ADN : BASES MOLECULARESADN : BASES MOLECULARES
M.Sc. Ana Hurtado AlendesFacultad de Medicina Humana
Universidad de San Martín de [email protected]
EMBRIOLOGÍA HUMANA Y GENÉTICA BÁSICA
EMBRIOLOGÍA HUMANA Y GENÉTICA BÁSICA
• ADN: organización, estructura y funciones• El gen: naturaleza y propiedades• Transcripción y síntesis de proteínas• El código genético: propiedades• Variación de la expresión de los genes: penetrancia y
expresividad, pleiotropía, heterogeneidad genética, y otros• El ADN mitocondrial: características. Mapa del ADNm• Las mutaciones: Clasificación• ADN recombinante: Clonación, localización de genes,
métodos de análisis de ADN.• Aplicaciones del ADN recombinante: Proyecto Genoma
Humano, elaboración de productos de importancia médica, pruebas genéticas, terapia génica.
• ADN: organización, estructura y funciones• El gen: naturaleza y propiedades• Transcripción y síntesis de proteínas• El código genético: propiedades• Variación de la expresión de los genes: penetrancia y
expresividad, pleiotropía, heterogeneidad genética, y otros• El ADN mitocondrial: características. Mapa del ADNm• Las mutaciones: Clasificación• ADN recombinante: Clonación, localización de genes,
métodos de análisis de ADN.• Aplicaciones del ADN recombinante: Proyecto Genoma
Humano, elaboración de productos de importancia médica, pruebas genéticas, terapia génica.
TÓPICOSTÓPICOS
MODELO DE UN CROMOSOMA
HUMANO MOSTRANDO SUS
NIVELES DE ORGANIZACIÓN
MODELO DE UN CROMOSOMA
HUMANO MOSTRANDO SUS
NIVELES DE ORGANIZACIÓN
(30nm diam.)(11nm diam.)
(2nm diam.)
Una célula somática humana cuyo núcleo contiene 46 cromosomas
Para formar el cromosoma el ADN se arrolla y forma niveles de organización más elevados
Abarca una secuencia específica de pares de bases (bp)
Watson y Crick, Cavendish lab,Cambridge, 1953.
Los ácidos nucleicos ya habían sido descubiertos por el biólogo suizo Friedrich Miescher (1844-1895) en sus clásicas investigaciones en las células de pus.La estructura espacial del ácido desoxiribonucleico fue investigada por Watson y Crick que la establecieron como doble espiral.
R. Franklin y R Gosling,Nature,171,740 (1953)
Rosalind FranklinRosalind Franklin(1920-1958)(1920-1958)
Maaurice Wilkins(1916-2004)
Basándose en los datos de Chargaff (1950), relativos a la composición de bases nitrogenadas en el ADN de diferentes organismos y los estudios de difracción de rayos X hechos por Wilkins y Franklin, Watson y Crick propusieron el Modelo de la Doble Hélice del ADN.
DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGIADOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGIA MOLECULARMOLECULAR
COMPOSICIÓN DE LOS ACIDOSNUCLEICOS
COMPOSICIÓN DE LOS ACIDOSNUCLEICOS
PentosasBases nitrogenadas
Fosfato
PO O
O
OH
Fosfatoinorgánico
PO O
OR
O
Monoéster defosfato
PO O
OR
OR
Diéster defosfato
ESTRUCTURA QUÍMICA DE UNNUCLEÓTIDO
ESTRUCTURA QUÍMICA DE UNNUCLEÓTIDO
NUCLEÓTIDOS DEL ADNNUCLEÓTIDOS DEL ADN
SÍNTESIS DEL ADNSÍNTESIS DEL ADN
LA DOBLE HÉLICE DEL ADNLA DOBLE HÉLICE DEL ADN
ReplicaciónReplicación TranscripciónTranscripción
La unidad de transcripción consiste de un promotor, una región que codifica
el RNA y un terminador.Los promotores y los intensificadores son importantes para el inicio de la
transcripción. Los promotores, secuencias reconocidas por la RNA
polimerasa, se encuentran cerca o dentro de la región que codifica el RNA,
constan de un promotor mínimo cerca del gen y uno regulativo localizado a
mayor distancia corriente arriba. Los intensificadores que estimulan la
transcripción se encuentran lejos del gen y funcionan independientemente de la
posición y la dirección.Las diferentes RNA polimerasas utilizan diversos mecanismos de
terminación.
La unidad de transcripción consiste de un promotor, una región que codifica
el RNA y un terminador.Los promotores y los intensificadores son importantes para el inicio de la
transcripción. Los promotores, secuencias reconocidas por la RNA
polimerasa, se encuentran cerca o dentro de la región que codifica el RNA,
constan de un promotor mínimo cerca del gen y uno regulativo localizado a
mayor distancia corriente arriba. Los intensificadores que estimulan la
transcripción se encuentran lejos del gen y funcionan independientemente de la
posición y la dirección.Las diferentes RNA polimerasas utilizan diversos mecanismos de
terminación.
UNIDAD DE TRANSCRIPCION DEL ADNUNIDAD DE TRANSCRIPCION DEL ADN
CORTE Y EMPALME DEL ADN (SPLICING)CORTE Y EMPALME DEL ADN (SPLICING)
TRADUCCION Y SINTESIS DE PROTEINASTRADUCCION Y SINTESIS DE PROTEINAS
PROPIEDADES DEL CÓDIGO GENÉTICOPROPIEDADES DEL CÓDIGO GENÉTICO
La unidad básica es el codón (tripletes)Consiste de 64 codones y los aas especificados por estos
codonesEs casi universalEs degenerado (61 codones con sentido y solo 20 aas distintos,
los aas pueden estar especificados por más de 1 codón)Es lineal (en el caso de alg. virus si se superponen o sea 1
nucleótido está incluido en más de 1 codón)La unión codón-anticodón es casi específica (tambaleo, alg.
tRNA se aparean con más de 1 codón de mRNA, 30-50 tRNA
pueden aparearse con los 61 codones)El codón que inicia la traducción es el AUG (metionina)Los codones de terminación de la traducción son: UUA,
UAG, UGAEs estable pero mutable
La unidad básica es el codón (tripletes)Consiste de 64 codones y los aas especificados por estos
codonesEs casi universalEs degenerado (61 codones con sentido y solo 20 aas distintos,
los aas pueden estar especificados por más de 1 codón)Es lineal (en el caso de alg. virus si se superponen o sea 1
nucleótido está incluido en más de 1 codón)La unión codón-anticodón es casi específica (tambaleo, alg.
