Licenciatura en Ingeniería Biológica Microbiología Dra. Sylvie Le Borgne
Esterilización de material, preparación e inoculación de medios de cultivos y curva de crecimiento microbiano
Introducción
Objetivos
El alumno conocerá de forma práctica como esterilizar el equipo, por vapor
de agua con presión en la autoclave.
El alumno obtendrá los conocimientos y técnicas adecuadas para la
preparación e inoculación de medios de cultivos, de igual forma aprenderá a
obtener la curva de crecimiento microbiano a travez de lo experimentado en
laboratorio.
Materiales
Métodos
Resultados y Discusion
La preparación del medio de cultivo fue apta para el desarrollo y crecimiento de las
bacterias que se cultivaron, gracias al medio en que estas fueron sembradas (Agar
EDMO) y sobre todo a la preparación y temperatura adecuada en las que estas
estuvieron.
Ariana González RíosEder Acevedo RodríguezUriel Vázquez Ortiz
Fig. 1 Uso del autoclave es primordial para la inoculación y cultivo de las
bacterias.
Fig. 2 colocando el medio de cultivo para el cultivo de las bacterias.
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Fig. 3 se logro apreciar que el cultivo fue un éxito en el que tanto la
Escherichia Coli, Citrobacter Freaundi y Klebsidia Pneunoniae.
Se logro apreciar como es que se formaron colonias en la caja Petri, al igual que se
vio el desplazamiento de estas para la formación de las colonias, el uso de la
autoclave fue de manera la mas adecuada a la temperatura necesaria para que estas
bacterias lograran desarrollarse en la temperatura que estas necesitan para un buen
desarrollo.
La preparación del medio de cultivo juega un papel muy importante para el cultivo
de las bacterias, ya que estas suelen ser el medio en el que estas van a desarrollarse
y lograr asi mostrar como es que estas suelen estar en familias, asi logrando
aprovechar cada uno de sus beneficios y utilidades que estas pueden tener para
nosotros, al igual que se llega a decir que los microrganismos al igual que otros
seres vivos son capaces de adaptarse a los cambios ambientales y a medida de que
se han adaptado a estos cambios, estas mismas se han distribuido en una gran
cantidad de hábitats, en condiciones tanto físicas como químicas, también cabe
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destacar que este tipo de metodología es de gran ayuda para lograr aislar de
microrganismos y sobre todo para estos microrganismos el estar libres logran
desplazarse en tanto que en los medios sólidos se multiplican localmente en el
punto de la inoculación y forman colonias cuya apariencia frecuentemente es
típica de cada especie determinada.
Conclusiones
Referencias
- Joanne M. Willey, Linda M., 2008, Microbiología de Prescott, Harley y Klein, séptima
edición, capitulo 5, 6 y 7 Pág. 99-200, María Álvarez y Cristina Sánchez, Ed. Mc Graw
Hill, Madrid España.
- Michael T., John M., Jack Parker, Brock Biología de los Microorganismos, 10a edición,
capitulo 5 y 6 Pág. 102-161, Ed. Pearson, Madrid
Respuestas al cuestionario
1) Define los siguientes términos: desinfección, desinfectante, esterilización, esterilizante,
saneamiento, antisepsia, antiséptico, quimioterapia, germicida, bactericida,
bacteriostático.
Desinfección: Proceso que destruye casi todos los microorganismos patógenos sobre objetos
inanimados.
Desinfectante: Agente, normalmente químico, que desinfecta: en general, se emplea con objetos
inanimados.
Esterilización: Proceso por el que todos los organismos vivos, esporas visibles, virus y viroides
son destruidos o eliminados de un objeto o hábitat.
Esterilizante: Son sustancias químicas que se utilizan en una cámara hermética (similar a una
autoclave).
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Saneamiento: Reducción de la población microbiana de un objeto inanimado hasta niveles
seguros según los estándar de salud pública.
Antisepsia: Prevención de una infección o sepsis.
Antiséptico: Sustancia química que se aplica a un tejido para evitar una infección al destruir o
inhibir los microorganismos patógenos.
Quimioterapia: Es un tratamiento sistemático del cáncer con fármacos citotóxicos.
Germicida: Compuesto que destruye agentes patógenos y muchos no patógenos, pero no
necesariamente las endosporas bacterianas.
Bactericida: Agente que destruye bacterias.
Bacteriostático: Que inhibe el crecimiento y la multiplicación de bacterias.
2) Explica brevemente los factores (tamaño y composición de la población, concentración o intensidad del agente, duración del tratamiento, temperatura y condiciones ambientales locales) que pueden alterar la eficacia de un agente antimicrobiano.
