Mtodos para la determinacin de Glucosa

FUNDAMENTO DE LOS ANALIZADORES UTILIZADOS EN BIOQUMICA CLINICA

Espectro ElectromagnticoEs la distribucin energtica del conjunto de las ondas electromagnticas. La radiacin electromagntica puede manifestarse de diversas maneras como calor radiado, luz visible, rayos X o rayos gamma. A diferencia de otros tipos de onda, como el sonido, que necesitan un medio material para propagarse, la radiacin electromagntica se puede propagar en el vaco (300 0000 km/s).

Una carga elctrica acelerada crea un campo elctrico variable y, como explican las leyes de Maxwell, los campos pueden abandonar la fuente que los produce y viajar por el espacio sin soporte material. Las ondas electromagnticas se propagan mediante una oscilacin de campos elctricos y magnticos.

EspectrofotmetroEl espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

Ley de Lamber-BeerEs una relacin emprica que relaciona la absorcin de luz con las propiedades del material atravesado.

A= abc

a: Coeficiente de absorcinb: longitud atravesada por la luz en el medioc: concentracin de la sustancia

La absorbancia es directamente proporcional a la concentracin en soluciones diluidas.

Calculo de absorbanciaA) Mtodo Directo

B) Mtodo del factor

C) Mtodo Grfico

La elaboracin de la curva de calibracin tiene por objeto fundamental la determinacin cuantitativa de la concentracin de solucin problema, pero adems se puede evaluar el funcionamiento del espectrofotmetro a travs de la linealidad fotomtrica.

NOM-177-SSA1-2013Pruebas y procedimientos para demostrar queun medicamento es intercambiable.

Calibracin,a la demostracin de que un instrumento particular o dispositivo produce resultadosdentro de lmites especificados, en comparacin con los producidos por una referencia o estndar trazablesobre un intervalo de mediciones establecido.

Mdulo de anlisis fotomtrico El mdulo fotomtrico consta de 81 cubetas de vidrio Pyrex, que se sumerge en una incubadora que contiene agua a 37 C 0.1 C. Las cubetas cuentan con un paso ptico cuya longitud es de 5 mm, deben llenarse con un volumen mnimo de 180 l (para abarcar la ventana ptica) hasta un mximo de 500 l.

La luz proviene de una lmpara de halgeno de 20 W. Un detector de fotodiodos detecta la luz difractada, a 12 longitudes de onda fijas de 340, 375, 405, 450, 510, 546, 570, 600, 660, 700, 750 y 850 nm. Las seales se amplifican y se convierten a absorbancia.

Blanco o TestigoSe le llama blanco o testigo al disolvente utilizado para preparar las soluciones estndar y las soluciones problema

Mtodos de anlisis fotomtricoUn solo punto

Dos puntos

Velocidad con un intervalo

Velocidad con dos intervalos

Velocidad con dos intervalos

Modulo ISECada anlisis se logra con la medicin de la diferencia potencial entre el electrodo de ion selectivo y el electrodo de referencia. Se puede determinar la magnitud de este potencial con la ecuacin de Nernst:

Mtodos para la determinacin de Glucosaa) Mtodos Qumicos: Foln-Wu y Nelson Somogy (estos mtodos requeran una desproteinizacin previa del suero y un calentamiento prolongado para el desarrollo del color, lo cul provocaba una serie de imprecisiones); el mtodo de Hultman o-toluidina es un compuesto toxico y carcingeno. Sin embargo ninguno de estos procedimientos es especifico para glucosa.

b)Mtodos enzimticos: Glucosa oxidasa (Muller, 1928) y Hexocinasa (Slein, 1963), estos mtodos dan el mximo grado de especificidad y confiabilidad.

El rojo de quinonimina se lee a 510 nm y el NADH+ a 340 nm.

C) Mtodos electroqumicos: La mayora de las cintas reactivas utilizan el mtodo electroqumico, estas llevan electrodos que proporcionan una corriente de electrones proporcional a la cantidad de glucosa oxidada. Permiten obtener resultados con una alta precisin.

Mtodos para la determinacin de creatininaLa mayora de las tcnicas fotomtricas para la determinacin de creatinina, se basan en la reaccin de Jaff descrita en 1886, sin embargo no es especfica para creatinina ya que interfieren en concentraciones elevadas la glucosa, cido urico, cido ascorbico, urea, bilirrubina etc.

El mtodo de Jaff en el que se utiliza la tierra de Fuller y la cromatografa de alta resolucin es el mtodo de referencia. Sin embargo la reaccin de Jaff modificada por Bonsnes-Taussky se considera el mtodo de eleccin, debido a su sencillez y bajo costo.

Mtodos para la determinacin de ColesterolLas tcnicas enzimticas, para la determinacin de colesterol, resultan adecuadas debido a su especificidad, exactitud y aplicabilidad. El cido ascrbico, la bilirrubina y concentraciones elevadas de albumina pueden interferir en la actividad de la colesterol oxidasa. Sin embargo, se considera que los mtodos enzimticos para determinar colesterol estn sujetos a menor error que los mtodos qumicos.

Mtodos para la determinacin de TriglicridosLos resultados obtenidos con los mtodos qumicos se consideran suficientemente precisos y exactos, sin embargo, las manipulaciones y el tiempo necesario para realizarlos los hacen poco prcticos, por ello los mtodos totalmente enzimticos son los ms recomendables.

Mtodos para la determinacin de calcio 2+La mayora de los mtodos establecidos para medir el calcio total, en realidad estiman la concentracin total por titulaciones, precipitaciones y determinaciones espectrofotomtricas, en las cuales se utilizan una gran variedad de molculas orgnicas para formar complejos coloridos con el calcio. Como mtodos de referencia se aplica la absorcin atmica, flamometria y la espectrometra de masas.

Mtodos para la determinacin de Amilasa A) Mtodos que miden la disminucin de la velocidad o de la turbiedad.B) Mtodos colorimtricos como el iodomtrico o amiloclstico. C) Mtodos enzimticos en los cuales se acopla una segunda enzima, para producir un compuesto colorido.

Una unidad de actividad enzimtica (smbolo U) es la cantidad de enzima que en una reaccin enzimtica cataliza la conversin de 1 mol de sustrato por minuto. Se utiliza tambin en combinacin con otras unidades (U/mg de protena o U/L) para sealar, respectivamente, la actividad enzimtica especfica o la concentracin de actividad enzimtica.

Mtodos para la determinacin de sodio+, potasio+ y cloruro-El mtodo de fotometra de flama para medir el sodio y potasio es el mtodo de referencia, la potencimetro con electrodo de in selectivo tiene la misma precisin que la flamometra.Los cloruros se miden por titulacin mercuromtrica, titulacin coulomtrica-amperomtrica, espectrofotometra y con electrodo de ion selectivo. El mtodo de referencia es la titulacin coulomtrica.

Se puede determinar la concentracin de una especie electroactiva en una disolucin empleando un electrodo de referencia (un electrodo con un potencial conocido y constante con el tiempo) y un electrodo de trabajo (un electrodo sensible a la especie electroactiva) y un potencimetro.

Cloruros: electrodos de mebrana slida con sales de amonio cuaternarias.Potasio: electrodo de membrana lquida tipo PVC con valinomicinaSodio: electrodo de membrana liquida tipo PVC con corona de terReferencia: electrodo de cloruro de plata/plata