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Debido a la inmunogenicidad y al polimorfismo de sus antígenos, el sistema Rh es el más complejo de los sistemas de grupos sanguíneos,
Después del ABO, es el sistema más importante.
Los genes codifican 2 proteinas Rh distintas, el antígeno D y los antígenos C ó c así como E ó e.
sistema Rh
50 antígenos
D ó RH1
C/c y E/e
Introducción Constitución química: proteica
N° en la clasificación de la ISBT: 004
Nombre del sistema Rh
Símbolo del sistema RH (RH D y RH CcEe)
Nombre de los genes: RHD, RHCE
RHD (CD240D): localizado en 1p34-36.2
RHCE (CD240CE): localizado en 1p34-36.2
57 antígenos (Rh 1 a Rh 57) de los cuales 7 son obsoletos
RH: se penso en LW
Complicación mas severa: EHRN
Presencia de antigeno D: Rh+ (positivo)
(Vancouver report. Vox Sang 2003; 84: 244-247)
1939: Levine y Stetson: atribuyen causa de EHRN a Acs. contra los GR
1940: Landsteiner y Wiener: producen por inmunización de conejos con GR de Macacus Rhesus, Acs. que aglutinan 85% de GR humanos.
Levine y Katzin : Ac similares en el suero de parturientas. Wiener y Peters: idem en sueros de personas que recibieron ABO compatible
Factor Rh Mono Rhesus.
Clasificación según Aglutinación:
85% Rh positivo
15% Rh negativo
Rh negativo y transfusiones.(AntiRh)
El factor Rh se transmite como un gen dominante simple y de acuerdo a la característica mendeliana.
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1941-1943: se observan otros Ac en politransfundidos
1943: Race: descubre dos Acs. C y c (Fisher-Race)
1945: Mourant descubre un Ac. que reacciona con el anti-Rh. Los alelos fueron denominados E y e
1960: Levine y Col. descubren la Ig anti-D
Nomenclaturas del sistema Fisher-Race: Terminología DCE
Wiener: Terminología Rh-Hr
Rosenfield y col.: Terminología alfanumérica
Tippett: teoría Genética
Nomenclatura ISBT Número : 004
Nombre : Rh
Símbolo : RH
Genes : RHD, RHCE 004001 Ag D
004002 Ag C
004003 Ag E
004004 Ag c
004005 Ag e
Reseña HistóricaFISHER-RACE WIENER
Tres pares de genes alelos cuyos loci están relacionados
Cada persona hereda 2 haplotipos idénticos (homocigoto) ó diferentes (heterocigoto)
La combinación en pares produce 36 genotipos
Muy aplicable para las reacciones serológicas
Ags: D, Cc, Ee
Alelos múltiples situados en un
solo Locus
Los 2 primeros genes: Rh y rh
(el 1° capaz de producir el Ag.
Rh0 )
Gen: r,r”, R1, R2, R0
Un Aglutinógeno: factores
Ags: Rho, rh’, rh’’
Teoría de Fisher y Race, Teoría Inglesa o de los 3 pares de genes ligados (DCE)
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Fisher-Race
Antígeno del sistema era producido por 3 locis, que portan 3 genes alelos estrechamente relacionados: Dd, Cc, Ee
Produce 8 diferentes haplotipos
Muy aplicable para las reacciones serológicas
DCE
dce