tRNA se aparean con más de 1 codón de mRNA, 30-50 tRNA
pueden aparearse con los 61 codones)El codón que inicia la traducción es el AUG (metionina)Los codones de terminación de la traducción son: UUA,
UAG, UGAEs estable pero mutable
AMINOACIDOS ESENCIALESAMINOACIDOS ESENCIALES
TODOS LOS ADULTOS Y NIÑOS
TODOS LOS ADULTOS Y NIÑOS
NIÑOS EN CRECIMIENTO
NIÑOS EN CRECIMIENTO
LACTANTE PREMATUROLACTANTE
PREMATURO
IsoleucinaLeucinaLisinaMetioninaFenilalaninaTreoninaTriptofanoValina
IsoleucinaLeucinaLisinaMetioninaFenilalaninaTreoninaTriptofanoValina
ArgininaHistidinaArgininaHistidina
CisteínaTirosinaCisteínaTirosina
VARIACIONES EN LA EXPRESION DE LOS GENES
VARIACIONES EN LA EXPRESION DE LOS GENES
Penetrancia y Expresividad
Penetrancia: Capacidad del gen para alcanzar una
expresión. Probabilidad que un gen se exprese.
Penetrancia reducida: Alg. individuos que poseen el
genotipo apropiado no expresan este carácter. Ejm:
Retinoblastoma (tumor ocular maligno), Corea de
Huntington.Expresividad: Gama de fenotipos que proceden de un
determinado genotipo. Severidad de expresión del fenotipo
Expresividad variable: Ejm. Neurofibromatosis tipo I,
Campodactilia, Fibrosis quística, Osteogénesis I.
Penetrancia y Expresividad
Penetrancia: Capacidad del gen para alcanzar una
expresión. Probabilidad que un gen se exprese.
Penetrancia reducida: Alg. individuos que poseen el
genotipo apropiado no expresan este carácter. Ejm:
Retinoblastoma (tumor ocular maligno), Corea de
Huntington.Expresividad: Gama de fenotipos que proceden de un
determinado genotipo. Severidad de expresión del fenotipo
Expresividad variable: Ejm. Neurofibromatosis tipo I,
Campodactilia, Fibrosis quística, Osteogénesis I.
RETINOBLASTOMA(Penetrancia reducida)RETINOBLASTOMA(Penetrancia reducida)
NEUROFIBROMATOSIS TIPO I(Expresividad variable)
NEUROFIBROMATOSIS TIPO I(Expresividad variable)
Enfermedad autosómica dominante
(17q)Penetrancia completa en adultosSíntomas clínicos: Desde crecimiento de
tumores benignos, manchas café con
leche,…..hasta tumores del sistema nervioso
central, neurofibromas plexiformes difusas
y cáncer del sistema nervioso o muscular.Expresividad variable: Algunos pueden
tener manchas café con leche, pecas
axilares y nódulos de Lisch (tumores benignos
en el iris), y otros tumores benignos que
involucran médula espinal o sarcomas
malignos de una extremidad, aún dentro de
la misma familia.
Enfermedad autosómica dominante
(17q)Penetrancia completa en adultosSíntomas clínicos: Desde crecimiento de
tumores benignos, manchas café con
leche,…..hasta tumores del sistema nervioso
central, neurofibromas plexiformes difusas
y cáncer del sistema nervioso o muscular.Expresividad variable: Algunos pueden
tener manchas café con leche, pecas
axilares y nódulos de Lisch (tumores benignos
en el iris), y otros tumores benignos que
involucran médula espinal o sarcomas
malignos de una extremidad, aún dentro de
la misma familia.
Pleiotropia (Un gen varios efectos)
Genes pleiotrópicos: Efectos fenotípicos múltiples
causados por un solo gen mutante o por un par de genes. Síndrome de Marfán: Mutación de un solo gen, produce
patología en ojos, esqueleto y sistema cardiovascular.
Cromosoma 15q (gen codificador de la fibrilina). Fibrosis quística: Puede afectar glándulas sudoríparas de
pulmones y páncreas. Cromosoma 7q31. Anemia de células falciformes: Afecta eritrocitos de hueso
y bazo.
Pleiotropia (Un gen varios efectos)
Genes pleiotrópicos: Efectos fenotípicos múltiples
causados por un solo gen mutante o por un par de genes. Síndrome de Marfán: Mutación de un solo gen, produce
patología en ojos, esqueleto y sistema cardiovascular.
Cromosoma 15q (gen codificador de la fibrilina). Fibrosis quística: Puede afectar glándulas sudoríparas de
pulmones y páncreas. Cromosoma 7q31. Anemia de células falciformes: Afecta eritrocitos de hueso
y bazo.
VARIACIONES EN LA EXPRESION DE LOS GENES
VARIACIONES EN LA EXPRESION DE LOS GENES
SÍNDROME DE MARFÁN (Pleiotropía)SÍNDROME DE MARFÁN (Pleiotropía)
Pectus excavatum
Aracnodactilia Dilatación de la aorta
Desviación del cristalino
Talla alta, escoliosis
VARIACIONES EN LA EXPRESION DE LOS GENES
VARIACIONES EN LA EXPRESION DE LOS GENES
Heterogeneidad genética (varios genes un solo efecto)Osteogénesis imperfecta: (AD y AR) Mutación de genes
causa estructura anormal de la triple hélice del
procolágeno. Codificado por 2 genes (crom. 17 y crom. 7).Síndrome de Waardenburg: Sordera profunda infantil con
alteración pigmentaria causado por diferentes genes
recesivos en diferentes loci. Padres recesivos tienen hijos de 3
tipos: todos sordos, todos oyentes y otros sordos y
oyentes.Heterogeneidad en las diferentes distrofias musculares: Duchene y tipo Becker ligados a X. Distrofia muscular risomélica AR. Distrofia muscular facioescápulo humeral AD (con
formas frustradas, unas más severas que otras).
Heterogeneidad genética (varios genes un solo efecto)Osteogénesis imperfecta: (AD y AR) Mutación de genes
causa estructura anormal de la triple hélice del
procolágeno. Codificado por 2 genes (crom. 17 y crom. 7).Síndrome de Waardenburg: Sordera profunda infantil con
alteración pigmentaria causado por diferentes genes
recesivos en diferentes loci. Padres recesivos tienen hijos de 3
tipos: todos sordos, todos oyentes y otros sordos y
oyentes.Heterogeneidad en las diferentes distrofias musculares: Duchene y tipo Becker ligados a X. Distrofia muscular risomélica AR. Distrofia muscular facioescápulo humeral AD (con
formas frustradas, unas más severas que otras).
