Universidad de CaraboboFacultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Medicina“Dr. Witremundo Torrealba"
Departamento de Fisiología y Bioquímica
Tema 3
Técnicas en BioquímicaElectroforesis
Br. Pérez José Br. Pérez EleannyBr. Pérez Ana
Marzo, 2012
Objetivos Específicos
Analizar los fundamentos teóricos de la electroforesis y su utilidad.
ContenidoMovimiento iónico en un campo eléctrico.Proceso electroforético.Cámara electroforética.Materiales de soporte.Utilidad de cada una de ella:
Electroforesis en geles de acrilamida.Electroforesis en geles de acrilamida SDS.Electroforesis bidimensional.Electroforesis en geles de agarosa.
Es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico
Electroforesis
Desventajas
Afecta la estructura de las proteínas por lo tanto, también afecta a la función de la misma.
Ventajas
Separación, visualización y cuantificación del numero de proteínas de una solución.
Movimiento iónico en un campo electromagnético.
http://www.micruxfluidic.com/es/tecnologia.html
Las moléculas de soluto con carga neta positiva se desplazan hacia el cátodo y las moléculas con carga neta negativa se desplazan hacia el ánodo.
La movilidad depende de la carga de la partícula que, a su vez, depende del pH del medio en el que se encuentre. Por esta razón es necesario indicar el electrolito o el pH utilizado para determinar la movilidad.
La movilidad μ expresada en cm2 por Volt-s de una molécula en un campo eléctrico, viene dada por la velocidad de emigración V expresada en cm/s, respecto de la fuerza del campo E, expresada en voltios/cm.
Movimiento iónico en un campo electromagnético.
Proceso electroforético
En la electroforesis libre una disolución tamponada de la mezcla de proteínas se coloca en una célula de observación en forma de U mayúscula, depositando una capa de tampón (buffer) puro sobre la disolución de proteínas.
Unidades Horizontales:
Unidades Horizontales:
Unidades Horizontales:
Cámaras electroforéticas.
Tipos de electroforesis
Es aquella en la cual las partículas se mueven de forma libre en el medio en que se encuentran dispersas.
Electroforesis de frente móvil
La muestra esta obligada a desplazarse sobre un soporte
solido tal como el papel o ciertos geles.
ELECTROFORESIS DE ZONA
¿Qué se necesita para realizar
una electroforesis de zona?
FACTORES QUE EFECTAN LA
ELECTROFORESIS
CARGA NETA
TAMAÑO Y FORMA
POTENCIAL DEL CAMPO ELÈCTRICO
MECANISMOS DE SOPORTE
NO RESTRICTIVOS
PAPEL
• Separación de sustancia de bajo peso molecular
ACETATO CELULOSA
• Se usa en análisis biológicos
• Débil resolución
AGARASO
• Es un polisacárido
• Se usa para la separación de ácidos nucleicos
ELECTROFORESIS CON PAPEL
ELECTROFORESIS CON
AGAROSA
RESTRICTIVOS
GELES DE ALMIDÒN
• Proviene de diversas fuentes naturales
POLIACRILAMIDA
• El mas usado en la electroforesis
• Son geles completamente inertes, estables y transparentes
ELECTROFORESIS DE POLIACRILAMIDA
Electroforesis en geles de acrilamida
Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición
Proteínas presentes en el extracto
celular
Enzima RNA polimerasa de la bacteria E coli
• Son químicamente inertes.
• Son transparentes • Son estables en un amplio
intervalo de valores de pH, temperatura y fuerza
iónica• Son resistentes a los
agentes desnaturalizantes.
• Pueden prepararse con tamaños de poro muy
variados.
Electroforesis en geles de acrilamida SDS
Compuesto de gran carga negativa.
Utilizado para estimar la pureza y la masa molecular.
Se une a las proteínas en una cantidad proporcional a la masa molecular.
Confiere a todas las proteínas un cociente Carga/Masa similar.
Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición
SDS - PAGE
Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición
• Separa a las proteínas casi exclusivamente en función de su masa molecular
Electroforesis bidimensional
Es la combinación secuencial del enfoque isoeléctrico y la electroforesis en gel con SDS.
SDS - PAGE
Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición
Electroforesis en geles de Agarosa
Los geles se comportan
como un tamiz molecular y
permiten separar
moléculas cargadas en
función de su tamaño y forma.
Resumen Los procedimientos de fraccionamiento se usan
para purificar las proteínas sobre la base de sus solubilidades, cargas, tamaños y especificidades de unión.
La electroforesis separa las moléculas según su tamaño y su carga.
La SDS-PAGE las separa principalmente por su tamaño.
La electroforesis en gel con SDS y el Enfoque Isoeléctrico se pueden utilizar por separado o combinados para obtener una mayor resolución.
La electroforesis bidimensional (2D) puede separar cientos de proteínas.
Bibliografía http://www.uco.es/organiza/departamentos/
bioquimica-biol-GELES%20AGAROSA.pdfhttp://idibam.blogspot.com/2008/09/
electroforesis-en-gel-de-agarosa.htmlLehninger. Principios de bioquímica Cuarta
Edición.Harold A .Harper .Manual de química
Fisiológica Sexta Edición.Biochemistry (3rd Edition) by Christopher K.
Mathews Kensal E. van Holde Kevin G. Ahern
Las grandes obras no son hechas con
la fuerza, sino con la perseverancia.
Recommended
