PERSPECTIVAS PARA EL CONTROL Y
ERRADICACION DEL PRRSV
Jairo Jaime C. MV, MSc, PhDMayo 6 de 2010
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HISTORIA
USA: North
Carolina
1989
EUROPA:Alemania
1990
Nuevo virusen Holanda: Lelystad (LV)
1991PRRS
1992
África del Sur
2004
Chile:erradicación
2007
Nuevas variantes(Vietnam y China)
2008
Libre de enfermedad:Suiza, Nueva
Zelanda y Australia
Mistery SwineDisease (MSD)
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ETIOLOGIA
EUROPA AMERICA DEL NORTE
LELYSTAD (LV)
GENOTIPO EUROPEO (EU)
O TIPO I
• Homología 63% nucleótidos• Igual organización genómica• Igual patogénesis
ATCC - 2332
GENOTIPO AMERICANO
(NA) O TIPO IINO COPIAR
ETIOLOGIA -TAXONOMIA
Arch Virol 1997, 142:629-33.
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PRRS - VIRION
NO COPIAR
ORGANIZACIÓNGENÓMICA PRRS
Virology 2001, 287:183-91
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MANIFESTACIONES CLÍNICAS
REPRODUCTIVAS 1, 2, 3 RESPIRATORIAS 3
• Abortos• Incremento en mortinatos• Momificaciones• Lechones débiles
• Pneumonitis linfomononuclearno específica.
* La intensidad de la enfermedad varía entre aislamientos (mediana virulencia y alta virulencia)4
* En animales jóvenes: larga viremia, altas tasas de excreción y replicación en macrófagos.
* Estado inmune del huésped5 1. Vet Rec 1991, 129:102-32. Am J Vet Res 1992, 53:485-83. Vet Q 1991, 13:131-6.4. Vet Immunol Immunopathol 2004, 102:233-475. Vaccine 2003, 21:1952-7
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VARIACIÓN GENÉTICA DEL VIRUS
SECUENCIA % IDENTIDAD REF
Lider (190 nt) 61% J Virol 1999, 73:270-280
ORF 1a 55% Gen Virol 1999, 80:307-15
ORF 1b 63%
GP5 51-59% Arch Virol 1997, 142:993-1001
ORF 7 (N) 57-59% Arch Virol 1995, 140:1451-60
ORF 6 (M) 70-81% J Gen Virol 1996, 77:1271-6
GP2a 63% J Virol 2004, 78:3684-703
E 76%
GP3 58%
GP4 68%
Entre Genotipos EU y NA
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Factor de Uniónde M o M-GP5
No internalización
- Marc 145- PAMs
PATOGENESIS -RECEPTORES
HeparanSulfato1
Sialodesina(CD-169)2
Internalización
CD-163 (Scavenger-R)3
- Marc - 145
Internalización
CD-151 (Tetraspanina)4
↑ Susceptibilidad ↑ 10-100 X en no
permisivas + CD 169
- Marc 145- PAMs
ENDOCITOCIS
1. J Virol 2007, 81:7371-92. Arch Virol 2003, 148:177-873. Virol J 2007, 4:624. J Gen Virol 2008, 89:2943-2953
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TRANSMISIÓN
DIRECTA INDIRECTA
SECRECIONES Y EXCRESIONES1: Botas y overoles4
Semen (43 dpi)2 Agujas5
Saliva Aerosoles: Hasta 4,7 Km6
Heces (discutible) 28-35 dpi3 Insectos7: Aedes vexans, Musca domestica, 2,4 Km
Leche Mamíferos y aves7: No vectores
Calostro
•J Vet Diagn Invest 1994, 6:3-12•J Am Vet Med Assoc 1994, 204:1943-8•Vet Microbiol 1997, 57:69-81•Vet Rec 2002, 150:114-115•Vet Rec 2003, 152:73-6•Vet Res 2009, 40:39•Am J Vet Res 2004, 65:1284-92
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TROPISMO CELULAR
1. J Vet Med B Infect Dis Vet Public Health 2000, 47:9-252. J Virol 1997, 71:9170-93. Vet Pathol 1997, 34:39-434. Vet Pathol 2001, 38:58-665. Arch Virol 2007, 152:289-303
PRRSV1: - Linaje monocito-macrófagos: macrófagos alveolares porcinos (PAMs)
PRRS RNA y NC2:- Células germinales testiculares- Células endoteliales en corazón- Células interdigitales del timo- Células dendríticas en bazo- Placas de peyer
DISTRIBUCION DE PRRSV ES DEPENDIENTE DE LA CEPA:- Mas virulentas: infectan mas tejidos y órganos3
AISLAMIENTOS OVARIOS4: - Responsables episodios de fallas reproductivas
IN VITRO- Cultivos primarios de PAMs5
- MARC – 145- CL 2621
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PRRS - APOPTOSIS
- Apoptosis, necrosis/oncosis, autofagia y pirosis
• Mecanismo de defensa: interrumpe replicación viral