Frecuencia de Antígenos Rh (USA)
Gen %
D 85
d 15
C 70
E 30
c 80
e 98
Fenotipo de Fisher y Race del sistema Rh (USA)
Frecuencia (%)
Combinación del Gen
Blancos Negros Indios americanos
Asiáticos
DCe 42 17 44 70
dce 37 26 11 3
DcE 14 11 34 21
Dce 4 44 2 3
dCe 2 2 2 2
dcE 1 0 6 0
DCE 0 0 6 1
dCE 0 0 0 0
Teoría de Wiener, (Rr,hr)teoría americana o del gen multiple alelomórfico
Wiener Un solo locus que poseía un
Aglutinógeno con 3 sitios antigénicas
Gen: R1, R2, r, R0
Un aglutinóngeno: factores
Ags: Rh0, rh’, rh”
R1 R2
Nomenclatura Según WienerGen Aglutinógeno Factores
Rho (D)
Rh’(C)
R’ Rh1 Rh” (E)
Rh1 Ce)
hr’(c)
r rh hr”(e)
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Terminología Rh-Hr de Wiener
Factores
sanguíneos
Designación
corta
Antígenos
Fisher-
RaceGen Aglutinógeno
Rh0 Rh0 Rh0hr’hr’’ R0 Dce
Rh1 Rh1 Rh0rh’hr’’ R1 DCe
Rh2 Rh2 Rh0hr’rh’’ R2 DcE
Rhz Rhz Rh0rh’rh’’ Rz DCE
rh rh hr’hr’’ r dce
rh’ rh’ rh’hr’’ r’ dCe
rh’’ rh’’ hr’rh’’ r’’ dcE
rhy rhy rh’rh’’ ry dCE
DCe DcE dce Dce dcE dCe DCE dCE
Anti - D + + - + - - + -
Anti - C + - - - - + + +
Anti - E - + - - + - + +
Anti - c - + + + + - - -
Anti - e + - + + - + - -
Frecuencia
AntisuerosHaplotipos y Antigenos
Haplotipos y Antigenos de Fisher-Race
Frecuentes Raros
Tipo Frecuencia
DCe/Dce
dce/DCe
D+ C+ E- c- e+ DCe/DCe 19.94% DCe/dCe
DcE/Dce
dcE/Dce
D+ C- E+ c+ e- DcE/DcE 0.95% DcE/dcE
Dce/dcE
dCe/DcE
DCE/dce
DCE/Dce
Dce/dCE
D- C- E- c+ e+ dce/dce 15.40% ---
D+ C- E- c+ e+ Dce/dce 2.32% Dce/Dce
D- C+ E- c+ e+ dCe/dce 0.95% ---
Fenotipos y Genotipos de Fisher-Race
D+ C+ E+ c+ e+ DCe/DcE 12.87%
D+ C+ E- c+ e+ DCe/dce 34.39%
D+ C- E+ c+ e+ DcE/dce 12.24%
FenotiposGenotipos probables Genotipos
Posibles
Gen Antígeno Factores sanguineos
r rh hr' , hr''
r' rh' rh' , hr''
r'' rh'' rh'' , hr'
ry rhy rh' , rh''
R0Rh0 Rh0 , hr' , hr''
R1Rh1 Rh0 , rh' , hr''
R2Rh2 Rh0 , hr' , rh''
RzRhz Rh0 , rh' , rh''
Genes de Wiener y sus Productos
Terminología Rh-Hr de Wiener
Factores
sanguíneos
Designación
corta
Antígenos
Fisher-RaceGen Aglutinógeno
Rh0 Rh0 Rh0hr’hr’’ R0 Dce
Rh1 Rh1 Rh0rh’hr’’ R1 DCe
Rh2 Rh2 Rh0hr’rh’’ R2 DcE
Rhz Rhz Rh0rh’rh’’ Rz DCE
rh rh hr’hr’’ r dce
rh’ rh’ rh’hr’’ r’ dCe
rh’’ rh’’ hr’rh’’ r’’ dcE
rhy rhy rh’rh’’ ry dCE
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D Rho
C rh'
E rh''
c hr'
e hr''
Los Antigenos DCE y los Factores
sanguineos de WienerDCe R1
DcE R2
Dce R0
DCE Rz
dce r
dCe r'
dcE r''
dCE ry
Los Haplotipos DCE y los Genes de
Wiener
Antígenos Fenotipo Cantidad %
DCe R1R1 3964 20.87
DcE R2R2 2869 15.1
DCEce R1R2 6186 32.56
DCce R1r 2544 13.39
DcEe R2r 2036 10.72
DCEe R1RZ 502 2.64
Dce R0r 275 1.448
DCcE R2RZ 152 0.8
DCE RZRZ 15 0.079
ce rr 379 1.995
Cce r’r 51 0.268
cEe r”r 21 0.111
CEce r’r” 4 0.02
CE ry 0 0
0.0220.87
15.1
32.56
13.39
10.72
10.72
1.995
0.268
0.111
????