CARACTERES INFLUIDOS POR EL SEXO (expresados en ambos sexos y con frecuencias diferentes)
CARACTERES INFLUIDOS POR EL SEXO (expresados en ambos sexos y con frecuencias diferentes)
FenotipoFenotipo GenéticaGenética Diferencia sexualDiferencia sexual
CalvicieCalvicie
Hiperplasia Hiperplasia suprarrenal congénitassuprarrenal congénitas
HemocromatosisHemocromatosis
HipogonadismoHipogonadismo
Miopía limitada a las Miopía limitada a las mujeresmujeres
Pubertad precozPubertad precoz
AD en vAD en vAR en mAR en m
ARAR
ADAD
ARAR
ADAD
ADAD
Exceso en varonesExceso en varones
Se reconoce más a Se reconoce más a menudo en mujeresmenudo en mujeres
Exceso en varonesExceso en varones
Limitado a varonesLimitado a varones
Limitado a mujeresLimitado a mujeres
Limitado a varonesLimitado a varones
CARACTERES LIMITADOS POR EL SEXO (PUBERTAD PRECOZ LIMITADO AL SEXO MASCULINO)
CARACTERES LIMITADOS POR EL SEXO (PUBERTAD PRECOZ LIMITADO AL SEXO MASCULINO)
Niños afectados son más altos que los de su edad, pero pronto interrumpen su crecimiento y son más bajos
Desorden autosómico dominante transmitido por varones afectados o mujeres portadoras no afectadas. La transmisión de varón a varón muestra que la herencia es autosomal, no ligada al crom. X. Debido a que el carácter es transmitido de portadoras femeninas, no puede ser ligada al crom. Y.
CARACTERES LIMITADOS POR EL SEXO (SINDROME DE FEMINIZACIÓN TESTICULAR)
CARACTERES LIMITADOS POR EL SEXO (SINDROME DE FEMINIZACIÓN TESTICULAR)
Cuatro hermanas con feminización testicular
Fórmula cromosómica: 46,XYTipo de herencia: HR ligada a X
EDAD Y EXPRESIÓN DE LOS GENESEDAD Y EXPRESIÓN DE LOS GENES
Muchos genes actúan antes del nacimiento o en las primeras fases del
desarrollo.Cuando el niño comienza su vida independiente puede ser afectado:
enfermedades metabólicas como fenilcetonuria y galactosemia.Corea de Huntington: Enfermedad neurodegenerativa autosómica
dominante. Locus 4p16.3, gen que codifica la huntingtina, expansión de
trinucleótidos CAG en el exón 1.
Muchos genes actúan antes del nacimiento o en las primeras fases del
desarrollo.Cuando el niño comienza su vida independiente puede ser afectado:
enfermedades metabólicas como fenilcetonuria y galactosemia.Corea de Huntington: Enfermedad neurodegenerativa autosómica
dominante. Locus 4p16.3, gen que codifica la huntingtina, expansión de
trinucleótidos CAG en el exón 1.
COREA DE HUNTINGTONCOREA DE HUNTINGTON
Edad observada de inicio de la enfermedad de acuerdo al número de repeticiones CAG
ADN MITOCONDRIAL (ADN mt)ADN MITOCONDRIAL (ADN mt)
12S
16S
Doble hélice de ADN circular de 16,579
pb.
Formado por 2 cadenas
complementarias:Una cadena pesada H
(molde) rica en G, y otra cadena ligera L
(codificadora) rica en C.
Contiene 37 genes: 13 codifican para
ARNm, 22 para ARNt y 2 para ARNr.
Las enzimas implicadas en su
replicación, transcripción y traducción son
codificadas por genes nucleares.
Las mutaciones ocasionan enfermedades:
MELAS (miopatía mitocondrial con
encefalopatía,acidosis láctica y episodios
similares al ictus), MERRF (epilepsia
mioclónica, fibras rojas deshilachadas),
NARP (neuropatía, ataxia, retinitis
pigmentosa), LHON (neuropatía hereditaria
de Leber), etc.
Doble hélice de ADN circular de 16,579
pb.
Formado por 2 cadenas
complementarias:Una cadena pesada H
(molde) rica en G, y otra cadena ligera L
(codificadora) rica en C.
Contiene 37 genes: 13 codifican para
ARNm, 22 para ARNt y 2 para ARNr.
Las enzimas implicadas en su
replicación, transcripción y traducción son
codificadas por genes nucleares.
Las mutaciones ocasionan enfermedades:
MELAS (miopatía mitocondrial con
encefalopatía,acidosis láctica y episodios
similares al ictus), MERRF (epilepsia
mioclónica, fibras rojas deshilachadas),
NARP (neuropatía, ataxia, retinitis
pigmentosa), LHON (neuropatía hereditaria
de Leber), etc.
Las mitocondrias del cigoto proceden del gameto materno.
Las mitocondrias del gameto paterno en caso de llegar al cigoto suelen ser degradadas.
Por este motivo, los hijos heredan el ADN mitocondrial de la madre.
