Silenciamiento de genes mediante RNA de interferencia
Nicole Salgado | Silvia Lazzarino
17 | 06 | 2011
CONTENIDOS
.1. Introducción
.2. Mecanismo
.3. Función
.4.Aplicación
.5.Análisis
Trabajo de botánicos con petunias. Se descubre un fenómeno de silenciamiento que fue llamado “co-supresión”.1990
Trabajos el hongo Neurospora crassa. Se descubre un fenómeno equivalente al de co-supresion que fue llamado “quelling”.
1992
Andrew Fire y Craig Mello trabajaron el silenciamiento de genes en C.elegans, definiendo el rol del RNA de interferencia (iRNA).
1998
Tomas Tuschl descubre el uso directo de los siRNA, lo que permite su aplicación en mamíferos.2000
Andrew Fire y Craig Mello ganan el premio Nobel de medicina por descubrir el silenciamiento de genes por iRNA.2006
Un poco de historia sobre los RNA de interferencia..IN
TRO
DU
CCIÓ
N
INTR
OD
UCC
IÓNEste mecanismo fue
observado por primera vez en 1990, en plantas (Petunias).
Más tarde se observó en: - Caenorhabditis elegans- Neurospora crassa
- - Drosophila Melanogaster
Luego se observó en mamíferos
Caenorhabditis elegans
Drosophila Melanogaster
Neurospora crassa
MEC
ANIS
MO
MEC
ANIS
MO
Video Nature Reviews: http://www.nature.com/focus/rnai/animations/index.html
¿Qué es el RNA de interferencia y cuál es su mecanismo de acción?
MEC
ANIS
MO
siRNA se introduce en la célula
siRNA se acopla RISC (RNA induced silencing complex) y se le remueve la hebra
sentido
iRNA se une al RNAm Slicer Ago 2 corta el
RNAm
Se evita traducción y se silencia el gen
A B C D
A B C D
RNA de interferencia
Este mecanismo actúa como un sistema inmune a nivel celular.PROTECCIÓN
Este sistema regula la expresión de genes, especialmente en el desarrollo.REGULACIÓNFU
NCI
ÓN
¿Cuál es el rol natural del iRNA en la célula?
APLI
CACI
ÓN
Usos del iRNA como metodología experimental…
APLI
CACI
ÓN
Usos del iRNA como metodología experimental…
FIGURA 1Análisis de la expresión de b-arrestina en células HEK293
transfectadas con siRNA.
FIGURA 2Efecto de la supresión de niveles de B-arrestina mediada por siRNA en la
internalización del receptor 7MS.
Aspectos a considerar sobre la metodología experimental…
Técnica de fácil uso. Gran variedad de mecanismos efectores.
Existen programas gratuitos para el diseño de iRNA.Producción de siRNA ampliamente extendida.
VEN
TAJA
S
El silenciamiento no es 100% completo. Puede haber silenciamiento inespecífico. Es necesario utilizar un mecanismo para que el iRNA ingrese a la célula blanco.
DES
VEN
TAJA
SANÁL
ISIS
Otras proyecciones al uso de los iRNA…AP
LICA
CIÓ
N
Eliminar de la célula los elementos
esenciales para un patógeno.
Anular la función de proteínas que
estén involucradas en enfermedades.
Interferir en la expresión de
genes patógenos.
FIN
BIBL
IOG
RAFÍ
A • Maria Fernanda Correa, Haroution Adjounian, Sarkis Horacio, “Silenciamiento de genes mediante RNA de interferencia, consideraciones del mecanismo y diseño de los sistemas efectores”, Archivos de farmacología y terapéutica, 2007.
• www.nature.com - RNA interference
• “Biotecnología, RNA de interferencia: el silencio de los genes”, Tomás López, Daniela Silva, Susana López y Carlos Arias.
• Seungkirl Ahn, Christopher D. Nelson, Tiffany Runyan Garrison, William E. Miller, and Robert J., “Desensitization, internalization, and signaling functions of !-arrestins demonstrated by RNA interference” PNAS, 2002.
ANEX
OSistemas efectores
shRNA