????
0.02
CLASIFICACIÓN NUMÉRICA DE ROSENFIELD 1962
Nomenclatura numérica: Rh1, Rh2,Rh3,Rh4
Ideal para el sistema de informática
No tiene ninguna implicación genética
Único objetivo: clasificar antígenos, anticuerpos y genes Rh,
denota la presencia o ausencia de los antígenos, un signo menos precede al antígeno ausente
El fenotipo se expresa colocando el signo (--) antes del
numero correspondiente al antígeno ausente. (ej: Rh-1,Rh-2
etc.)
D:1, C:2, E:3, c:4, e:5
Rh comunes para las tres nomenclaturasGenotipo %
Wiener Fisher-Race Rosenfield Aprox en blancos
Genotipos
Comunes
R1r DCe/dce Rh:1,2,-3,4,5 33
R1R1 DCe/DCe Rh:1,2,-3,-4,5 18
rr dce/dce Rh:-1,-2,-3,4,5 15
R1R2 DCe/DcE Rh:1,2,3,4,5 11
R2r DcE/dce Rh:1,-2,3,4,5 9
R2R2 DcE/DcE Rh:1,-2,3,4,-5 2
Genotipos
Raros
r’r dCe/dce Rh:-1,2,-3,4,5 1
r’r’ dCe/dCe Rh:-1,2,-3,-4,5 0.01
r’’r’ dcE/dce Rh:-1,-2,3,4,5 1
r’’r’’ dcE/dcE Rh:-1,-2,3,4,-5 0.03
R0r Dce/dce Rh:1,-2,-3,4,5 2
R0R0 Dce/Dce Rh:1,-2,-3,4,5 0.1
ryr dCE/dce Rh:-1,2,3,4,5 Raro
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Fin década de los '80: Análisis de Genética Molecular: mRNAde una proteína del sistema Rh - cDNA sonda - Análisis de Southern Blotting en ADN de leucocitos de individuos Dccee y de individuos dccee.:
2 loci (2 genes): D, CcEe
Homología entre los 2 genes
Polimorfismo Rh+/Rh- debido a presencia / ausencia del gen D
Estudios comparados con primates: gen original CcEe; el D surge por duplicación.
Procesamiento alternativo ARN transcrito: posibilidad de aparición de mensajeros distintos para los antígenos C, c, E, e
Teoría Genética 1986: Tippet: 2 Genes estructurales
Gen RHD: presente o ausente
Gen RHCE: expresan 6 Proteínas
Análisis molecular: demuestran 2 genes Rh altamente
homólogos
Variantes RH, surgen procesos de mutación, desigual
crossing over, conversión gen, modifican proteínas e
interacción con otras.
Codifican 8 haplotipos: Dce, dce, DCe, dCe, DcE, dcE, DCE, and dCE, conocidos en la forma corta como R0, r, R1, r', R2, r”, Rz, y ry
TEORIAS DE LA HERENCIA
D, C, E, c, e
Ag
3 Gen
FISHER
Factores
Rh1, Rh2, Rho
Ag
1 Gen
WIENER
Prot.D, Prot CcEe
RHD, RHCE
2 gen
TIPPET
SISTEMA RH
ANTIGENOS DEL SISTEMA RH
Ag Públicos: Rh1, 2 ,3, 4, 5.. 6 (frecuente)
Ag Privados: solo en algunas personas
Rh8: Cw: mutación Gen C; menos del 2%
Mutaciones en menos del 1%
Rh 13, 14: Parte Ag D
Rh 25: Sistema LW
Existe el gen RHAG que codifica la Glicoproteína asociada al Rh (RhAG).
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Los procedimiento usados en el mapeo e
identificación de los Ag. de los GR son los
siguientes:
Inmunoprecipitación por Acs monoclonales
Solubilización de la MP por detergente do-decil-
sulfato de sodio
Electroforesis en gel de poliacrilamida
Resecado de gel y sometido a auto-radiografía
Radioinmunoensayo competitivo etc.
