UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL
FACULTAD DE OCEANOGRAFIA, PESQUERIA, CIENCIAS
ALIMENTARIAS Y ACUICULTURA
TITULO :
FACTORES FISICOS Y QUIMICOS QUE INFLUENCIAN EN EL CRECIMIENTO
MICROBIANO
N° DE PRÁCTICA: 6
PARTICIPANTE:
GAMARRA RAMOS, CARLOS ALBERTO
DOCENTE
DOC. MARIA TERESA FLORES CORDOVA
SECCION
FECHA
MIRAFLORES, 10 de junio, 2013
OBJETIVO GENERAL
Determinar mediante el análisis práctico, realizado el laboratorio de
microbiología, la reacción de los microorganismos frente a agentes físicos,
químicos y biológicos.
Determinar y reconocer estos agentes que favorecen la velocidad de
crecimiento de los microorganismos, dependiendo del medio al cual es
sometido el cual puede ser favorable o no, para su desarrollo o caso contrario
utilizar el medio como un indicador para su control.
OBJETIVO ESPECIFICO
Conocer como los agentes físicos, químicos y biológicos que encontramos en
nuestro medio, permiten el desarrollo de un microorganismo o su posible
control, el cual podremos utilizarlo para evitar la proliferación de estos en
ciertos alimentos o materiales que están al contacto con ello. para una buena
higienización en la industria de los alimentos.
2
FUNDAMENTO
Las razones principales para controlar los microorganismos son: prevenir la
transmisión de enfermedades, evitar el deterioro de los alimentos y evitar la
contaminación tanto en procesos industriales que requieran cultivos puros, como en
laboratorios de diagnóstico o investigación.
Condiciones que influyen en la acción microbiana
Hay ciertos factores que tienen que ser considerados a la hora de aplicar agentes
químicos o físicos para el control de microorganismos.
Concentración del agente químico
Mientras más concentrado esté el agente químico, más rápido se destruirán los
organismos.
Intensidad del agente físico
Cuanto más intenso es el agente físico (calor o radiación más rápidamente mata a los
microorganismos.
Tiempo de exposición
A mayor tiempo de exposición, mayor es el número de organismos destruidos.
Temperatura
A mayor temperatura se acelera la destrucción de los organismos.
Número de organismos
Mientras mayor sea el número de microorganismos, más tiempo se requiere para
destruirlos.
Clase de organismo
Las células vegetativas (las que están metabólicamente activas) son más susceptibles
que las esporas bacteriales.
Estado fisiológico de las células
Mientras más viejas sean las células, más rápido se destruyen.
Naturaleza del medio ambiente
Algunos ambientes desfavorecen la destrucción rápida de los microorganismos,
como por ejemplo los medios viscosos
MARCO TEORICO
FACTORES FÍSICOS EN EL CONTROL DEL CRECIMIENTO BACTERIANO
TemperaturaLa temperatura es de suma importancia para el crecimiento de los organismos. A
medida que aumenta está por encima de la temperatura óptima de crecimiento, mayor
es la velocidad de muerte de los microorganismos. Es por ello que altas temperaturas
se usan en el control microbiológico. Las temperaturas altas pueden aplicarse de dos
formas: calor húmedo (con agua) o calor seco.
El calor húmedo es mucho más eficiente que el calor seco, ya que este actúa
mediante la coagulación de las proteínas celulares, por otro lado el calor seco destruye
la célula por la oxidación de agentes químicos de la célula.
Presión osmótica
La pared celular de las bacterias las protege de cambios en la presión osmótica del
medio, pero si la presión osmótica externa es mucha, el organismo puede morir; esto
sucede si las concentraciones de solutos en el medio en que crece el organismo son
extremos. Altas concentraciones de sal interrumpen los procesos de transporte a
través de la membrana y desnaturalizan las proteínas.
pH y crecimiento microbiano
Cada organismo tiene un rango de pH dentro del cual es posible el crecimiento y
normalmente posee un pH óptimo bien definido. La mayoría crece en un margen de
pH de 2- 3 unidades. La mayoría de los amientes naturales tiene un valor de pH entre
5 y 9 y los microorganismos con pH optimo de estén orden son los más comunes.
Los organismos que crecen mejor a bajo pH constituyen un tipo de extremofilos
llamados acilo filos. El grupo de los hongos son más anisofilos que las bacterias,
muchos hongos crecen en forma óptima a pH 5 o inferior e incluso algunos crecen
bien a pH 2.
FACTORES QUÍMICOS PARA EL CONTROL DE MICROORGANISMOS
El fenol y sus derivados
El fenol se adhiere a superficies inertes y proporciona lo que se llama una desinfección
residual. Su acción se prolonga por varias horas. Los compuestos de fenol pueden
actuar como microbicidas o microbiostáticos dependiendo de la concentración que se
utilice. Los fenoles poseen efecto germicida pues dañan la membrana y desnaturalizan
las proteínas bacteriales. Uno de los derivados del fenol se llama cresol; éstos tienen
un efecto germicida superior al fenol. Los cresoles se usan en jabones líquidos (ej.
lysol es un jabón más un cresol). Otro derivado del fenol es el hexaclorofeno, el cual
se usa en jabones para las manos (en cirugía y hospitales). Un ejemplo de este último
es el Phisohex. El fenol y sus derivados por lo general no matan esporas.
