Fermentación en estado sumergido para la obtención de enzimas, utilizando los hongos Trichoderma sp y
Aspergillus sp
Xiomara Cogollo LópezProfesional en acuicultura
Darío González R.Ingeniero Agropecuario
Maestría en BiotecnologíaCohorte 7
Universidad de Córdoba2014º
• Las enzimas tienen numerosas aplicaciones en la industria de alimentos y bebidas.
Se utilizan para transformación y producción de aromas y de productos
intermedios. Se emplean varias enzimas microbianas en la industria de alimentos
tales como: α y ß amilasa, proteasas, Invertasa, pululanasa, glucosa-isomerasa,
dextranasa, lipasa, lactasa, amiloglucosidasa, glucosa-oxidasa, Pectinasa y otras .
• Las enzimas pectolíticas se utilizan en la industria de alimentos para clarificar
néctares y obtener más volumen de producción, aumentando en un 25% por cada
tonelada tratada de materia prima (frutas).
Amiloglucosidasa
Pectinasa α amilasa
El hongo Aspergillus pertenece a la clase Deuteromicetos es decir
que carecen de esporas sexuales. Al orden Moniliales lo cual indica
que presentan micelio claro y sin coloración o con un coloreado débil.
El género Aspergillus es abundante. Muchos de ellos son los
responsables de ciertas alteraciones alimenticias y otros útiles en la
preparación de algunos alimentos.
Es un hongo que se encuentra de manera natural en un número importante de
suelos agrícolas y otros tipos de medios. Pertenece a la subdivisión
Deuteromicetes, la cual se caracteriza por no presentar un estado sexual
determinado.
Antagonista de patógenos vegetales que se encuentra presente en la mayoría de
los suelos. Activa el crecimiento radicular de las plantas, es capaz de colonizar y
crecer en las raíces a medida que éstas se desarrollan y aumenta la resistencia
del cultivo frente al ataque de posibles patógenos
Solución de esporas
Inducción a la producción de enzimas
Medio líquido + pectina comercial
5 días a 150 rpm
Maceración
Centrifugación
Sobrenadante
Actividad de la poligalacturonasa (DNS)
Pectina comercial
Pectina nativa
Complejo enzimático + pectina comercial
0,1ml
Espectrofotometría 540 nm
DNS
Incubar 1 y 2 horas
Figura 1. Curva de absorbancia para fermentación de azucares reductores
y=0,5856x-0,0294R²=0,99989
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4
AB
S
concentración
CURVADNS
Grupo Microorganismo Peso(gr)
1 BiomasaAspergillussp 0,17
2 BiomasaAspergillussp 0,16
3 BiomasaTrichodermasp 0,59
4 BiomasaTrichodermasp 0,72
GRUPO 1 ABSORBANCIA
(1 HORA)
ENZIMA (1
HORA)
ABSORBANCI
A (2 HORA)
ENZIMA (2
HORA) PECTINA NATIVA + COMPL ENZIM
CMCIAL
1,754 3,0454 1,338 2,335
PECTINA CMCIAL + ASPERGILLUS 1,774 3,0796 1,417 2,4699
PECTINA NATIVA + ASPERGILLUS 0,232 0,4464 0,114 0,2449
GRUPO2 PECTINA NATIVA + COMPL ENZIM
CMCIAL
1,537 2,6749 1,465 2,5519
PECTINA CMCIAL + ASPERGILLUS 1,394 2,4307 1,383 2,4119
PECTINA NATIVA + ASPERGILLUS 0,093 0,209 0,113 0,2432
GRUPO3 PECTINA NATIVA + COMPL ENZIM
CMCIAL
0,398 0,539 0,286 0,73
PECTINA CMCIAL + TRICHODERMA 0,105 0,349 0,175 0,23
PECTINA NATIVA + TRICHODERMA 0,058 0,236 0,109 0,15
GRUPO4 PECTINA NATIVA + COMPL ENZIM
CMCIAL
0,233 0,4481* 1,633 0,8154*
PECTINA CMCIAL + TRICHODERMA 0,135 0,2807* 0,753 0,5296*
PECTINA NATIVA + TRICHODERMA 0,351 0,6496* 0,163 1,1595*
Tabla 2. Técnica de DNS
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
1 2
Co
ncen
tració
n (
mg
/ml)
de a
zu
care
s r
ed
ucto
res
Tiempo (horas)
PECTINA COMERCIAL+ HONGO
Aspergillus sp
Aspergillus sp
Trichoderma sp
Trichoderma sp
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
1 2
Co
ncen
tració
n (
mg
/ml)
de a
zu
care
s r
ed
ucto
res
TIEMPO (HORAS)
PECTINA COMERCIAL + COMPLEJO ENZIMATICO
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
1 2
Co
ncen
tració
n (
mg
/ml)
de a
zu
care
s r
ed
ucto
res
Tiempo (horas)
PECTINA NATIVA+ HONGO
Aspergillus sp
Aspergilllus sp
Trichoderma sp
Trichoderma sp
La diferencia entre los tratamientos evaluados
con pectina nativa, pectina comercial y enzima
mas la enzima comercial , pudo deberse
principalmente a la actividad metabólica del
hongo y al efecto de la interacción entre los
factores (pH, temperatura, aireación,
contaminación y manipulación)
La actividad de la pectina para los
cuatro casos, fue mayor en la
primera hora de evaluación, debido
a la concentración de sustrato que es
superior en comparación a la del
segundo tiempo asumiendo la
actividad enzimática.
En la segunda hora donde se evaluó el
Aspergillus sp, la concentración disminuyo
mientras que en el grupo 4 donde se
evaluó Trichoderma sp, la concentración
aumento en la segunda hora, hallándose
diferencias entre microorganismos en el
mismo sustrato.
Aspergillus sp
Trichoderma sp
GRACIAS
Recommended