21/09/20100
titulo de la presentacion
21/09/2010
JORNADA DE PORTES OBERTES
SANT CARLES DE LA RÀPITA
16 de Setembre de 2010
EL PROJECTE ALARMTOXHelena Eixarch Puigcerver
IRTA
3
ÍNDEX
-Introducció: - Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes de detecció de toxines
-Desenvolupament del projecte i resultats:- Producció d’enzims PP per enginyeria genètica
- Desenvolupament d’assajos bioquímics i biosensors
- Anàlisi de mostres de camp i comparació amb mètodes de
referència
-Propers passos a realitzar
-Conclusions
21/09/2010
SEGURETAT
ALIMENTÀRIA I SALUT
RECOLZAMENT AL
SECTOR
4
Objectius del projecte
Desenvolupar
assajos bioquímics i
biosensors per a la detecció
de toxines aquàtiques
Medi maríAigües
continentals
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
21/09/20105
Objectius del projecte
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
Rapidesa
Sensibilitat
Rendibilitat
Rapidesa i
fiabilitat en
la detecció
Velocitat de
resposta front a
contaminacions
Qualitat dels
productes
d’aqüicultura
i pesca
Funcionament
del sector
turístic
Garantir
l’aigua
potable
Preservar
el medi
ambient
21/09/20106
Definició de conceptes: ASSAIG
Reacció bioquímica que permet detectar
substàncies d’interès
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
COMPOST A DETECTAR
Compost químic
Compost biològic
MATERIAL BIOLÒGIC
Enzim
Anticòs
Microorganisme
Altres
Reacció química
Reconeixement estructural
SENYAL MESURABLE
Color
Turbidesa
Fluorescència
21/09/20107
Definició de conceptes: ASSAIG
Reacció bioquímica que permet detectar
substàncies d’interès
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
TOXINA
AQUÀTICA:
Àcid okadaic (OA)
Microcistina (MC)
COMPOST A DETECTAR
Compost químic
Compost biològic
MATERIAL BIOLÒGIC
Enzim
Anticòs
Microorganisme
Altres
Reacció química
Reconeixement estructural
SENYAL MESURABLE
Color
Turbidesa
Fluorescència
21/09/20108
Definició de conceptes: ASSAIG
Reacció bioquímica que permet detectar
substàncies d’interès
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
ENZIM:
PROTEïNA
FOSFATASA
(PP)
COMPOST A DETECTAR
Compost químic
Compost biològic
Reacció química
Reconeixement estructural
SENYAL MESURABLE
Color
Turbidesa
Fluorescència
MATERIAL BIOLÒGIC
Enzim
Anticòs
Microorganisme
Altres
TOXINA
AQUÀTICA:
Àcid okadaic (OA)
Microcistina (MC)
21/09/20109
Definició de conceptes: ASSAIG
Reacció bioquímica que permet detectar
substàncies d’interès
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
DETECCIÓ DE
TOXINES EN MARISC
I AIGUA
COMPOST A DETECTAR
Compost químic
Compost biològic
ENZIM:
PROTEïNA
FOSFATASA
(PP)
MATERIAL BIOLÒGIC
Enzim
Anticòs
Microorganisme
Altres
TOXINA
AQUÀTICA:
Àcid okadaic (OA)
Microcistina (MC)
Reacció química
Reconeixement estructural
SENYAL MESURABLE
Color
Turbidesa
Fluorescència
21/09/2010
10
Definició de conceptes: BIOSENSOR
Instrument que utilitza material biològic per a
detectar substàncies d’interès
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
SENYAL ELÈCTRIC
DETECCIÓ DE
TOXINES EN MARISC
I AIGUA
COMPOST A DETECTAR
Compost químic
Compost biològic
ENZIM:
PROTEïNA
FOSFATASA
(PP)
MATERIAL BIOLÒGIC
Enzim
Anticòs
Microorganisme
Altres
TOXINA
AQUÀTICA:
Àcid okadaic (OA)
Microcistina (MC)
Reacció química
Reconeixement estructural
21/09/2010
11
Definició de conceptes: BIOSENSOR
Instrument que utilitza material biològic per a
detectar substàncies d’interès
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions Exemple:
BIOSENSOR DE GLUCOSA
PER A DIABÈTICS
SENYAL ELÈCTRICCOMPOST A DETECTAR
Compost químic
Compost biològic
MATERIAL BIOLÒGIC
Enzim
Anticòs
Microorganisme
Altres
Reacció química
Reconeixement estructural
21/09/201012
Definició de conceptes:
REACCIÓ ENZIMÀTICA
Enzim
PP
Enzim
PP
Enzim
PP
Enzim
PP
Entrada del
substrat al
centre actiu
Transformació
del substrat
Obtenció
del
producte
BIOSENSOR
ASSAIG
BIOQUÍMIC
Enzim
PP
Enzim
PP
OA/MC
Enzim
PP
Presència
de toxines
Bloqueig
del centre
actiu
Absència
de producte
LA DISMINUCIÓ DEL
SENYAL ENS DÓNA
UNA MESURA DE LA
QUANTITAT DE
TOXINA PRESENT
EN UNA MOSTRA
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
21/09/201013
Definició de conceptes:
REACCIÓ ENZIMÀTICA
LA DISMINUCIÓ DEL
SENYAL ENS DÓNA
UNA MESURA DE LA
QUANTITAT DE
TOXINA PRESENT
EN UNA MOSTRA
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
-20
0
20
40
60
80
100
120
0,0 0,1 1,0 10,0 100,0
% A
cti
vit
at
PP
2A
OA (µg/L)
-20
0
20
40
60
80
100
120
0,0 0,1 1,0 10,0 100,0
% I
nh
ibic
ió P
P2
A
OA (µg/L)
21/09/201014
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
Altres mètodes de detecció de toxines
Mètodes de referència de detecció de toxines
Ens permeten comprovar que els resultats que
obtenim amb els assajos i biosensors són
correctes
MÈTODES BIOLÒGICS