ADN MITOCONDRIAL (ADN mt)ADN MITOCONDRIAL (ADN mt)
GENOMA NUCLEAR MITOCONDRIAL
Tamaño 3.000 Mb 16.6 hb
N° de moléculas de ADN diferentes
23 (en XX) ó 24 (en XY), todos lineales
1 de ADN circular
Total de moléculas de ADN/célula
23 en las células haploides46 en las células diploides
Varios miles
Proteínas asociadas Varias clases de proteínas histonas y no histónicas
Libre de proteínas
N° de genes 50.000 a 100.00 37
Repetición de ADN Amplias fracciones Muy poco
Trascripción La mayoría de los genes se transcriben individualmente
Trascripción continua de multiplicidad de genes
Intrones En la mayoría de los genes
Ausentes
% de ADN codificante 2 a 3 % Aproximadamente 95 %
Recombinación Al menos una vez por cada par de homólogos en la meiosis
Ninguna
Herencia Mendeliana, en las secuencias en “X” y en autosomas; paterna, en las secuencias en “Y”
Exclusivamente materna
Fuente: Strachan, T. The human genome. ios Scientific Publishers, Medical Perspectives Series. Londres. 1994
DIFERENCIAS ENTRE EL GENOMA NUCLEAR Y MITOCONDRIAL
DIFERENCIAS ENTRE EL GENOMA NUCLEAR Y MITOCONDRIAL
DIFERENCIAS EN EL CÓDIGO GENÉTICO CON EL ADN NUCLEAR
DIFERENCIAS EN EL CÓDIGO GENÉTICO CON EL ADN NUCLEAR
En la mitocondria humana AUA (Met) y AUU (Ile) actúan como codones de “inicio” junto a AUG
En la mitocondria humana AUA (Met) y AUU (Ile) actúan como codones de “inicio” junto a AUG
CODON MITOCONDRIA HUMANA CÓDIGO ESTÁNDAR
AGA Stop Arg
AGG Stop Arg
AUA Met Ile
UGA Trp Stop
MUTACIONESMUTACIONES
• Cambios heredables en la secuencia de ADN• Tipos de mutaciones a) Mutaciones a gran escala - Ganancia o pérdida de una regiòn cromosómica - Translocación de partes de un cromosoma b) Mutaciones a pequeña escala Sustitución, deleción o inserción de un nucleótido
Mutaciones agran escala
Mutaciones apequeña escala
Translocación
ATCGAATC
ATGGAATC
Sustitución
AnemiafalciformeAnemia
falciforme
CLASIFICACION DE LAS MUTACIONESCLASIFICACION DE LAS MUTACIONES
Respecto a su mecanismo de producción
Puntuales: Transiciones: Cambio de una purina por otra purina o una
pirimidina por otra pirimidina. Transversiones: Cambio de una purina por una pirimidina o
visceversa.De extensión variable: Inserciones: Se adiciona 1,2 o más bases y produce cambio de
encuadre. Deleciones: Se suprime 1,2 o más bases y produce cambio de
encuadre. Expansión de repeticiones de tripletes
Respecto a su mecanismo de producción
Puntuales: Transiciones: Cambio de una purina por otra purina o una
pirimidina por otra pirimidina. Transversiones: Cambio de una purina por una pirimidina o
visceversa.De extensión variable: Inserciones: Se adiciona 1,2 o más bases y produce cambio de
encuadre. Deleciones: Se suprime 1,2 o más bases y produce cambio de
encuadre. Expansión de repeticiones de tripletes
Respecto a su expresión
Letales: Origina la muerte prematuraSubletales: Permite la vida pero se presentan alteraciones
estructurales y funcionalesCondicionales: Se expresa sólo bajo determinadas
condiciones, p.ej. exposición a fármacos.Somáticas: Afecta a algunas estructuras del organismo. Las
mutaciones que estimulan la división celular pueden
aumentar en número y propagarse para dar origen a los
diferentes tipos de cáncer.Genéticas: O de la línea germinal, altera la información
genética de los gametos y los descendientes.
Respecto a su expresión
Letales: Origina la muerte prematuraSubletales: Permite la vida pero se presentan alteraciones
estructurales y funcionalesCondicionales: Se expresa sólo bajo determinadas
condiciones, p.ej. exposición a fármacos.Somáticas: Afecta a algunas estructuras del organismo. Las
mutaciones que estimulan la división celular pueden
aumentar en número y propagarse para dar origen a los
diferentes tipos de cáncer.Genéticas: O de la línea germinal, altera la información
genética de los gametos y los descendientes.
Respecto al efecto que producen en el organismo que las
presenta
Positivo: Confiere al organismo una nueva ventaja con
respecto a su ambiente, una mayor facilidad de adaptación o
nuevas aptitudes respecto a otro.Negativo: Pueden restar capacidades de sobrevivencia, de
adaptación o estructura. Son los más frecuentes. Ej. producen
los padecimientos hereditarios (autosómicos recesivos).Neutro: No se altera el funcionamiento.
Respecto al efecto que producen en el organismo que las
presenta
Positivo: Confiere al organismo una nueva ventaja con
respecto a su ambiente, una mayor facilidad de adaptación o
nuevas aptitudes respecto a otro.Negativo: Pueden restar capacidades de sobrevivencia, de
adaptación o estructura. Son los más frecuentes. Ej. producen
los padecimientos hereditarios (autosómicos recesivos).Neutro: No se altera el funcionamiento.
TASA DE MUTACIÓNTASA DE MUTACIÓNEs el número de mutaciones que se producen alelos mutantes
en cada locus y en cada generación. Por ejemplo: la tasa de
mutación para la acondroplasia es de 4 mutaciones cada 100,000
gametos (4x10-5).Factores que afectan la tasa de mutación: La frecuencia con
la cual se producen los cambios primarios en el DNA, la
probabilidad de reparación del cambio, y la probabilidad de
reconocer o registrar una mutación (en organismos inferiores se
pueden diseñar experimentos y en el hombre son indirectos y
deducibles por inferencia basándose en el árbol genealógico).Frecuencia de mutación: Incidencia de un tipo específico de
mutación dentro de un grupo determinado de organismos. Por
ejemplo: para la acondroplasia, la frecuencia de mutación en los
Estados Unidos es de 1 cada 20,000 (2x10-4).
Es el número de mutaciones que se producen alelos mutantes
en cada locus y en cada generación. Por ejemplo: la tasa de
mutación para la acondroplasia es de 4 mutaciones cada 100,000
gametos (4x10-5).Factores que afectan la tasa de mutación: La frecuencia con
la cual se producen los cambios primarios en el DNA, la
probabilidad de reparación del cambio, y la probabilidad de
reconocer o registrar una mutación (en organismos inferiores se
pueden diseñar experimentos y en el hombre son indirectos y
deducibles por inferencia basándose en el árbol genealógico).Frecuencia de mutación: Incidencia de un tipo específico de
mutación dentro de un grupo determinado de organismos. Por
ejemplo: para la acondroplasia, la frecuencia de mutación en los
Estados Unidos es de 1 cada 20,000 (2x10-4).
MutaciónMutación Tasa de la mutaciónTasa de la mutación
Enfermedad de HuntingtonEnfermedad de Huntington
Acondroplasia Acondroplasia
NeurofibromatosisNeurofibromatosis
Hemofilia AHemofilia A
Distrofia muscular de Distrofia muscular de DuchenneDuchenne
RetinoblastomaRetinoblastoma
1 x 101 x 10-6-6
1 x 101 x 10-5-5
1 x 101 x 10-4-4
3.2 x 103.2 x 10-5-5
9.2 x 109.2 x 10-5-5
6 x 106 x 10-6-6
TASA DE MUTACIONES POR GAMETO DE ALG. GENES EN EL SER HUMANO
TASA DE MUTACIONES POR GAMETO DE ALG. GENES EN EL SER HUMANO
CAUSAS DE LAS MUTACIONESCAUSAS DE LAS MUTACIONES
a) Mutaciones endógenas o espontáneas: Surgen por cambio naturales en la estructura del ADN.