Tamaño de población: La destrucción de una población grande requiere más tiempo que la de una
población más pequeña, ya que en cada intervalo de tiempo se destruye una proporción de la
población microbiana.
Composición de la población: La eficacia de un agente varía conforme a la composición, ya que
los organismos presentan una grande susceptibilidad.
Concentración o capacidad de un agente microbiano: Cuanto más se encuentre el agente químico,
o más intenso es el agente físico, más rápida ser la destrucción de estos. Por lo que la eficacia de
un agente no es proporcional a la concentración o intensidad.
Duración del tratamiento: Cuanto más tiempo este expuesta una población a un agente
microbicida, más organismo serán destruidos.
Temperatura: El aumento de temperatura puede aumentar la actividad de un compuesto químico.
Condiciones ambientales locales: Las condiciones ambientales tienen factores que ofrece o
colabora a la destrucción de cierto agente.
3) Explica brevemente los métodos de control microbiano: agentes físicos. Agentes
químicos y métodos mecánicos.
Agentes físicos: Los agentes físicos empleados con más frecuencia para el control para el control
microbiano son el calor, las bajas temperatura, la filtración y radiación.
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a) Calor: Método más generalizado para el control de crecimiento microbiano. Se pude
aplicar la desnaturalización que es la aplicación de altas temperaturas y el tiempo que se
lleva para reducir 10 veces la densidad de la población a una cierta temperatura es
llamado tiempo de reducción decimal. También se usa el término de tiempo de muerte
térmica, que es tiempo mínimo que se necesita para destruir todos los microorganismos.
Se usan métodos como la pasteurización o la autoclave.
b) Bajas temperaturas: La congelación a temperaturas de -20°C, o inferiores detiene le
crecimiento microbiano, a las bajas temperatura y a la ausencia de agua líquida.
c) Filtración: Se usa para esterilizar líquidos sensibles o gases. Se usan tres tipos de filtro:
filtro de profundidad, el cual es utilizado para eliminar de un proceso final de
esterilización partículas de gran tamaño que influiría. Otro filtro utilizado es el filtro de
membrana, el cual retiene muchas de las partículas en la superficie del filtro. Y el tercer
filtro de uso común es el filtro de nucleación, el cual utiliza la radiación nuclear.
d) Radiación: Se utiliza radiación electromagnética, lo cual permite controlar potencialmente
el crecimiento microbiano. Se utilizan rayos X, radiación gamma, microondas y radiación
ultravioleta.
Agentes químico: Este tipo de agentes se utiliza para la desinfección y la antisepsia, se usa
también para impedir el crecimiento microbiano en los alimentos. Entre los grupos de
desinfectantes que se usan, se encuentran los compuesto fenólicos, alcoholes, halógenos, metales
pesados, compuestos de amoniaco cuaternario, aldehídos, gases esterilizantes y agentes
quimioterapéuticos.
Agentes mecánico:
4) Explica porqué el calor es el agente esterilizante más eficaz.
Utilizando el concepto de tiempo de muerte térmica, nos indica el tiempo mínimo necesario para
destruir todos los microorganismos a una temperatura especifica y a en condiciones factibles.
Con lo anterior concluimos que es más rápido el tipo de esterilización que se realiza con este
mecanismo.
5) Explica en qué consiste el método de pasteurización.
Es un proceso que reduce la población microbiana en leche y otros alimentos sensibles al calor,
por lo tanto hay una aplicación de calor. Este método también impide el crecimiento de
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organismos alterantes de los líquidos perecederos.
6) Define endospora bacteriana. ¿Cómo se eliminan las endosporas bacterianas de un
material contaminado?
Las endosporas bacterianas son las estructuras más resistentes al calor que se conocen: son
capaces de sobrevivirá a temperaturas que rápidamente matan a células vegetales de la misma
especia. Para eliminas ciertas endosporas de un material, se mete al autoclave, y este
habitualmente alcanza una temperatura de 121°C y tarda de 4 a 5 minutos para que haya una
reducción decima de endosporas.
7) Describe la cinética de muerte microbiana.
La muerte de una población se reduce a
noveles iguales a intervalos constantes, esto
quiere decir que la velocidad de destrucción
disminuye debido a la supervivencia más
resistente de los microorganismos
expuestos. En la gráfica exponencial se
muestra a los supervivientes al tiempo de
exposición, a 121°C. Y nos indica que el
tiempo de destrucción decimas (D) es igual
a 1 minuto.
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Ariana González RíosEder Acevedo RodríguezUriel Vázquez Ortiz
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