GENETICA MOLECULAR DEL SISTEMA RH
Proteína dependiente de fosfolípidos y grupos
sulfidrilos
Proteína Glicosilada no fosforilada
Proteína D: Ac Palmitico se fija tio-ester a grupos
sulfihidrilo (cysteina)
Se identificó y secuenció 417 aa del Gen Rh
Le Van Kim clonó el gen RHD y RHCE
36 aa difieren por substituciones
Se inicia N-terminal methionina: RNAm
Polipéptido Rh: 12 veces atraviesan la bicapa lipídica de la MP.
Hay 6 dominios extracelulares
Diferencia entre RHD y RHCE tan solo 44 pares de bases
Diferencia entre C y c 4 aa
Diferencia entre E y e 1 aa
Función en la membrana: desconocida
Deficiencia de fenotipo Rh: GR morfológica y funcionalmente anormales
Incremento de permeabilidad de cationes
Anormal organización de fosfolipidos, movíl.
Asociación GP, cambios transporte MC, transferencia cationes a través MC.
Asimetría es mantenida en parte, > fuerza
fluidos por fosfatidil-serina y etanolamina
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RH D
RHSC. RD
FY
CROMKN
Palmitate
TrysinLys 42, 43 Gly
Serina
103226
Alanina
D
NH2 (1) Tripsina COOH (417)
152169170172
223
233238
C-285
350
353354
Bromel / PapainaGly 353, 354 Ala
16
C-12
60
68
121
127128
C-195
183 198
201
245
263
267
306
311.
314
C-115
C-116 323325
327
329
330331
396
GENES y
PROTEINAS RH D
Número estimado de Antígenos Dpor G.R.
Fenotipo Sitios de D por célula (rango)
DCe/dce 9,900 – 14,600
DcE/dce 14,000 – 16,000
Dce/dce 12,000 – 20,000
DCe/DCe 14,500 – 19,300
DCe/DcE 23,000 – 31,000
DcE/DcE 15,800 – 33,300
D-- / D-- 110,000 – 202,000
Número de Ag c, e y E por célula(Hughes-Jones et al. 1971):
c: células cc, 70 000–85 000; Células cC, 37 000– 53 000;
células dce/dce 31,500; DcE/DcE, 24,000,
e: células ee, 18 200–24 000; Células eE, 13 400– 14 500;
células Dce/DCw, 20,000
E: 450–25 600, dependiendo de la fuente de anti-E y del fenotipo del GR. Células DcE/DcE, 27,500; en células DcE/dce 17,900
El ANTÍGENO D
Es el mas inmunógeno e importante
80% de Rh (-) si reciben Rh (+): Anti-D
Expresión del Ag D: variable de acuerdo a etnias
Variantes del antígenos D:
Antígeno D débil
Antígenos D parciales
Antígenos D deprimidos por efecto de posición “TRANS”
ANTIGENO D: TERMINOS
Ag D: normal
D Débil : cantidad reducida, calidad normal: Du
D Parcial: Cantidad normal, < epítopos normal
D Parcial Débil: menor cantidad D Parcial
Elevado D: incremento cantidad
ANTÍGENO D DEBILGenéricamente designado Du (Stratton )Expresión debilitada de D que reacciona de manera variable con diferentes antisueros comerciales (Du alto grado y bajo grado)No es detectado por técnicas de aglutinación directa (no por IgMsí por IgG con TCI) se detecta con el tratamiento enzimático de los GR ó con el test de Coombs indirecto.Detectado por técnicas enzimáticas ó por TCILos GR D débiles son hematíes D positivos con un número menor de lugares antigénicos en su membrana, deben ser consideradas como POSITIVOS (1,990)Los reactivos modernos (Ac monoclonales) detectan la mayoría de Ag D débilesProducen aloinmunización por transfusión ó feto maternaCualitativamente no es diferente. Menor número de sitios antigénicos
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ANTIGENO D D DEBIL : Du
ALTO GRADO
Detectados algunos anti.D
BAJO GRADO
Hereditario
No detectado Anti-D IgM y si por IgG-AGH
Obsoleto Du,> Negros
0.3 a 1.7% Londres
D DEBIL POR EFECTO
TRANS DE C
Alto grado Du
Fenotipo D y C
Envuelve complejo dCe
Hereditario
Delección
Detectados por elusión
Complejos dCe/D débil
D
C
e
d
ce
C en posición CIS
con respecto de D
D
c
e
d
Ce
C en posisición TRANS
con respecto de D
D deprimido
ANTIGENO PARCIAL D El Ag D contiene numerosos epítopos.