- Incorporación de nucleótidos erróneos en la replicación que dan lugar a transiciones, transversiones y mutaciones que
cambian el marco de lectura. - Depurinación - Desaminación oxidativa - Mutágenos endógenos que generan radicales libres de oxígeno b) Mutaciones exógenas o inducidas: Surgen por cambios causados
por sustancias químicas ambientales o por radiación. - Agentes químicos que reaccionan o se unen al ADN: alquilantes (dimetilnitrosamina, dimetilsulfato,etc.), intercalantes (naranja de acridina, nitrógeno mostaza, etc) y otros (5-bromouracilo,etc) - Agentes físicos: radiación u.v., rayos X y radioactividad
ADN RECOMBINANTEADN RECOMBINANTE
La tecnología del ADN recombinante es un conjunto de
técnicas moleculares para localizar, aislar, alterar, estudiar y
recombinar secuencias de ADN. Consiste en la unión artificial de
moléculas de ADN o parte de esas moléculas que no se
encuentran juntas en la naturaleza y provienen de diferentes
organismos.Dichas técnicas incluyen:
- La clonación del ADN
- Localización de genes y construcción de genotecas
- Métodos de análisis del ADN (Southern Blot, Northern Blot,
PCR, secuenciación, FISH, microarrays, etc).
- Utilización de vectores de expresión
La tecnología del ADN recombinante es un conjunto de
técnicas moleculares para localizar, aislar, alterar, estudiar y
recombinar secuencias de ADN. Consiste en la unión artificial de
moléculas de ADN o parte de esas moléculas que no se
encuentran juntas en la naturaleza y provienen de diferentes
organismos.Dichas técnicas incluyen:
- La clonación del ADN
- Localización de genes y construcción de genotecas
- Métodos de análisis del ADN (Southern Blot, Northern Blot,
PCR, secuenciación, FISH, microarrays, etc).
- Utilización de vectores de expresión
REQUISITOS BÁSICOS PARA CLONAR “ADN”
REQUISITOS BÁSICOS PARA CLONAR “ADN”
19731973
Descubrimiento del primerDescubrimiento del primer
PLÁSMIDOPLÁSMIDOa partir de Staphyloccocus aureusa partir de Staphyloccocus aureus
(1977 – pBR322)(1977 – pBR322)
19711971
Purificación de la primeraPurificación de la primera
ENZIMA DEENZIMA DERESTRICCIONRESTRICCION
El traslado de un vector que lleva una porción de ADN al
interior de una célula donde tiene lugar la replicación.Un método para identificar las células que contiene cualquier
porción deseada del ADN.
El traslado de un vector que lleva una porción de ADN al
interior de una célula donde tiene lugar la replicación.Un método para identificar las células que contiene cualquier
porción deseada del ADN.
ENZIMAS DE RESTRICCIÓNENZIMAS DE RESTRICCIÓN
ENZIMAS DE RESTRICCIÓNENZIMAS DE RESTRICCIÓN
VECTORES DE CLONACIÓNVECTORES DE CLONACIÓN
Agentes transportadores, son pequeñas moleculas de ADN con
capacidad de autorreplicación que se utilizan para transferir
segmentos de ADN extraños entre células huésped
Agentes transportadores, son pequeñas moleculas de ADN con
capacidad de autorreplicación que se utilizan para transferir
segmentos de ADN extraños entre células huésped
PRINCIPALES VECTORES DE CLONACION
PlásmidosBacteriófagosCósmidosCromosomas artificiales (YACS, BACS)
PRINCIPALES VECTORES DE CLONACION
PlásmidosBacteriófagosCósmidosCromosomas artificiales (YACS, BACS)
PLÁSMIDOSPLÁSMIDOSMoléculas de ADN circular extracromosómicos, replicación
autónoma, se encuentran en el citoplasma de células bacterianas y
frecuentemente contienen 1 ó 2 genes que codifican resistencia a
antibióticos.Pueden ser aislados y reintroducidos en un bacteria por
transform.Transportan fragmentos de hasta 15 Kb.El más usado es el pBR322, contiene genes que codifican
resistencia a Amp y Tet y muchos sitios de restricción.
Moléculas de ADN circular extracromosómicos, replicación
autónoma, se encuentran en el citoplasma de células bacterianas y
frecuentemente contienen 1 ó 2 genes que codifican resistencia a
antibióticos.Pueden ser aislados y reintroducidos en un bacteria por
transform.Transportan fragmentos de hasta 15 Kb.El más usado es el pBR322, contiene genes que codifican
resistencia a Amp y Tet y muchos sitios de restricción.
BACTERIÓFAGOSBACTERIÓFAGOS
Son virus genéticamente modificados que infectan células
bacterianas y se usan como vectores de clonaciónEl genoma del fago modificado contiene secuencias de restricción
en áreas que no alterarán la replicaciónEl genoma del fago recombinante se introduce en cápsides virales
y pueden utilizarse para infectar células de E. coli por transducción.Son capaces de transportar fragmentos de hasta 20 Kb de long.
Son virus genéticamente modificados que infectan células
bacterianas y se usan como vectores de clonaciónEl genoma del fago modificado contiene secuencias de restricción
en áreas que no alterarán la replicaciónEl genoma del fago recombinante se introduce en cápsides virales
y pueden utilizarse para infectar células de E. coli por transducción.Son capaces de transportar fragmentos de hasta 20 Kb de long.
CÓSMIDOSCÓSMIDOS
Son plásmidos que contienen
sitios cos (extremos cohesivos del
DNA del fago) y que pueden
ensamblarse en cápsides de fagos.Contiene varios sitios de
restricción y genes de resistencia a
antibióticos. Transportan fragmentos de
ADN de hasta 45 Kb de long.Se introducen a bacterias por
transducción y allí pueden existir
en forma de plásmidos.
Son plásmidos que contienen
sitios cos (extremos cohesivos del
DNA del fago) y que pueden
ensamblarse en cápsides de fagos.Contiene varios sitios de
restricción y genes de resistencia a
antibióticos. Transportan fragmentos de
ADN de hasta 45 Kb de long.Se introducen a bacterias por
transducción y allí pueden existir
en forma de plásmidos.