BIOASSAIG RATOLÍ
MÈTODES QUÍMICS
CROMATOGRAFIA
21/09/201015
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
Desenvolupament del projecte i resultats
Bloc 1: Producció d’enzims PP per enginyeria genètica
Bloc 2: Disseny i desenvolupament d’assajos i biosensors
Bloc 3: Anàlisi d’aigües, microalgues i bivalves per OA i MC
21/09/201016
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
Bloc 1: Producció d’enzims PP per enginyeria genètica
Objectius:
- Producció i purificació
d’enzims fosfatasa (PP)
- Enzims més sensibles a OA
i MC que els disponibles
comercialment
- Enzims més estables que
els comercials
Desenvolupament del projecte i resultats
Resultats:
- Enzims PP produïts i
purificats
- Sensibilitat igual als enzims
comercials
- Enzims més estables que
els comercials
- Modificats per a poder-los
immobilitzar
21/09/201017
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
Bloc 2: Disseny i desenvolupament d’assajos i biosensors
Objectius:
- Establiment de les
condicions òptimes de
reacció:
- Quantitats d’enzim, mostra
i altres reactius
- Temps d’assaig
- Temperatura d’assaig
- Optimització biosensors:
- Immobilització
- Funcionament
Desenvolupament del projecte i resultats
Resultats:
- Reacció enzimàtica posada
a punt
- Permet detectar OA i MC
- Immobilització biosensors en
desenvolupamet
21/09/201018
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
Bloc 3: Anàlisi d’aigües, microalgues i bivalves per OA i MC
Desenvolupament del projecte i resultats
Objectius:
- Obtenció de mostres de
camp per part dels socis del
projecte i socis associats
- Anàlisi de les mostres amb
assajos i biosensors
- Anàlisi de les mostres per
mètodes químics: validació
Resultats:
- Mostres de camp:
- Aigües: Embassaments de
Catalunya, Extremadura,
Castilla y León, Castilla la
Mancha
21/09/201019
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
Bloc 3: Anàlisi d’aigües, microalgues i bivalves per OA i MC
Desenvolupament del projecte i resultats
Objectius:
- Obtenció de mostres de
camp per part dels socis del
projecte i socis associats
- Anàlisi de les mostres amb
assajos i biosensors
- Anàlisi de les mostres per
mètodes químics: validació
- Mostres de camp:
- Microalgues: Cultius en
laboratori, per absència de
creixements naturals
Resultats:
21/09/201020
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
Bloc 3: Anàlisi d’aigües, microalgues i bivalves per OA i MC
Desenvolupament del projecte i resultats
Objectius:
- Obtenció de mostres de
camp per part dels socis del
projecte i socis associats
- Anàlisi de les mostres amb
assajos i biosensors
- Anàlisi de les mostres per
mètodes químics: validació
- Mostres de camp:
- Marisc: Delta de l’Ebre,
Alacant, Galícia
Ostres de la Badia
Resultats:
21/09/201021
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
Bloc 3: Anàlisi d’aigües, microalgues i bivalves per OA i MC
Desenvolupament del projecte i resultats
Objectius:
- Obtenció de mostres de
camp per part dels socis del
projecte i socis associats
- Anàlisi de les mostres amb
assajos i biosensors
- Anàlisi de les mostres per
mètodes químics: validació
- Mostres analitzades amb
assajos bioquímics i
validades per mètodes
químics:
- OA: Musclo, Ostra plana,
Tellerina, Ostró
- MC: Aigües, cultius de
microalgues
Resultats:
21/09/201022
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
Bloc 3: Anàlisi d’aigües, microalgues i bivalves per OA i MC
Desenvolupament del projecte i resultats
Objectius:
- Obtenció de mostres de
camp per part dels socis del
projecte i socis associats
- Anàlisi de les mostres amb
assajos i biosensors
- Anàlisi de les mostres per
mètodes químics: validació
- Validació:
- OA: Sobreestimació amb
els assajos bioquímics
sobre marisc; factor de
correcció
- MC: Estimació correcta
sobre aigües i microalgues;
s’ha d’optimitzar
Resultats:
21/09/201023
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
Propers passos a realitzar
1. Anàlisi de la resta de mostres de marisc
amb assajos bioquímics i validació amb
mètodes químics
2. Desenvolupament final dels biosensors:
immobilització
3. Anàlisi de mostres amb biosensors i
validació amb mètodes químics
21/09/201024
- Introducció:
- Objectius del projecte
- Definició de conceptes
- Altres mètodes
- Desenvolupament del
projecte i resultats:
- Producció d’enzims
- Assajos i biosensors
- Anàlisi de mostres
- Propers passos
- Conclusions
Conclusions
El projecte es desenvolupa segons
planificació
Som capaços de detectar OA i MC amb la
tecnologia desenvolupada
Encara estem lluny de l’aplicació pràctica als
programes de vigilància
Importància de la col·laboració externa per a
l’obtenció de mostres de camp: validació del
mètode
GRÀCIES PER LA VOSTRA
ATENCIÓ[email protected]