Los GR de algunos individuos D+ no expresan algunos de esos epítopos.
Si reciben GR D+, pueden formar Ac contra los epítopos D que les faltan.
Considerar RhD+ como donantes y RhD- como receptores.
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D PARCIAL Personas D(+) con Anti-D
Falta parte Mosaico D
Forman alo anti-D: contra epitopes faltantes
Presentes en GR Rh+, ausentes en Rh-
Salmon-Tippet: D parcial o Ag. D débil
Wiener: Rho Mosaico
RhA, RhB, RhC, RhD ,Du
Categorías D Parcial Tippet y Sanger: dividieron en VI Categorías (1,970)
Interacciones con Anti-D
Adicionó Categoría VII y I obsoleto
En 198O potentes Anti-D monoclonal contra 9 epitopos
(29 Acs)
18 Acs contra ep 6/7
Actualmente: Variantes de D parcial 30 epitopes ( por
estudios serológicos y biología molecular)
Categoría VI: epi3,4,9
Característica: falta de 1 ó más epD
epD 6/7 son mas inmunógenos
epD presentes en todas excepto en Categoria DVI
Categoria III a Y III c: tienen los 30 epitopes
Un anti D es una respuesta policlonal
epD1 epD2 epD3 epD4 epD5 epD6 epD7 epD8 epD9
II + + + - + + + + -
III a + + + + + + + + +
III c + + + + + + + + +
IV a ( Goa ) - - - + + + + + -
IV b - - - - + + + + -
V a ( Dw ) - + + + - + + + +
VI - - + + - - - - +
VII ( Tar ) + + + + + + + - +
DFR - - + + - - - - +
CategoriaEpitopes Presentes
Categorias de Antigenos D Parciales
POSITIVOS NEGATIVOS CAT. D PARCIALES
25 5 II
30 0 III a - IIIc
29 1 III b
20 10 IV a
19 11 IV b
22 8 V a
6 24 VI
27 3 VII
D parciales - 30 epítopos
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D VI
Epitopes D6 y D7 no presentes en DVI
Donantes: CONSIDERARLOS D+
Receptores: CONSIDERARLOS RH -
Tipificación de donantes: ANTI-D (DVI)
PACIENTES: NO NECESARIO
Antígeno D ParcialANTIGENO D DEPRIMIDO POR EFECTO DE
POSICION “TRANS” DEL ANTIGENO C
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Rh(D) –Normal Rh(D) – Fraco Rh(D) – parcial Rh(D) –parcial fraco
Normal Normal Variante Variante
Normal Reduzido Normal Reduzido
Legenda: Epítopo Antígeno
ALO ANTI-D (HUMANOS) Son IgG (IgM) (IgA)
IgG1, IgG3 (IgG4)
NO activan C’ sérico
Anti D, C, E, c, etc..
Mixturas
ANTI-D MONOCLONALES Hibridomas ratón
Hibridomas humanos
Contra 9 epitopos
Monoclonal y mezcla monoclonal: Suero
Rh
Minino 2 sueros Monoclonales
GENES y PROTEINAS RH CE
SC. RD
CROMKN
RH CE
RH
FY
Palmitate
TripsinaLys 42, 43 Gly
C/c (Ser/Pro)
103 226
E/e (Pro/Ala) CE
NH2 (1)Triysin ?
COOH (417)
.