CROMOSOMAS ARTIFICIALESCROMOSOMAS ARTIFICIALES
Cromosoma artificial de levadura (YAC, Yeast artificial
chromosome)
Cromosoma artificial de levadura (YAC, Yeast artificial
chromosome)Contienen todos los elementos necesarios para propagar un
cromosoma en levaduras: un origen de replicación, un par de
telómeros y un centrómero.Contienen fragmentos de ADN de 100 a 2,000 Kb de tamaño y
pueden introducirse en células de S. cereviciae y serán
replicados juntos con los cromosomas verdaderos
Contienen todos los elementos necesarios para propagar un
cromosoma en levaduras: un origen de replicación, un par de
telómeros y un centrómero.Contienen fragmentos de ADN de 100 a 2,000 Kb de tamaño y
pueden introducirse en células de S. cereviciae y serán
replicados juntos con los cromosomas verdaderos
Cromosoma artificial bacteriano (BAC, Bacterial artificial
chromosome)
Cromosoma artificial bacteriano (BAC, Bacterial artificial
chromosome)Construído a partir de los factores F (plásmidos de fertilidad
de E. coli.Se utilizan para clonar fragmentos de ADN que oscilan entre
100 y 500Kb en las bacterias.
Construído a partir de los factores F (plásmidos de fertilidad
de E. coli.Se utilizan para clonar fragmentos de ADN que oscilan entre
100 y 500Kb en las bacterias.
MÉTODOS DE INTRODUCCIÓN DEL VECTOR
MÉTODOS DE INTRODUCCIÓN DEL VECTOR
Transducción: Consiste en introducir el ADN en una célula
hospedadora mediante un virus.
Transducción: Consiste en introducir el ADN en una célula
hospedadora mediante un virus.
Transformación: Consiste en introducir una molécula de ADN
foráneo en una célula bacteriana mediante tratamientos físicos y
químicos.
Transformación: Consiste en introducir una molécula de ADN
foráneo en una célula bacteriana mediante tratamientos físicos y
químicos.
LOCALIZACIÓN DE GENES: Construcción de Genotecas
LOCALIZACIÓN DE GENES: Construcción de Genotecas
Clonación de fragmentos escogidos al azar: Primero se clona un
número grande de fragmentos de ADN (GENOTECA), en
conocimiento de que uno o más contienen el DNA de interés y
entonces se busca el clon de interés entre los clones.
Clonación de fragmentos escogidos al azar: Primero se clona un
número grande de fragmentos de ADN (GENOTECA), en
conocimiento de que uno o más contienen el DNA de interés y
entonces se busca el clon de interés entre los clones.
¿Cómo encontramos la secuencia de DNA para ser clonada en
primer lugar?
¿Cómo encontramos la secuencia de DNA para ser clonada en
primer lugar?
Genoteca Genómica (Colección de fragmentos de ADN)Genoteca cDNA (Colección de fragmentos de ADN que se
transcriben en RNAm)
Genoteca Genómica (Colección de fragmentos de ADN)Genoteca cDNA (Colección de fragmentos de ADN que se
transcriben en RNAm)
…/
Selección de genotecas de ADN: Por hibridación con sondas para
encontrar fragmentos de ADN clonados en bacterias o fagos
Selección de genotecas de ADN: Por hibridación con sondas para
encontrar fragmentos de ADN clonados en bacterias o fagos
Cuando el gen todavía no se ha aislado se utiliza como sonda
un gen similar proveniente de otro organismo.Si ya se aisló la proteína producida por el gen y se determinó
su secuencia de aas pueden crearse sondas sintéticas.
Cuando el gen todavía no se ha aislado se utiliza como sonda
un gen similar proveniente de otro organismo.Si ya se aisló la proteína producida por el gen y se determinó
su secuencia de aas pueden crearse sondas sintéticas.
/…
/…Paseo cromosómico: Se basa en que una genoteca de ADN
consiste de un conjunto de fragmentos de ADN superpuestos. Se
utiliza el extremo del clon de un gen vecino para hacer una sonda
complem., con esta sonda se selecciona de la genoteca un segundo
clon que se superpone con el primero y se extiende en la dirección del
gen de interés. Este segundo clon se aisla y purifica y se prepara
una sonda desde su extremo, con esta sonda se selecciona de la
genoteca un tercer clon que se superpone con el segundo, y así
sucesivamente.
Paseo cromosómico: Se basa en que una genoteca de ADN
consiste de un conjunto de fragmentos de ADN superpuestos. Se
utiliza el extremo del clon de un gen vecino para hacer una sonda
complem., con esta sonda se selecciona de la genoteca un segundo
clon que se superpone con el primero y se extiende en la dirección del
gen de interés. Este segundo clon se aisla y purifica y se prepara
una sonda desde su extremo, con esta sonda se selecciona de la
genoteca un tercer clon que se superpone con el segundo, y así
sucesivamente.
MÉTODOS DE ANÁLISIS DE ADN: Southern Blot
MÉTODOS DE ANÁLISIS DE ADN: Southern Blot
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Visualización del PCRVisualización del PCR
479 bp479 bpgrandegrande
190 bp190 bppequeñapequeña
1 2 3 M100 4 5 6 71 2 3 M100 4 5 6 7
Secuenciación del ADNSecuenciación del ADN
Es una herramienta que nos
da información sobre la secuencia
de nucleótidos del genoma de
cualquier organismo. Hay dos métodos principales:
- Método de la terminación de la
cadena (Sanger et al., 1977).
- Método de degradación
química (Maxam and Gilbert,
1977).
Es una herramienta que nos
da información sobre la secuencia
de nucleótidos del genoma de
cualquier organismo. Hay dos métodos principales:
- Método de la terminación de la
cadena (Sanger et al., 1977).
- Método de degradación
química (Maxam and Gilbert,
1977).
FISH: Fluorescence in situ hybridization
FISH: Fluorescence in situ hybridization
Es una herramienta que permite
localizar un fragmento de ADN o
ARN de interés sobre cromosomas,
tejidos o células = localización física.Útil para identificar
anormalidades en los cromosomas y
para el mapeo genético.
Es una herramienta que permite
localizar un fragmento de ADN o
ARN de interés sobre cromosomas,
tejidos o células = localización física.Útil para identificar
anormalidades en los cromosomas y
para el mapeo genético.
