TECNOLÓGICO DE MONTERREY CAMPUS MORELIALaboratorio e Microbiología.
Practica #1
Preparación y esterilización de materiales del laboratorio.
Por
Jessica Michelle Méndez Beltrán
Anayantzin Torres Morales
Carlos Pineda Bernal
M.C. Luis José Flores Álvarez.
Morelia, Michoacán, 24 de agosto de 2015.
Introducción.
El objetivo de esta práctica que el estudiante conozca los materiales del laboratorio de
microbiología, distinga los procedimientos para preparar, limpiar y esterilizar el material que
requiera y su área de trabajo, así como el fundamento de la técnica de esterilización.
En el trabajo del laboratorio de Microbiología tienen importantísima aplicación los procedimientos,
técnicas y productos que suprimen o disminuyen la vitalidad de los microorganismos patógenos.
La preparación del material del laboratorio se inicia desde el momento en que se colectan
recipientes o utensilios que contienen sustancias de un estudio ya realizado o los materiales que se
requieren para llevarlo a cabo, estos deberán esterilizarse y lavarse; posteriormente se secan, se
tapan y se envuelven adecuadamente para ser esterilizados en el horno o autoclave.
En Microbiología la esterilización se define como “el proceso mediante el cual se eliminan todos los
microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de un objeto, medio o superficie” y su
aplicación garantiza la ausencia de microorganismos en el material y medios de cultivo a ser
empleados. Existen diversos métodos de esterilización, entre ellos: calor (seco o húmedo),
filtración (para sustancias termolábiles y aire), radiaciones y aplicación de gas de óxido de etileno
(para jeringas y cajas de plástico).
Existen diferentes métodos para la esterilización del material como son:
Métodos físicos
Los métodos físicos se realizan a través de la utilización de calor húmedo, seco o radiación,
destruyen todas las formas de vida microbiana, incluyendo las esporas, el método más utilizado es
el de vapor a presión.
1. Vapor a presión-calor húmedo.
2. Aire caliente-calor seco.
3. Radiación ionizante.
Métodos químicos
1. Gas óxido de etileno.
2. Gas y solución de formaldehído.
3. Plasma/vapor peróxido de hidrógeno.
4. Ozono.
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Objetivo.
Conocer los materiales del laboratorio de microbiología, distinguir los procedimientos para preparar, limpiar y esterilizar el material que requiera y su área de trabajo, así como el fundamento de la técnica de esterilización.
Material.o 7 tubos de cultivo de 16 x 150 mm con
tapón de roscao 3 tubos de cultivo de 16 x 150 mm sin
tapón de roscao 3 pipetas de 1 o 2 mlo 3 pipetas de 10 ml
o 1 pipeta Pasteuro 3 matraces Erlenmeyer de 250 mlo 1 autoclaveo 1 horno de calor secoo Algodón y gasao Papel manila o estraza para envolver
Actividad.
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Realización de asepsia del área de trabajo.
Limpieza, preparación y envoltura de la cristalería para
utilizarla.
Presentación de los utensilios para el
manejo directo de los microorganismos.
Elaborar tapones para tubos y matraces.Envolver pipetas.Etiquetar el material.
Esterilizar el material en la forma en que lo indique el instructor.
Desarrollo de la práctica.
Resultados.Cuestionario:
1. ¿Qué es la esterilización?
La esterilización es la muerte y/ o eliminación de todo microorganismo. No existen grados de esterilidad, un objeto es estéril o no lo es.
2. ¿Qué tipo de esterilización utilizó para el material de cristalería?
Se utilizó un método físico por medio de calor, en específico calor húmedo.
3. ¿Cuál es el fundamento de la esterilización por calor seco?
Deshidrata las bacterias, virus, etc. y facilita la coagulación o desnaturalización de las proteínas
4. ¿Cuál es el fundamento de la esterilización por calor húmedo?
