papulans
Xanthomonasaxonopodispv. citri
Xanthomonas campestris pv. vesicatoria
Afecciones vasculares
Síntomas de enfermedades bacterianas
Marchitez
Síntomas de enfermedades bacterianas
Síntomas de enfermedades bacterianas
Manchas foliares
Síntomas de enfermedades bacterianas
Manchas angulares, acuosas
Síntomas de enfermedades bacterianas
Manchas foliares
Pantoea stewartii
Síntomas de enfermedades bacterianas
Cribado
PASOS DEL DIAGNOSTICO
Observación del problema
Aceptación o replanteo de hipótesis
Planteo de
hipótesis
Prueba de hipótesis
• Observación de síntomas y signos• Aislamiento en medios de cultivo• Prueba de hipersensibilidad en no huésped• Pruebas de patogenicidad• Prueba de Gram• Características culturales• Pruebas bioquímicas y fisiológicas• Pruebas serológicos (ELISA)• Técnicas moleculares
Diagnóstico de enfermedades bacterianas
La bibliografía indica que podría ser una bacteria!!
Microcorrida: para hojas
Técnicas para ver el signo de bacterias
Test de flujo: para tallos
Técnicas para ver el signo de bacterias
• Observación de síntomas y signos• Aislamiento en medios de cultivo• Prueba de hipersensibilidad en no huésped• Pruebas de patogenicidad• Prueba de Gram• Características culturales• Pruebas bioquímicas y fisiológicas• Pruebas serológicos (ELISA)• Técnicas moleculares
Diagnóstico de enfermedades bacterianas
Aislamiento
Podemos utilizar el material observado en la microcorridao test de flujo
Aislamiento
Indirecto
Cultivo trampa
Aislamiento Aislamiento
• Observación de síntomas y signos• Aislamiento en medios de cultivo• Prueba de hipersensibilidad en no huésped• Pruebas de patogenicidad• Prueba de Gram• Características culturales• Pruebas bioquímicas y fisiológicas• Pruebas serológicos (ELISA)• Técnicas moleculares
Diagnóstico de enfermedades bacterianas
Diagnóstico de enfermedades bacterianas
1. Se realiza una inoculación masiva en el mesófilode una hoja de una planta NO HUESPED
2. Se observa la ocurrencia (o no) de reacción de hipersensibilidad
Hipersensibilidad en no huésped
La aparición de una reacción de hipersensibilidad indica que la bacteria inoculada es patógena.
Hipersensibilidad en no huésped
Prueba de patogenicidad
Inoculación mediante aspersión
Prueba de patogenicidad
Inoculación mediante infiltración
• Patógenos vasculares: inoculación al tallo– axila - pinchar a través
de gota– inyección al tallo
Prueba de patogenicidad
• Observación de síntomas y signos• Aislamiento en medios de cultivo• Prueba de hipersensibilidad en no huésped• Pruebas de patogenicidad• Prueba de Gram• Características culturales• Pruebas bioquímicas y fisiológicas• Pruebas serológicos (ELISA)• Técnicas moleculares
Diagnóstico de enfermedades bacterianas
Taxonomía
– Morfológicas, – Culturales (forma, bordes,
color de las colonias)– Fisiológicas– Bioquímicas– Patológicas (capacidad
para atacar a determinado huésped)
Características taxonómicas
Morfología de colonia en medio sólido
Forma
Elevación
Borde
Morfología de colonia en medio sólido
Pared celular Prueba de gram indirecta
GRAM (+) GRAM (-)
GRAM (-)– Erwinia– Pseudomonas– Xanthomonas– Xylella– Agrobacterium
GRAM (+)– Clavibacter– Curtobacterium– Streptomyces
Principales géneros de Bacterias fitopatógenas
PseudomonasAgrobacteriumBurkholderiaRalstoniaErwinia
Coloración de la colonia en medio YDC
AmarillaCrema
XanthomonasErwinia
Reacción de oxidación/fermentación o de Hugh & Leifson
La mayoría de las bacterias fitopatógenas tienen metabolismo oxidativo
Características fisiológicas
• Metabolismo oxidativo– Pseudomonas– Xanthomonas– Xylella– Agrobacterium– Clavibacter
• Metabolismo fermentativo– Erwinia
Reacción de o/f
Producción de pigmentos fluorescentes
Pseudomonas fluorescens se caracteriza por producir pigmentos fluorescentes (izq)
Características fisiológicas
• Observación de síntomas y signos• Aislamiento en medios de cultivo• Prueba de hipersensibilidad en no huésped• Pruebas de patogenicidad• Prueba de Gram• Características culturales• Pruebas bioquímicas y fisiológicas• Pruebas serológicos (ELISA)• Técnicas moleculares
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• Serología: ELISA
Otras Técnicas
• Técnicas moleculares– PCR– PCR-RFLP (restriction fragment length polymorphism)
– Real time PCR– Secuenciación
Otras Técnicas
Técnicas moleculares
PCR
PCR-RFLP
Técnicas moleculares
Real time PCR
Técnicas moleculares
Secuenciación
Diagnóstico de enfermedades bacterianas
• AGRIOS, G. 2005. Plant pathology. 5nd. ed. London, Elsevier Academic Press. 922 p.
• KADO, C. 2010.Plant bacteriology. Minessota, APS Press. 336 p.
• TRIGIANO, R.; WINDHAM, M.; WINDHAM, A. 2008. Plant pathology, concepts and laboratory exercises. 2nd. ed. Florida, RC Press. 558 p.
Bibliografía consultada