Metafase hibridado con una sonda para el síndrome de DiGeorge (microdeleción en la región 22q11.2
APLICACIONES DEL ADN RECOMBINANTEAPLICACIONES DEL ADN RECOMBINANTE
Mapeo génicoNaturaleza y función de los genes: Proyecto Genoma
Humano.Elaboración de productos farmaceúticos: insulina humana,
hormona del crecimiento, factores de coagulación, etc.Elaboración de bacterias especializadas: para degradar
sustancias químicas tóxicas y contaminantes, aumenten la
captación de nitrógeno, inhiban el crecimiento de patógenos, etc.Productos para la agricultura: plantas transgénicas con
rasgos valiosos.Pruebas genéticas: diagnóstico de enfermedadesTerapia génica
Mapeo génicoNaturaleza y función de los genes: Proyecto Genoma
Humano.Elaboración de productos farmaceúticos: insulina humana,
hormona del crecimiento, factores de coagulación, etc.Elaboración de bacterias especializadas: para degradar
sustancias químicas tóxicas y contaminantes, aumenten la
captación de nitrógeno, inhiban el crecimiento de patógenos, etc.Productos para la agricultura: plantas transgénicas con
rasgos valiosos.Pruebas genéticas: diagnóstico de enfermedadesTerapia génica
MAPEO GÉNICOMAPEO GÉNICO
Es la localización de los genes en el genoma de un organismo.Tipos: Genético y FísicoSe utilizan los marcadores genéticos (RFLPs, microsatélites,
SNPs, etc.) y sitios de restricción.Procedimiento:
- Identificación del modo de herencia
- Aplicación de los métodos analíticos y experimentales para
mapear el gen y luego refinar su localización
- Identificación de los genes candidatos
- Selección de los genes candidatos para mutación
- Determinación de las consecuencias funcionales de la
mutación(s).
Es la localización de los genes en el genoma de un organismo.Tipos: Genético y FísicoSe utilizan los marcadores genéticos (RFLPs, microsatélites,
SNPs, etc.) y sitios de restricción.Procedimiento:
- Identificación del modo de herencia
- Aplicación de los métodos analíticos y experimentales para
mapear el gen y luego refinar su localización
- Identificación de los genes candidatos
- Selección de los genes candidatos para mutación
- Determinación de las consecuencias funcionales de la
mutación(s).
RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism)
RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism)
15 GATA repeats = 127 bp 15 GATA repeats = 127 bp GDB primers publicados son coloreados en azul y rojo primers publicados son coloreados en azul y rojo
D3S1358D3S1358Marcador microsatéliteMarcador microsatélite
Microsatélite de un cromosoma que segrega con una enfermedad Microsatélite de un cromosoma que segrega con una enfermedad autosómica en el mismo. Microsatélite que cosegrega con una autosómica en el mismo. Microsatélite que cosegrega con una enfermedad = Ligación genética, (dentro de 20 cM)enfermedad = Ligación genética, (dentro de 20 cM)
3
Mapa genético del cromosoma 1. Mapa genético del cromosoma 1. APOA2=apoliproteina,ACTN2=APOA2=apoliproteina,ACTN2=actina, CRP=proteina reactiva actina, CRP=proteina reactiva C,SPTA1=espectrinaC,SPTA1=espectrina
Comparación entre el mapa genético y físico del Comparación entre el mapa genético y físico del cromosoma 3 de cromosoma 3 de Saccharomyces cerevisiaeSaccharomyces cerevisiae . .
PROYECTO GENOMA HUMANOPROYECTO GENOMA HUMANOPROYECTO GENOMA HUMANOPROYECTO GENOMA HUMANO
Objetivo: Desarrollar métodos nuevos y automatizados para la
clonación y secuenciación del DNA y generar mapas físicos y
genéticos detallados del genoma humano. Identificar los genes y
describir sus funciones.Comenzó en 1990 con dos equipos participantes: un consorcio
internacional de investigadores con subsidios públicos y una
compañía privada.Se obtuvo el primer borrador en el 2000 y la secuencia completa
en el 2003.
Objetivo: Desarrollar métodos nuevos y automatizados para la
clonación y secuenciación del DNA y generar mapas físicos y
genéticos detallados del genoma humano. Identificar los genes y
describir sus funciones.Comenzó en 1990 con dos equipos participantes: un consorcio
internacional de investigadores con subsidios públicos y una
compañía privada.Se obtuvo el primer borrador en el 2000 y la secuencia completa
en el 2003.
El consorcio utilizó un enfoque basado en el mapaSe construyó un mapa genético de cada cromosomaEn base al mapa genético se elabora un mapa físico de alta resoluciónSe utilizaron las huellas de restricción del DNA para ensamblar los clones
BAC en los contigs que fueron posicionados en los cromosomas mediante
marcadores y sondas genéticas.Los clones BAC se subclonaron, secuenciaron y el genoma completo fue
ensamblado y almacenado en un banco de datos de un ordenador.
El consorcio utilizó un enfoque basado en el mapaSe construyó un mapa genético de cada cromosomaEn base al mapa genético se elabora un mapa físico de alta resoluciónSe utilizaron las huellas de restricción del DNA para ensamblar los clones
BAC en los contigs que fueron posicionados en los cromosomas mediante
marcadores y sondas genéticas.Los clones BAC se subclonaron, secuenciaron y el genoma completo fue
ensamblado y almacenado en un banco de datos de un ordenador.
La empresa privada utilizó la secuenciación del genoma completo por
fragmentos escogidos al azar (shotgun)
La empresa privada utilizó la secuenciación del genoma completo por
fragmentos escogidos al azar (shotgun)
Aplicaciones médicas del ADN Aplicaciones médicas del ADN recombinanterecombinante
Aplicaciones médicas del ADN Aplicaciones médicas del ADN recombinanterecombinante
Producción de proteínas de utilidad médica (como la
somatostatina, la insulina, la hormona del crecimiento humano, los
interferones, etc.).Utilización de plantas desarrolladas mediante ingeniería
genética para producir vacunas orales.Vacunas sintéticas (por ej. vacunas contra el paludismo y la
rabia) mediante técnicas recombinantes.
Producción de proteínas de utilidad médica (como la
somatostatina, la insulina, la hormona del crecimiento humano, los
interferones, etc.).Utilización de plantas desarrolladas mediante ingeniería
genética para producir vacunas orales.Vacunas sintéticas (por ej. vacunas contra el paludismo y la
rabia) mediante técnicas recombinantes.