• Inducida por células inmunes: LT CD8+ y NK
• En células infectadas como respuesta a replicación viral
• Limita progenie viral
• VIRUS: estrategias para inhibir apoptosis
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PRRS - APOPTOSIS
1. Virology 1997, 365:419-342. Vet Immunol Immunopathol 2004,
102:131-423. Vet Microbiol 2005, 108:167-774. Vet Microbiol 2007, 122:72-82
DIRECTA (en células infectadas)1
GP 5:
1. Condensación cromatina, fragmentación DNA, activación caspasas
2. Apoptosis dependiente de caspasas
3. Vías intrínsecas y extrínsecas4. ↑ proporción Bax/Bcl-25. PRRS induce estrés oxidativo6. Induce necrosis secundaria
INDIRECTA (Bystander cells)
1. En pulmones y tejido linfoide2
2. Tasa apoptótica (22-24%) vs 3% en circovirus3
3. Solamente 5-10% de PAMs son infectados por PRRSV →TNFα y GP5
4. ↑ Expresión de Fas L4
PRRSV
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PRRS - INMUNIDAD
PRRSV
Inducción y subversión de defensas del
huésped
Estimula inmunidad
pos-infección
Predilección por sistema inmune (replicación en
macrófagos)
Inmunosupresion
Infecciones secundarias
Conocimiento fragmentario de inmunidad
frente a PRRS.
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PRRS – INMUNIDAD INNATA
• Ingesta y degradación de patógenos
• liberación TNFα y IL-1
• APC junto con DCs
RESPUESTAS ATIPICAS:
* Respuesta INF α reducida1
* ↑ inducción de IL-102
1. Res Vet Sci 1999, 67:47-522. Physiol Behav 2007, 90:73-81
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PRRS – INMUNIDAD
Adaptada de Vet Immunol Immunopathol 2004, 102:155-63
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ANTICUERPOS NO PROTECTIVOS
1. Vet Microbiol 1997, 55:277-872. Nature 2003, 422:307-123. Virus Res. 2006, 115:198-206
ADE1 DECOY EPITOPE 2 GLYCANSHIELDING3
MACROFAGOS PERSISTENCIA Cepas españolas de 1991 – 2005
GP5
No Protectivo Protectivo
27 30
37
45X
GP5
N37 N53NO COPIAR
PRRS - VACUNAS
TIPO RECOMENDACION REF
MLV- Cerdas: ↓ viremia y fallas
reproductivas- Lechones: ↓ viremia
Vet Immunol Immunopathol 2006, 109:99-115
KV ↓ fallas reproductivasVet Immunol Immunopathol 2004, 102:299-314
DNAInducción Acs y CMI → protección de viremia y fallas reproductivas
Vet Immunol Immunopathol 2006, 109:151-160
RECOMBINANTES- No más potentes que MLV y DNA- Múltiples aplicaciones
Vet Immunol Immunopathol2006, 109:99-115
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PRRS – CLASIFICACIÓN DE GRANJAS
NECESIDAD• Nomenclatura para describir el estatus de las granjas• Facilitar comunicación entre veterinarios, productores, genetistas, etc.• Sistema de clasificación con base en biología y ecología del virus
AASVUSDA
PRRS - CAP
CLASIFICACIÓN DE GRANJAS
MARZO 9/2010NO COPIAR
CLASIFICACIÓN DE GRANJAS
Subpoblaciones:• Reproductoras adultas• Cerdos en edad de destete (7 días antes – 3 posdestete)• Madres de reemplazo• Cerdos en crecimiento (posdestete)
Estado de eliminación (Shedding)
PCR * AISLAMIENTO VIRAL
Estado de exposición
(Exposition)
ELISA * IFA IPMANO COPIAR
CLASIFICACIÓN DE LAS GRANJAS SEGÚN EL ESTADO DE ELIMINACIÓN Y EXPOSICIÓN DE
PRRSV
GRANJA - CATEGORIA ESTADO DE ELIMINACION ESTADO DE EXPOSICION
I – Positivos inestables Positivo Positivo
IIA – Positivos estables Incierto Positivo
II B- Positivos estables (eliminación no permanente)
Incierto Positivo
III- Negativos provisionales Negativo Positivo
IV - Negativo Negativo Negativo
Adaptado de J Swine Health Prod. 2011, Jan and Feb - 2011
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CRITERIOS DE CLASIFICACION PARA PRRS EN UNA GRANJA DE REPRODUCTORAS
Adaptado de J Swine Health Prod. 2011, Jan and Feb - 2011
CATEGORIA CRITERIO EVIDENCIA DE SOPORTE
Negativos (IV)
- El “herd rollovers”, inicia al momento de eliminación de todos los animales previamente infectados.