RH1
D
RH2
C
RH3
E
RH4
C
RH5
e
RH6
f
RH7
Ce
RH8
CW
RH9
CX
RH10
V
RH11
EW
RH12
Gobs. obs. obs. obs.
RH17
Hro
RH18
Hr
RH19
hrS
RH20
VS
RH21
CG
RH22
CE
RH23
DWobs.
obs. RH26
c-like
RH27
cE
RH28
hrH
RH29
Rh total
RH30
Goa
RH31
hrB
RH32
RN
RH33
Har
RH34
HrB
RH35 RH36
Bea
RH37
Evansobs. RH39
J-S
RH40
Tar
RH41
Ce-like
RH42
Ces
RH43
Crawford
RH44
Nou
RH45
Riv
RH46
Sec
RH47
Dav
RH48
JAL
RH49
STEM
RH50
FPTT
RH51
MAR
RH52
BARC
RH53
JAHK
RH54
DAK
RH55
LOCR
RH56
CENR
Sistema Rh (ISBT: 004 - RH)
RH57CEST
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FENOTIPO RhPROTEÍNAS
PRESENTES
PESO
MOLECULAR
NÚMERO DE
AMINOÁCIDOS
Rh(D)
Positivo
Proteína D 32 kD 417
Proteína CcEe 34 kD 417
Rh(D)
NegativoProteína CcEe 34 kD 417
PROTEÍNAS Rh
1
5’
1 1010 1
RHD – RNAm RHCE – RNAm
Proteína RHD Proteína RHCE
(1558 NT)
Genes RHD e RHCE : 1p34.3 - 36.1
(417 AA)
(1558 NT)
(417 AA)
Caixa Rhesus
Caixa Rhesus
1 10
Gene RHD Gene RHCE10
SMP1
5’ 3’ 3’
P N
POSICIÓN DEL AMINOÁCIDO
C c E e
16 Cisteína Triptofano - -
60 Isoleucina Leucina - -
68 Serina Ac. Aspártico - -
103 Serina Prolina - -
226 - - Prolina Alanina
Diferencias estructurales entre (C, c) y (E, e)
ANTÍGENOS POSICIÓN AMINOÁCIDO
C - c 41 Glicina
Cw 41 Arginina
Diferencias Estruturales entre los Antígenos Cw, C, c
Cw: Willis, puede estar presente
independientemente de C y c
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USA Africanos Chinos
JaponesHNERM 2008
Fenotipo % % cantidad
D 82
88%95% >99% 97.5 36 619
d 15 2.5 36 619
C 70 65.2 551
E 30 63.8 2 416
c 80 76 765
e 98 83 80
Distribución de Grupos ABO y Rh Hospital Edgardo Rebagliati 1999
TOTAL %
O- 540 59
A- 254 27.7
B- 104 11.4
AB- 18 1.97
TOTAL %
0+ 25 011 68.3
O- 540 1.47
A+ 7 331 20
A- 254 0.69
B+ 2 893 7.9
B- 104 0.28
AB+ 468 1.28
AB- 18 0.05
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Anticuerpos del sistema Rh1. No ocurren em forma natural, existen ejemplos raros de Anti
RhE y rarisimos de Anti RhD naturales.
2. La mayoría es de clase IgG (principalmente IgG1 e IgG3) y
reactivos a 37ºC.
3. No son fijadores de complemento, mas producen hemólisis
extravascular severa.
4. Estan implicados en reacciones hemolíticas transfusionales y
enfermedad hemolíticas perinatal.
5. Pueden ocurrir como auto-anticuerpos (principalmente anti-
Rhe).
6. Indivíduos com fenótipos RhD-parciales pueden desarrollar
anti-RhD.
7. Raramente detectados en medio salino. Son mejor detectados en pruebas enzimáticas y com AGH (Coombs Indireto).
ANTICUERPOS DEL SISTEMA RH
SIGNIFICATIVO
CLÍNICAMENTE
CLASE DE
ANTICUERPO
RANGO
TÉRMICO EHRN
REACCIONES TRANSFUSIONALES
H. EXTRAVASCULAR H. INTRAVASCULAR
SÍ
4°C
37°C
RARA