Los alcoholes
Los alcoholes dañan la membrana, desnaturalizan las proteínas, disuelven lípidos y
deshidratan la célula. La concentración más efectiva de alcohol es el 70% y los más
utilizados son el alcohol etílico e isopropílico.
Halógenos
Los halógenos actúan sobre los microorganismos oxidando las proteínass y enzimas
esenciales. No matan las esporas. Los halógenos más comunmente usados son el
cloro y el iodo.
1. El cloro Es uno de los desinfectantes más usados y es microbicida contra la
mayoría de los microorganismos. Se usa para limpiar las aguas contaminadas y se
aplica en agua potable.
2. El iodo Se utiliza comúnmente como un antiséptico y es uno de los mejores que
hay para la piel. Se aplica principalmente como tintura de iodo. Es microbicida para la
mayoría de los organismos. El iodo también se emplea como iodóforo (compuesto de
iodo con otros agentes). Los iodóforos no manchan ni irritan, un ejemplo es el
betadine.
Jabones y detergentes
Un jabón es una sal de sodio o de potasio de un ácido graso. Los agentes que
reducen la tensión superficial del agua (surfactantes) y que se emplean principalmente
para la limpieza de superficies se llaman detergentes (el jabón es un ejemplo de un
detergente). Los detergentes se clasifican en catiónicos, aniónicos y no-iónicos. Los
detergentes catiónicos son mejores desinfectantes que los demás. Otro nombre con
que se conocen a los detergentes catiónicos son cuaternarios de amonio. Estos son
bacteriostáticos a bajas concentraciones y bactericidas a concentraciones mayores.
Ácidos
Hay una serie de ácidos orgánicos que se usan como conservantes en muchos
alimentos como el ácido acético, ácido benzoico, ácido láctico, ácido propiónico y
ácido sórbico. El ácido baja el pH y esto desnaturaliza las proteínas. No matan las
esporas
PROCESO EXPERIMENTAL (practica de laboratorio)
5. INFLUENCIA DE LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE SOLUTO:
Las altas concentraciones de solutos hacen que el agua disponible de los medios de
cultivo sea menos asequible a los microorganismos. La mayoría de los
microorganismos de la naturaleza prefieren los ambientes de alta humedad (alto aw).
Existen microorganismos que prefieren los ambientes con alta concentración de
solutos y crecen mejor en ambientes fuertemente osmóticos.
Aunque existen muchos factores que influyen para probar las necesidades de aw de los
microorganismos, uno de los factores más importantes es el tipo de soluto la influencia
de cloruro de sodio, o sal común, para determinar el halofilismo; y por otro lado se
puede determinar la influencia de la glucosa, u otro azúcar, para probar la osmofilia de
loa microorganismos.
a) Determinación del halofilismo :
Siembra un microorganismo en placas con medio de cultivo favorable, prepara
do con deferentes concentraciones de cloruro de sodio: 5%, 10% ,15%, de
CLNa.
Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37°c por
3, 5, 8,15, días.
Leer el crecimiento microbiano en las estrías de siembra
b) Determinación de osmofilia :
Siembra un microorganismo en placas con medio de cultivo favorable, prepara
do con deferentes concentraciones de glucosa: 10%, 20% ,30%,
Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37°c por
5, 10,15, días.
Leer el crecimiento en la superficie del agar.
PROCESO DE LABOARTORIO
a) Determinación del halofilismo :
Siembra un microorganismo (Staphylococcus aureus) en placas con medio
de cultivo favorable, prepara do con deferentes concentraciones de cloruro de
sodio: 5%, 10% ,15%, de CLNa.
Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37°c por
3, 5, 8,15, días.
Leer el crecimiento microbiano en las estrías de siembra
PROCESO DE LABOARTORIO
a) Determinación de osmofilia :
Siembra un microorganismo (Staphylococcus aureus) en placas con medio
de cultivo favorable, prepara do con deferentes concentraciones de glucosa:
10%, 20% ,30%,
Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37°c por
5, 10,15, días.
Leer el crecimiento microbiano en las estrías de siembra
6. DETERMINACIÓN DE LA ACCIÓN GERMICIDA DE ALGUNOS AGENTES
QUÍMICOS:
La acción germicida de algunos compuestos químicos se determina poniéndole en
contacto el microorganismo son una solución del agente químico y después de un
periodo de tiempo se controla la viabilidad del microorganismo, sembrándolo en un
medio de cultivo adecuado.
Los factores influyentes, que se deben controlar en esta prueba, son la concentración
del compuesto químico, la temperatura y el tiempo de contacto.
Determinación de la acción desinfectante del fenol al 0.5%:
Colocar 0.5 ml de inoculo de cultivo fresco en 5ml de solución de fenol al 0.5%
Agitar y dejar actuar durante 1 minuto
Tomar una asada de la mezcla y sembrara a un tubo de caldo nutritivo,
marcado convenientemente.