- Cuando categoría III luego de un año son seronegativos por ELISA
- Granjas negativas que inicien programa completo de despoblación y repoblación con animales negativos
- ELISA negativos luego de completar “rollover”
- ELISA negativo en granjas III
- ELISA negativo al menos 30 días pos repoblación
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PROTOCOLO RECOMENDADO PARA EVALUAR ESTADO DE ELIMINACION EN CERDOS EN
EDAD DE DESTETE PARA CATEGORIA IIA Y IIB
Adaptado de J Swine Health Prod. 2011, Jan and Feb - 2011
PRUEBA PCRAnimales evaluados Animales en edad de destete
Muestra Suero (sangre)
Subpoblacion Machos de bajo peso en las camadas puede incrementar la sensibilidad (opcional)
Muestreo 1 cerdo por camada seleccionado al azar
Numero mínimo de muestras 30 muestras, determinado para una prevalencia del 10% y 95% de confianza.
Pools Pools de 5
Periodicidad Mínimo 4 para determinar variación en prevalencia e incrementar confianza si hay positivos presentes.
Frecuencia (mínima) de pruebas Cada 30 días o mas frecuente
Reglas de clasificación No positivos en un periodo superior a 90 días y no signos clínicos
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PROTOCOLO RECOMENDADO PARA EVALUAR ESTADO DE ELIMINACION DE CERDAS EN
REEMPLAZO PARA GRANJAS CATEGORIA III
Adaptado de J Swine Health Prod. 2011, Jan and Feb - 2011
PRUEBA ELISA
Animales evaluadosCerdas negativas de reemplazo (negativas cuando entran, sirven de centinelas)
Muestra SueroSubpoblacion No
Procedimiento de muestreo Muestras al azar en multiples edades en cerdas de reemplazo
Numero mínimo de muestras 60 muestras, para prevalencia del 5% y 95% de confianzaPools NoFalsos positivos Reevaluación por ELISA, IFA y PCR.
Frecuencia (mínima) de pruebasUna al menos 60 días luego de la introducción de cerdas de reemplazo negativas.
Reglas de clasificación Ningún positivo luego de descartar los falsos positivos
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PROTOCOLO RECOMENDADO PARA EVALUAR EL ESTADO DE PRRS DE CERDAS DE REEMPLAZO CON
BASE EN EL ESTADO SEROLOGICO (ELISA) Y VIREMIA (PCR) ANTES DE ENTRAR A GRANJA
Adaptado de J Swine Health Prod. 2011, Jan and Feb - 2011
PRUEBA ELISA Y PCRAnimales evaluados Cerdas de reemplazo negativas en cuarentena Muestra SueroSubpoblacion NoProcedimiento de muestreo Muestreo aleatorioNumero mínimo de muestras 60 muestras (prevalencia 5% y 95% confianza)Pools No para ELISA, pools de 5 para PCR
Falsos positivosPara positivos y muestras sospechosas: reevaluar por ELISA, IFA y PCR.
Frecuencia (mínima) de pruebasUna inmediatamente entra en cuarentena.Una al entrar en producción: ELISA y PCR
Reglas de clasificación Ningún positivo luego de descartar falsos positivos
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PROTOCOLO RECOMANDADO PARA EVALUAR EL ESTADO DE PRRS EN MADRES DE CATEGORIA IV
ESTABLECIDA COMO NEGATIVA POR “ROLLOVER” DONDE HUBO REMOSION DE ANIMALES INFECTADOS
Adaptado de J Swine Health Prod. 2011, Jan and Feb - 2011
PRUEBA ELISA Y PCR
Animales evaluados Madres
Muestra Suero
Subpoblacion No
Procedimiento de muestreo Muestreo aleatorio de múltiples partos y estado de gestacion
Numero mínimo de muestras 30 muestras (prevalencia 10% y 95% confianza)
Pools No
Falsos positivosPara positivos y muestras sospechosas: reevaluar por ELISA, IFA y PCR.