Coagulación de proteínas (desnaturalización), lo que es causado por la rotura de los puentes de hidrógeno que son los que mantienen a las proteínas en su forma tridimensional,
5. ¿Cuál es la temperatura, presión y tiempo para la esterilización en autoclave?
A los 121°C con una presión de 15 lb durante un tiempo de 15 minutos.
6. ¿Cuál es más eficaz como agente esterilizante, el calor seco o el calor húmedo?, ¿por qué?
Dependiendo del material que se quiera esterilizar, en nuestro caso al solo esterilizar material de vidrio o cristalería lo mejor es el calor húmedo debido a que tiene un rápido calentamiento y
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Introduzca el material a esterilizar en el autoclave.
Revisar que el nivel de agua coincida con la marca en el tubo
indicador.
Conectar el autoclave y poner la perilla de control en calentamiento alto.
Cerrar la puerta, apretar las manijas de dos en dos en
posición encontrada, abra la válvula y esperar a que salga el
aíre con el vapor de agua que se produce.
Dejar que el equipo se caliente hasta alcanzar los 121 °C o 15 lb
de presión revisando continuamente la escala del
manómetro.
Mantener el equipo en estas condiciones durante 15 minutos.
Apagar el autoclave y dejar que baje la presión a “0”. Abrir la válvula de seguridad y con la
ayuda de guantes de asbesto o una franela húmeda abrir
cuidadosamente la puerta.
penetración, destruye bacterias y esporas en corto tiempo, no deja residuos tóxicos y es más económico que el calor seco.
7. ¿Cuál es el diámetro del poro en los filtros de ésteres de celulosa utilizados para esterilizar por filtración? Y ¿Cuánto mide una bacteria de las más pequeñas que se conocen?
El poro de los filtros bacteriológicos comunes es de 0,22 micrómetros para esterilizar líquidos y de 0,45 micrómetros para retener bacterias.
8. Defina desinfección y asepsia
Desinfección: Técnica de saneamiento que tiene por objeto destruir los microorganismos patógenos, productores de enfermedades transmisibles, actuando sobre el ambiente y superficies de locales, objetos y excretas que son portadores de aquéllos, evitando así su propagación
Asepsia: Conjunto de procedimientos que tienen por objeto impedir la penetración de gérmenes en el sitio que no los contenga.
9. ¿Cuál es el método más apropiado para esterilizar el siguiente material?
MATERIAL MÉTODOSolución de vitaminasCajas de Petri de plástico de desecho Horno de aire caliente Aceite mineral Horno de aire caliente Sangre para transfusiónRopa contaminada Vapor a presiónCajas de Petri de plástico limpias Horno de aire caliente Talco Calor secoInstrumental de cirugía Vapor a presiónSangre de desecho Por vaporCadáveres de animales de experimentación de laboratorio
Fig. 1: Material forrado con papel manila. Fig. 2: Autoclave utilizada.
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Referencias.- Departamento de Química Biológica. (2014). Esterilización > Generalidades. Agosto 23,
2015, de Universidad de Buenos Aires Sitio web: http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminarioesterilizacion.htm
- Garcés, A.. (2008). PREPARACIÓN DEL MATERIAL DE VIDRIO DE USO EN EL LABORATORIO. Agosto 23, 2015, de Universidad Central de Venezuela Sitio web: http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Prep_de_material_de_vidrio.pdf
- Grupo Cosmos. (2013). Información Técnica y Comercial del Filtro bacterial. Agosto 23, 2015, de Cosmos Sitio web: http://www.cosmos.com.mx/wiki/fv11/filtro-bacterial
- López, L. & Torres, C.. (2006). Preparación del material para el trabajo en Microbiología Limpieza y Esterilización. Agosto 22, 2015, de Universidad Nacional del Nordeste Sitio web: http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp3.pdf
- Rivas, R.. (2013). ASEPSIA Y ANTISEPSIA EN ENDODONCIA. Agosto 23, 2015, de UNAM Sitio web: http://www.iztacala.unam.mx/rrivas/NOTAS/Notas13Microbiologia/aseconceptos.html
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