Productos farmaceúticos obtenidos por Productos farmaceúticos obtenidos por clonamiento en vectores de expresiónclonamiento en vectores de expresión
Producto Producto Tratamiento paraTratamiento para
Factor de coagulación VIIIFactor de coagulación VIIIFactor de coagulación IXFactor de coagulación IXEritropoyetinaEritropoyetinaInsulinaInsulinaHormona de crecimientoHormona de crecimientoActivador del plasminógenoActivador del plasminógenoVacuna de la hepatitis BVacuna de la hepatitis BInterferon Interferon
Interferon Interferon Interferon Interferon
Interleukina 2Interleukina 2Factor de estimulación deFactor de estimulación decolonias de granulocitoscolonias de granulocitosDNasaDNasa
Hemofilia AHemofilia AHemofilia BHemofilia BAnemiaAnemiaDiabetesDiabetesDeficiencia en la hormona de crecimientoDeficiencia en la hormona de crecimientoDesórdenes trombóticosDesórdenes trombóticosHepatitis BHepatitis BLeucemia de células de cabello,Leucemia de células de cabello,hepatitis crónicahepatitis crónicaEsclerosis múltipleEsclerosis múltipleInfec. en pacientes con granulomatosisInfec. en pacientes con granulomatosiscrónicacrónicaCarcinoma de células renalesCarcinoma de células renalesNeutropenia después de la quimioterapiaNeutropenia después de la quimioterapia
Fibrosis quísticaFibrosis quística
I. Clonamiento del gen de interésII. Construcción del vector de expresiónIII. Generación de la oveja transgénicaIV. Purificación bioquímica del producto
PRODUCCIÓN DE ANIMALES TRANSGÉNICOS
PRODUCCIÓN DE ANIMALES TRANSGÉNICOS
VACUNAS COMESTIBLES DE VACUNAS COMESTIBLES DE ORIGEN VEGETALORIGEN VEGETAL
Protección contra la hepatitis B (antígeno Protección contra la hepatitis B (antígeno de superficie HBsAg), el cólera, la diarrea de superficie HBsAg), el cólera, la diarrea ((E. coli, toxinaE. coli, toxina LT-B, CT-B), HIV (gp120), LT-B, CT-B), HIV (gp120), herpesherpes
Plantas: papa, plátano, tomate, tabaco, Plantas: papa, plátano, tomate, tabaco, otras frutasotras frutas
Evaluaciones en laboratorio en estado Evaluaciones en laboratorio en estado avanzado. En papa, hasta 0.3% de ab avanzado. En papa, hasta 0.3% de ab solubles de LT-B en papas hervidas (Tacket solubles de LT-B en papas hervidas (Tacket et alet al, 1998), 1998)
Actualmente, fase de prueba en voluntariosActualmente, fase de prueba en voluntarios Cornell Univ., Univ. of Loma Linda Cornell Univ., Univ. of Loma Linda
(California), Maryland, Pennsylvania, (California), Maryland, Pennsylvania, MississippiMississippi
http://home.cwru.edu/~eay3/ESR/vaccine2big.htm
http://www.sciam.com/2000/0900issue/0900langridge.html
Enfermedad de HuntingtonEnfermedad de Huntington
PRUEBAS DE DIAGNÓSTICOPRUEBAS DE DIAGNÓSTICO
TERAPIA GÉNICATERAPIA GÉNICAEs la introducción de genes a través de vectores para curar un Es la introducción de genes a través de vectores para curar un
defecto o retardar la progresión de una enfermedad y de este defecto o retardar la progresión de una enfermedad y de este
modo mejorar la calidad de vida del paciente.modo mejorar la calidad de vida del paciente.Los vectores se pueden dividir en dos categorías:Los vectores se pueden dividir en dos categorías:
- Vectores virales:- Vectores virales: integrativos y no integrativos. Ej. retrovirales, integrativos y no integrativos. Ej. retrovirales,
adenovirus, baculovirus, etc.adenovirus, baculovirus, etc.
- Vectores no virales:- Vectores no virales: comprende el transporte directo del ADN comprende el transporte directo del ADN
desnudo o una mezcla de genes con lípidos catiónicos (liposomas).desnudo o una mezcla de genes con lípidos catiónicos (liposomas).Tipos de terapia génica:Tipos de terapia génica:
- Terapia de línea germinal:- Terapia de línea germinal: Se introduce un gen intacto (ej. Se introduce un gen intacto (ej.
microinyección) dentro de un huevo fertilizado. Antiético.microinyección) dentro de un huevo fertilizado. Antiético.
- Terapia de células somáticas:- Terapia de células somáticas: Se introduce por transducción un Se introduce por transducción un
gen intacto en células somáticas. Ej. células de pulmón en el caso gen intacto en células somáticas. Ej. células de pulmón en el caso
de fibrosis quística. Dos estrategias: de fibrosis quística. Dos estrategias: in vivoin vivo y y ex vivoex vivo..
Es la introducción de genes a través de vectores para curar un Es la introducción de genes a través de vectores para curar un
defecto o retardar la progresión de una enfermedad y de este defecto o retardar la progresión de una enfermedad y de este
modo mejorar la calidad de vida del paciente.modo mejorar la calidad de vida del paciente.Los vectores se pueden dividir en dos categorías:Los vectores se pueden dividir en dos categorías:
- Vectores virales:- Vectores virales: integrativos y no integrativos. Ej. retrovirales, integrativos y no integrativos. Ej. retrovirales,
adenovirus, baculovirus, etc.adenovirus, baculovirus, etc.
- Vectores no virales:- Vectores no virales: comprende el transporte directo del ADN comprende el transporte directo del ADN
desnudo o una mezcla de genes con lípidos catiónicos (liposomas).desnudo o una mezcla de genes con lípidos catiónicos (liposomas).Tipos de terapia génica:Tipos de terapia génica:
- Terapia de línea germinal:- Terapia de línea germinal: Se introduce un gen intacto (ej. Se introduce un gen intacto (ej.
microinyección) dentro de un huevo fertilizado. Antiético.microinyección) dentro de un huevo fertilizado. Antiético.
- Terapia de células somáticas:- Terapia de células somáticas: Se introduce por transducción un Se introduce por transducción un
gen intacto en células somáticas. Ej. células de pulmón en el caso gen intacto en células somáticas. Ej. células de pulmón en el caso
de fibrosis quística. Dos estrategias: de fibrosis quística. Dos estrategias: in vivoin vivo y y ex vivoex vivo..
TERAPIA GÉNICA in vivo y ex vivoTERAPIA GÉNICA in vivo y ex vivo