Frecuencia (mínima) de pruebasUna luego de confirmación que animales infectdos fueron removidos (verificando los registros de producción)
Reglas de clasificación Ningún positivo luego de descartar falsos positivos
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PROTOCOLO RECOMANDADO PARA EVALUAR EL ESTADO DE ELIMINACION Y EXPOSICION DE
PRRSV EN ANIMALES EN CRECIMIENTOPRUEBA ELISA
Animales evaluados Cerdos en crecimiento
Muestra Suero
Subpoblacion No
Procedimiento de muestreoMuestreo longitudinal: muestreo aleatorio de grupos de multiples edades
Numero mínimo de muestras30 muestras por grupo de edad (prevalencia 10% y 95% confianza)
Pools No
Falsos positivos Reevaluar positivos y sospechosos por ELISA y IFA
Frecuencia (mínima) de pruebasDepende de las razones para determinar el estado de eliminación y exposición
Reglas de clasificación Ningún positivo luego de descartar falsos positivos
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PRRS – CONTROL REGIONAL Y ELIMINACIÓN
FASE I: VIABILIDAD DEL PROGRAMA
• Densidad poblacional• Prevalencia PRRS• Sistemas producción• Características de flujo
FASE II: IDENTIFICACION SITIOS RELACIONADOS A PRODUCCION DE CERDOS
• Ubicación geográfica• Plantas de sacrificio• Plantas de alimento• Tipos de producción
FASE III: CARACTERIZACION
• Flujo de animales • Riesgo de infección• PCR y ELISA• Medición de Riesgos
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PRRS – CONTROL REGIONAL Y ELIMINACIÓN
FASE IV: DISEÑO DE CONTROL Y ESTRATEGIAS DE ELIMINACION (5)
A. Identificación de objetivosB. Determinar estado de PRRSC. Entendimiento limitacionesD. Opciones de soluciónE. Implementación y monitoreo de
soluciones
FASE V: EJECUCIÓN Y MONITOREO DE ESTRATEGIAS
• Despoblación y repoblamiento• Vacunación en masa• Flujo unidireccional o despoblamiento
parcial
EVALUACION
• Reducción sistemática del riesgo de infección•Revisión medidas bioseguridad•Identificación factores de riesgo
MEDICION• ↓ numero de brotes en región / año• ↓ prevalencia en granjas infectadas• Eliminación de PRRS en la región / periodo de tiempo
USA: 9 proyectosCanada: 1 proyectoMexico: 1 proyecto
Young Swine Conference 2010, 54-59.
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PRRS ERRADICACION – CHILE
• Brote de PRRS: 2000• Organización de la industria porcina: regiones definidas V(Valparaiso) a región VIII (Bio-Bio)• Producción limitada: para 2000, 100 productores industriales, actualmente 80.•Producción: 4 millones•100% de productores: ASPROCER
Am Assoc Swine Vet. 2006. 409-416
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PRRS ERRADICACION – CHILE
Am Assoc Swine Vet. 2006. 409-416
Diagnostico: • Laboratorio de referencia: SAG• Laboratorios privados validados: PCR y ELISA
Justificación para erradicar: • Estatus negativo para mantener competitividad de la industria• Pérdidas económicas por infecciones clínicas• Granjas positivas: en área circunscrita (87.5% en RM)• Los mayores productores y reemplazo genético negativo a virus.
No vacunar: • Podría enmascarar la presencia de infecciones de campo y complicar
diagnostico
Programa de erradicación:• Enero 2001, planeado a cuatro años (diciembre 2004)
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PROGRAMAERRADICACION – CHILE
Am Assoc Swine Vet. 2006. 409-416
COMITÉ TECNICO:
Visita: propietarios, veterinarios, operarios
Revisión y plan de acción Información discutida y analizada
caso por caso Localización granjas positivas y
categorización Estrategia de acuerdo a cada granja
BIOSEGURIDAD:
Flujo de animales
Niveles de bioseguridad en cada granja: lavado y desinfección de vehículos, acceso restringido, control de plagas.
POLITICO: Decretos: 191 y 235 Declaración obligatoria Destinación exclusiva de positivos: planta de sacrificio
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COSTO ERRADICACION PRRS – CHILE
Am Assoc Swine Vet. 2006. 409-416
Contribución ASPROCER a SAG USD 216,667
Fondos SAG USD 326,506
Fondos Salud Animal USD 125, 217
Contribución productores I USD 3,486,973
Contribución productores II USD 498,637
Contribución empresas genética USD 751,518
TOTAL USD 5,405,518
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CONCLUSIONES
CONCLUSIONES****
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GRUPO DE INVESTIGACIÓN EN MICROBIOLOGÍA Y EPIDEMIOLOGÍA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
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