PRÁCTICAS DE INGREDIENTES BIOACTIVOS
MÁRCIA SILVARÉKA MAULIDE CANE
28 NOVIEMBRE 2011
INGREDIENTES BIOACTIVOS
Cálculo de los volúmenesCi = 1 g/L = 1000 mg/L
Vf = 100 µL¿V1, V2, V3, V4,V5? Ci . Vi = Cf . Vf
↔ Vi = Cf . Vf / Ci
Solución Cf (mg/L) Vi (µL) Vagua destilada añadida (µL)
1 0 0100
2 100 1090
3 200 2080
4 400 4060
5 600 6040
EXTRACCIÓN, PURIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS EN HOJAS DE TÉ
Preparación de la curva patrón
Cálculo de la recta patrón
Determinación de polifenoles en la muestra
PRÁCTICA 1. EXTRACCIÓN, PURIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS EN HOJAS DE TÉ
Cálculo de la recta patrón
Solución Concentración (mg/L) Absorbancia (A)
1 0 0
2 100 0,294
3 200 1,099
4 400 1,125
5 600 1,379
f(x) = 2.82 xR² = 0.999886839425144
Concentración (g/L)
Abs
orba
ncia
(A)
Por este motivo se empleó otra curva de calibrado más robusta y fiable, donde eliminamos estos dos puntos. La ecuación de la recta obtenida por la pareja fue y = 2,82x.
EXTRACCIÓN, PURIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS EN HOJAS DE TÉ
La ecuación de la recta obtenida inicialmente no era fiable, porque la R es inferior a 0,9 y por que los valores de absorbancia de los patrones 200 y 400 son muy parecidos.
A partir de la ecuación de la recta obtenida y las absorbancias de cada fracción, se calcularon la masa de compuestos fenólicos (por 1 g de extracto) y el porcentaje de los mismos. Ecuación de la recta: y = 2,82x y –absorbancias
x -concentraciones las soluciones.
Extracción, Purificación y Determinación de compuestos fenólicos en hojas de té
Fracción Peso secoextracto (mg) Cextracto (mg/mL)
1- extracto inicial 2,2 2,2
2 0,5 0,5
3 1,1 1,1
4 0,4 0,4
Cálculo de las concentraciones
Peso secoextracto (mg) = meppendorf+extracto - mappendorf
Vfraccións = 1,0 mLCextracto (mg/mL) = Peso secoextracto /
Vfracción
Extracción, Purificación y Determinación de compuestos fenólicos en hojas de té
Csoluciones (g/L) = Abs / 2,82mcompuestos fenólicos (g) / mextracto (g) = Csoluciones (g/L) (1L / Cextracto (g/L))
% mcompuestos fenólicos (g) / mextracto (g) = (mcompuestos fenólicos (g) / mextracto (g)) 100 en el extracto inicial% mcomp. fenólicos (g) / mextracto (g) = [(mcomp. fenólicos (g) / mextracto (g)) / mextracto inicial (g)] 100 en los
fracciones 2, 3 y 4
Fracción Abs. (A) Csoluciones (g/L) Cextracto (g/L)mcomp. fenólicos (g) /
mextracto (g)
% mcomp. fenólicos
(g) / mextracto (g)
1- extracto
inicial1,110 0,394 2,2 0,177 17,7 %
2 0,002 7,09 10-4 0,5 1,42 10-3 0,1 %
3 0,774 0,264 1,1 0,240 24,9 %
4 0,418 0,148 0,4 0,370 37%
Extracción, Purificación y Determinación de compuestos fenólicos en hojas de té
Fracción
% mcomp. fenólicos
(g) / mextracto
(g)
1- extracto
inicial17,7 %
2 0,1 %
3 24,9 %
4 37%
Discusión de los resultados Fracción extraída con metanol presentaba un mayor
contenido en compuestos fenólicos (37%) frente a las fracciones extraídas con agua ( 0,1%) y con acetato de etilo (24,9%).
Agua es el disolvente menos eficaz para hacer la extracción: los compuestos fenólicos presentan polaridades altas.
En una infusión de té se pierde parte de los compuestos fenólicos del mismo (el té contiene un 30% /g de peso seco; mientras que la infusión preparada en esta práctica contenía sólo el 17 % de estos compuestos).
Extracción y purificación de los compuestos fenólicos presentes en las hojas de té empleando disolventes orgánicos permite obtener una mayor cantidad de estos compuestos bioactivos (37% y 24,9% ).
Extracción con éter de petróleo
Determinación de carotenoides por cromatografia en capa fina (TLC)
PRÁCTICA 2. EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS ALIMENTOS
Desarrollo de la cromatografía en capa fina (TLC)
EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS ALIMENTOS
La clorofila a sale más alta que la clorofila b. Los carotenoides en función de la concentración pueden presentar un color: naranja-rojo (mayor concentración) amarillo (menor concentración)
Extracto de Tomate liofilizado
EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS ALIMENTOS
El beta-caroteno fue el que más migró hacia arriba (fue con el frente); presentaba un color naranja con bordes amarillos (porque hay menos intensidad), (Rf ≈ 0,99).
El licopeno también migró hacia arriba y se encuentra más cerca del beta-caroteno; La luteína tiene una polaridad más alta, migra menos hacia arriba (Rf ≈ 0,97).
Discusión de los resultados
EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS ALIMENTOS
Extracto de pimentón – el princiipal componente es la capsantina (color rojo).
Se pudieron distinguir distintas bandas:
Las de más arriba pueden corresponder a una molécula de capsantina unida a dos ácidos grasos.
Las demás bandas corresponden a otros esteres de la capsantina u otros carotenoides.
Discusión de los resultados
EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS ALIMENTOS
Extracto de espinaca: es una fuente importante de luteína.
En la placa 1, se observa que la espinaca tiene una mezcla de las clorofilas a y b; las bandas de color gris que aparecen pueden deberse a que la clorofila haya perdido el magnesio en su estructura, convirtiéndose en feofitina.
Extracto de zanahoria - bandas de beta-caroteno, igual que en el tomate, pero puede que la zanahoria tenga una mezcla de isómeros.
Beta-caroteno ha migrado con el frente hacia más arriba; Alfa y el gamma-caroteno también eluirian con el frente. La zanahoria también contiene luteína.
PRÁCTICAS DE INGREDIENTES BIOACTIVOS
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28 NOVIEMBRE 2011
INGREDIENTES BIOACTIVOS
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