A los 2.5 minutos de realizar la mezcla, repicar nuevamente a otro tubo con
caldo nutritivo, marcado convenientemente.
A los 5 minutos procedes igual que el paso anterior
A los 10 minutos realizar una última siembra semejante
Incubar todos los tubos a la temperatura optimó de crecimiento , de 37°C ,de 24
a 48 horas
Leer la turbidez que aparecen en los tubos , y considerar como resistentes a los
desinfectantes si presenta crecimiento en el tubo
PROCESO DE LABOARTORIO
Colocar 0.5 ml de inoculo de cultivo fresco en 5ml de solución de fenol al 0.5%
Agitar y dejar actuar durante 1 minuto
Tomar una asada de la mezcla y sembrara a un tubo de caldo nutritivo,
marcado convenientemente.
A los 2.5 minutos de realizar la mezcla, repicar nuevamente a otro tubo con
caldo nutritivo, marcado convenientemente.
A los 5 minutos procedes igual que el paso anterior
A los 10 minutos realizar una última siembra semejante
Incubar todos los tubos a la temperatura optimó de crecimiento , de 37°C ,de 24
a 48 horas
7. DETERMINACIÓN DE LA ACCIÓN DE LOS ANTIBIOTICOS.
El antibiograma o prueba de sensibilidad de una microorganismo, frente a varios
antibióticos .colocar varios discos de papel con antibióticos diferentes e incubar a la
temperatura más favorable para el crecimiento microbiano, la falta de crecimiento en
zona alrededor del disco significa que el antibiótico tiene un efecto letal o inhibidor
hacia el microorganismo.
Metodología:
Siembra por extensión en superficie 0.1 m. de inoculo de una cepa joven,
distribuyéndolo uniformemente.
Aplicar inmediatamente los discos con antibióticos a una distancia superior a
1.5 cm. entre uno y otro.
Incubar las placas a la temperatura optima de crecimiento , a 35°c por 24 horas
Leer la zona de inhibición que rodea al disco, midiendo en milímetros el
diámetro del halo de inhibición.
PROCESO DE LABOARTORIO
RESULTADOS
Medida de la zona alrededor del disco = 13 mm
RESULTADOS Y CONCLUSIONES
CUADRO N°1
INFLUENCIA DE LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE SOLUTO
Determinación del halofilismo
CONCENTRACIONES DE ( ClNa)/con Staphylococcus aureus
5% 10% 15%
INCUBACIÓN A 37°C
A una concentración del 5% podemos determinar no hubo presencia de m.o.
A una concentración del 10% podemos determinar poco crecimiento
A una concentración del 15% podemos determinar no hubo presencia de m.o.
En conclusión el Staphylococcus aureus en dichas concentraciones es
inhibido su crecimiento
CUADRO N°2
INFLUENCIA DE LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE SOLUTO
Determinación de osmofilia
CONCENTRACIONES DE GLUCOSA/con Staphylococcus aureus
10% 20% 30%
INCUBACIÓN A 37°C
A una concentración del 10% podemos determinar hubo presencia de m.o.
A una concentración del 20% podemos determinar hubo presencia de m.o.
A una concentración del 30% podemos determinar hubo presencia de m.o.
En conclusión el Staphylococcus aureus en dichas concentraciones favorece
en su velocidad de crecimiento.
CUADRO N°3
DETERMINACIÓN DE LA ACCIÓN GERMICIDA DE ALGUNOS AGENTES QUÍMICOS
Determinación de la acción desinfectante del fenol al 0.5%:
TIEMPOS 2.5 MINUTOS 5 MINUTOS 10 MINUTOS
INCUBACIÓN A 37°C/24 HORAS
A un tiempo del 2.5 minutos podemos determinar hubo poca presencia de
turbidez y no presenta crecimiento de m.o.
A un tiempo del 5 minutos podemos determinar hubo presencia de turbidez u
y no presenta crecimiento de m.o.
A un tiempo del 10 minutos podemos determinar hubo presencia de turbidez y
presenta crecimiento de m.o.
En conclusión el Staphylococcus aureus en dichas tiempos favorece en su
velocidad de crecimiento.
CUADRO N°4
DETERMINACIÓN DE LA ACCIÓN DE LOS ANTIBIOTICOS
Reacción a los antibióticos
INCUBACIÓN A 37°C/24 horas Radio alrededor del disco = 13 mm
La reacción a los antibióticos podemos determinar que existe una zona de
inhibición alrededor del disco y esta media de diámetro en milímetros =13 mm
En conclusión el Staphylococcus aureus existe una mayor resistencia al m.o.
BIBLIOGRAFIA
DOMÍNGUEZ M.; GARCÍA C.; ARIAS MICROBIOLOGÍA EN LOS
ALIMENTOS, PAGI.214.
FREEMAN, BOB A; MICROBIOLOGÍA DE BURROWS 22A EDICIÓN,
EDITORIAL INTERAMERICANA, ESPAÑA 1986. PAGS. 57-62.
Recommended